第18章-补体检测及补体参与试验课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,医学技术学院免疫教研室,第十八章,补体检测及补体参与,的试验,医学技术学院免疫教研室 第十八章 补体检测及补体参与,案例：,患者男，,11,岁。,主诉：,5,年以来反复出现浮肿,近,4d,加重入院。患者于,5,年前,无明显诱因出现水肿,多发生于手、足和颜面部。,6-7,次,年,每次发作持续,2-3d,。患者无传染病接触史及食物和,药物过敏史。其母亲及哥哥有类似症状,哥哥,8,岁时死于,该病引起的呼吸窘迫,其父体健。,实验室检查：,血细胞计数,/,尿液分析,/,肝肾功能均正常。血浆,C4,值减,至,0.68mol/l (,参考值,0.97-2.43mol/l),。,C1INH,为,29,(,参考值,70,-130,),。,初步诊断：,遗传性血管水肿。,问题：,1,哪些实验室检查可以明确诊断,?,为什么？,2,该病主要与补体哪种成分相关？发病特点？,3.,检测该患者补体成分用何方法,?,案例：患者男，11岁。 主诉：5年以来反复出现浮肿,近4d加,掌握：,补体的概念及其理化性质；血清总,补体活性测定（,CP-CH50,）的实验原理；,补体结合试验的原理。,熟悉：,CP-CH50,方法、结果判定及方法评,价；单个补体成分测定。,了解：,其他,掌握：补体的概念及其理化性质；血清总补体活性测定（CP-CH,第一节,补体的理化特性与生物学,功能,第二节,血清总补体活性测定,第三节,单个补体成分的测定,第四节,补体参与的试验,第五节,补体测定的临床意义,第一节 补体的理化特性与生物学 功能 第二,补体,（,complement,C),：,存在于人和动物,血,清,、组织液和某些细胞,上的一组激活后具有,酶,活性的,不,耐热蛋白质。,第一节,补体的生物学特性与功能,补体（complement,C)： 存在于人和动物血,补体并非单一成分，是由,30,余种可溶性蛋,白和膜结合蛋白组成，称为补体系统,。,根据补体系统的生物学功能，可将其分为：,补体,固有成分,、补体调,节蛋白,、补体,受体,(,complement receptor, CR,),三大部分,。,第一节,补体的理化特性与生物学功能,补体并非单一成分，是由30余种可溶性蛋白和膜结合蛋,?,由,肝,细胞、巨噬细胞肠粘膜上皮产生,?,含量约占血清球蛋白总量的,10%,，,多为,球蛋白。,?,C3,含量最高、,D,因子,含量最低,?,对热不稳定，,56加热,30,分钟,灭活,?,多种理化因素如射线、机械振荡可破坏,补体,掌握,一、补体成分的理化特性,?由肝细胞、巨噬细胞肠粘膜上皮产生 ?含量约占血清球,补体,成分,分子量,电泳,区带,血清含量参考,值（,g/ml,）,补体,成分,分子量,电泳,区带,血清含量参考,值（,g/ml,）,C1q,390,2,70,C9,79,240,C1r,95,35,B,95,210240,C1s,85,35,D,25,2,C2,117,1,2030,P,220,2,25,C3,190,1,1300,C1INH,150,180,C4,180,2,430600,C4bp,1100,250,C5,190,2,75,I,因子,93,50,C6,128,2,60,H,因子,159,400480,C7,120,2,55,S,因子,88,500,C8,163,1,200,补体的理化性质,了解,补体 成分 分子量 电泳 区带 血清含量参考值（g/ml）,经典途径,二、补体系统的激活,C1,C4,C2,Ab+Ag,C3,转化酶,C5,转化酶,C5,C6,C7,C8,C9,MAC,膜攻击,了解,经典途径 二、补体系统的激活 C1,C4,C2 Ab+Ag,第18章-补体检测及补体参与试验课件,甘露糖苷,MBL,C4,C4a + C4b,C2,C2b + C2a,C4b2a,（,C3,转化酶）,+,MASP,MASP,MBL,甘露糖苷,MASP,：（,MBL,相关的丝氨酸蛋白酶）,MBL,途径,MASP2,甘露糖苷 MBL C4 C4a + C4b C2 C2b,经典激活途径,替代激活途径,MBL,途径,激活物质,抗原抗体复合物,肽聚糖、酵母多糖、,脂多糖,MBL,相关的丝氨酸,蛋白酶,起始分子,C1q,C3,C4/C2,参与补体,成分,C1/C4/C2/C3/,C5-C9,C3/B/D/P,因子,/C5-,C9,、,C2-C9/MASP,所需离子,Ca,2+,、,Mg,2+,Mg,2+,Ca,2+,C3,转化酶,C4b2a,C3bBbp,C4b2a,C5,转化酶,C4b2a3b,C3bnBb,C4b2a3b,生物学,作用,参与特异性免疫,的效应阶段,感,染后期,发挥作用,参与非特异性免疫,的效应阶段,感染,早期,发挥作用,参与非特异性免,疫的效应阶段,感染早期,发挥作用,三种途径比较,经典激活途径 替代激活途径 MBL途径 激活物质 抗原抗体复,三、补体系统的生物学功能,1,.,溶解细胞、细菌、病毒（,MAC,）,2.,调理作用（,C3b,C4b,）,3.,清除免疫复合物,(,C3b,),4.,引起炎症反应,(,C3a, C4a,，,C5a,),5.,免疫调节作用,(,C3b,),了解,三、补体系统的生物学功能 1.溶解细胞、细菌、病毒（MAC）,复习,1.,产生补体的细胞是？补体的理化特,性？,2.,哪类疾病考虑检测补体活性？,3.,检测补体活性常用实验？,4.,补体参与的实验,PH,要求？,复习 1.产生补体的细胞是？补体的理化特性？ 2.哪类疾病考,第二节,血清总补体活性测定,?,补体总,活性,测定方法,?,应用不同激活物活化不同补体途径,?,基于经典途径的,CP-CH50,（临床常规项目）,应用于,C3,旁路检测的,AP-CH50,（不是常规）,MBL,途径活性测定的可靠方法暂未建立,第二节 血清总补体活性测定 ?补体总活性测定方法 ?应用不,补体最主要的活性是,溶细胞,作用，这种,活性很容易通过溶血反应进行检测。在一,个适当的、稳定的反应系统中，溶血反应,对补体的剂量依赖呈一个特殊的,S,形曲线,。,50%,溶血,-CH50,掌握,补体最主要的活性是溶细胞作用，这种活性很容易通过溶血反应进行,在半溶血,（,50,溶血）,上下时曲线最陡，对补,体量的变化非常敏感。,故采用,50,溶血,作为终,点指标，这一方法称为,补体,50,溶血，简称为,CH50,。,一、,CP-CH50,实验原理,掌握,测定总补体活性,在半溶血（50溶血）上下时曲线最陡，对补体量的变化非常敏感,2.,测定方法要点及结果判断,熟悉,（,1,）调制红细胞悬液：,2%SRBC,（,2,）溶血素：,2U,（,3,）缓冲液：,BBS;PH7.2-7.4;,钙镁离子,.,（,4,）配制,50%,溶血标准管,（,5,）正式试验,（表,18-1,）,（,6,）,50%,溶血总补体活性的计算,2.测定方法要点及结果判断 熟悉 （1）调制红细胞悬液：2%,3.,方法评价,?,方法,简便,、,快速,，但敏,感性低,?,经典途径的总补体溶血活性测定，如,CH50,测定,值,过低,或完全无活性，应考虑,补体缺陷,.,?,CH50,增高,见于：心肌梗死、大叶性肺炎等,?,CH50,降低,见于：系统性红斑狼疮、类风湿性关,节炎和强直性脊柱炎或严重肝病等,熟悉,3.方法评价 ?方法简便、快速，但敏感性低 ?经典途径的总补,二、脂质体均相免疫溶破试验,?,用于血清,总补体活性,测定,?,试剂盒,包括：,1.,脂质体,（内含抗原和酶）,2.,羊抗,DNP,抗体和酶底物,该方法,不使用,SRBC,，血清用量少，,影响因素少，操作简便、,快速准确,，适,用于自动分析仪测定。,了解,二、脂质体均相免疫溶破试验 ?用于血清总补体活性测定 ?试剂,三、,AP-CH50,?,原理：,家兔红细胞,未经致敏可直接激活,人血清中的,B,因子,，引起旁路途径活化，,导致兔红细胞溶解。在红细胞量一定时，,溶血程度与血清中参与旁路激活途径的,补体量,与,活性呈正相关,。,?,本法主要反映旁路途径的溶血功能，结,果与,C3,、,B,因子、,P,因子等的量及活性有,关。,了解,三、AP-CH50 ?原理：家兔红细胞未经致敏可直接激活人血,第三节,单个补体成分的测定,熟悉,?,常作为单个补体成分的检测指标：,C3,、,C4,、,C1q,、,B,因子和,C1INH,等,?,测定方法：,免疫溶血法,（检测单个补体成分的,活性,）,免疫化学法,（检测单个补体成分的,含量,）,第三节 单个补体成分的测定 熟悉 ?常作为单个补体成分的检,原理：,Ag+Ab(IgG /IgM)+C,溶血,材料：,抗原,：,SRBC,抗体,：兔或马抗,SRBC,的抗体,补体,：已知缺少某一成分的补体,不溶,(,人缺,C2/,豚鼠缺,C4/,小鼠缺,C5/,家兔缺,C6),加入待检血清观察溶血程度,一、免疫溶血法,熟悉,原理：Ag+Ab(IgG /IgM)+C 溶血 材,应用,检测补体活性,?,检测待检标本中某一,单个补体,成分是否,缺乏，可以帮助诊断补体某个成分缺失,或其含量正常但无溶血活性的先天性补,体,缺陷。,?,方法评价,?,简便，快速，无需特殊仪器与设备，敏,感性较,低,，影响因素多。,应用 检测补体活性 ?检测待检标本中某一单个补体成,二、免疫化学法,免疫化学法分类,1.,单向免疫扩散,2.,火箭免疫电泳,3.,酶联免疫吸附试验,4.,透射比浊法,5.,散射比浊法,?,前两种方法：,手工操作繁琐、耗时长、影响因素多、,结果重复性差，已逐渐淘汰,?,后两种方法：,通过仪器对补体的,C3,、,C4,、,B,因子等单,个成分进行自动化定量测定,熟悉,二、免疫化学法 免疫化学法分类 1.单向免疫扩散,一、补体结合试验,(complement fixation test,，,CFT,),补体结合试验,将免疫溶血作为,指示系统,，用以检测另一反应系统,中抗原或抗体的传统方法。,?,第四节,补体参与的试验,一、补体结合试验 (complement fixation,1.,试验原理,利用抗原抗体免疫复合物可激活补体,的特点，用一定量的,补体,和,致敏绵羊红,细胞,来检测,有无抗原抗体,特异性结合的,一类试验。,掌握,1.试验原理 利用抗原抗体免疫复合物可激活补体的特点，用一定,1.,试验原理,5,种,成分参与反应，分属于,3,个,系统,反应系统：,即已知的抗原（或抗体）与,待测的抗体（或抗原）；,补体系统：,豚鼠血清,指示系统：,即,SRBC,与相应溶血素；,掌握,1.试验原理 5种成分参与反应，分属于3个系统 反应,补体,结合,试验,补体结合试验,2.,结果判断,1.,反应系统中,有抗原或抗体时,，补体被消,耗，指示系统,不发生溶血,，,补体结合试,验,阳性,2.,反应系统中,无抗原或抗体时,，补体未被,消耗，指示系统,发生溶血,，,补体结合试,验,阴性,熟悉,2.结果判断 1.反应系统中有抗原或抗体时，补体被消耗，指示,优,点,灵敏度高、特异性强、结果易观察、可检测,的范围广泛，无需特殊设备、试验条件要求,不高。,缺,点,参与反应的成分多，影响因素复杂，操作繁,琐，难于标准化。,3.,方法评价,了解,优 点 灵敏度高、特异性强、结果易观察、可检测的范围广泛，无,二、补体依赖的细胞毒试,验,?,原理：,带有特异性抗原的,靶细胞,与相应,抗,体,结合后，在,补体,的参与下，可引起靶细,胞膜损伤，导致细胞膜的通透性增加、细,胞死亡，而不带特异性抗原的细胞仍存活。,?,本实验可用于检测细胞,膜抗原,，也可,用于鉴定抗体的特异性。,了解,二、补体依赖的细胞毒试验 ?原理：带有特异性抗原的靶细胞与相,三、补体参与的其他试验,1.,免疫粘连血凝试验,2.,溶血空斑试验,3.,胶固素结合试验,4.C1q,抗体的测定试验,了解,三、补体参与的其他试验 1.免疫粘连血凝试验 2.溶血空斑试,应用于补体含量和活性检测的试验,?,1.,诊断病原体感染,?,2.,检测补体的功能,CH50,试验,?,3.,补体单个成分及其裂解产物的测定,第五节,补体测定的临床意义,了解,应用于补体含量和活性检测的试验 ?1.诊断病原体感染 ?,一、补体活性与含量增高,?,各种,传染病,、组织,损伤,、急性,炎症,和某些,肿瘤,患者，常见,C2,、,C3,、,C4,和,C9,的增高。,?,病情危重时，总补体活性常呈,下降,趋势。,了解,一、补体活性与含量增高 ?各种传染病、组织损伤、急性炎症和某,(,图,),血管神经性水肿,二、补体活性与含量降低或缺陷,1.,先天性某些补体成分缺陷,C2,、,C3,缺陷导致的严重感染,遗传性血管神经性水肿,DAF,缺陷引起的阵发性血红蛋白尿；,细胞表面补体受体（,CR1,）缺陷可导致,C1C,清,除障碍,I,因子、,H,因子缺陷的肾小球肾炎；,C1q,缺陷表现的严重顽固性皮肤损害，免疫,复合物性血管炎（包括肾炎）等。,C1q,缺陷可引起严重顽固性皮肤损害,了解,(图)血管神经性水肿 二、补体活性与含量降低或缺陷 1.先天,案例：,患者男，,11,岁。,主诉：,5,年以来反复出现浮肿,近,4d,加重入院。患者于,5,年前无明显诱因出现水肿,多发生于手、足和颜面部。,6-7,次年,每次发作持续,2-3d,。患者无传染病接触史,及食物和药物过敏史。其母亲及哥哥有类似症状,哥,哥,8,岁时死于该病引起的呼吸窘迫,其父体健。,实验室检查：,血细胞计数,/,尿液分析,/,肝肾功能均正常。血浆,C4,值减,至,0.68mol/l (,参考值,0.97-2.43mol/l),。,C1INH,为,29,(,参考值,70,-130,),。,初步诊断：,遗传性血管水肿。,问题：,1,哪些实验室检查可以明确诊断,?,为什么？,2,该病主要与补体哪种成分相关？发病特点？,3.,检测该患者补体成分用何方法,?,案例：患者男，11岁。 主诉：5年以来反复出现浮肿,近4d加,2.,后天获得性补体活性与含量降低：,补体消耗增多,补体大量丢失,补体合成不足,2.后天获得性补体活性与含量降低： 补体消耗增多,三、补体裂解产物检测的临床意义,?,型超敏,反应为免疫复合物性，可通,过测定补体的裂解产物,C3a,、,C5a,等，,来了解疾病的进展,三、补体裂解产物检测的临床意义 ?型超敏反应为免疫复合物性,1.,补体三条激活途径的异同？,2.,补体主要功能是什么？,3.CP-CH50,测定原理及应用？,4.,补体单个成分检测方法？,5.,补体结合试验结果判定？,思考题,1.补体三条激活途径的异同？ 2.补体主要功能是什么？ 3.,1.,机体补体水平下降常见于（,）,A.,急性炎症,B.,组织损伤,C.,类风湿性关节炎,D.,某些恶性肿瘤,E.,过敏反应,2.,溶血反应的检测试剂中加入少量的钙、镁离子的目的,是,( ),A.,保持溶液的等渗压,B.,维持合适的,pH,C.,抑制细菌的生长,D.,抑制溶血反应,E.,有助于补体的激活,3.CH50,试验测定的是,( ),A.,总补体量,B.,总补体浓度,C.,总补体溶血活性,D.,总补体体积,E.,单个补体,C,E,C,1.机体补体水平下降常见于（ ） A.急性炎症 B,4.,在,CH50,试验中,溶血程度与补体含量的关系为,( ),A.,直线,B.,双曲线,C.,抛物线,D.S,形曲线,E.,正态分布,5.,关于补体结合试验的描述正确的是,( ),A.,仅用于抗原检测,B.,有,2,个系统参与反应,C.,不溶血结果为阳性,D.,溶血结果为阳性,E.,只用于可溶性抗原检测,6.,关于,CH50,说法正确的是,( ),A.,方法简便,/,快速,/,敏感性高,B.,无需特殊设备,C.,与测定使用的缓冲液无关,D.,补体活性与反应体积,成正比,E.,反映,MBL,途径的补体活性,7.,正常血清中,补体含量最高的是,( ),A.C1 B.C2 C.C3 D.C4 E.C5,D,C,B,C,4.在CH50试验中,溶血程度与补体含量的关系为( ),8.,血清总补体活性测定常以红细胞溶血为指示,作为判,定终点的是,( ),A.25%,溶血,B.50%,溶血,C.75%,溶血,D.100%,溶血,E.,不溶血,9.,与,CP-CH50,检测血清补体溶血活性有关的是,( ),A.,补体,C3/B/D/P,的含量与活性,B.,补体,C5-9,的量与活性,C.,补体,C1-9,的量与活性,D.,补体,C3/B/D/P,及,C5-9,的含量与活性,E.,补体,B/D/P,及,C1-9,的含量与活性,10.,CP-CH50,试验时常用的,SRBC,悬液的浓度为,( ),A.1% B.5% C.10% D.20% E.2%,B,C,E,8.血清总补体活性测定常以红细胞溶血为指示,作为判定终点的是,11.,补体结合试验中常作为补体的血清是,( ),A.,马新鲜血清,B.,绵羊新鲜血清,C.,小鼠新鲜血清,D.,豚鼠新鲜血清,E.,大鼠新鲜血清,12.,用于,AP-CH50,的红细胞是,( ),A.,绵羊红细胞,B.,家兔红细胞,C.,鸡红细胞,D.,小鼠红细胞,E.,人,O,型红细胞,13.,补体结合试验的指示系统是,( ),A.,特异性抗体与待测抗原,B.,特异性抗原与待测抗体,C.,特异性抗体与补体,D.SRBC,与溶血素,E.,特异性抗原与补体,D,B,D,11.补体结合试验中常作为补体的血清是( ) A.马新鲜,