寄生虫课件

,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,2020/9/14,#,第六章 革兰阳性球菌,第六章 革兰阳性球菌,1,革兰阳性球菌,是指革兰染色为阳性的一群球菌，与医学,有关的兼性厌氧球菌有9属,通常引起化脓性感染，故又称化脓性球菌（,pyogenic cocci）,本章主要介绍,葡萄球菌属、链球菌属、肠球菌属。,专性厌氧球菌在第十六章厌氧菌中介绍。,革兰阳性球菌是指革兰染色为阳性的一群球菌，与医学,2,第一节 葡萄球菌属,葡萄球菌属（,Staphylococcus,）,在自然界广泛分布。,存在于人和动物的皮肤黏膜上的菌株,可致多种化脓性感染,疖、痈、脓肿、菌血症等,烫伤样皮肤综合症,毒性休克综合症,第一节 葡萄球菌属葡萄球菌属（Staphylococcu,3,一、分类,葡萄球菌属目前有35个种、17个亚种,凝固酶,凝固酶阳性葡萄球菌,凝固酶阴性葡萄球菌,（,Coagulase negative staphylococcus, CoNS ）,噬菌体分型,可将金黄色葡萄球菌分成45群26型,质粒分型、血清学分型、抗生素分型和细菌,DNA,的,RFLP,或,PFGE,分型，用来研究细菌的致病性、耐,药性、流行病学特点和细菌鉴别的关系,一、分类葡萄球菌属目前有35个种、17个亚种,4,分类,引起人类疾病的重要菌种有,金黄色葡萄球菌（,S.aureus,）,表皮葡萄球菌（,S.epidermidis,）,头状葡萄球菌（,S.capitis,）,人葡萄球菌（,S.hominis,）,腐生葡萄球菌（,S.saprophyticus,）,其余尚有一些能在人体中分离到,溶血葡萄球菌、沃氏葡萄球菌、模仿葡萄球菌、里昂葡萄球菌、施氏葡萄球菌、巴氏葡萄球菌、耳葡萄球菌、孔氏葡萄球菌、木糖葡萄球菌、解糖葡萄球菌、山羊葡萄球菌、普氏葡萄球菌、中间葡萄球菌等。,分类引起人类疾病的重要菌种有,5,二、临床意义,凝固酶阳性的金黄色葡萄球菌是人类重要致病菌,可引起社区和医院感染,感染常以急性、化脓性为特征，如果未经有效治疗，感染可扩散至周围组织或经菌血症转移至其他器官,常见的感染,疖、痈、外科切口、创伤等局部化脓性感染和骨髓炎、化脓性关节炎、肺炎、心内膜炎、脑膜炎、菌血症等全身性感染,二、临床意义凝固酶阳性的金黄色葡萄球菌是人类重要致病菌,6,临床意义,致病性主要与各种侵袭性酶类和多种毒素有关,肠毒素引起食物中毒，表现为急性胃肠炎,噬菌体,II,群产生的剥脱毒素（或称表皮溶解素）可引起人类烫伤样皮肤综合征,多见于新生儿、幼儿和免疫功能低下的成人,皮肤呈弥漫性红斑和水疱形成，继以表皮上层大量脱落,由噬菌体群产生的毒性休克综合征毒素-,I（Toxic shock syndrome toxin I, TSST-1）,属超抗原家族，刺激,T,细胞诱发,TNF,和,IL-1,可致机体多个器官的功能紊乱或引起毒性休克综合征,(TSS),临床意义致病性主要与各种侵袭性酶类和多种毒素有关,7,临床意义,CoNS,是人体皮肤黏膜正常菌群之一,是医院感染的主要病原菌,表皮葡萄球菌,人工瓣膜性心内膜炎、静脉导管感染、腹膜透析性腹膜炎、血管移植物感染和人工关节感染等,腐生葡萄球菌,女性尿路感染的重要病原菌,其他凝固酶阴性葡萄球菌,重要的条件致病菌和免疫受损患者的感染菌,产生荚膜多糖或糖萼有关,增强细菌与外来物质（生物性瓣膜、导管等）表面的粘附或在其表面形成一层生物膜而保护细菌对抗杀菌物质作用。,临床意义CoNS是人体皮肤黏膜正常菌群之一,8,三、生物学特性,直径0.51.5,m、,革兰阳性球菌,呈单个、成双、短链（液体培养基或脓汁中）或成簇排列呈葡萄串样，无鞭毛和芽胞，某些菌株能形成荚膜,在金黄色葡萄球菌的细胞壁有葡萄球菌,A,蛋白，具有抗原性,大多为兼性厌氧菌,对营养要求不高，最适生长条件,3537，pH7.47.6。,普通培养基上形成直径23,mm,不透明的圆形凸起菌落,产生金黄色、白色、柠檬色等非水溶性色素附着在菌落上。,三、生物学特性直径0.51.5m、革兰阳性球菌,9,生物学特性,金黄色葡萄球菌血琼脂平板上菌落周围有透,明溶血环。能在含10%15%,NaCl,琼脂中生长,该菌的抵抗力比其他无芽胞细菌强，耐干燥,近年来耐药性增强，对多种抗菌药物不敏感,生化反应活泼、能分解多种糖类和蛋白质，,触酶阳性,该属细菌,DNA G+C mol%,为3039,生物学特性金黄色葡萄球菌血琼脂平板上菌落周围有透,10,酶和毒素,葡萄球菌属产生多种酶和毒素,产生2种血浆凝固酶,结合凝固酶或聚集因子,是结合在菌体表面的凝固酶，能与血浆中的纤维蛋白原交联使菌体快速凝集,游离凝固酶,是细菌分泌到菌体外的凝固酶，能被血浆中的协同因子（,cofactor）,激活形成复合物，再使纤维蛋白原转变成纤维蛋白，而使血浆凝固,酶和毒素葡萄球菌属产生多种酶和毒素,11,酶和毒素,耐热核酸酶,葡萄球菌溶素,有,、,等,破坏红细胞、白细胞、血小板以及肝细胞等,肠毒素,是一组对热稳定的可溶性蛋白质，耐热100 30,min ,分子量为2630,kDa，,能够抵抗胃肠液中蛋白酶的水解作用,根据抗原性和等电点的不同可分为,A、B 、C1、C2、,C3、D、E、G,和,H,等9个血清型，以,A、D,型多见,编码肠毒素基因大多位于染色体上（,D,型由质粒编码）,酶和毒素耐热核酸酶,12,酶和毒素,毒性休克综合征毒素,透明质酸酶、磷脂酶、触酶、杀白细胞,素和表皮剥脱毒素等,携带诱导性的青霉素酶和乙酰基转移酶质粒，通过转导进行质粒的转移,部分菌株通过获得外源性的,macA,基因而,产生青霉素结合蛋白2,a（PBP2a），,导致对所有,内酰胺类抗生素耐药,酶和毒素毒性休克综合征毒素,13,四、微生物检验 （一）检验程序,四、微生物检验 （一）检验程序,14,（二）标本采集,根据感染的部位，采集不同的标本。,该属细菌广泛分布在人体皮肤和黏膜，采取时避免病灶周围正常菌群污染,。,（二）标本采集根据感染的部位，采集不同的标本。,15,（三）标本直接检查,无菌体液如脑脊液和关节穿刺液可使用涂,片、革兰染色后直接显微镜检查，查见细菌,具有重要临床价值。,其他体液标本如同时伴有炎性细胞时则直接,显微镜检查结果也具有参考价值。,涂片检查发现有形态相似的革兰阳性球菌，,则可初步报告“查见类似葡萄球菌属革兰阳性,球菌”，并进一步进行分离和鉴定予以证实。,（三）标本直接检查无菌体液如脑脊液和关节穿刺液可使用涂,16,（四）分离培养与鉴定,脓液、分泌物等,接种于血琼脂平板,有污染的标本如粪便等,应接种在选择平板上，如甘露醇高盐平板、哥伦比亚多粘菌素奈啶酸平板,血液标本则用肉汤增菌培养基,（四）分离培养与鉴定脓液、分泌物等,17,葡萄球菌属内各菌种鉴定方法,葡萄球菌属内各菌种鉴定方法,18,1.,菌落性状,金黄色葡萄球菌,直径6,8mn，,金黄色或橙色，菌落周围出现或不出现透明溶血环,表皮葡萄球菌,直径为5,6,mm，,某些产粘液菌株能粘附在琼脂平板表面，无色或白色,溶血葡萄球菌,直径5,9,mm,，不透明，无色素或奶油色、黄色,里昂葡萄球菌,直径4,7,mm，,边缘整齐稍扁，奶色、黄色和沃氏葡萄球菌相似,腐生葡萄球菌,直径5,8,mm，,白色或柠檬色,菌落外观疑为葡萄球菌者应进行革兰染色证实,甘露醇高盐平板上金黄色葡萄球菌菌落为黄色,1.菌落性状 金黄色葡萄球菌,19,2凝固酶试验,有玻片法和试管法两种,玻片凝固酶试验-测定结合型凝固酶,试验时挑取少数菌落培养物（不能用生,长高盐琼脂上的菌落）加入1滴血浆，10,秒内观察细菌聚集和凝块形成,金黄色葡萄球菌、中间型葡萄球菌呈现,阳性反应,2凝固酶试验 有玻片法和试管法两种,20,2凝固酶试验,试管凝固酶试验-测定分泌型凝固酶,以孵育过夜的牛心脑浸液肉汤培养物和血浆在37水浴中孵育4,h，,观察凝块形成。如试验结果为阴性者再置室温1824,h，,因某些菌种（中间葡萄球菌、猪葡萄球菌）的凝集出现所需时间长于4,h,必须注意,某些菌株产生的葡激酶在延长孵育时间后可使凝块溶解使之产生假阴性,若使用的不是无菌血浆可产生假阳性或假阴性结果；,细菌不是纯培养物或污染可导致假阳性,2凝固酶试验试管凝固酶试验-测定分泌型凝固酶,21,3耐热核酸酶试验,大多数金黄色葡萄球菌、施氏葡萄球菌、中间葡萄球菌、猪葡萄球菌能产生耐热核酸酶。,表皮葡萄球菌、模仿葡萄球菌、肉葡萄球菌含微弱耐热核酸酶。,3耐热核酸酶试验 大多数金黄色葡萄球菌、施氏葡萄球菌、中间,22,4磷酸酶试验,大多数的表皮葡萄球菌和金黄色葡萄球菌、施氏葡萄球菌、中间葡萄球菌和猪葡萄球菌为阳性。,将待测菌种点种在加有硝基酚磷酸盐的,pH5.66.8 MH,琼脂上，孵育1824,h，,菌落周围出现黄色为阳性。,4磷酸酶试验 大多数的表皮葡萄球菌和金黄色葡萄球菌、施氏,23,5吡咯烷酮芳基酰胺酶试验,溶血葡萄球菌、里昂葡萄球菌、施氏葡萄球菌和中间葡萄球菌为阳性。,将孵育24,h,斜面培养物接种在含吡咯烷酮-,萘基酰胺（,PYR）,肉汤中，使细菌浓度调整为2号麦氏管浊度，35孵育2,h，,加入,PYR,试剂后2分钟内呈现深紫红色为阳性。,5吡咯烷酮芳基酰胺酶试验 溶血葡萄球菌、里昂葡萄球菌、施,24,6其他鉴定试验,常用的葡萄球菌属种间细菌的鉴定生化试验,鸟氨酸脱羧酶试验、脲酶试验、,-,半乳糖苷酶、3-羟基丁酮酸试验、新生霉素敏感试验、多粘菌素,B,耐药试验、糖产酸试验,6其他鉴定试验 常用的葡萄球菌属种间细菌的鉴定生化试验,25,（五）肠毒素检测,动物学试验,经典的方法是采用幼猫腹腔注射(肉汤培养物或呕吐物)，4,h,内发生呕吐腹泻和体温升高或死亡等现象者，提示金黄色葡萄球菌肠毒素存在,琼脂扩散试验或,ELISA,法测定,用琼脂扩散试验测定待测标本中的金黄色葡萄球菌肠毒素与相应抗毒素在琼脂糖中进行双相扩散，观察有无沉淀线产生,将抗毒素包被在固相载体中以双抗体夹心,ELISA,法检测样本中的肠毒素,（五）肠毒素检测动物学试验,26,第二节 链球菌属,链球菌属（,Streptococcus,）,细菌种类多，分布广,其中某些菌种为毒力强的致病菌,另一些则是作为正常菌群栖居于宿主的呼吸道、消化道、泌尿生殖道,还有一些是皮肤上的过路菌和黏膜上的定居菌,第二节 链球菌属链球菌属（Streptococcus）,27,一、分类,链球菌属的分类较为复杂,传统分类,以血平板上溶血现象,Lancefield,抗原血清分型,种系分类法,链球菌属的分类较以前的分类有较大的变化,一、分类链球菌属的分类较为复杂,28,传统分类,根据链球菌属各种细菌在血平板上的溶血现象,甲型（,）,溶血性链球菌,乙型（,）,溶血性链球菌,不出现溶血的丙型（,）,链球菌,根据,Lancefield,抗原血清分型,分为,A、B、C、D、,等20群,血清群与溶血特性没有相关性。对人类致病的主要是,A,群,传统分类根据链球菌属各种细菌在血平板上的溶血现象,29,种系分类法,根据种系分类法的研究结果,原来归属为,D,群链球菌的肠球菌和,N,群链球菌已分别独立为肠球菌属（,Enterococcus,）,和乳球菌属（,lactococcus,）,遗传学和血清学分型不能统一,在遗传学上相关的同种细菌其抗原可出现异质性,毫无相关的菌种可出现同一抗原。,根据伯杰鉴定细菌手册第9版，链球菌目前分为40个种和亚种,种系分类法根据种系分类法的研究结果,30,传统的分类方法,溶血性链球菌,A、C、G,群抗原,菌落直径大于0.5,mm,A,群的化脓性链球菌（,S. pyogenes,）、C,群、,G,群的马链球菌（,S.equi,）,和似马链球菌（,S.equismilis,）,菌落直径小于0.5,mm,具,A、C、G,群抗原，统称米勒链球菌（,S.milleri,）,咽喉炎链球菌、中间型链球菌和星座链球菌,还有,溶血和不溶血的细菌,B,群抗原,无乳链球菌（,S.agalactiae,）,传统的分类方法溶血性链球菌,31,传统的分类方法,溶血性链球菌,包括肺炎链球菌（,S.pneumoniae,）,草绿色链球菌群（,Viridans streptococci,）,不溶血,D,群链球菌,牛链球菌（,S,.bovis,）,传统的分类方法溶血性链球菌,32,二、临床意义,化脓性链球菌是致病力最强的一种链球菌,能产生多种毒素,链球菌溶素,O,和,S,红疹毒素,M,蛋白、脂磷壁酸,酶（链激酶、链道酶、透明质酸酶等）,可引起急性咽炎、呼吸道感染、丹毒、脓疱病、,软组织感染、心内膜炎和脑膜炎等,产毒株还可引起猩红热,可致感染后的变态反应性疾病如急性肾小球肾炎、,风湿热等,近年来报道引起毒素休克综合征,二、临床意义化脓性链球菌是致病力最强的一种链球菌,33,临床意义,无乳链球菌是新生儿菌血症和脑膜炎的常见菌,该菌定居于妇女生殖道,能导致新生儿感染,早发型新生儿感染多发病于出生后24,h，,以肺炎为主,晚发型为产后7天至3月内，以脑膜炎和菌血症为主,B,群链球菌对成人侵袭力较弱,主要有肾盂肾炎、子宫内膜炎,糖尿病、泌尿生殖道功能失调、肿瘤和免疫机能低下者易受,B,群链球菌感染,临床意义无乳链球菌是新生儿菌血症和脑膜炎的常见菌,34,临床意义,C、G,群,溶血性链球菌,与化脓性链球菌有相似的毒力因子，引起上述相似的感染,米勒链球菌是人体口腔、上呼吸道、消化道、泌尿生殖道正常菌群,尽管在化脓性感染病灶中能分离到该菌，但大都是手术和创伤引起的内源性感染,临床意义C、G群溶血性链球菌,35,临床意义,肺炎链球菌,大叶性肺炎、支气管炎,中耳炎、乳突炎、鼻窦炎、脑膜炎和菌血症,肺炎链球菌的荚膜在细菌的侵袭力上起着重要作用,肺炎链球菌的溶血素、神经氨酸酶也是其主要致病物质,临床意义肺炎链球菌,36,临床意义,草绿色链球菌,人体口腔、消化道、女性生殖道的正常菌群，,可引起心脏瓣膜异常患者的亚急性细菌性心内膜炎,从血液中分离出该菌常被认为是污染的细菌,血液链球菌,、,温和链球菌,、,格氏链球菌,、,口腔链球菌,、,中间型链球菌,常分离自深部脓肿，特别是肝和脑的脓肿,临床意义草绿色链球菌,37,三、生物学特性,三、生物学特性,38,1形态,链球菌是直径小于2,m,的球形或卵圆形革兰阳性球菌，呈链状排列，链的长短和细菌的种类及生长环境有关,肺炎链球菌呈矛尖状，宽端相对尖端向外，成双排列，无芽胞、无动力，但能形成荚膜和粘液层,1形态链球菌是直径小于2m的球形或卵圆形革兰阳性球菌，呈,39,2培养特性,兼性厌氧菌,肺炎链球菌和草绿色链球菌某些种需要,CO,2,营养要求高,须在培养基中加入血液、血清。最适生长温度3537，,pH7.47.6,血平板上形成灰白色小菌落,不同菌种的菌落可形成,、,三种特征性溶血现象,液体培养基中表现为絮状和颗粒沉淀,肺炎链球菌,荚膜多糖使菌落呈粘液状,产生自溶酶，培养48,h,后出现“脐窝状”菌落,2培养特性兼性厌氧菌,40,3生化特性和抵抗力,发酵葡萄糖和多种糖，不产气，乳酸为代谢终末产物，触酶阴性,链球菌基因,DNA,中,G+C mol%,为3446,抵抗力,本菌属大多数细菌对干燥和消毒剂敏感,本菌属细菌较少引起细菌耐药性,近年对青霉素耐药甚至多重耐药的肺炎链球菌的出现并在全球播散，引起高度关注,3生化特性和抵抗力发酵葡萄糖和多种糖，不产气，乳酸为代谢终,41,抗原结构,抗原结构复杂,多糖抗原,位于细胞壁以此可将链球菌分类为,A、B、C、D、F、G,等20群,蛋白抗原,主要有,M,蛋白、,F,蛋白和,G,蛋白等,抗原结构抗原结构复杂,42,四、微生物检验,检验程序,四、微生物检验检验程序,43,（二）标本采集,咽拭子、痰液、脓汁和血液等标本采集后在2,h,内运送到实验室，立即进行检查和接种,对,B,群溶血链球菌的检查，用无菌棉签采集第35周37周妊娠妇女的阴道分泌物，置于含多粘菌素,(10g/ml),和萘啶酸,(15g/ml),选择性培养肉汤中孵育1824,h，,再作分离培养,（二）标本采集咽拭子、痰液、脓汁和血液等标本采集后在2h内运,44,（三）标本直接检查,直接显微镜检查,标本涂片、革兰染色、显微镜检查见链状排列革兰,阳性球菌有助于无正常菌群污染标本的诊断,荚膜肿胀试验用于检查肺炎链球菌,直接检测抗原,咽拭标本的,A,群链球菌和女性生殖道标本的,B,群链,球菌可用抗原检测,用凝集试验或用,ELISA,方法等检测,该方法特异性和敏感度高，当标本所含的菌数太少,可出现假阴性,（三）标本直接检查直接显微镜检查,45,（四）分离培养与鉴定,用羊血琼脂平板培养有助于识别溶血特性和进一步,鉴定,初代分离需用5%,CO,2,环境，3537孵育24,h,观察菌落性状,菌落周围呈现透明溶血环的为,溶血性链球菌，菌落直径大于0.5,mm,或小于0.5,mm。,草绿色溶血环的为,溶血性链球菌。有些菌落灰白色不出现溶血环,革兰染色为革兰阳性球菌，链状或短链状排列,触酶试验阴性，6.5%,NaCl,不生长者,可确定为链球菌属细菌,（四）分离培养与鉴定用羊血琼脂平板培养有助于识别溶血特性和进,46,链球菌属内的鉴定试验,链球菌属内的鉴定试验,47,溶血性链球菌鉴定,溶血性链球菌鉴定,Lancefield,群特异性抗原鉴定,根据,Lancefield,分群的要求提取各菌落的抗原，与相应的分群血清进行凝集试验。,与,B,群抗血清凝集的菌株可直接确认为无乳链球菌,与,F,群抗血清凝集并且菌落直径0.5,mm,可确定为米勒链球菌,与,A、C、G,群抗血清凝集的菌株不能确定种类，还需根据菌落大小和生化反应进一步鉴定,溶血性链球菌鉴定溶血性链球菌鉴定,48,溶血性链球菌鉴定,PYR,试验,化脓性链球菌产生的吡咯烷酮芳基酰胺酶水解吡咯烷酮,-,萘基酰胺，加入,N，N-,二甲氧基肉桂醛试剂后产生桃红色,杆菌肽（,bacitracin）,敏感试验,化脓性链球菌为阳性，有别于其他,PYR,阳性的,溶血性细菌（猪链球菌、海豚链球菌）和,A,群小菌落,溶血性链球菌（米勒链球菌）,此法可作为筛选试验,溶血性链球菌鉴定PYR试验,49,溶血性链球菌鉴定,VP,试验,挑取平板上孵育过夜菌落置于2,ml VP,肉汤中，孵育6,h,后加入,VP,试剂，摇匀30秒，出现桃红色者为阳性,该试验可鉴别,A、C、G,群,溶血的大、小两种不同菌落,CAMP,试验,无乳链球菌能产生,CAMP,因子，它可促进金黄色葡萄球菌溶血能力，使其产生显著的协同溶血作用,本法可作为无乳链球菌的初步鉴定试验,溶血性链球菌鉴定VP试验,50,溶血性链球菌鉴定,此外鉴别,溶血链球菌还有,BGUR（B-D,葡糖糖醛酸酶试验）,C、G,群菌落为阳性反应，,C、G,群米勒链球菌则为阴性反应。,溶血性链球菌鉴定此外鉴别溶血链球菌还有BGUR（B-D葡,51,2非,溶血链球菌鉴定,通过血清学测定抗原群，可将,B,群链球菌、非,溶血的菌株和肺炎链球菌得以鉴定,Lancefield,的,D,群抗原可以存在于牛链球菌、肠球菌属和片球菌属，因此需要进行生化反应予以鉴别。,菌,种,optochin,敏感试验,胆汁溶菌试验,胆汁七叶苷试验,肺炎链球菌,S,+,草绿色链球菌,R,牛链球菌,R,+,2非溶血链球菌鉴定 通过血清学测定抗原群，可将B群链球菌,52,草绿色链球菌鉴定,草绿色链球菌是人体正常菌群一部分，通常不致病，目前借助于常规方法鉴定到种有一定困难，通常将其鉴定到群。,根据16,SrRNA,可分为温和链球菌群（,mitis group）、,米勒链球菌群（,miller group）、,变异链球菌群（,mutans group）,和唾液链球菌群（,salivrius group）,菌 群,VP,脲酶,精氨酸,七叶苷,甘露醇,山梨醇,温和链球菌群,变异链球菌群,唾液链球菌群,/,/,米勒链球菌群,/,/,草绿色链球菌鉴定 草绿色链球菌是人体正常菌群一部分，通常不致,53,商品化鉴定系统,API-Strep,系统,ID32 strep,系统,Microscan,系统,商品化鉴定系统API-Strep系统,54,抗链球菌溶素,O,抗体检测,常用于风湿热的辅助诊断,活动性风湿热患者抗体效价一般超过400单位,抗链球菌溶素O抗体检测常用于风湿热的辅助诊断,55,肠球菌属,Enterococus,广泛分布在自然界,常栖居在人、动物的肠道和女性生殖道,为医院感染的重要病原菌,肠球菌属Enterococus广泛分布在自然界,56,一、分类,肠球菌属原归类于链球菌属,于1984年将其命名为肠球菌属,至今，经由16,SrRNA,序列分析和核酸杂交,等，证实肠球菌可分为5群19个种,临床标本分离的肠球菌多属于第2群,一、分类肠球菌属原归类于链球菌属,57,二、临床意义,肠球菌所致感染最多见于泌尿道感染,是重要的医院感染病原菌,多与泌尿道器械操作、留置导尿、尿路结构异常有关,腹腔和盆腔创伤时也是常见的感染菌,肠球菌引起的菌血症常发生于有严重基础疾患的老年人、长期住院接受抗菌药物治疗的免疫功能低下患者,二、临床意义肠球菌所致感染最多见于泌尿道感染,是重要的医院感,58,二、临床意义,近年来不断上升的肠球菌感染率和广泛使用,抗菌药物出现的耐药性有关,在临床诊断前应认真评估分离菌的临床意义,临床标本中分离的80%90%是粪肠球菌,屎肠球菌约占5%10%,很少分离到肠球菌属的其它种,二、临床意义近年来不断上升的肠球菌感染率和广泛使用,59,三、生物学特性,形态：,肠球菌为革兰阳性球菌、呈单个，成对或短链状排列，琼脂平板上生长的细菌呈球杆状,液体培养基中呈卵圆形、链状排列,无芽胞和荚膜，个别菌种有稀疏鞭毛,三、生物学特性形态：,60,培养特性,兼性厌氧，最适生长温度35，10和45均能生长,营养要求不高。部分粪肠球菌菌株在含有兔血、马血或人血的平板上出现,溶血，而在羊血平板上不出现。其它菌种出现,溶血或不溶血,所有菌株在含6.5%,NaCl,肉汤中能生长,培养特性兼性厌氧，最适生长温度35，10和45均能生长,61,生物学特性,在40%胆汁培养基中能分解七叶苷，多数菌种具有吡咯烷酮芳基酰胺酶，能水解吡咯烷酮-,-,萘基酰胺（,PYR）,不含细胞色素氧化酶和触酶,但粪肠球菌培养于含血的培养基中，可合成细胞色素或触酶或两者皆有，因而某些菌株表现为触酶弱阳性,含链球菌,D,群抗原。,G+Cmol%,为3745,生物学特性在40%胆汁培养基中能分解七叶苷，多数菌种具有吡咯,62,抵抗力,对头孢菌素类、林可霉素类和磺胺类抗菌药物耐药,近年来获得性耐药菌株不断增多，表现为对氨基糖苷类耐药和对万古霉素耐药。对万古霉素的耐药是由,van,A、,van,B,和,van,C,等基因介导,抵抗力对头孢菌素类、林可霉素类和磺胺类抗菌药物耐药,63,四、微生物检验,（一）检验程序,四、微生物检验（一）检验程序,64,（二）标本采集,常规方法采集血、尿、创伤标本和其他拭子，,标本于1小时内接种完毕。,（三）标本直接检查,涂片染色显微镜检查可见单个、成双或短链,排列卵圆形革兰阳性球菌,（二）标本采集常规方法采集血、尿、创伤标本和其他拭子，（三）,65,（四）分离培养与鉴定,标本接种于含血琼脂平板,若送检标本中含革兰阴性杆菌可选用选择鉴别培养基，常用的有：,叠氮胆汁七叶苷琼脂，可抑制革兰阴性菌生长，而肠球菌分解七叶苷产生黑色菌落；,哥伦比亚多粘菌素-萘啶酸琼脂,(CAN),和苯乙基乙醇琼脂,(PEA),由于耐万古霉素肠球菌发生率增高，为早期检出耐,药菌株，可使用含万古霉素琼脂筛选方法（详见第,三十五章）,（四）分离培养与鉴定标本接种于含血琼脂平板,66,细菌鉴定方法如下,菌属的鉴定,肠球菌属细菌革兰染色阳性，卵圆形，单个、成双或短链排列。,触酶阴性、胆汁七叶苷和,PYR,阳性、6.5%,NaCl,肉汤中能生长,菌属,万古霉素,分解葡萄糖产气,PYR,胆汁七叶苷,6.5%,NaCl,生长温度,10,45,肠球菌属,敏感,乳球菌属,敏感,V,V,链球菌属,敏感,a,V,明串珠菌属,耐药,V,b,V,V,细菌鉴定方法如下菌属的鉴定 菌属万古霉素分解葡萄糖产,67,肠球菌属间的菌种鉴定,根据对甘露醇，山梨醇和精氨酸的代谢分五群,第一群:分解甘露醇、山梨糖产酸，不水解精氨酸,第二群:分解甘露醇和水解精氨酸,第三群:水解精氨酸，不分解甘露醇、山梨醇和山梨糖,第四群:不分解甘露醇，山梨糖，不水解精氨酸,第五群:分解甘露醇不分解山梨糖，不水解精氨酸,肠球菌属间的菌种鉴定根据对甘露醇，山梨醇和精氨酸的代谢分五群,68,触酶阳性的其它革兰阳性球菌,微球菌属（,Micrococcus,）,巨球菌属(,Macrococcus,),动球菌属(,Planococcus,),考氏考克氏菌(,Kocuria kristinae,),触酶微弱阳性的差异球菌属(,Alloiococcus,),和粘性罗氏菌(,Rothia mucilaginosa,),这些菌属细菌在人体和动物体表广泛存在，常在临,床标本中分离到，一般认为是非致病菌。,偶尔在某些免疫抑制或缺陷的患者中引起机会感染,如心内膜炎、脑膜炎、肺炎等。,触酶阳性的其它革兰阳性球菌微球菌属（Micrococcus）,69,微球菌属,以往曾将葡萄球菌属、微球菌属、口腔球菌属和动球菌属共同归类为微球菌科。,细菌为革兰阳性，直径为11.8,m,的球菌，常成对、四联或呈不规则排列,在大多数临床标本中由于形态与葡萄球菌属相似，触酶阳性而混淆。本菌属氧化酶阳性，对杆菌肽敏感、呋喃唑酮耐药可以与葡萄球菌属区别。,微球菌属以往曾将葡萄球菌属、微球菌属、口腔球菌属和动球菌属共,70,差异球菌属,是需氧的革兰阳性球菌，成对或簇排列。触酶试验弱阳性，氧化酶试验阴性，常在中耳炎患者的标本中分离到。,差异球菌属是需氧的革兰阳性球菌，成对或簇排列。触酶试验弱阳性,71,粘性罗氏菌,是兼性厌氧菌，触酶可变的革兰阳性球菌，成簇排列，在5%,NaCl,琼脂上不能生长，可与葡萄球菌属、微球菌属区别。,粘性罗氏菌是兼性厌氧菌，触酶可变的革兰阳性球菌，成簇排列，在,72,巨球菌属,菌体直径为1.32.5,m，,革兰阳性球菌，触酶、氧化酶阳性，对溶葡萄球菌素敏感。,巨球菌属菌体直径为1.32.5m，革兰阳性球菌，触酶、氧,73,二、触酶阴性的革兰阳性球菌,临床标本中分离到的触酶阴性的革兰阳性球菌除了链球菌属和肠球菌属外，还经常分离到,乳球菌属（,Lactococcus,）,气球菌属（,Aerococcus,）,片球菌属（,Pediococcus,）,孪生球菌属（,Gemella,）,白联球菌属（,Leuconostoc,）,生活力缺损菌属（,Abiotrophia,）,二、触酶阴性的革兰阳性球菌临床标本中分离到的触酶阴性的革兰阳,74,乳球菌属,原归属于,Lancefield N,群链球菌,BE、6.5%NaCl,生长及,PYR,试验阳性，45,不生长,可从血液、尿道及创口分泌物中分离到，在免疫缺陷患者中可引起菌血症,乳球菌属原归属于Lancefield N群链球菌,75,气球菌属,为成簇四联排列，血平板上有,溶血,绿色气球菌（,A.viridans,）,常被认为是临床标本的污染菌，偶尔引起菌血症或心内膜炎，,PYR,阳性，6.5%,NaCl,生长，但不能在10或45生长，,V-P,阴性,尿气球菌（,A.urinae,）,常从尿道感染的患者尿液中分离到并被认为是尿道炎的病原体，对磺胺类和氨基糖苷,类药物耐药，,PYR,阴性，,LAP,和,BGUR,阳性。,气球菌属为成簇四联排列，血平板上有溶血,76,白联球菌属和片球菌属,万古霉素耐药,革兰阳性、触酶阴性球菌，,PYR,阴性,片球菌属具有,Lancefield D,群抗原,虽有从免疫抑制患者血液中分离到的报,道，但临床意义有待进一步确认,白联球菌属和片球菌属万古霉素耐药,77,孪生球菌属,溶血孪生球菌（,G.haemolysans,）,可从心内膜炎、脑膜炎患者中分离到,在兔血平板上有,溶血，有氧环境下生长较好。羊血平板上与草绿色链球菌相似,生长缓慢的菌株容易与生活力缺损菌属混,淆，可通过“卫星”试验加以鉴别,孪生球菌属溶血孪生球菌（G.haemolysans）,78,结束语,当,你尽了自己的最大努力,时,，,失败,也是伟大,的，所以不要放弃，坚持就是正确的。,When You Do Your Best, Failure Is Great, So DonT Give Up, Stick To The,End,结束语,79,谢谢,大家,荣幸,这,一路，与你同行,ItS An Honor To Walk With You All The,Way,演讲人：,XXXXXX,时 间：,XX,年,XX,月,XX,日,谢谢大家演讲人：XXXXXX,80,