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单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,第二章,氨基酸,Chapter2,Amino acid,教学目标,：,掌握氨基酸的结构特点与理化性质。,1.从氨基酸的结构特点上理解氨基酸的分类和生物学特性。,2.掌握氨基酸的理化性质，重点掌握两性解离与等电点的含义、氨基酸参加的化学反响，特别是侧链的反响。了解氨基酸的光谱学特征。,第一节 氨基酸 Amino acid,AA) 蛋白质的构件分子 Protein Architecture P123,一 蛋白质的水解,酸水解: 6mol/L HCL，4mol/L H2SO4,回流煮沸20h。,缺点：Trp破坏，Asn、Gln脱酰胺基，,羟基氨基酸(Ser Thr)局部破坏。,优点：不消旋,碱水解：5mol/LNaOH共煮10-20小时,缺点: 消旋,优点：色氨酸稳定,酶水解：水解位点特异，得到多肽片段和AA的,混合物，用于一级结构分析。,二.,氨基酸的结构,(,Structure of Pr-AA),1,. 20,种氨基酸的结构通式,:,不变局部,可变局部,非解离形式,解离形式,2.结构特点,(1)除脯氨酸亚氨基酸外，这些天然氨基酸在结构上 的共同特点为： 与羧基相邻的-碳原子上都有一个氨基，因而称为-氨基酸.,-C-C-C-C-COOH,-C-C-C-C(NH2)-COOH -氨基酸,-C-C-C(NH2)-C-COOH -氨基酸,-C-C(NH2)-C-C-COOH -氨基酸,什么是,-,氨基酸？,(2),除,甘氨酸,外,其它所有氨基酸分子中的,-,碳原子都为,不对称碳原子,所以：,A.,除甘氨酸外都具有旋光性,.,除甘氨酸,外，都具有,D-,型 和,L-,型两种立体异,构体。,B.,除胱氨酸和酪氨酸外，其余,AA,都能,溶于水。,三,.,氨基酸的分类,AA and classification,根本氨基酸:编码的蛋白质氨基酸 20种,修饰稀有氨基酸：多肽合成后由基,本aa经酶促修饰而来。,存在于生物体内但不,组成蛋白质 (约150种)。,蛋白质,AA,Pr-AA,非蛋白质,AA,Non-Pr AA,一.根本20种氨基酸按照,R基的化学结构分类,1.脂肪族氨基酸,1.中性氨基酸：含一氨基一羧基,Gly Ala Val Leu Ile Ser、Thr Cys、Met,含有羟基和硫的氨基酸,含羟基：,Ser,、,Thr,含硫：,Cys,、,Met,含羟基的氨基酸：,Ser,、,Thr, Ser的-OHPKa=15),在生理条件下不解离,但它是一个极性基团，能与其它基团形成,氢键，具有重要的生理意义，常出现在,大多数酶的活性中心。, Thr 中的-OH是仲醇，具有亲水性。, Ser和Thr的-OH往往与糖链相连，通过O-,糖苷键形成糖蛋白。,Cys的R中含巯基-SH,具有两个重要性质：,1在较高pH值条件，巯基离解。,2两个Cys的巯基氧化生成二硫键，生,成胱氨酸。CysssCys,胱氨酸,共价键,二硫键在蛋白质的结构中具有重要意义。,Cys还常出现在酶的活性中心。,Met的R基中含有甲硫基-S-CH3，硫原,子有亲核性，易发生极化，因此,在生物合成中是一种重要的甲基供体。,2酸性氨基酸及其酰胺:,Asp、Glu、Gln、Asn,酸性氨基酸及其酰胺,:,Asp,、,Glu,、,Gln,、,Asn,3.含碱性基团: His 、Lys 、Arg,Lys侧链氨基的pKa为10.53，生理条件下，Lys,侧链带有一个正电荷NH3+.,Arg是碱性最强的氨基酸，侧链上的胍基是已,知碱性最强的有机碱，pKa值为12.48，生,理条件下完全质子化。,His含咪唑环，它是20种氨基酸中侧链pK值最,接近生理pH值的一种，在接近中性pH时，,可离解平衡。它是在生理pH条件下唯一具,有缓冲能力的氨基酸。,(,2,).,芳香族氨基酸：,Phe,、,Tyr,、,Trp,苯丙氨酸,酪氨酸,色氨酸,这三种氨基酸在紫外区,280nm,处有特殊吸收峰,蛋白质的紫外吸收主要来自这三种氨基酸,在,280nm,处,三种氨基酸的紫外吸收值,Trp,Tyr,Phe,Phe,疏水性最强。,Tyr,的,-OH,磷酸化是一个十分普遍的调控机制，,Tyr,在较高,pH,值时，,酚羟基离解,。,。,(3).杂环族氨基酸： ProHis),Pro的-亚氨基是环的一局部，因此具有特殊的刚性结构，一般出现在两段-螺旋之间的转角处，Pro残基所在的位置必然发生骨架方向的变化.,二按照R基的极性性质(疏水性程度)分为：,1.非极性氨基酸,在维持蛋白质的三维结构中起着重要作用蛋白质的疏水核心,非极性氨基酸,2,.,极性氨基酸,:,这类氨基酸的侧链都能,与水形,成氢键,，因此很容易溶于水,。,1不带电荷的极性氨基酸,2.带负电荷的AA(酸性AA),3.带正电何的AA(碱性AA),* 胶原蛋白中的Lys侧链氧化时能形成很强的分子间(内)交联。,* Arg的胍基碱性很强，与NaOH相当。,* His是一个弱碱，是天然的缓冲剂，它往往存在于许多酶的活性中心。,*非极性AA一般形成蛋白质的疏水核心，带电荷的AA和极性AA位于外表。,酶的活性中心：His、Ser、Cys,三.根据人体能否自身合成,必需氨基酸定义：,成年人：Thr、 Val、 Leu、Ile、,Phe 、Trp、Lys、 Met,半必须氨基酸：婴儿期Arg和His,非必需氨基酸：其余,二非编码的蛋白质氨基酸:,_修饰氨基酸,蛋白质合成后，由根本氨基酸修饰而来。,14-羟脯氨酸,25-羟赖氨酸,36-N-甲基赖氨酸,4-羧基谷氨酸,5Tyr的衍生物,四 非蛋白质氨基酸:,150多种，不组成蛋白质,但有生理功能.,1L-型 氨基酸的衍生物,2D-型氨基酸,3-、-、-氨基酸,第二节,.,氨基酸的重要理化性质,一. 一般物理性质,溶解性：在水中的溶解度差异很,大，溶解于稀酸或稀碱，,不溶解于有机溶剂。,熔点： 一般在200以上。,味感： 其味随不同氨基酸有所,不同。,一 AA的光学活性和立体化学,1,、,氨基酸的构型,构型,(configuration),：具有相同的分子式和结构式，但原子在空间的分布排列不同。,构象,(conformation),：在化学结构和构型同的分子中，其原子由于单键的内旋转而在空间形成的不同的构象体可以相互转化。,Thr,和,Ile,有四种光学异构体,分别是,D-,、,L-,、,D-,别,-,、,L-,别,-,氨基酸。,L-,苏氨酸,(L-threonine),D-,苏氨酸,(D-threonine),L-,别,-,苏氨酸,(L-allo-threonine),D-,别,-,苏氨酸,(D-allo-threonine,2、氨基酸的旋光性 P143,旋光性：除甘氨酸外，-氨基酸都具有旋光性，能使偏振光平面向左或向右旋转，左旋者通常用-表示，右旋者用+表示。,光学异构体：-氨基酸中-碳原子是一个不对称碳原子，在空间的排列方式有两种方式：D型和L型。,光学异构体的化学性质和物理性质都是一样。并且，构型与旋光方向没有直接对应关系。,氨基酸的旋光性符号和大小取决于它的R基的性质，并与溶液的PH值有关。P144 图3-16,比旋光度 ：单位浓度和单位长度下的旋光度。是旋光物质的特征物理常数。,P3表3-4蛋白质中L型氨基酸的比旋光度,消旋作用 ：旋光性物质在化学反响中，只要其不对称碳原子经过对称状态的中间阶段，即发生消旋作用，并转变为D-型和L-型的等当量混合物，称消旋物。,外消旋物,：,D-,型和,L-,型的等摩尔混合物,内消旋物,：分子内消旋,胱氨酸有三种立体异构体：,L-,胱氨酸,D-,胱氨酸,内消旋胱氨酸,二氨基酸的光谱性质,可见光区：无吸收,远紫外和红外区：都吸收,近紫外区200400nm：Tyr/Trp/Phe,原因：-C=C-C=C-C=C-C=C-,1,、紫外吸收光谱,酪氨酸的,max,275nm,，,275=1.4,10,3,苯丙氨酸的,max,257nm,，,257=2.0,10,2,色氨酸的,max,280nm,，,280=5.6,10,3,蛋白质含量测定,280nm,、核磁共振波谱,自学,二.氨基酸的酸碱性质P130,1.氨基酸的兼性离子形式,1三种现象：,1晶体熔点高,2不溶于非极性溶剂,3介电常数高,2原因：,1-羧基的 pK1=2.0，,当pH3.5，-COO-存在。,-氨基的 pK2=9.4，,当pH8.0时，-NH+3存在。3.5pH pKa 时，碱酸 平衡右移,pH = pKa 时，碱=酸 平衡,pH 碱 平衡左移,2pKa 就是HA50%解离碱 = 酸时溶液的,pH值，Ka 就是此时溶液的H+。,3当碱 = 酸时溶液的pH值等于pKa,氨基酸在水溶液中既能起,质子供体,的作用,又能起,质子受体,的作用，因此是,两性电解质,。,+,H+,H+,+,Gly,的两性解离和酸碱滴定曲线,终点：,100%,Gly+,净电荷：,+1,第一拐点：,50%Gly +, 50%Gly,平均净电荷,+0.5,pH=pK1+lgGly/Gly+=pK1=2.34,第二拐点：,100%,Gly,净电荷为,0 ,第三拐点：,50%Gly,，,50%Gly-,净电荷：,-0.5,pH=pK2+lgGly /Gly=pK2=9.6,终点：,100% Gly- ,净电荷：,-1,在,pH2.34,和,pH9.60,处，,Gly,具有缓冲能力。,3.,氨基酸的等电点,(1),氨基酸的等电点,:,当溶液浓度为某一,pH,值时，氨基酸分子中所含的,-NH3,+,和,-COO,-,数目正好相等，即净电荷为,0,。在电场中的氨基酸既不向正极也不向负极移动，此时溶液的,pH,值即为氨基酸的等电点，简称,pI,。,等电点时，氨基酸处于两性离子状态。在某一试验条件下，等电点是氨基酸的特征常数。,2等电点的计算,中性氨基酸：以,Gly,为例,K,1,=,Gly, H,+,Gly,+,K,2,=,Gly,-, H,+,Gly,pI,时，,Gly,+, = Gly,-,Gly, H,+,K,1,=,Gly, K,2,H,+,H,+,2,=K,1,K,2,pH=pK1+pK2/2,pI=pK1+pK2/2,pI =,（,2.34+9.60,）,/2=5.97,Gly,对多氨基和多羧基氨基酸的解离,解离原那么：,先解离,a-COOH,随后其他,-COOH;,然后解离,a-NH,3,+,，随后其他,a-NH3+,pI,等于两性离子两侧的,pK,值得算术平均值。,酸性氨基酸，以,Asp,为例：,碱性氨基酸，以,Lys,为例：,A,pK,1,pK,2,pI,pI,pK,3,pK,3,pK,2,pK,1,加入的,OH,-,mL,数,加入的,OH,-,mL,数,pH,pH,一氨基二羧基,AA,的等电点计算：,pI,=,2,pK,1,+pK,2,二氨基一羧基,AA,的等电点计算：,pI,=,2,pK,2,+pK,3,谷氨酸A和赖氨酸B滴定曲线和等电点计算,中性氨基酸：,pK,1,，,为,羧基的解离常数，,pK,2,，,为,氨基的解离常数。,pI=(pK,1,，,+pK,2,，,)/2,酸性氨基酸：,pK,1,，,为,羧基的解离常数，,pK,2,，,为侧链羧基的解离常数。,pI=(pK,1,，,+pK,2,，,)/2,碱性氨基酸：,pK,2,，,为,氨基的解离常数，,pK,3,，,为侧链氨基的解离常数。,pI=(pK,2,，,+pK,3,，,)/2,等电点与该离子浓度无关，只决定于两性离子两侧的,Pka,值。,氨基酸的两性解离性质及等电点pI,(,pK,1,),pH = pI,净电荷,=0,pH pI,净电荷为负,CH,R,COOH,NH,3,+,CH,R,COO,NH,2,CH,R,COO,NH,3,+,+,H,+,+,OH,-,+,H,+,+,OH,-,(,pK,2,),1.,某氨基酸的等电点即为该氨基酸,两性离子,两边的,pK,值和的一半。,2.,在氨基酸等电点以上任何,pH,，,AA,带净的负电荷，在电场中向阳极移动；在氨基酸等电点以下任何,pH,，,AA,带净的正电荷，在电场中向阴极移动。,3.,在一定,pH,范围中，溶液的,pH,离,AA,等电点愈远，,AA,带净电荷愈多。,实验证明在等电点时，氨基酸主要以两性离子形式存在，但也有少量的而且数量相等的正、负离子形式，还有极少量的中性分子。氨基酸在等电点状态下，溶解度最小。,P133 表3-3，氨基酸的解离常数和等电点,氨基酸的-羧基pKa在间，比典型羧基的pKa如乙酸pKa为4.76要小很多，并且，羧基的电离大于氨基。所以，一氨基一羧基的氨基酸的等电点都在pH6.0左右。,表中只有His的咪唑基侧链在生理条件下不带电荷，在生理条件下，只有His有缓冲能力。,pH = pKa时，缓冲能力最大，等电点时缓冲能力最小。,三,.,氨基酸的化学性质,P135,一-氨基参加的反响,1.与亚硝酸反响,2.与酰化试剂反响,3.烃基化反响,4.形成Schiffs碱反响,5.脱氨基反响,NH2 OH,R CH COOH + HNO2 R CH COOH+H2O+N2,Van Slyke 法测氨基氮体积的根底，,N2中的1/2为氨基氮。,含亚氨基的脯氨酸那么不能与亚硝酸反响。,氨基酸定量和蛋白质水解程度的测定。,1、与亚硝酸反响,2 酰化反响,氨基酸的氨基与酰氯或酸酐在弱碱溶液中发生作用，氨基被酰基化。氨基中的氢被酰基所取代。,例如与酰化试剂丹磺酰氯DNS-Cl，5二甲基氨基萘-1-磺酰氯的反响,丹磺酰氯,常用于多肽链,N,末端氨基酸的标记和微量氨基酸的定量测定。,N,Gly,Ala,Ser,Leu,Phe,C,DNS,Gly,Ala,Ser,Leu,Phe,C,水解,DNS,Gly,、,Ala,、,Ser,、,Leu,、,Phe,DNS-AA,在紫外光激发后发黄色荧光,.,此外，蛋白质和,多肽,的人工合成中用作,N,末端,-NH,2,的保护剂。,苄氧甲酰氯 、 叔丁氧甲酰氯、对,-,甲苯磺酰氯、邻苯二甲酸酐,3.烷基化反响,Sanger反响:与2.4一二硝基氟苯DNFB的反响。,（,R,烃基）,反响特点：,A.为- NH2的反响。,B.氨基酸- NH2的一个H原子可被烃基取代(卤代烃),C.在弱碱性条件下，与DNFB发生芳环取代，生成二硝基苯氨基酸DNP-氨基酸。,应用：,别离得到的DNP-氨基酸黄色，层析法鉴定。, Edman反响：,N=C=S +,NCHCOOH,H,H,R,PITC,NC,NCHCOOH,H,H,R,S,PTC-,氨基酸,NC,H,R,S,N,C,C,O,PTH-,氨基酸,pH8.3,无水,HF,苯异硫氰酸酯,PITC,苯氨基硫甲酰衍生物,苯乙内硫脲衍生物,Edman降解法根底,+,PITC,弱碱中,(40,0,C),苯硫乙内酰脲,(PTH-AA),(,无水氢氟酸中,),H,+,苯氨基硫甲酰氨基酸PTC-氨基酸,Edman反响,反响特点：,A.氨基酸与苯异硫氰酸酯( PITC)偶联，生成苯氨,基硫甲酰衍生物PTC-AA，同时PTC-氨基酸环化生成苯乙内酰硫脲衍生物 PTH-氨基酸。,B.PTH-氨基酸无色可以用层析法别离鉴定。,应用：,多肽、蛋白质序列分析,多肽顺序自动分析仪，灵敏度提高，能连续测定。一次可连续自动测定60个以上的氨基酸。,4、与甲醛反响, 反响特点：,A.为- NH2的反响,B.在常温，中性条件，甲醛与- NH2反响，,生成羟甲基衍生物，释放氢离子。,应用：,氨基酸定量分析-甲醛滴定法间接滴定,为什么用甲醛滴定而不用酸碱直接滴定？,R,COOH R,COO,C=O + H,2,N CH C=N CH,H R H R,醛 氨基酸,Schiff,s,碱,-H,2,0,+H,2,0,5.生成西佛碱的反响Schiff,西佛碱是某些酶促反响的中间产物如转,氨基反响的中间产物,6.荧光胺 与- NH2的反响：,氨基酸与荧光胺反响生成有荧光的物质M=475)，根据荧光强度可用荧光分光光度计测定氨基酸的含量。,7.与5,5-双硫基-双(2-硝基,苯甲酸)反响,-SH的反响。,生成的硫代硝基苯甲酸在波长,412nm处有最大吸收峰。,测定细胞游离- SH的含量,8.脱氨基反响：,-氨基酸在氨基酸氧化酶,的作用下脱氨基转变成酮酸。,-羧基参加的反响 P138,1成盐、成酯反响 :,成盐：氨基酸与碱作用生成盐，为什么,氨基酸的酰化反响或烷基化反响需,要在碱性溶液中进行？。,成酯：-羧基被醇酯化后，形成相应的,酯。,2成酰氯的反响,氨基被保护后，羧基可与二氯亚砜或,五氯化磷反响，生成酰氯，使羧基活化，容易与另一氨基酸结合，在多肽的人工合成中常用。,3脱羧基反响,在氨基酸脱羧酶的作用下 ，放出CO2生成相应的胺。,二 -羧基参加的反响,1.成盐或成酯反响,2.成酰氯反响,3.脱羧基反响,4.叠氮反响,P138,2、成酯 NH2 枯燥，HCl R CH COOH + C2H5OH 回流 R CH COOC2H5 + H2O,NH,3,Cl,保护羧基,1、与NaOH等形成盐,为什么氨基酸的酰化反响或烷基化反响 需要在碱性溶液中进行？,HN-,保护基,R CH-COOH + PCl,5,HN-,保护基,R CH-COOCl + POCl,3,+ HCl,保护氨基 活化羧基,3、成酰氯的反响,氨基被保护后，羧基可与二氯亚砜或,五氯化磷反响，生成酰氯，使羧基活化，容易与另一氨基酸结合，在多肽的人工合成中常用,3.脱羧基反响,NH2 脱羧酶,RCH-COOH,R-CH2-NH2 +CO2,YNH O NH,2,NH,2,RCHCOCH,3,YNH O HNO,2,RCHCNHNH,2,YNH O RCHCN,-,N,+,N + 2H,2,O,酰化氨基酸甲酯,肼,酰化氨基酰肼,酰化氨基酰叠氮,肽的人工合成,4、叠氮反响,三-羧基和-氨基都参加的反响,1、与茚三酮反响,2、成肽反响,1.与茚三酮反响,茚三酮在弱酸中与-氨基酸共热，引起氨基酸的氧化脱氨、脱羧反响，最后，茚三酮与反响产物氨和复原茚三酮脱水缩合生成紫色物质max=570nm。,Pro、Hy-Pro与茚三酮形成黄色化合物,max=440nm,弱酸 加热,氨基酸与茚三酮反响,+,茚三酮,(,无色,),NH,3,CO,2,RCHO,+,还原性茚三酮,(,弱酸,),加热,3H,2,0,紫色化合物,+,2NH,3,+,水合茚三酮,还原性茚三酮,反响特点：,A.该反响由NH2与COOH共同参与,B.茚三酮是强氧化剂,C.该反响非常灵敏，可在570nm测定吸光值,D.测定范围：0.5-50g/ml,E.脯氨酸与茚三酮直接生成黄色物质不释放NH3,应用：,A.氨基酸定量分析先用层析法别离,B.氨基酸自动分析仪：,用阳离子交换树脂，将样品中的氨基酸别离，自动定性定量，记录结果。,OH,羟,2、成肽反响,四 侧链R基参加的反响,1,、,Tyr,2,、碱性,AA,2,、碱性,AA,3,、带硫,AA,侧链R基参加的反响 用于蛋白质的化学修饰,功能团有：,羟基、酚基、巯基,(,包括二硫键,),、吲 哚基、咪唑基、胍基、甲硫基、非,-,氨基和非,-,羧基等。,Tyr酚基在3和5位上易发生亲电取代反响，,如碘化和硝化,黄色反响,一碘,Tyr,二碘,Tyr,一硝基,Tyr,二硝基,Tyr,Tyr +,重氮苯磺酸,橘黄色,His咪唑基 + 重氮苯磺酸,棕红色,Pauly反响,3,5,Arg,侧链胍基在碱性硼酸钠缓冲液中与环己二酮生成缩合物。,Trp,侧链吲哚基能被,N-,溴代琥珀酰亚胺,氧化,分光光度法测定,Trp,含量,Met,侧链上甲硫基：强亲核基团与烃化试剂成锍盐,保护巯基,解离为硫醇阴离子,与二硫硝基苯甲酸发生硫醇,-,二硫化物交换,pH8.0,时,412nm,最大光吸收,分光光度法测定,-SH,Cys,的巯基不稳定，易被氧化成二硫键,巯基在有痕量的金属离子如：,Cu,2+,，,Fe,2+,，,Co,2+,或,Mn,2+,时，易被氧化。,硫醇的空气氧化产物,Cys中的二硫键可被氧化剂过甲酸以及复原剂巯基化合物翻开。,磺基丙氨酸,强氧化剂,过甲酸,巯基化合物,复原剂,及时保护,DTT,二硫苏糖醇DTT 复原剂翻开二硫键,.酪氨酸的酚基,米伦反响Millon：酚基与HgNO3、HgNO2 HNO3和HNO2作用产生白色的沉淀，加热后呈红色。,. 精氨酸的胍基,坂口反响Sagakuchi：胍基与-萘酚，次溴氯酸盐在氢氧化钠溶液中 生成红色物质。,与5,5-双硫基-双(2-硝基苯甲酸),反响,-SH的反响：P13,Cys的R侧链上的-SH,在PH8.0和室温下与 5,5-双硫基-双(2-硝基苯甲酸)反响生,成含SH的硫代硝基苯甲酸， max=412nm。,测定细胞游离- SH的含量,苯环的黄色反响,phe+,少量浓,H,2,SO,4,+,浓,HNO,3,黄色,Tyr,or,Trp,+,浓,HNO,3,黄色,Folin一酚反响,+,磷钼酸,Tyr,磷钨酸,or,Trp,蓝色（钼蓝与钨蓝混合物,）,乙醛酸反响 紫色环反响,吲哚,Trp+浓H2SO4-紫色环,六、氨基酸混合物的分析别离,利用,AA,成分分配系数的差异,一分配层析法的一般原理,分配层析原理,层析系统有两个相组成，一个是固定相，一个是流动相，混合物在层析系统中的别离决定于该混合物的组分在这两相分配系数。,分配定律：一种溶质在两种一定的互不相溶的溶剂中分配，在一定温度下到达平衡后，溶质在两相中浓度比值为一常数，即分配系数。,层析系统,固定相,流动相,附着在固相上的液体,固体,按两相所处状态分：,流动相,液体,气体,固定相,液体,液液层析,气液层析,固体,液固层析,气固层析,先决条件,：,分配系数有差异，,差异越大，越容易分开。,柱,固定相装于柱内,纸,固定相是液体，吸附在滤纸上，将样品点在纸上，用流动相展开,薄层,将有适当粘度的固定相涂在薄板上,薄膜,与纸层析相似，,纸用其它高分子有机吸附剂代替,按操作形式分：,吸附,固体 吸附能力不同,分配,液体 分配系数不同,离子交换,离子交换剂 亲和性不同,凝胶,多孔凝胶， 通过速度不同,亲和,固定相只能与一种组分结合，,分开其它无亲和力的组分,按层析原理分：,固定相 各组分对固定相,(1) 纸层析, 支持剂：滤纸,固定相：吸附水,流动相：丁醇、醋酸、水, 原理： 混合氨基酸在这两相中不断,的分配，使他们分布在滤纸,的不同位置。,根本步骤：点样、展层、现色、定性定量,2纸层析,单向纸层析图,Rf,值,双向纸层析图,相对迁移率,R,f,= X/Y,X-,原点到层析点,的距离,Y-,原点到溶剂前,沿距离,(2),柱层析,填充物,：填充物为亲水性的不溶物,质纤维素、淀粉、硅胶等。,固定相,：结合水,洗脱剂：,苯酚、正丁醇等。,原 理：,洗脱剂洗脱时，加在柱上端,的氨基酸混合样品在两相之,间连序分配，以不同的速度,向下移动，分部收集柱下端,的洗脱液，再用茚三酮显色,定量。,(3)离子交换层析,支持剂：离子交换树脂球形的颗粒,离子交换树脂基质：具有酸性或碱性基团的人工合成聚苯乙烯-苯二乙烯高分子化合物。,带电基团：是通过后来的化学反响引入,基质的。,类 型：阳离子交换树脂,阴离子交换树脂,原理：,阳离子交换树脂：含有酸性基团如-SO3H (强酸性或_COOH弱酸性，可解离出H+,在酸性环境中，氨基酸的阳离子可与H+发生交换而结合到树脂上。,阴离子交换树脂：含有碱性基团如_N(CH3)3OH(强碱性_NH3OH弱碱性，可解离出_OH-，在碱性环境中能与溶液中的阴离子氨基酸阴离子交换而结合到树脂上。,磺酸型阳离子交换树脂,作用力：,1静电吸引，,2氨基酸侧链与树脂基质的疏水,相互作用。,在PH3左右，AA与阳离子交换树脂之间的静电吸引力的大小次序：,碱性氨基酸R2+) 中性氨基酸R+ 酸性氨基酸R0,洗出顺序为：,酸性氨基酸、中性氨基酸、碱性氨基,酸。,离子交换层析,(4) 薄层层析,支持剂：纤维素粉、硅胶、氧化铝粉,根本步骤：铺板、点样、展层、现色、定性定量,(5)气液层析气相层析、气相色谱,固定相：涂有薄层液体的惰性颗粒,流动相：H2、N2、CO2,前提：样品能汽化、热稳定,(6) 高效(压)液相层析(HPLC),固定相支持剂颗粒很细，因而外表积很大；溶剂系统采取高压，因此洗脱速度增大 。,因此多种类型的柱层析如分配层析、离子交换层析、吸附层析和 凝胶过滤层析都可以用HPLC 。,本节小结,1.20种氨基酸的结构特征；甘氨酸和脯氨酸结构,特点,2.酸性氨基酸与碱性氨基酸；必需氨基酸与非必,需基酸；极性氨基酸与非极性氨基酸的划分.,3.两性离子；pK值与pI；,4.氨基、羧基和侧链巯基的化学反响 ；,5.旋光性；苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸的紫外吸,收特点,6.纸层析和离子交换层析的原理及方法,书后习题：1，2，3，5，10，11，14，15。,
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