溶血性贫血实验室检查讲课课件

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,#,什么叫溶血性贫血？,hemolytic anemia-,指各种原因导致红细胞生存时间缩短、破坏增多或加速，骨髓代偿造血功能不足时所发生的一类贫血。,什么叫溶血性疾病？,指骨髓代偿能力尚足以补偿红细胞的损耗而不出现贫血。,什么叫溶血性贫血？,1,溶血性贫血的分类,(,病因和发病机制,),1,、,RBC,内在缺陷所致的溶贫,（,1,）,RBC,膜缺陷：,遗传球,PNH,（,2,）,HB,结构异常：,海洋性贫血,（,3,）,RBC,内酶缺陷：,G-6PD,缺乏症,2,、,RBC,外来因素所致的溶贫,AIHA,、药物、化学因素、感染因素,溶血性贫血的分类(病因和发病机制)1、RBC内在缺陷所致的溶,2,溶血性贫血的分类（溶血的场所）,1,、,血管内溶血：,RBC,在循环血液中直接破坏，如,血型不合输血,PNH,2,、,血管外溶血：,RBC,在脾脏破坏，如,球形,RBC,增多症、脾亢,3,、,原位溶血：幼,RBC,在骨髓中溶血，如,AL,、巨幼贫,溶血性贫血的分类（溶血的场所）1、血管内溶血：RBC在循环血,3,二、哪一类溶血性贫血？,各种溶血均可减低，血管内溶血减低最显著,参考值 未孵育 50%溶血44.,其Hb氧化成Heinz小体（用结晶紫、甲紫或煌焦油兰染色，油镜观察）,原理：PNH患者红细胞膜对补体敏感,在酸性(pH6.,按抗体反应最适温度分为温抗体型和冷抗体型，后者又分为冷凝集素综合征和阵发性冷性血红蛋白尿,重型 地贫80-90%,等电点调节水溶液的pH，能使蛋白质的NH+与COO- 数目相等呈电中性，,其Hb氧化成Heinz小体（用结晶紫、甲紫或煌焦油兰染色，油镜观察）,效价低于1:40，反应最高温度4,正常人强荧光；,目的：检查红细胞表面的或血清中游离的不完全 抗体，用于诊断AIHA。,对低渗溶液抵抗能力减小即RBC渗透脆性增加,正常血液数小时后变成暗色,含铁血黄素尿试验（Rous试验）,如何诊断溶血性贫血？,第一步,确定是否有溶血,第二步 哪一类溶贫,二、哪一类溶血性贫血？如何诊断溶血性贫血？第一步 确定是,4,一、首先确定有无溶血,（一）,找出,RBC,破坏增多的依据,（,1,）,RBC,寿命缩短,（,2,）血片见,RBC,碎片,（,3,）,血浆游离,HB,增高,（血管内溶血）,（,4,）,HB,尿检测（），酱油色,（,5,）,尿含铁血黄素试验（）,（,6,）血清非结合胆红素（间接胆红素）增高,（,7,）尿胆原增高,（,8,）,血清结合珠蛋白减低,（,9,）,血浆高铁血红素清蛋白检测（）电泳法 ：区带,一、首先确定有无溶血,5,Hb,代谢示意图,珠蛋白,血红素 铁,+,卟啉,单核巨噬系统,脾脏,血管外溶血,RBC,血管内溶血,血浆游离,Hb,肾脏,血红蛋白尿,游离胆红素,肝脏,结合珠蛋白,近曲小管上皮细胞,肾阈,结合胆红素,粪胆原的肠肝循环,含铁血黄素尿,Rous,实验,胆汁,粪胆原,肠道,血液,肾脏,尿胆原,高铁血红蛋白,清蛋白,/,血红素蛋白,Hb代谢示意图 珠蛋白 单核巨噬系统 血管外溶血RBC血管,6,溶血性贫血筛查,红细胞寿命测定,方法：,51,Cr,标记红细胞，检测其半衰期,正常红细胞半衰期,25,32,天,溶血性贫血者半衰期小于,15,天,确定溶血性贫血的可靠方法,溶血性贫血筛查红细胞寿命测定,7,溶血性贫血筛查,血浆游离血红蛋白测定,参考值：,50mg/L(1-5mg/dl),临床意义：,血管内溶血者明显升高,AIHA,、珠蛋白生成障碍性贫血者轻度升高,血管外溶血时正常,溶血性贫血筛查血浆游离血红蛋白测定,8,溶血性贫血筛查,血清结合珠蛋白测定,参考值：,0.7-1.5g/L,临床意义：,各种溶血均可减低，血管内溶血减低最显著,肝病、传单、先天性无结合珠蛋白血症减少或消失,感染、创伤、糖皮质激素治疗、服用避孕药物、肝外阻塞性黄疸可增高,溶血性贫血筛查血清结合珠蛋白测定,9,溶血性贫血筛查,血浆高铁血红素清蛋白测定,方法：,生化法：与硫化铵形成铵血色原，经光谱仪测定,558nm,吸收光带,电泳法：醋酸纤维膜电泳,正常值：阴性,临床意义：阳性者表示严重的血管内溶血,溶血性贫血筛查血浆高铁血红素清蛋白测定,10,溶血性贫血筛查,含铁血黄素尿试验（,Rous,试验）,原理：,铁离子,+,氰化钾 铁氰化铁（蓝色）,如肾小管上皮有含铁血黄素，该试验阳性,正常值：阴性,临床意义：阳性者表示慢性血管内溶血，如,PNH,溶血性贫血筛查含铁血黄素尿试验（Rous试验）,11,含铁血黄素,含铁血黄素,12,（,二）显示红细胞代偿增生依据,外周血网织红增多；,外周血红细胞形态：,大小不均，大红细胞、嗜多色细胞及有核红细胞，,Howell-Jolly,小体、,Cabot,环、点彩红细胞等,增生性贫血骨髓象：,增生明显活跃，红系显著增生，粒系相对减少，巨核系一般正常,（二）显示红细胞代偿增生依据,13,二、哪一类溶血性贫血？,（一）红细胞膜缺陷的检验,红细胞渗透脆性试验,红细胞孵育渗透脆性试验,自身溶血试验及纠正试验,二、哪一类溶血性贫血？（一）红细胞膜缺陷的检验,14,1,、 红细胞渗透脆性试验,原理,:,正常红细胞为双凹圆盘状,在低渗盐水中吸水膨胀的适应性较大,(,可增加,70%,的体积而不破裂,),遗传性球形细胞增多症等红细胞的表面积,/,体积,(S/V),的比值小,对低渗盐水的适应性小,(,脆性增大,),本试验是测定红细胞在一系列不同浓度低渗氯化钠盐水内开始溶血和完全溶血的氯化钠浓度，检测其对不同浓度的低渗盐水溶血的抵抗力。,1、 红细胞渗透脆性试验原理:,15,红细胞渗透脆性试验,（,erythrocyte osmotic fragility test),原理：,低渗溶液,红细胞皱缩,红细胞膨胀甚至破裂,高渗溶液,等渗溶液,正常,低渗溶液,低渗溶液红细胞皱缩红细胞膨胀甚至破裂高渗溶液等渗溶液正常,16,参考值,0.6 - 0.8%NaCl,溶液,红细胞不破裂,0.42-0.46%NaCl,溶液,部分红细胞破裂,0.28-0.34%NaCl,溶液,红细胞完全破裂,NaCl,0.85%,0.6%,0.42%,0.34%,0.8%,0.7%,对低渗溶液抵抗能力,减小,即,RBC,渗透脆性,增加,NaCl0.85%0.6%0.42%0.34%0.8%0.7,17,临床意义,（,1,）脆性增高,开始溶血及完全溶血时氯化钠浓度较正常对照提前两管，即,0.04%,以上,;,开始溶血,0.5%,，完全溶血,0.38%,主要见于遗传性球形红细胞增多症,（,2,）脆性减低,小细胞低色素性贫血：海洋性贫血、缺铁性贫血,溶血性贫血实验室检查讲课课件,18,对低渗溶液抵抗能力减小即RBC渗透脆性增加,各种溶血均可减低，血管内溶血减低最显著,正常红细胞半衰期2532天,Coombs试验（抗人球蛋白试验）,当升温至30-37C则发生溶血,大小不均，大红细胞、嗜多色细胞及有核红细胞，Howell-Jolly小体、Cabot环、点彩红细胞等,按抗体反应最适温度分为温抗体型和冷抗体型，后者又分为冷凝集素综合征和阵发性冷性血红蛋白尿,（5）尿含铁血黄素试验（）,2、RBC外来因素所致的溶贫,目的：检查红细胞表面的或血清中游离的不完全 抗体，用于诊断AIHA。,脆性减低 缺铁性贫血、珠蛋白生成障碍性贫血、镰形细胞贫血、脾切除术后,杂合子G6PD缺乏者34h变色,HbF 明显增高见于中重型地中海贫血。,2,、红细胞孵育渗透脆性试验,原理,37,孵育,24,小时，细胞内葡萄糖消耗增加，,ATP,减少，钠离子泵出减少，细胞膨胀，脆性增高 。,参考值,未孵育,50%,溶血,44.45g/LNaCl,孵育,50%,溶血,4.655.9g/LNaCL,临床意义,常用于轻型遗传球、遗传性非球形细胞溶血的诊断,脆性增高 遗传性球形红细胞增多症,脆性减低 缺铁性贫血、珠蛋白生成障碍性贫血、镰形细胞贫血、脾切除术后,对低渗溶液抵抗能力减小即RBC渗透脆性增加2、红细胞孵育渗透,19,3,、自身溶血试验及纠正试验,原理,先天性非球形红细胞溶血患者红细胞内酶缺陷，葡萄糖酵解障碍，,ATP,不足不能维持细胞钠泵作用,患者红细胞在自身血浆中孵育,48h,，溶血增强，可加入葡萄糖、,ATP,，观察溶血能否被纠正,参考值,正常人,孵育后轻微溶血、溶血度,3.5%,加葡萄糖和加,ATP,后，溶血明显纠正，溶血度,1%,3、自身溶血试验及纠正试验 原理,20,3,、自身溶血试验及纠正试验,临床意义,常用于遗传球、遗传性非球形细胞溶血的鉴别诊断,遗传性球形细胞增多症,遗传性非球形细胞性溶贫,（,型）葡萄糖,6,磷酸脱氢酶缺陷症,（,型）丙酮酸激酶缺陷症,孵育后溶血,增强,增强,增强,加葡萄糖后溶血,明显纠正,部分纠正,不能纠正,加,ATP,后溶血,明显纠正,部分纠正,纠正,3、自身溶血试验及纠正试验 临床意义常用于遗传球、遗,21,（型）丙酮酸激酶缺陷症,（9）血浆高铁血红素清蛋白检测（）电泳法 ：区带,葡萄糖-6-磷酸脱氢酶荧光斑点试验和活性测定,血红素,定义：体内免疫异常，产生自身抗体、补体，结合在红细胞膜上使红细胞破坏加速,原理 37孵育24小时，细胞内葡萄糖消耗增加，ATP减少，钠离子泵出减少，细胞膨胀，脆性增高 。,效价低于1:40，反应最高温度4,各种溶血均可减低，血管内溶血减低最显著,含铁血黄素尿试验（Rous试验）,有过剩抗体时直接、间接均为阳性。,原卟啉,有过剩抗体时直接、间接均为阳性。,蔗糖溶血试验（sucrose hemolysis test),各种溶血均可减低，血管内溶血减低最显著,5)条件下, 能被正常人新鲜血清(含补体)所溶解,产生酸溶血现象。,（二）红细胞酶缺陷的检验,定义：红细胞酶缺陷所致溶血性贫血又称红细胞酶病，指参与红细胞代谢的酶由于基因缺陷，导致活性改变而发生溶血的一组疾病,内容：,高铁血红蛋白还原试验,氰化物,-,抗坏血酸试验,变性珠蛋白小体生成试验,葡萄糖,-6-,磷酸脱氢酶荧光斑点试验和活性测定,丙酮酸激酶荧光筛选试验和活性测定,（型）丙酮酸激酶缺陷症（二）红细胞酶缺陷的检验 定义：红,22,原理,1,、高铁血红蛋白还原试验,G6PD,正常,NADPH,还原型辅酶,烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸,高铁血红蛋白,亚铁血红蛋白,NADPH,充足,原理1、高铁血红蛋白还原试验G6PD正常NADPH还原型辅酶,23,G6PD,高铁,Hb,还原酶,G6P,G6-PA,NADP,NADPH,还原型美兰,氧化型美兰,高铁,Hb,（,Fe3+,）为褐色,氧合,HB,（,Fe2+,）红色,结果：,光电比色法 ，正常还原率,75%,，低于,75%,为异常，,提示,G6PD,活力，,74,31%,为,G-6PD,缺乏的杂合子（红棕,色），,30%,以下为显著缺陷的纯合子（为棕色,目测比色法）。,G6PD高铁Hb还原酶G6PG6-PANADPNADPH还原,24,参考值,高铁血红蛋白还原率,75%,高铁血红蛋白,0.31.3g/L,临床意义,G6PD,缺陷导致高铁血红蛋白还原率下降,见于蚕豆病、伯氨喹型药物溶血性贫血,1,、高铁血红蛋白还原试验,参考值1、高铁血红蛋白还原试验,25,原理,:,6-,磷酸葡萄糖,NADP,GSH,H,2,0,2,氧合血红蛋白,6-,磷酸葡萄糖酸,NADPH,GSSG,H,2,0,高铁血红蛋白,结果,:,正常人标本呈红色,G-6PD,2,、氰化物,-,抗坏血酸试验,临床意义,:,正常血液数小时后变成暗色,纯合子,G6PD,缺乏者,2h,变色,杂合子,G6PD,缺乏者,34h,变色,原理:G-6PD2、氰化物-抗坏血酸试验临床意义:,26,3,、变性珠蛋白小体生成试验,又称,“,红细胞包涵体,”,、,“,赫恩小体,”,、,“,Heinz,小体,”,、,“,海因小体,”,原理,：,G-6PD,缺乏致红细胞内,GSH,减少，高铁血红蛋白增高，形成变性珠蛋白小体，沉着于红细胞膜上。,抗凝血,+,乙酰苯肼,37,温育,2,4h,充分的氧化,其,Hb,氧化成,Heinz,小体（用结晶紫、甲紫或煌焦油兰染色，油镜观察）,3、变性珠蛋白小体生成试验又称“红细胞包涵体”、 “赫恩小体,27,1.,正常人 ,30%,2.,G6P,D,缺陷症,、不稳定Hb、HbH病等常高于45%,结果：,该小体为圆形或多角形色涵体，,0.2,2um,。 多位于红细胞边缘，一个红细胞含,1,20,个，多为,1,2,个，以含,5,个以上小体的红细胞计数,1. 正常人 30%结果： 该小体为圆形或多角形色涵体,28,4,、,G6PD,荧光斑点试验和活性测定,原理,:,G6PD,使,NADP,还原成,NADPH,后者在紫外线照射下发出荧光,参考值：,正常人强荧光；,酶活性,5,U/gHb,6-,磷酸葡萄糖,NADP GSH H,2,0,2,氧合血红蛋白,6-,磷酸葡萄糖酸,NADPH GSSG H,2,0,高铁血红蛋白,G-6PD,4、G6PD荧光斑点试验和活性测定 6-磷酸葡萄糖,29,5,、丙酮酸激酶荧光筛选试验和活性测定,原理,:,ADP + PK,磷酸丙酮酸,丙酮酸,NAPH,乳酸,NAD,（无荧光）,5、丙酮酸激酶荧光筛选试验和活性测定 ADP,30,参考值,正常,PK,活性荧光在,20min,内消失,酶活性,15.14.99U/gHb,临床意义,PK,严重缺乏（纯合子）荧光,60min,不消失,杂合子荧光,2560min,消失,参考值,31,(,三,),、珠蛋白合成异常的检测,(三)、珠蛋白合成异常的检测,32,血红蛋白的结构,原卟啉,血红素,Hb,（四聚体） 铁,2,条,链,珠蛋白：由,4,条多肽链组成,2,条非,链,正常人,HbA,（,22,）,97%,HbA2,（,22,）,1.5-3%,HbF,（,2 2,）,0.5-0.8%,血红蛋白的结构正常人 HbA（22） 97%,33,血红蛋白病,珠蛋白肽链量的不正常,(,地中海贫血,),血红蛋白分子结构异常,(,异常血红蛋白病,),遗传性溶血性疾病,血红蛋白病,34,1.,血红蛋白电泳,蛋白质的两性性质,是由氨基酸的,NH,+,与,COO,-,决定的。,等电点,调节水溶液的,pH,，能使蛋白质的,NH,+,与,COO,-,数目相等呈电中性，,此时蛋白质无电泳，在水中电解度小，并发生沉淀。,电泳：,一个带电荷的离子或胶体颗粒在电场中可向一极移动。,原理：,在一定的,pH,缓冲液中，缓冲液的,pH,大于,Hb,等电点，其带负电，在电场中向阳极移动；反之向阴极移动。 由于各种,Hb,珠蛋白肽链结构不同，其等电点不同，电泳方向和速度亦不同，故可分离出不同的区带，对区带进行电泳扫描，可进行,Hb,定量分析。,1.血红蛋白电泳蛋白质的两性性质是由氨基酸的NH+与CO,35,(+) H J K A G D E (-),1. HbH,增多是,HbH,病，为,-,地中海贫血的一种；,HbA2,明显增高见于轻型,地中海贫血；,HbF,明显增高见于中重型,地中海贫血。,2.,正常值：醋纤法（,PH8.6,）,HbA 96%98%,，,HbA2 1.0%3.1%,，,HbF,2%,电 泳 结 果,CA,A2,F,A,异常,正常,(+) H J,36,2.,胎儿蛋白,HbF,（,2 2,）酸洗脱试验：,含,HbF,红细胞着色,原理：,HbF,抗酸力强,临床意义：,脐带血、新生儿、婴儿阳性,成人小于,1%,地中海贫血轻者少数红细胞阳性,地中海贫血重症阳性细胞增多,2.胎儿蛋白HbF （2 2）酸洗脱试验：含HbF红细,37,3.HbF,定量测定（碱变性试验）,:,原理：,碱性溶液中,HbF,不易变性沉淀，可测定滤液中,Hb,量,临床意义：,2,岁,-,成人,HbF4%,为异常,重型,地贫,80-90%,AL,、,AA,、淋巴瘤等可轻度升高,38,4.HbA2,定量测定,诊断轻型,地贫的重要依据,5.,限制性内切酶谱分析,基因诊断,39,(,四,),、自身免疫性溶血性贫血检测,(四)、自身免疫性溶血性贫血检测,40,自身免疫性溶血性贫血,（,autoimmune hemolytic anemia,AIHA),定义：,体内免疫异常，产生自身抗体、补体，结合在红细胞膜上使红细胞破坏加速,病因：,尚未完全阐明，可能因素：病毒感染可激活多克隆,B,细胞或化学物与红细胞膜相结合，改变其抗原性，导致自身抗体产生,分类：,可为原发性的，也可继发于结缔组织病、造血系统肿瘤、感染等,按抗体反应最适温度分为温抗体型和冷抗体型，后者又分为冷凝集素综合征和阵发性冷性血红蛋白尿,自身免疫性溶血性贫血 （autoimmune hemoly,41,1. Coombs,试验（抗人球蛋白试验）,原理：,不完全抗体,(IgG),，无法架接两个邻近的红细胞，而只能和一个红细胞抗原相结合。,抗人球蛋白抗体是完全抗体,可与多个不完全抗体的,Fc,段相结合,导致红细胞凝集现象,称为抗人球蛋白试验阳性。,目的：,检查红细胞表面的或血清中游离的不完全 抗体，用于诊断,AIHA,。,直接,Coombs Test(+),说明病人,RBC,表面上包被有不完全抗体,间接,Coombs Test(+),则说明病人血清中存在着不完全抗体,1. Coombs试验（抗人球蛋白试验） 原理：不完全抗体,42,Coombs,血清（抗人球蛋白血清）,Coombs血清（抗人球蛋白血清）,43,（,1,）直接试验,正常人：阴性,直接反应阳性，最常见于,AIHA,（其他有药物诱发的溶贫、阵发性冷性,Hb,尿、新生儿同种免疫溶血病、,SLE,、类风湿关节炎、恶性淋巴瘤等）。,目的：,测定吸附于红细胞表面的不完全抗体,方法：,结果：,（1）直接试验正常人：阴性目的：测定吸附于红细胞表面的不,44,（,2,）间接试验,有过剩抗体时直接、间接均为阳性。,AIHA,分三型：,C,3,型,12%,，,IgG,型,24%,，,IgG+C,3,型,60%,。冷凝集素病为,IgM,抗体。,目的：,测定血清中游离的不完全抗体,方法,：,结果：,间接阳性，见于,AIHA,，正常人为阴性,。,病人血清,正常,RBC,抗,IgG,（2）间接试验有过剩抗体时直接、间接均为阳性。目的：测定血清,45,2.,冷凝集素试验,原理,冷凝激素是可逆性抗体：低温时可与自身红细胞、,O,型红细胞、患者同型红细胞发生凝集，温度升高时，凝集块又复消失,参考值,效价低于,1:40,，反应最高温度,4,临床意义,某些,AIHA,很高,2.冷凝集素试验原理,46,3.,冷热双相溶血试验,原理：,阵发性寒冷性血红蛋白尿症（,PCH,）患者的血清中有双相溶血素，在,0-4,C,时，溶血素与红细胞结合，并吸附补体，但不溶血；当升温至,30-37C,则发生溶血,参考值：,阴性,临床意义：,阳性见于阵发性寒冷性血红蛋白尿患者,3. 冷热双相溶血试验,47,（五）、阵发性睡眠性血红蛋白尿,paroxysmal noturnal hemoglobinuria , PNH,为获得性红细胞膜缺陷引起的慢性血管内溶血常在睡眠时加重也可伴有发作性睡眠性血红蛋白尿和全血细胞减少,（五）、阵发性睡眠性血红蛋白尿paroxysmal no,48,1,、酸溶血试验,(Ham,试验,),原理：,PNH,患者红细胞膜对补体敏感,在酸性,(pH6.4,6.5),条件下,能被正常人新鲜血清,(,含补体,),所溶解,产生酸溶血现象。,临床意义：,正常人阴性,阵发性睡眠性血红蛋白尿阳性（,PNH,），此试验,可作为,PNH,的确诊试验。,1、酸溶血试验 (Ham试验) 临床意义：,49,2.,蔗糖溶血试验,（,sucrose hemolysis test),原理：,蔗糖溶液加强补体与红细胞结合，使蔗糖进入红细胞，导致溶血增强,临床意义：,敏感性最高，特异性差,是,PNH,的筛选试验,阴性常可排除,PNH,，阳性需再做,Ham,试验。阳性率,90-91%,。,2.蔗糖溶血试验（sucrose hemolysis tes,50,3.,蛇毒因子溶血试验,原理：,蛇毒因子直接激活补体,C3,，旁路途径激活补体系统，攻击,PNH,病人红细胞,临床意义：,是特异性,PNH,试验，敏感性优于,Ham,试验,溶血性贫血实验室检查讲课课件,51,常用的溶血性贫血病因实验检查项目,项目,结果,常见疾病,红细胞脆性试验,增高,遗传性球形红细胞增多症,抗人球蛋白试验,阳性,AIHA,；药物免疫性溶血性贫血；新生儿同种免疫容血病；冷凝集素综合症,酸溶血试验,阳性,PNH,（确诊试验）,蔗糖溶血试验,阳性,PNH,（筛选试验）,高铁血红蛋白还原试验,还原率减低,G6PD,缺乏症,血红蛋白电泳,异常,用于检查,HbC,、,HbBart,S,等,常用的溶血性贫血病因实验检查项目项目结果常见疾病红细胞脆性试,52,项目,结果,常见疾病,HbA2,增高,地贫,HbF,增高,地贫,冷热溶血试验,阳性,PCH,病,项目结果常见疾病HbA2增高地贫HbF增高地贫冷热溶血试,53,溶血性贫血实验室检查讲课课件,54,The End,The End,55,溶血性贫血筛查,血清结合珠蛋白测定,参考值：,0.7-1.5g/L,临床意义：,各种溶血均可减低，血管内溶血减低最显著,肝病、传单、先天性无结合珠蛋白血症减少或消失,感染、创伤、糖皮质激素治疗、服用避孕药物、肝外阻塞性黄疸可增高,溶血性贫血筛查血清结合珠蛋白测定,56,1,、 红细胞渗透脆性试验,原理,:,正常红细胞为双凹圆盘状,在低渗盐水中吸水膨胀的适应性较大,(,可增加,70%,的体积而不破裂,),遗传性球形细胞增多症等红细胞的表面积,/,体积,(S/V),的比值小,对低渗盐水的适应性小,(,脆性增大,),本试验是测定红细胞在一系列不同浓度低渗氯化钠盐水内开始溶血和完全溶血的氯化钠浓度，检测其对不同浓度的低渗盐水溶血的抵抗力。,1、 红细胞渗透脆性试验原理:,57,目的：测定吸附于红细胞表面的不完全抗体,(+) H J K A G D E (-),6-磷酸葡萄糖酸 NADPH GSSG H20 高铁血红蛋白,多位于红细胞边缘，一个红细胞含120个，多为12个，以含5个以上小体的红细胞计数,原理：不完全抗体(IgG)，无法架接两个邻近的红细胞，而只能和一个红细胞抗原相结合。,红细胞渗透脆性试验,结果： 该小体为圆形或多角形色涵体，0.,确定溶血性贫血的可靠方法,脆性减低 缺铁性贫血、珠蛋白生成障碍性贫血、镰形细胞贫血、脾切除术后,Hb（四聚体） 铁,提示G6PD活力，74 31%为G-6PD缺乏的杂合子（红棕,直接反应阳性，最常见于AIHA（其他有药物诱发的溶贫、阵发性冷性Hb尿、新生儿同种免疫溶血病、SLE、类风湿关节炎、恶性淋巴瘤等）。,原理：PNH患者红细胞膜对补体敏感,在酸性(pH6.,(+) H J K A G D E (-),2,、红细胞孵育渗透脆性试验,原理,37,孵育,24,小时，细胞内葡萄糖消耗增加，,ATP,减少，钠离子泵出减少，细胞膨胀，脆性增高 。,参考值,未孵育,50%,溶血,44.45g/LNaCl,孵育,50%,溶血,4.655.9g/LNaCL,临床意义,常用于轻型遗传球、遗传性非球形细胞溶血的诊断,脆性增高 遗传性球形红细胞增多症,脆性减低 缺铁性贫血、珠蛋白生成障碍性贫血、镰形细胞贫血、脾切除术后,目的：测定吸附于红细胞表面的不完全抗体2、红细胞孵育渗透脆性,58,（二）红细胞酶缺陷的检验,定义：红细胞酶缺陷所致溶血性贫血又称红细胞酶病，指参与红细胞代谢的酶由于基因缺陷，导致活性改变而发生溶血的一组疾病,内容：,高铁血红蛋白还原试验,氰化物,-,抗坏血酸试验,变性珠蛋白小体生成试验,葡萄糖,-6-,磷酸脱氢酶荧光斑点试验和活性测定,丙酮酸激酶荧光筛选试验和活性测定,（二）红细胞酶缺陷的检验 定义：红细胞酶缺陷所致溶血性贫血,59,1.,血红蛋白电泳,蛋白质的两性性质,是由氨基酸的,NH,+,与,COO,-,决定的。,等电点,调节水溶液的,pH,，能使蛋白质的,NH,+,与,COO,-,数目相等呈电中性，,此时蛋白质无电泳，在水中电解度小，并发生沉淀。,电泳：,一个带电荷的离子或胶体颗粒在电场中可向一极移动。,原理：,在一定的,pH,缓冲液中，缓冲液的,pH,大于,Hb,等电点，其带负电，在电场中向阳极移动；反之向阴极移动。 由于各种,Hb,珠蛋白肽链结构不同，其等电点不同，电泳方向和速度亦不同，故可分离出不同的区带，对区带进行电泳扫描，可进行,Hb,定量分析。,1.血红蛋白电泳蛋白质的两性性质是由氨基酸的NH+与CO,60,1. Coombs,试验（抗人球蛋白试验）,原理：,不完全抗体,(IgG),，无法架接两个邻近的红细胞，而只能和一个红细胞抗原相结合。,抗人球蛋白抗体是完全抗体,可与多个不完全抗体的,Fc,段相结合,导致红细胞凝集现象,称为抗人球蛋白试验阳性。,目的：,检查红细胞表面的或血清中游离的不完全 抗体，用于诊断,AIHA,。,直接,Coombs Test(+),说明病人,RBC,表面上包被有不完全抗体,间接,Coombs Test(+),则说明病人血清中存在着不完全抗体,1. Coombs试验（抗人球蛋白试验） 原理：不完全抗体,61,（,1,）直接试验,正常人：阴性,直接反应阳性，最常见于,AIHA,（其他有药物诱发的溶贫、阵发性冷性,Hb,尿、新生儿同种免疫溶血病、,SLE,、类风湿关节炎、恶性淋巴瘤等）。,目的：,测定吸附于红细胞表面的不完全抗体,方法：,结果：,（1）直接试验正常人：阴性目的：测定吸附于红细胞表面的不,62,（,2,）间接试验,有过剩抗体时直接、间接均为阳性。,AIHA,分三型：,C,3,型,12%,，,IgG,型,24%,，,IgG+C,3,型,60%,。冷凝集素病为,IgM,抗体。,目的：,测定血清中游离的不完全抗体,方法,：,结果：,间接阳性，见于,AIHA,，正常人为阴性,。,病人血清,正常,RBC,抗,IgG,（2）间接试验有过剩抗体时直接、间接均为阳性。目的：测定血清,63,