血小板聚集功能课件

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Situ ProcessFI,FIG 2,Injured blood vessel,Exposure of collagen,Adhesion of platelets mediated by vWF,Activation and de-granulation of platelets,Aggregation of platelets,erythrocyte,non-activatedthrombocyte,lumen,endothelial cell,basal membrane,activated collagen-bound thrombocyte,collagen fibers,smooth muscle cells,Hemostasis,The Normal,In - Situ,Process,FIG 2erythrocyteHemostasisThe,FIG 3,Platelet plug stabilization by fibrin,lumen,endothelial cell,basal membrane,erythrocytes,activatedthrombocytes,plug sealing and stabilization by fibrin formation,The Normal,In - Situ,Process,Hemostasis,FIG 3lumenThe Normal In - Situ,一、血小板的结构,一、血小板的结构,图22 血小板电镜像 (1横切面 2纵切面,3膜 4糖衣 5线粒体 6血小板颗粒 7小管系 8糖原颗粒),图22 血小板电镜像 (1横切面 2纵切面,血小板聚集功能课件,血小板聚集功能课件,电镜下血小板超微结构:表面结构,骨架系统,细胞器,特殊膜系统,静止相 机能相,电镜下血小板超微结构:表面结构,骨架系统,细胞器,特殊膜系统,表 面 结 构,表 面 结 构,表面结构,细胞外衣 糖蛋白的糖链(血小板膜受 体的所在位置),细胞膜 蛋白质与脂质,开放管道系统的开口,表面结构细胞外衣 糖蛋白的糖链(血小板膜受 体的所在,血小板聚集功能课件,Fibronectin,Thrombin,TSP,vWF,Collagen,FibrinogenvWF,Fibronectin,GPI,c,/II,a,GPV,GPIV,GPI,a,/II,a,GPI,b,/IX,GPII,b,/III,a,1.糖蛋白:受体特性,图3. 血小板的表面结构模式图2,ICSH,CD42b/42a,CD41/61,CD36,CD49b/29,FibronectinThrombinTSP vWFColl,d,-granule,a,-granule,GPIb-IX receptor-complex,von Willebrand - Factor,fibrinogen,GPIIb-IIIa receptor-complex,Release of,glycoproteins,vWF,fibrinogen,coagulation factors,Release of,ADP,serotonin,calcium,etc,endothelial cell,platelet,Primary Hemostasis,Normal Platelet Function,collagen fibers,d-granulea -granuleGPIb-IX rec,d,-granule,a,-granule,Glanzmann Thrombastenia,Bernard-Soulier Syndrome,platelet,No release from granules:,Gray syndrome (no,a-,granules),Storage Pool Disease (no,d-,granules),Secretion defects (granules are present but secretion is inhibited),Primary Hemostasis,Congenital Platelet Dysfunctions,d-granulea-granuleGlanzmann Th,Von Willebrand Disease Mechanism,Primary Hemostasis,d,-granule,a,-granule,GPIb/Ix receptor-complex,von Willebrand - Jrgens Syndrome,platelet,collagen fibers,Von Willebrand Disease Mechani,重要糖蛋白缺乏所导致的疾病?,重要糖蛋白缺乏所导致的疾病?,生化组成,磷脂酰胆碱(PC),磷脂酰乙醇胺(PE),膜磷脂,鞘磷脂,甘油磷脂,磷脂酰丝氨酸(PS),磷脂酰肌醇(PI),溶血卵磷脂,胆固醇,糖脂,膜脂质,75%80%,20%25%,2%5%,2.膜脂质,SPH,生化组成,Phosphatidylcholine, PC,Phosphatidylethano-,lamine,PE,Phosphatidylserine, PS,Phosphatidylinositol,PI,Sphingomyelin,SPH,溶血磷脂,platelet factor 3,2.膜脂质,PF,3,图4. 血小板的表面结构模式图3,Phosphatidylcholine, PCPhospha,(二)血小板骨架系统和收缩蛋白,. 微管,Microtubule,. 微丝,Microfilaments,. 膜下细丝,Submembrane filaments,图5. 血小板的骨架系统模式图4,(二)血小板骨架系统和收缩蛋白. 微管 Microtubu,A,and,B,二聚体,细丝,微管,微管 维持血小板形态,A and B二聚体细丝微管微管 维持血小板形态,骨架系统和收缩蛋白,微丝 肌动蛋白细丝及肌球蛋白粗丝,参与血小板收缩活动,伪足形成和释放,膜下细丝,骨架系统和收缩蛋白微丝 肌动蛋白细丝及肌球蛋白粗丝,参与血,(三)血小板,细胞器和内容物,D,D,D,1.-颗粒( granule):,P-selectin,,PF4,-TG,,TSP,Fn,a,a,a,a,2.致密颗粒(dense body,, 颗粒):,ADP,ATP,3. 溶酶体颗粒(颗粒):,组织蛋白酶D、E、O等,图6. 血小板细胞器模式图5,(三)血小板细胞器和内容物DDD1.-颗粒( granul,细胞器和内容物,致密颗粒,颗粒,溶酶体,颗粒,ADP,-TG,酸性水解酶,ATP,PF,4,-半乳糖苷酶,5-HT,P-选择素,-葡萄糖醛酸酶,Ca,2+,PDGF 、TSP,弹性硬蛋白酶,Fn,胶原酶,FV、XI、vWF、,肝素酶,FXIII、白蛋白、,1,-AT、 ,2,-MG、C1-INH,血小板活化?,细胞器和内容物致密颗粒颗粒溶酶体颗粒ADP -TG酸性水,(四)血小板,特殊膜系统,图7. 血小板细胞器模式图6,开放管道系统:,(open canalicular system,OCS),交换通道,致密管道系统:,(dense canalicular,system,DTS),Ca2+,(四)血小板特殊膜系统图7. 血小板细胞器模式图6开放,FIG 4a,Cellular organiza-tion of a platelet, side cross-view,outer membrane,surface connectedcanalicular system,actin microtubuli,dense (,d,-) granules,alpha (,a,-),granules,lysosomes,mitochondria,FIG 4b,Equatorial cross-view,Primary Hemostasis,The Platelet,FIG 4aouter membraneFIG 4bPrim,图6. 血小板结构模式图,Dense tubular,system,Open,canalicular,system,Microtubules,Microfilaments,Dense,body,Dense,body,in,granule,Granules,Exterior coat,图8. 血小板结构模式图7,Plasma membrane,总结:,图6. 血小板结构模式图Dense tubularOp,二、血小板的活化,及其分子基础,二、血小板的活化,1.血小板形态的改变,2.血小板表面特殊蛋白的表达(GPIIb/IIIa,CD62P),3.血浆血小板特异产物水平增,(,PF4,-TG,TXA2),(一) 血小板活化的表现,1.血小板形态的改变(一) 血小板活化的表现,1.血小板收缩的基础:,在活性物质的作用下发生骨架蛋白的收缩,(二) 血小板活化的分子基础,Resting Platelet,Activated,Platelet,活化激活剂:,throbin、collagen、,TXA2、PAF、,adrenaline、ADP、,Vasopridsin、等,图9. 血小板活化示意图,1.血小板收缩的基础:(二) 血小板活化的分子基础Resti,2.血小板表面物质表达基础:,(二) 血小板活化的分子基础,Activated,Platelet,GPb/a,P-selectin,图10. 血小板表面物质表达,2.血小板表面物质表达基础:(二) 血小板活化的分子基础Ac,3.血小板代谢基础,(1)能量代谢,(二) 血小板活化的分子基础,葡萄糖,glucose,糖酵解,丙酮酸,乳酸,三羧酸循环,CO,2,图11. 血小板能量代谢,3.血小板代谢基础(二) 血小板活化的分子基础葡萄糖糖酵解丙,(2)膜磷脂代谢,C,a,2+,+,+,PC,PE,PI,溶血PC、PE、PI,PIP,2,DAG,AA,环,氧,化,酶,PGG,2,PGH,2,5-HPETE,LTA,2,PGI,2,TXA,2,LTB,4,LTC,4,LTD,4,LTE,4,脂,肪,加,氧,酶,PS,Platelet factor 3,前列环素,合成酶,血栓素,合成酶,secretion,PLC,PLC,PLA,2,图12. 血小板膜磷脂代谢,白三烯,血管内皮细胞,(2)膜磷脂代谢Ca2+PC溶血PC、PE、PIPIP,血小板聚集功能课件,花生四烯酸代谢产物,TXA2,收缩血管,促进血小板聚集,PGI2,舒张血管,抑制血小板聚集,花生四烯酸代谢产物TXA2PGI2,血小板聚集功能课件,三、血小板功能,三、血小板功能,1.定义,:,是指Plt粘附于血管内皮下组分,或其他物质表面的能力,(一) 粘附功能,( Platelet adhesion ),1.定义:(一) 粘附功能( Platelet adhesi,一.,粘,附,功,能,vWF,胶原 ,Adhesion,内皮,细胞,endothelium,基,底,膜,GP,a,-,a,GP,b,-,Resting Platelet,图13. 血小板粘附模式图,黏附反应需要条件?,一. vWF胶原 Adhesion内皮细胞基GPa-a,1.定义,:,是指Plt与Plt之间的粘附,是形成血小板血栓的基础,也是血小板进一步活化和参与二期止血、促进血液凝固的保证。,(二) 聚集功能,( Platelet aggregation ),1.定义:(二) 聚集功能( Platelet aggre,Resting Platelet,ADP,GP,Activated,Platelet one,Activated,Platelet two,GPb-a,Aggregation,二.,聚,集,功,能,a,GP,b,-,a,Fibrinogen,C,a,+,图14. 血小板聚集模式图,Resting PlateletADPGPActivate,Gp Ib,vWF,Dense Granule,IIIa,IIb,IIIa,IIb,ADP,ADP,IIIa,IIb,Platelet Aggregation,Fibrinogen,E,D,D,D,Gp IbvWFDense GranuleIIIaIIbII,血小板聚集功能,定义,三个要素 GPIIb/IIIa ,Fg,Ca,2+,诱导剂的作用,高切变率的条件下,vWF与Fn也参与血小板聚集,图7,(幻灯),血小板聚集功能定义,血小板聚集功能课件,2.诱聚剂:,低分子物质:,ADP、肾上腺素、TXA,2,、5-HT等。,蛋白水解酶:,a、蛇毒等,颗粒及巨分子:,胶原、微纤维等,凝集素:,瑞斯托霉素等,2.诱聚剂:,血小板聚集,三种途径,ADP,TXA2 PGG2, PGH2 ,TXA2,PAF,血小板聚集三种途径,血小板聚集,两种聚集波形,血小板聚集两种聚集波形,1.定义,:,指血小板被机械或诱导剂激活后,Plt、及溶酶体等贮存颗粒中的内容物通过OCS释放到,Plt,外的过程,(三) 释放反应,(,Platelet release reaction,),1.定义: (三) 释放反应( Platelet rele,Ca,+,Resting,Platelet,ADP,Activated,Platelet one,a,三.,释放反应,颗粒:,-TG,PF4,TSP,致密颗粒:,ADP,P-selectin,C,a,2+,图15. 血小板释放模式图,release,Ca+RestingADPActivated a三.颗,血小板聚集功能课件,血小板聚集功能课件,四.,促,凝,作,用,a,C,a,a,a,Fg,Activated,Platelet,a,a,C,a,FIBRIN CLOT,PF,3,PF,3,a,- -C,a,2+,PF,3,Coagulation,a,-,a,C,a,2+,PF,3,凝血活酶,图16. 血小板促凝作用模式图,四.aCaaaFgActivated aaCaF,Trombogenese,Prothrombine,Thrombine,Xa,Intrinsieke,Extrinsieke,Fibrine,Fibrinogeen,ADP,TXA,2,5-HT,GP IIb/IIIa,GP IIb/IIIa,Simons ML, Decker JW. Br Heart J 1995;74:337;,Katzung BG. Basic & Clinical Pharmacology, Appleton & Lange, 2001,Wand beschadiging,Endotheelcellen,Collagen,vWF,PGI,2,GP Ia,GP Ib,GP IIb/IIIa,-,TrombogeneseProthrombineThromb,血小板的促凝活性,PF,3,的促凝活性 (参与两个复合物形成),接触产物生成活性(CPFA):胶原、ADP,胶原诱导的凝血活性(CICA):胶原,颗粒中的凝血因子释放(FV、Fg、FXI),凝血酶原酶合成:FXa结合位点,血小板的促凝活性PF3的促凝活性 (参与两个复合物形成),五.,血,块,收,缩,功,能,图17. 血小板血块收缩功能模式图,五.图17. 血小板血块收缩功能模式图,六、 维护血管内皮细胞完整性,填充空隙,参与内皮细胞再生和修复,六、 维护血管内皮细胞完整性填充空隙,总结:,血小板功能,1.粘附功能,2.聚集功能,3.释放反应,4.促凝作用,5.血块收缩作用,6.维护血管内皮细胞完整性,总结:血小板功能1.粘附功能 2.聚集功能 3.释放反应,血小板聚集功能课件,血 小 板 检 验,血 小 板 检 验,血小板生存时间测定(丙二醛法,MDA法),血小板生存时间测定(丙二醛法,MDA法),血小板寿命测定还可以有其他方法?,血小板寿命测定还可以有其他方法?,Arachidonic acid,Cyclo-oxygenase,Endoperoxidases,MDA,Effects of Aspirin,Inhibition,Platelet,New Platelet,Cyclo-oxygenase,Endoperoxidases,MDA,Arachidonic acidCyclo-oxygenas,血小板生存时间测定,缩短,血小板破坏、消耗增多,ITP、药物免疫性血小板减少性紫癜、输血后紫癜、脾功能亢进、SLE、DIC、TTP、HUS,血栓性疾病,心肌梗死、DVT、糖尿病血管病变,血小板生存时间测定缩短,血小板自身抗体测定,血小板自身抗体测定,血小板自身抗体,血小板相关免疫球蛋白(PAIg G,A,M),血小板蛋白自身抗体(特异性),药物相关自身抗体,同种血小板自身抗体,血小板自身抗体血小板相关免疫球蛋白(PAIg G,A,M),血小板相关免疫球蛋白检测,血小板相关免疫球蛋白检测,PLATELET IMMUNOFLUORESCENCE,patient,donor,eluaat,PLATELET IMMUNOFLUORESCENCEpat,单克隆抗体血小板抗原固定试验(monoclonal antibody immobilazation of platelet antigen,MAIPA),单克隆抗体血小板抗原固定试验(monoclonal ant,MoAb incubation + solubilisation,G,M ELISA plates + labeled anti Human IgG,substrate reaction,+,HRP,+,substrate,+,HRP,+,serum Ig,+,MoAb,Sanquin,serum incubation,MAIPA,MoAb incubation + solubilisati,改良抗原捕获酶联免疫吸附试验,(modified antigen capture ELISA,MACE),改良抗原捕获酶联免疫吸附试验,MACE,健康人血小板+待测血清,孵育后裂解,加入包被不同鼠抗血小板膜糖蛋白抗体微孔中,+,substrate,MACE健康人血小板+待测血清孵育后裂解加入包被不同鼠抗血小,临床意义,增高,见于ITP、同种免疫性血小板减少性紫癜、药物免疫性血小板减少性紫癜、恶性淋巴瘤、Evan综合征、SLE、慢性活动性肝炎等,动态检测有利于疗效和预后判断,临床意义,血小板黏附试验(玻株柱法),血小板黏附试验(玻株柱法),血小板聚集功能课件,血小板黏附试验(玻株柱法),血小板黏附率(%)=,柱前血小板数柱后血小板数 100%,柱前血小板数,问题:,柱前血小板数25010,9,/L,柱后血小板数125 10,9,/L,黏附率?,血小板黏附试验(玻株柱法),血小板黏附试验,临床意义,增高,高凝状态与血栓性疾病,降低,vWD 、巨血小板综合征、血小板无力症、尿毒症、肝硬化、MDS、服用血小板抑制药物,血小板黏附试验临床意义,血小板聚集试验,血小板聚集试验,透射比浊法测定原理,光 源,诱导剂,透射比浊法测定原理光 源诱导剂,样品,光电计,滤光片,光源,透射比浊法测定原理,样品光电计滤光片光源透射比浊法测定原理,血小板聚集功能课件,血小板聚集功能课件,血小板聚集功能课件,血小板聚集功能课件,血小板聚集功能课件,血小板聚集功能课件,散射比浊法,测定原理,增 加 散 透 率 : 660nm 测 定 散 射 光,聚集,形成,诱导剂,散射比浊法测定原理增 加 散 透 率 : 660n,散射光测定,检测器 (LED),光电计,样品,100 %,0 %,时间,散射光强度,散射光测定检测器 (LED)光电计样品100 %0 %时间散,阻抗法,阻抗法,阻抗法的优点,直接使用全血,其他血细胞同时存在,真正模拟体内生理环境,保存全部血小板,避免大血小板在制备PRP时丢失,对于脂血标本的检测,可以克服光学法检测时因过于浑浊而影响结果,全血电阻聚集仪与光学法相比,检测高凝状态时的血小板功能更为敏感,阻抗法的优点直接使用全血,血小板聚集试验,临床意义,增高,反映血小板聚集功能增强。见于血栓前状态和血栓性疾病。,降低,反映血小板聚集功能减弱。见于血小板无力症、巨血小板综合征、储存池病、尿毒症、肝硬化、MDS等,血小板聚集试验临床意义,血小板第3因子有效性测定,血小板第3因子有效性测定,原理,a,C,a,a,a,Fg,Activated,Platelet,a,a,C,a,FIBRIN CLOT,PF,3,PF,3,a,- -C,a,2+,PF,3,Coagulation,a,-,a,C,a,2+,PF,3,凝血活酶,原理aCaaaFgActivated aaCaF,血小板第3因子有效性测定,组别 患者血浆(ml) 正常血浆(ml),PRP PPP PRP PPP,一 0.1 0.1,二 0.1 0.1,三 0.1 0.1,四 0.1 0.1,参考值 APTT 1-APTT 25s,血小板第3因子有效性测定组别 患者血浆(ml) 正,血小板第3因子有效性测定,临床意义,降低,见于先天性血小板第3因子缺乏症、血小板无力症、巨血小板综合征、肝硬化、MDS、尿毒症、DIC、AL、再生障碍性贫血以及某些药物的影响等,血小板第3因子有效性测定临床意义,血块收缩试验,血块收缩试验,血块收缩试验,血块收缩试验,血小板膜糖蛋白检测,血小板膜糖蛋白检测,流式细胞仪原理示意图,流式细胞仪原理示意图,无需分离,快速检测,避免血小板的激活,针对单个细胞分析,最少的标本处理,避免血小板亚群的丢失,测定血小板的活化状态,检查循环血小板反应性,FCM,FCM,FCM,可以测定膜表面多种受体的变化,新单抗,新功能性抗原决定簇检测,极高灵敏度,检出仅有1%活化血小板亚群,需微量体积标本(约2l),适合于新生儿,血小板明显减少标本,也能进行准确的分析,无放射性核素污染,FCM可以测定膜表面多种受体的变化,糖蛋白阳性血小板百分率,GPIb(CD42b),GPIIb(CD41),GPIIIa(CD61),GPIX(CD42a),CD62P(P-Selectin) 2%,CD63 2%,FIBR 5%,95%99%,糖蛋白阳性血小板百分率GPIb(CD42b) 95%99%,血小板聚集功能课件,血小板聚集功能课件,血小板聚集功能课件,流式细胞仪检测血小板活化,R2细胞群为单个血小板,R3细胞群为聚集的血小板 图1a为未加ADP的血小板分布;图1b示ADP活化后的血小板荧光强度、FSC均抬高,R2细胞群明显减少,R3明显增加,直观的表明血小板发生了聚集。并可自动计算出图T3门中血小板占总血小板的百分率,即为血小板聚集率。,流式细胞仪检测血小板活化R2细胞群为单个血小板,R3细胞群为,临床意义,血小板功能缺陷病,血栓前状态和血栓病:,CD41,CD61,CD62P,CD63,临床意义血小板功能缺陷病,FCM与聚集仪测定血小板聚集的敏感性比较,FCM与聚集仪测定血小板聚集的敏感性比较,血小板活化分析,血小板活化分析,血小板膜磷脂酰丝氨酸和凝血因子,荧光素标记的Annexin V(PS特异结合),Fib FV/Va FX/Xa 的单抗+PLT,FCM检测荧光强度,血小板膜磷脂酰丝氨酸和凝血因子荧光素标记的Annexin V,活化血小板膜糖蛋白分子标志物,CD41,CD61,CD62P,CD63,活化血小板膜糖蛋白分子标志物 CD41,CD61,CD62,血小板微粒,活化出芽,0.1-1.0um,相同结构,血小板微粒活化出芽,血浆血栓烷B,2,(TXB,2,)测定,原理,ELISA,临床意义,增高,血栓前状态与血栓性疾病,降低,见于环氧化酶或TX合成酶缺乏症、服用抑制环氧化酶或TX合成酶的药物等。,血浆血栓烷B2(TXB2)测定原理 ELISA,11-去氢血栓烷B,2,(TXB,2,)测定,原理,ELISA,TXB2在肝脏氧化酶作用下的产物,不受体外血小板活化的影响,11-去氢血栓烷B2(TXB2)测定原理 ELISA,血浆,-TG、PF,4,测定,原理,双抗体夹心法,临床意义,增高,反映血小板被激活及其释放反应亢进。,降低,见于先天或获得性储存池病。,血浆 -TG、PF4测定原理 双抗体夹心法,血小板功能分析仪PFA-100,血小板功能分析仪PFA-100,PFA-100,血小板功能测定仪,溶液,贮藏器,按钮,屏幕,打印机,圆盘传送带,暗盒,测试暗盒,PFA-100 血小板功能测定仪溶液贮藏器按钮屏幕打印机圆,In Vivo,Haemostasis,PFA-100,capillary,200m,aperture,150m,epinephrine,or,ADP,platelet,vWF,erythrocyte,FLOW,- 40,mbar,collagen,membrane,PFA-100,Test Principle,lumen,fibrinogen,platelet,collagen fibrils,erythrocyte,endothelial cell,vWF,In Vivo HaemostasisPFA-100 ca,Test Cartridge before and after a test,before,after,aperture,150 M,cup,platelet,aggregate,Filter,+,epinephrine,or ADP,flash membrane,800 ,l blood,capillary,200 M,collagen,PFA-100,Test Principle,Test Cartridge before and afte,PFA-100,Test Principle,Occlusion Process,PFA-100 Test PrincipleOcclusi,PFA-100,REV. 2.00S/N: 00370,14/07/9714:01,ID#:23456.17,Test Type: Collagen/EPI,SAMPLE A:110 SEC,Final Result and Print-out,Closure time in seconds indi-,cating “Primary-Hemostasis-,Capacity (PHC)”,PFA-100,Test Principle,Final Result and Print-outClos,Method Simplicity,Pipette 800 l blood,Three,1,1,Start the test,Steps,3,3,Insert cassette,Easy,2,2,PFA-100,Test Advantages and Benefit,Method SimplicityPipette 800 ,衷心感谢各位,衷心感谢各位,此课件下载可自行编辑修改,仅供参考!感谢您的支持,我们努力做得更好!谢谢,此课件下载可自行编辑修改,仅供参考!感谢您的支持,我们努力,
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