临床微生物室标本处理及操作流程课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,临床微生物室标本处理及操作流程,*,临床微生物室标本处理及检验流程,1,临床微生物室标本处理及操作流程,临床微生物室标本处理及检验流程1临床微生物室标本处理及操作流,The Role of the Clinical Bacteriology Lab,Infection,Control,Team,2,临床微生物室标本处理及操作流程,The Role of the Clinical Bacte,临床微生物检验流程示意,临床标本,留取,环节一,运送,实验室,环节二,分析前,分析中,标本合格？,环节三,接种,培养,检测,门诊病房诊所,不合格,合格,环节四,环节五,分析后,报告,环节六,SOP,QC,IQ,培养基、冰箱,温箱、气体,直接检测,仪器设备、试剂,EQA标本,标本合格,判定,SOP,对每个环节进行控制，构成质量保证体系,+,3,临床微生物室标本处理及操作流程,临床微生物检验流程示意临床标本留取环节一运送实验室环节二分析,内 容,微生物鉴定,标本处理,药敏试验,4,临床微生物室标本处理及操作流程,内 容微生物鉴定标本处理4临床微生物室标本处理及操作流程,标本处理,血培养,脑脊液培养,呼吸道标本,(,痰标本、咽部标本）,尿培养,生殖道标本培养,抽吸物和组织标本的培养（需氧、厌氧培养）,粪便培养,5,临床微生物室标本处理及操作流程,标本处理血培养,血培养,Blood Culture,6,临床微生物室标本处理及操作流程,血培养Blood Culture 6临床微生物室标本处理及,7,临床微生物室标本处理及操作流程,7临床微生物室标本处理及操作流程,脑脊液,CEREBROSPINAL FLUID,8,临床微生物室标本处理及操作流程,脑脊液CEREBROSPINAL FLUID8临床微生物室,9,临床微生物室标本处理及操作流程,9临床微生物室标本处理及操作流程,严格无菌操作,soap,10,临床微生物室标本处理及操作流程,严格无菌操作soap10临床微生物室标本处理及操作流程,脑脊液,CEREBROSPINAL FLUID,无菌操作，腰椎穿刺采样,最少1 mL，最好5 mL,打入3个小管中，以第二根小管送检培养,分枝杆菌培养标本需要2 mL以上，置于4保存,即时送检,绝对不能冷藏！,11,临床微生物室标本处理及操作流程,脑脊液 CEREBROSPINAL FLUID无菌操作，腰,12,临床微生物室标本处理及操作流程,12临床微生物室标本处理及操作流程,如何看待CSF的培养结果？,（1）,如,果同期送检的血培养大于3天报警，通常不是很紧急,（2）,假如仍不确定，电话联系微生物室值日主管，了解革兰氏染色涂片的相关情况。,（3）,必须综合生化和血液学结果,（4）,如果CSF常规检查报告中没有中性粒细胞或脑脊液的其他指标正常，对报告的致病菌应保持怀疑，可能送检污染。,13,临床微生物室标本处理及操作流程,如何看待CSF的培养结果？（1）如果同期送检的血培养大于3天,呼吸道标本,Respiratory Cultures,14,临床微生物室标本处理及操作流程,呼吸道标本Respiratory Cultures14临床,上呼吸道标本,Upper Respiratory Tract Specimens,15,临床微生物室标本处理及操作流程,上呼吸道标本 Upper Respiratory Trac,16,临床微生物室标本处理及操作流程,16临床微生物室标本处理及操作流程,下呼吸道标本 Lower Respiratory Tract Specimens,17,临床微生物室标本处理及操作流程,下呼吸道标本 Lower Respiratory Trac,下呼吸道感染,Lower Respiratory Tract Infections,急性支气管炎,社区获得性肺炎,院内获得性肺炎,免疫妥协患者肺炎,18,临床微生物室标本处理及操作流程,下呼吸道感染Lower Respiratory Tract,下呼吸道标本,Lower Respiratory Tract Specimen,自然咳痰,诱导痰,气管内吸取物,支气管肺泡灌洗液,保护性毛刷,支气管灌洗液,肺部组织,19,临床微生物室标本处理及操作流程,下呼吸道标本Lower Respiratory Tract,标本质量,带血痰,唾液or诱导痰 (?),脓痰,粘液样痰,20,临床微生物室标本处理及操作流程,标本质量带血痰唾液or诱导痰 (?)脓痰粘液样痰20临床微生,用革兰氏染色来评估,呼吸道标本是否合格,21,临床微生物室标本处理及操作流程,用革兰氏染色来评估21临床微生物室标本处理及操作流程,痰标本10鳞状上皮细胞/每低倍视野=拒收,22,临床微生物室标本处理及操作流程,痰标本10鳞状上皮细胞/每低倍视野=拒收22临床微生物室标,有PMN的痰标本，中性粒细胞多，且鳞状上皮细胞特别少=接受，进行培养,粘液丝,23,临床微生物室标本处理及操作流程,有PMN的痰标本，中性粒细胞多，且鳞状上皮细胞特别少=接受，,细胞内细菌,胞内细菌 提示感染,24,临床微生物室标本处理及操作流程,细胞内细菌胞内细菌 提示感染24临床微生物室标本处理及操,柱状纤毛上皮细胞,肺泡巨噬细胞,25,临床微生物室标本处理及操作流程,柱状纤毛上皮细胞肺泡巨噬细胞25临床微生物室标本处理及操作流,滑石颗粒,26,临床微生物室标本处理及操作流程,滑石颗粒26临床微生物室标本处理及操作流程,淀粉样小体,见于迁延长时间的呼吸道疾病,27,临床微生物室标本处理及操作流程,淀粉样小体见于迁延长时间的呼吸道疾病27临床微生物室标本处理,弹性纤维,28,临床微生物室标本处理及操作流程,弹性纤维28临床微生物室标本处理及操作流程,库什曼螺旋体,29,临床微生物室标本处理及操作流程,库什曼螺旋体29临床微生物室标本处理及操作流程,呈链排列的革兰阳性球菌和革兰阴性球杆菌。缺乏鳞状上皮细胞提示混合厌氧菌感染,30,临床微生物室标本处理及操作流程,呈链排列的革兰阳性球菌和革兰阴性球杆菌。缺乏鳞状上皮细胞提示,你看见多少种形态？,几种细菌的混合形态，缺乏鳞状上皮细胞=混合厌氧菌感染。如果是呼吸道标本可能是吸入性肺炎。报告临床医生“提示吸入性肺炎”,31,临床微生物室标本处理及操作流程,你看见多少种形态？几种细菌的混合形态，缺乏鳞状上皮细胞=混合,呼吸道标本中未被染色的，有折射的杆菌=抗酸杆菌,32,临床微生物室标本处理及操作流程,呼吸道标本中未被染色的，有折射的杆菌=抗酸杆菌32临床微生物,呈链排列的革兰阳性球菌？或革兰阳性分枝杆菌？,肺中的结节吸出物，不规则“球菌”，分叉，无短链，链的末端的呈尖状，都证明是分枝状的革兰阳性杆菌，可能是放线菌或诺卡菌（通常来自脑或肺组织的标本）,33,临床微生物室标本处理及操作流程,呈链排列的革兰阳性球菌？或革兰阳性分枝杆菌？肺中的结节吸出物,肺炎-可接受的,不合格标本,评述,很少的鳞状上皮细胞,10个/低倍视野,可以在玻片上看到许多鳞状上皮细胞，说明在采集时受到了上呼吸道分泌物的污染或口水的污染。,很多的中性粒细胞,很少有或没有中性粒细胞,免疫抑制的病人也会出现中性粒细胞减少,中性粒细胞和上皮细胞都很少的标本需要培养,很多中性粒细胞混合有形态多样的细菌（革兰氏阴性杆菌，纺锤形，革兰氏阳性球菌）,吸入性肺炎标本革兰氏染色的典型形式，培养只会培养出正常菌群，所以革兰氏染色是用于诊断的方法。,许多或中等量的中性粒细胞，以一种形态的细菌为主,酵母菌样，酵母菌是一种很少引起肺炎的细菌，常由口腔污染,成双革兰氏阳性球菌，短链=肺炎链球菌,革兰氏阳性菌成群排列=金黄色葡萄球菌,革兰氏阴性球杆菌（小）=流感嗜血杆菌,革兰氏阴性杆菌大且肥厚=肺炎克雷伯菌或其他肠道菌,革兰氏阴性双球菌=卡他莫拉菌,许多不着色的有折射的杆状细菌,可能是肺结核，抗酸杆菌不能被革兰氏染色所染色。,呼吸道标本的涂片评估模式,34,临床微生物室标本处理及操作流程,肺炎-可接受的不合格标本评述很少的鳞状上皮细胞许多鳞状上皮可,35,临床微生物室标本处理及操作流程,35临床微生物室标本处理及操作流程,尿培养标本,Urine Culture,36,临床微生物室标本处理及操作流程,尿培养标本 Urine Culture 36临床微生物室标,尿道感染,每年850万例尿路感染, 90%为女性,1/2.5个妇女在一生中会得UTI,下行性感染：血流,肾脏膀胱（金黄色葡萄球菌，酵母菌，结核分枝杆菌）,上行性感染：尿道膀胱肾盂 血流,37,临床微生物室标本处理及操作流程,尿道感染每年850万例尿路感染, 90%为女性37临床微生物,用于尿液培养的标本,肾活检或肾抽吸物（外科）,耻骨上膀胱抽吸物,（孕妇，婴儿，全膀胱）,微导管尿（内部导管和外部导管）-老年人,中段尿，清洁留取急诊成年人,留置导尿管中采集的标本（经常被三种以上细菌污染）,38,临床微生物室标本处理及操作流程,用于尿液培养的标本 肾活检或肾抽吸物（外科）38临床微生物,尿液标本,采集中段尿时要先用肥皂清洗女性的外阴和男性的外生殖器包括包皮内，然后用清水冲洗,长期留置导尿管的患者应在更换新管时留取尿标本。,做厌氧培养时应耻骨上膀胱穿刺采集尿。,39,临床微生物室标本处理及操作流程,尿液标本 采集中段尿时要先用肥皂清洗女性的外阴和男性的外生,尿液运输方法,如不能及时送检，需冷藏。,4小时延迟送检，须废弃标本,。,40,临床微生物室标本处理及操作流程,尿液运输方法如不能及时送检，需冷藏。40临床微生物室标本处理,41,临床微生物室标本处理及操作流程,41临床微生物室标本处理及操作流程,过夜培养,否,自然排尿,是,继续培养；,随后观察；发送初步的培养阴性报告,24小时后仍不生长则发出,最终的生长阴性报告, 10,5,CFU/ml,1,organism,一种以上细菌生长,多种肠道细菌或混杂的皮肤菌丛；重新采集清洁标本,纯培养的机会致病菌,（查阅凝固酶阴性葡萄球菌的注释）,ID & Suscept.鉴定&药敏,10,5,CFU/ml,)1-2种机会致病菌,（查阅凝固酶阴性葡萄球菌的注释）,进行鉴定和药敏，若数量 1,过夜培养,否,导管尿,是,继续培养；,随后观察；发送初步的培养阴性报告,24小时后仍不生长则发出,最终的生长阴性报告, 10,4,CFU/ml,一种以上细菌生长,多种肠道细菌或混杂的皮肤菌丛；重新采集清洁标本,纯培养的机会致病菌,（查阅凝固酶阴性葡萄球菌的注释）,鉴定&药敏, 10,4,CFU/ml,1-2种机会致病菌（查阅凝固酶阴性葡萄球菌的以上相同注释,进行鉴定和药敏，若数量 10,评价尿培养的标准,病人,标本特征,有意义菌落形成单位/ml（非皮肤污染）,无症状者,清洁留取,100,000,有症状者，不固定的,清洁留取,10,000 1-2种机会致病菌。若多于2种则认为尿液被污染,有症状，性活跃女性,清洁留取,100个纯菌落肠杆菌科菌,男性,清洁留取,1000个，机会致病菌,任何人,内置导尿管,100,000任意数量机会致病菌,任何人,通过直接导管获得,100任意数量机会致病菌,任何人,外科手术从肾脏获得,任意数量（肉汤增菌，厌氧菌）,任何人,经皮穿刺膀胱吸取,任意数量（肉汤增菌，厌氧菌）,任何人,任意标本,任何数量金黄色葡萄球菌,不同人,有争议,任何数量的酵母菌,44,临床微生物室标本处理及操作流程,评价尿培养的标准病人标本特征有意义菌落形成单位/ml（非皮肤,出现如下情况时，怎样判断？,尿常规结果,尿培养结果,可能原因,WBC ,PRO ,计数 +,PRO +,计数 +,PRO +,计数 10,5,培养出一种致病菌,预示患者泌尿系统感染。按药敏结果选择性用药。,WBC +,PRO +,计数 10,5,培养出大于两种致病菌,患者泌尿系统可能感染，但标本可能被污染，应重复送检。,WBC 10,5,培养出大于两种致病菌,标本污染,45,临床微生物室标本处理及操作流程,出现如下情况时，怎样判断？尿常规结果尿培养结果可能原因WBC,生殖道标本,Lower Genital Tract Specimens,46,临床微生物室标本处理及操作流程,生殖道标本 Lower Genital Tract Spe,女性生殖道标本送检,47,临床微生物室标本处理及操作流程,女性生殖道标本送检47临床微生物室标本处理及操作流程,宫颈或宫颈内部：淋病奈瑟菌，沙眼衣原体，人乳头瘤病毒,阴道高位拭子：酵母菌，阴道毛滴虫，细菌性阴道感染,肛门或直肠拭子：淋病奈瑟菌，B群链球菌（+阴道拭子）,女性下生殖道标本采集,48,临床微生物室标本处理及操作流程,宫颈或宫颈内部：淋病奈瑟菌，沙眼衣原体，人乳头瘤病毒阴道高位,早发B群链球菌病,1%的新生儿因母亲定植（10-30%的孕妇）发展为EOD,50%病死率,25%的美国女性在L&D期间得到IV预防,长期病症包括：在30%以上的新生儿中产生严重精神运动发展障碍,Adriaanse et al. Neonatal early onset group B streptococcal infection: a nine-year retrospective study in a tertiary care hospital.,J Perinat Med.,2019;24:531538,49,临床微生物室标本处理及操作流程,早发B群链球菌病 1%的新生儿因母亲定植（10-30%的,在孕期3537周时的普查培养,阴道和直肠拭子,肉汤过夜增菌,接种于血平板上,再孵育过夜和鉴定可疑菌落,任何有GBS菌尿的患者需要在分娩期做好预防,分娩时快速检测敏感性不够,50,临床微生物室标本处理及操作流程,在孕期3537周时的普查培养50临床微生物室标本处理及操作,男性生殖道标本送检,51,临床微生物室标本处理及操作流程,男性生殖道标本送检51临床微生物室标本处理及操作流程,男性的生殖道致病菌与女性绝大部分一致；,尿道炎通常由淋病奈瑟氏菌或非淋病奈瑟氏菌引起；,可能并发于生殖器溃疡；,52,临床微生物室标本处理及操作流程,男性的生殖道致病菌与女性绝大部分一致；52临床微生物室标本,淋病奈瑟氏菌感染,挤压尿道或直接获取尿道口分泌物；,直接涂片,如果培养，须直接接种温暖的筛选性平板，保温并即刻送微生物室培养。,53,临床微生物室标本处理及操作流程,淋病奈瑟氏菌感染 挤压尿道或直接获取尿道口分泌物；53临,任何不能及时送检的生殖道标本，都应采用运送培养基采样保存。,禁止冷藏,54,临床微生物室标本处理及操作流程,任何不能及时送检的生殖道标本，都应采用运送培养基采样保存。禁,55,临床微生物室标本处理及操作流程,55临床微生物室标本处理及操作流程,伤口、皮肤、组织,Wound,、,Skin,、,Tissue,56,临床微生物室标本处理及操作流程,伤口、皮肤、组织Wound、Skin、Tissue56临床,标本采样和送检,临床常常送检脓液和渗出液的拭子给实验室做检查。,风险,标本不足量,拭子干燥,拭子吸附细菌，难于释放到平板培养,尽可能抽吸或将拭子深入伤口，紧贴伤口前沿取样深部伤口和特殊原因造成的伤口，如动物咬伤，应考虑厌氧培养；,57,临床微生物室标本处理及操作流程,标本采样和送检 临床常常送检脓液和渗出液的拭子给实验室做,58,临床微生物室标本处理及操作流程,58临床微生物室标本处理及操作流程,59,临床微生物室标本处理及操作流程,59临床微生物室标本处理及操作流程,发现,评述,出现鳞状上皮细胞,提示标本采集技术不过关；培养出来的可能是皮肤正常菌群,大量的中性粒细胞,如果查见细胞内的细菌，则更有意义。,大量的中性粒细胞染色多样染色阳性和阴性，小的细菌,混合有厌氧或兼性厌氧菌感染,出现少量破碎的中性粒细胞和比较大的面包车样的染色不定的杆菌,可能是梭菌引起的组织坏死，紧急外科手术，产气荚膜梭菌引起的气性坏疽,很少有中性粒细胞，但是有其他体细胞,患者不能产生足够的免疫反应或微生物不能趋化中性粒细胞（如球菌）。仍然高度怀疑细菌病因。,细胞内微生物,细菌感染,成块的小的灰白的染色不规则的阳性成链的球菌,如果分离自脓肿，提示咽峡炎链球菌（米勒链球菌）感染。,很细小的革兰氏阴性杆菌,特别是从淋巴结或组织中分离的，可能是生物恐怖试剂（布鲁氏杆菌，耶尔森，弗朗西斯）要在风厨中操作。平板用胶条密封在生物安全柜中操作，不可以嗅标本。,组织和抽吸物涂片检查,60,临床微生物室标本处理及操作流程,发现评述出现鳞状上皮细胞提示标本采集技术不过关；培养出来的可,胃肠道标本（略）,61,临床微生物室标本处理及操作流程,胃肠道标本（略）61临床微生物室标本处理及操作流程,62,临床微生物室标本处理及操作流程,62临床微生物室标本处理及操作流程,微生物鉴定,63,临床微生物室标本处理及操作流程,微生物鉴定63临床微生物室标本处理及操作流程,微生物鉴定（1）,血平皿上的菌落形态,革兰阳性细菌,所有的链球菌,-溶血链球菌,-溶血链球菌与肺炎链球菌,葡萄球菌属,肠道革兰阴性杆菌,沙门菌属，志贺菌属,假单胞菌属,嗜血杆菌属,64,临床微生物室标本处理及操作流程,微生物鉴定（1）血平皿上的菌落形态64临床微生物室标本处理及,65,临床微生物室标本处理及操作流程,65临床微生物室标本处理及操作流程,66,临床微生物室标本处理及操作流程,66临床微生物室标本处理及操作流程,67,临床微生物室标本处理及操作流程,67临床微生物室标本处理及操作流程,68,临床微生物室标本处理及操作流程,68临床微生物室标本处理及操作流程,69,临床微生物室标本处理及操作流程,69临床微生物室标本处理及操作流程,70,临床微生物室标本处理及操作流程,70临床微生物室标本处理及操作流程,71,临床微生物室标本处理及操作流程,71临床微生物室标本处理及操作流程,72,临床微生物室标本处理及操作流程,72临床微生物室标本处理及操作流程,73,临床微生物室标本处理及操作流程,73临床微生物室标本处理及操作流程,74,临床微生物室标本处理及操作流程,74临床微生物室标本处理及操作流程,微生物鉴定（2）,奈瑟菌属、莫拉菌属,不动杆菌属,布氏杆菌属、巴斯德菌属,芽胞杆菌属,产单核李斯特菌,酵母菌属,75,临床微生物室标本处理及操作流程,微生物鉴定（2）奈瑟菌属、莫拉菌属75临床微生物室标本处理及,76,临床微生物室标本处理及操作流程,76临床微生物室标本处理及操作流程,77,临床微生物室标本处理及操作流程,77临床微生物室标本处理及操作流程,78,临床微生物室标本处理及操作流程,78临床微生物室标本处理及操作流程,79,临床微生物室标本处理及操作流程,79临床微生物室标本处理及操作流程,80,临床微生物室标本处理及操作流程,80临床微生物室标本处理及操作流程,81,临床微生物室标本处理及操作流程,81临床微生物室标本处理及操作流程,82,临床微生物室标本处理及操作流程,82临床微生物室标本处理及操作流程,药敏试验,纸片扩散法药敏试验,特殊药敏试验,MRSA,克林霉素耐药的葡萄球菌,VISA或VRSA,青霉素耐药的葡萄球菌,超广谱-内酰胺酶,83,临床微生物室标本处理及操作流程,药敏试验纸片扩散法药敏试验,84,临床微生物室标本处理及操作流程,84临床微生物室标本处理及操作流程,纸片扩散法-测量抑菌圈（1）,使用透射光观察,：,Staphylococcus,spp. 葡萄球菌属,linezolid利奈唑烷,oxacillin苯唑西林,vancomycin万古霉素,任何生长均有意义,Enterococcus,spp.肠球菌属,vancomycin万古霉素,Light光线,85,临床微生物室标本处理及操作流程,纸片扩散法-测量抑菌圈（1）使用透射光观察 ： St,纸片扩散法-测量抑菌圈（2）,使用反射光观察：,所有其他药物/菌株组合,Light光线,86,临床微生物室标本处理及操作流程,纸片扩散法-测量抑菌圈（2）使用反射光观察：Light光线8,变形杆菌属.,忽略迁徙性生长,纸片扩散法-测量抑菌圈（3）,87,临床微生物室标本处理及操作流程,纸片扩散法-测量抑菌圈（3）87临床微生物室标本处理及操作流,测量完全抑菌的圈,纸片扩散法-测量抑菌圈（4）,Linezolid,利奈唑烷,88,临床微生物室标本处理及操作流程,测量完全抑菌的圈纸片扩散法-测量抑菌圈（4）Linezoli,铜绿假单胞菌耐药亚群 ；测量无菌区域,圈内菌落,纸片扩散法-测量抑菌圈（5）,大肠埃希菌混杂有肠球菌；用纯培养重复试验,89,临床微生物室标本处理及操作流程,铜绿假单胞菌耐药亚群 ；测量无菌区域圈内菌落纸片扩散法-测量,90,临床微生物室标本处理及操作流程,90临床微生物室标本处理及操作流程,91,临床微生物室标本处理及操作流程,91临床微生物室标本处理及操作流程,92,临床微生物室标本处理及操作流程,92临床微生物室标本处理及操作流程,致谢：,Ms Ellen Jo Baron,(Stanford Univ.Dept.Pathology),Ms Janet Hindler,(UCLA Medical Center Los Angeles ,California),提供“,临床微生物实验室基本操作流程”图片资料。,93,临床微生物室标本处理及操作流程,致谢： 93临床微生物室标本处理及操作流程,谢谢!,94,临床微生物室标本处理及操作流程,谢谢!94临床微生物室标本处理及操作流程,