临床常见苛养菌的培养与鉴定课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,第,*,页,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,第,*,页,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,第,*,页,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,第,*,页,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,第,*,页,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,可编辑,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,可编辑,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,2020/9/14,#,临床常见苛养菌的鉴定与药敏,1,临床常见苛养菌的鉴定与药敏1,苛养菌概述,苛养菌的基本特征：,对营养要求较高，在普通培养基上不生长或难以生长的一类细菌,体外培养需添加,特殊因子,或,其他营养成分,2.,苛养菌分离和鉴定的基本要求：,采用,高营养,的培养基，,延长,培养时间,置于,CO,2,或,微需氧,的环境，保持一定湿度,不能随意丢弃无法鉴定的细菌，极有可能是苛养菌及少见菌,2,苛养菌概述苛养菌的基本特征：2,目录,1.,肺炎链球菌,2.,流感嗜血杆菌,3.,脑膜炎奈瑟氏菌,4.,淋病奈瑟氏菌,5.,布鲁氏菌属,6.,放线菌属,7.,星形诺卡菌,苛养菌,8.,溶血隐秘杆菌,3,目录1.肺炎链球菌2.流感嗜血杆菌3. 脑膜炎奈瑟氏菌4.,1.,肺炎链球菌,1.1,概述,1.2,生物学性状,1.3,检测方法,1.4,药敏分析,1.5,案例分析,4,1.肺炎链球菌 1.1 概述 1.2 生,1.1,肺炎链球菌,-,概述,第,5,页,肺炎链球菌,社区感染,常见病原菌之一，定植在正常人的鼻咽部。,以肺部感染为主，,大叶性肺炎,多见,。同时会导致耳部及鼻咽部的感染。严重时可继发,胸膜炎、脓胸、脑膜炎和败血症。,常见送检标本类型有,痰、咽拭子、尿液、脑脊液、血液、穿刺液,。,肺炎球菌离开人体后很易死亡，痰培养分离率很低。,易感人群：小于,5,岁及大于,65,岁,肺炎链球菌疫苗,1.1 肺炎链球菌-概述第5页肺炎链球菌社区感染常见病原菌之,5,1.2,肺炎链球菌,-,生物学性状,培养条件：,CO,2,环境，哥伦比亚血平板。,菌落形态：,18-24h,后血平板上形成草绿色溶血、灰色、半透明、圆形、针尖样、表面光滑（有些菌株可表现为粘液状）的菌落,;,培养,48h,后，脐凹状菌落。,涂片染色：,G,+,球菌,矛头状,成双或链状排列，尖端向外。,用放大镜观察,6,1.2 肺炎链球菌-生物学性状用放大镜观察6,1.2,肺炎链球菌,-,生物学性状,荚膜是,肺炎链球菌,的,主要毒力,因子,之一,。,根据荚膜特异性多糖抗原性，分为近,90,个血清型,，,成人致病以,1-9,型及,12,型最多，其中,3,型,毒力最强，常致严重肺炎。,肺炎链球菌感染后，机体可建立较牢固的型特异性免疫，,同型病菌的再次感染少见,。,第,7,页,1.2 肺炎链球菌-生物学性状荚膜是肺炎链球菌的主要毒力因子,7,1.3,肺炎链球菌,-,检测方法,OP,Optochin,试验,:,敏感,胆汁溶菌试验,:,阳性,菊糖发酵试验,:,阳性,荚膜肿胀试验：,阳性,触酶 ：阴性,胆汁七叶甘 ：阴性,甲型溶血链球菌,(R),肺炎链球菌,(S),第,8,页,传统手工法,1,干扰肺炎链球菌叶酸的合成,抑菌环直径,14mm,为敏感,抑菌环直径,18mm,确认,Optochin,试验,1.3 肺炎链球菌-检测方法OPOptochin试验: 敏,8,1.3,肺炎链球菌,-,检测方法,第,9,页,乳胶凝集法,2,免疫学方法,3,基因检测法,4,质谱检测法,5,标本类型：菌液,标本类型：尿液、脑脊液,科研,热点,1.3 肺炎链球菌-检测方法第9页乳胶凝集法2免疫学方法3基,9,1.4,肺炎链球菌,-,药敏分析,第,10,页,试验条件,培养基,：纸片扩散法：含,5%,绵羊血的,MHA,接种物,：直接菌落悬滴法，相当于,0.5,麦氏标准,孵育,：,352,，,5%CO,2,；,20-24h,纸片扩散法检测药敏建议报告抗生素种类：,青霉素类：苯唑西林,大环内酯类：红霉素,磺胺类：复方新诺明,喹诺酮类：左氧,四环素类：四环素,糖肽类：万古霉素,增加使用,D-,抑菌圈试验或肉汤微量稀释法检测诱导型克林霉素耐药的信息。,肺炎链球菌,A,组 首选试验 并常规报告,红霉素,C,组 补充试验 选择性报告,*,阿莫西林,青霉素,（苯唑西林纸片）,*,阿莫西林,-,复方新诺明,克拉维酸,B,组 首选试验 选择性报告,*,头孢吡肟,*,头孢噻肟,*,头孢呋辛,*,头孢曲松,头孢洛林,(,非脑膜炎,),克林霉素,多西环素,吉米沙星,氯霉素,左氧氟沙星,莫西沙星,*,厄他培南,氧氟沙星,*,亚胺培南,*,美罗培南,泰利霉素,利奈唑胺,四环素,万古霉素,利福平,诱导实验,新增,修订,纸片扩散法,1.4 肺炎链球菌-药敏分析第10页试验条件纸片扩散法检测药,10,1.4,肺炎链球菌,-,药敏分析,第,11,页,用苯唑西林代替青霉素来进行纸片扩散法检测,1.4 肺炎链球菌-药敏分析第11页用苯唑西林代替青霉素来进,11,1.4,肺炎链球菌,-,药敏分析,第,12,页,PRSP,的筛选,常规工作中可以用苯唑西林的纸片扩散法来检测青霉素的敏感性。,苯唑西林,抑菌圈直径,20mm,19mm,判定青霉素为敏感,可能是青霉素,结果不可靠,必须,测定青霉素的MIC,此法仅适用于无生命危险感染的患者。,预测,-,内酰胺类抗生素敏感,1.4 肺炎链球菌-药敏分析第12页PRSP的筛选苯唑西林抑,12,1.4,肺炎链球菌,-,药敏分析,第,13,页,-,内酰胺类抗生素,K-B,法未给出标准,推荐用,MIC,法,1.4 肺炎链球菌-药敏分析第13页-内酰胺类抗生素,13,1.4,肺炎链球菌,-,药敏分析,第,14,页,MIC,法试验条件,方法,：微量稀释法直接上机,(GP-68,）及,E-test,法,接种物,：,0.5,麦氏标准,孵育,：,352,，,5%CO,2,；,20-24h,细菌生长区,E test,塑料,条,椭圆形,细菌生长,抑制区,256,128,8,016,判读抑菌浓度,（,MIC ug/ml),E-test,法,1.4 肺炎链球菌-药敏分析第14页MIC法试验条件 细菌,14,1.4,肺炎链球菌,-,药敏分析,第,15,页,药物,敏感,中介,耐药,青霉素注射,（非脑膜炎）,2,4,8,青霉素注射,（脑膜炎）,0.06,-,0.12,口服青霉素,0.06,0.12-1,2,脑膜炎分离株，,需尽快用可靠方法检测和报告,青霉素和头孢曲松,(,或头孢噻肟或美罗培南,),的,MIC,值,对于非脑脊液标本中分离出的肺炎链球菌，需同时使用,脑膜炎和非脑膜炎,的折点来报告青霉素的敏感性,1.4 肺炎链球菌-药敏分析第15页药物敏感中介耐药青霉素,15,1.5,肺炎链球菌,-,案例分析,第,16,页,患者,：,男,60,岁，因“突发高热，颈强直，脑膜刺激征，意 识不清住院”。,既往史：,2008,年脑科手术史，术后肺炎链球菌导致化脓性脑膜炎。,入院后：,脑脊液常规：白色，混，,WBC:3.08*10,6,脑脊液涂片,:,革兰阳性球菌,脑脊液培养：草绿色溶血、灰色、圆形、针尖样,、,脐凹状菌落,。,Optochin,试验,:,敏感,胆汁溶菌试验,:,阳性,。,治疗过程,：入院后经验用药：,头孢曲松,（广谱三代，容易透过血脑屏障）,获知涂片报告后，加,万古霉素,。两周后，预后较好。,2,3,1,4,5,1.5 肺炎链球菌-案例分析第16页患者：男60岁，因“突发,16,2.,流感嗜血杆菌,2.1,概述,2.2,生物学性状,2.3,检测方法,2.4,药敏分析,第,17,页,2.流感嗜血杆菌 2.1 概述 2.2,17,嗜血杆菌属（,Haemophilus,）,副流感,嗜血杆菌,H. parainfluenzae,溶血性,嗜血杆菌,H. paraphrophilus,副嗜沫,嗜血杆菌,H. paraegyptius,嗜沫嗜血杆菌,H. aphrophilus,杜克嗜血杆菌,H. ducreyi,流感嗜血杆菌,H. influenzae,牙龈部定植,性病软下疳,呼吸道及全身感染,心内膜炎,亚急性心内膜炎,口咽部定植,18,嗜血杆菌属（Haemophilus）副流感溶血性副嗜沫嗜沫嗜,2.1,流感嗜血杆菌,-,概述,呼吸道,继发感染,原发感染,鼻咽炎,喉头炎,急性气管炎,肺炎、中耳炎、,脑膜炎（,2,个月,3,岁）,心包炎、化脓性关节炎,菌血症,败血症,流感嗜血杆菌,社区感染,常见病原菌之一，常引起急性化脓性感染，有荚膜的,b,型强毒株,可以通过呼吸道飞沫传播。,流感嗜血杆菌感染可分为原发性感染和继发感染。原发感染以小儿多见。继发感染：多是内源性感染，以成人多见。,常见送检标本类型有,痰、咽拭子、肺泡灌洗液、脑脊液、血液、穿刺液,。,19,2.1 流感嗜血杆菌-概述呼吸道继发感染原发感染鼻咽炎喉头炎,2.2,流感嗜血杆菌,-,生物学性状,培养条件：需氧，,CO,2,环境中，最适宜的培养基是,巧克力平板,（,加入万古霉素和制霉菌素,），不同嗜血杆菌对因子的需求不同。血平板上有卫星现象。,菌落形态：,35,，,18,24h,培养形成微小、无色透明、不溶血，呈露滴样小菌落。,涂片染色：,革兰阴性小杆菌，,无芽胞。粘液型菌株有荚膜。,第,20,页,X,因子,血红素,X,因子为存在于血红蛋白中的一种血红素，为含铁的卟啉，耐高温，,V,因子,辅酶,或辅酶,血液中所含的,V,因子通常处于被抑制状态，经,80,90,加热,10min,后可使,V,因子释放,2.2 流感嗜血杆菌-生物学性状第20页X因子 血红素,20,2.3,流感嗜血杆菌,-,检测方法,第,21,页,传统手工法,1,自动化方法,2,乳胶凝集法,3,免疫学方法,4,基因检测法,5,质谱检测法,6,卫星试验,卟啉试验,糖发酵试验,吲哚快速法试验,尿素酶试验,2.3 流感嗜血杆菌-检测方法第21页传统手工法1自动化方法,21,2.3,流感嗜血杆菌,-,检测方法,金黄色葡萄球菌,卫星试验,X,因子,V,因子,V,因子,血平板,MH,平板,流感嗜血杆菌与金黄色葡萄球菌在血琼脂培养基上共同培养时可见卫星现象，因葡萄球菌能合成,V,因子，使其菌落周围生长的流感嗜血杆菌菌落较大，远离者则较小。,细菌种类,血平板,MH,平板,需要因子,流感嗜血杆菌,+,-,X+V,副流感嗜血杆菌,+,+,V,2.3 流感嗜血杆菌-检测方法金黄色葡萄球菌,22,2.3,流感嗜血杆菌,-,检测方法,第,23,页,MH,平板,因子实验,流感嗜血杆菌,V,X,X+V,副流感嗜血杆菌,X,X+V,V,黄色区域表示细菌生长,2.3 流感嗜血杆菌-检测方法第23页,23,细菌,生长因子,荚膜,溶血,吲哚,脲酶,触酶,鸟,AA,X,V,流感嗜血杆菌：,a,f,型,未定型,+,+,D,D,D,D,+,+,D,D,副流感嗜血杆菌：三个型,未定型,D,D,D,D,溶血嗜血杆菌,+,+,D,副溶血嗜血杆菌,+,+,D,D,杜克氏嗜血杆菌,D,埃及嗜血杆菌,+,嗜沬嗜血杆菌,+,副嗜沬嗜血杆菌,嗜血杆菌属根据吲哚、脲酶和鸟氨酸脱羧酶可分为,8,个生物型。,2.3,流感嗜血杆菌,-,检测方法,未定型为,无荚膜株,B,定型为,有毒株,荚膜溶血吲哚脲酶触酶鸟AAXV流感嗜血杆菌：,24,2.4,流感嗜血杆菌,-,药敏分析,第,25,页,仅用于流感,流感嗜血杆菌和副流感嗜血杆菌,A,组 首选试验 并常规报告,氨苄西林,C,组 补充试验 选择性报告,阿奇霉素,克拉霉素,阿莫西林,氨曲南,阿莫西林,-,克拉维酸,复方新诺明,头孢克罗,2,头孢丙烯,2,头孢克肟,3,头孢泊肟,3,B,组 首选试验 选择性报告,氨苄西林,-,舒巴坦,头孢洛林,头孢呋辛（口服）,头孢呋辛,2,环丙沙星,左氧氟沙星,头孢噻肟,头孢他啶,头孢曲松,莫西沙星,氧氟沙星,厄他培南,亚胺培南,氯霉素,利福平,泰利霉素,美罗培南,四环素,试验条件,培养基,：纸片扩散法：,嗜血杆菌试验培养基（,HTM,）,肉汤稀释法：,HTM,肉汤,接种物,：直接菌落悬滴法，相当于,0.5,麦氏标准,孵育,：,352,，,5%CO2,；,20-24h,氨苄西林和阿莫西林,是治疗流感嗜血杆菌的首选药物,。,-,内酰胺酶的检测可作为一种快速试验方便地检出流感嗜血杆菌对氨苄西林和阿莫西林的耐药性,常用的检测方法为显色头孢菌素法,-,头孢硝噻吩法，我院目前阳性率在,20%,左右。,从脑脊液中分离的流感嗜血杆菌，常规中只报告,氨苄西林、一种三代头孢菌素、氯霉素和美罗培南的,试验结果。,2.4 流感嗜血杆菌-药敏分析第25页仅用于流感流感嗜血杆菌,25,3.,脑膜炎奈瑟氏菌,第,26,页,3.1,概述,3.2,生物学性状,3.3,鉴别要点,3.4,药敏分析,3.5,案例分析,3. 脑膜炎奈瑟氏菌第26页 3.1 概述,26,3.1,脑膜炎奈瑟氏菌,-,概述,第,27,页,脑膜炎奈瑟菌存在于携带者和脑膜炎患者的鼻咽部。,通过,飞沫经空气传播,，冬末春初为流行高峰。感染后多数患者呈携带状态或隐性感染。,少数出现呼吸道感染症状，仅极少数发展成败血症，累及脑膜，形成,化脓性脑脊髓膜炎。,人工培养物如不及时转种，超过,48h,常死亡。该菌能产生,自溶酶,，故采集时标本不宜放冰箱，应保温立即送检。,根据脑膜炎奈瑟菌夹膜多糖抗原的不同， 可分为,A,、,B,、,C,等,13,个血清群，我国主要是由,A,群和,C,群,引起。,3.1 脑膜炎奈瑟氏菌-概述第27页脑膜炎奈瑟菌存在于携带者,27,3.2,脑膜炎奈瑟氏菌,-,生物学性状,培养条件：,5%-10%,的,CO,2,培养基：血平板和巧克力。,菌落形态：光滑、凸起、半透明、湿润。,涂片染色：革兰阴性球菌，肾形或咖啡豆状，凹面相对、成对排列位。脑脊液涂片时，,常位于中性粒细胞内外,。,第,28,页,3.2 脑膜炎奈瑟氏菌-生物学性状第28页,28,3.3,脑膜炎奈瑟氏菌,-,鉴别要点,第,29,页,氧化酶实验,：,阳性,触酶试验：,阳性,吲哚实验： 阴性,DNA,酶： 阴性,硝酸盐还原实验：阴性,麦芽糖,： 分解 淋病奈瑟菌的鉴别,与不动杆菌的鉴别,葡萄糖：,分解 莫拉菌的鉴别,自动鉴定仪可上机检测,3.3 脑膜炎奈瑟氏菌-鉴别要点第29页氧化酶实验：,29,3.4,脑膜炎奈瑟氏菌,-,药敏分析,第,30,页,不必进行常规的药敏试验,，临床耐药率不高。,临床经验性用药通常有：青霉素是首选，对氯霉素，广谱的头孢菌素敏感。,对临床细菌性脑膜炎经验治疗失败的细菌，都应该进行,-,内酰胺酶过筛和,MIC,试验,试验条件,培养基,：微量肉汤法：补充离子的,MH,肉汤，加,2%-5%,的冻融马血。,琼脂稀释法：,MH,琼脂加,5%,的羊血。,接种物,：直接菌落悬滴法，相当于,0.5,麦氏标准。,孵育,：,352,，,5%CO2,；,20-24h,3.4 脑膜炎奈瑟氏菌-药敏分析第30页不必进行常规的药敏试,30,3.5,脑膜炎奈瑟氏菌,-,药敏分析,应该在生物安全柜中进行脑膜炎奈瑟菌的,相关操作,3.5 脑膜炎奈瑟氏菌-药敏分析应该在生物安全柜中进行脑膜炎,31,THANK YOU,SUCCESS,2024/8/25,32,可编辑,THANK YOUSUCCESS2023/9/232,3.5,脑膜炎奈瑟氏菌,-,案例分析,患者,：男，足月出生九天，因无明显诱因出现发热,拟 “新生儿感染”收住入院儿科,NICU,。,入院后,：,血常规：,WBC10.01*0,9,/L,。脑脊液常规,:,无色透明，潘氏,(+),，细胞计数,0.31610,9,/L,。,血培养及脑脊液,:,血培养阳性，脑脊液培养阴性,。送至,CDC,确认为,B,群脑膜炎奈瑟菌。,咽拭子培养,:3,名密切接触者检出一株,B,群脑膜炎奈瑟菌株（,系患者的外祖母,）。,药敏试验：对头孢三嗪、 头孢噻肟、 利福平、 氨苄西林、四环素、 米诺霉素、环丙沙星均敏感；而对磺胺甲基异噁唑、复方新诺明均耐药。,治疗过程,：,予以独立病房隔离治疗,，,头孢曲松,、青霉素抗感染及物理降温后，病情平稳。,3,2,1,4,3.5 脑膜炎奈瑟氏菌-案例分析患者：男，足月出生九天，因无,33,4.,淋病奈瑟氏菌,4.1,概述,4.2,生物学性状,4.3,鉴别要点,4.4,药敏分析,34,4. 淋病奈瑟氏菌 4.1 概述 4.2,4.1,淋病奈瑟氏菌,-,概述,淋病奈瑟菌侵入,泌尿生殖系统,繁殖，引起化脓性感染。胎儿可经产道感染造成新生儿淋病性急性结膜炎。,实验室在运送淋球菌培养及涂片标本时要注意,保温,。,出现,耐头孢菌素,的淋病奈瑟菌是一个重大的公共卫生问题。,人是淋病奈瑟菌的唯一天然宿主。,35,4.1 淋病奈瑟氏菌-概述淋病奈瑟菌侵入泌尿生殖系统繁殖，引,4.2,淋病奈瑟氏菌,-,生物学性状,培养条件：,5%-10%,的,CO,2,培养基：,改良,Thayer-Martin(MTM),培养基,（加入万古霉素,、,多粘菌素,、,制霉菌素,、,三甲氧苄二氨嘧啶,TMP,）。,菌落形态：灰白色、光滑、凸起、半透明。,涂片染色：革兰阴性球菌，肾形或咖啡豆状，凹面相对、成对排列位。涂片操作时,不要用力涂擦,，应该在玻片上滚动。,直接涂片报告方式为：找到革兰阴性双球菌（细胞内）,36,4.2 淋病奈瑟氏菌-生物学性状培养条件：5%-10%的CO,4.3,淋病奈瑟氏菌,-,鉴别要点,氧化酶实验：,阳性,触酶试验：,阳性,吲哚实验： 阴性,DNA,酶： 阴性,硝酸盐还原实验：阴性,麦芽糖： 不分解,与不动杆菌的鉴别,葡萄糖： 分解,脑膜炎奈瑟菌的鉴别,莫拉菌的鉴别,37,4.3 淋病奈瑟氏菌-鉴别要点氧化酶实验： 阳性与不动,4.4,淋病奈瑟氏菌药敏分析,A,组,首选试验,并常规报告,淋病奈瑟菌,i,头孢曲松,头孢克肟,环丙沙星,四环素,C,组,补充试验,选择性报告,大观霉素,试验条件,培养基,：纸片扩散法：,GC,琼脂基础,+1%,特定的生长添加剂,接种物,：直接菌落悬滴法，相当于,0.5,麦氏标准,孵育,：,352,，,5%CO2,；,20-24h,2013,年,CLSI,将,头孢曲松、头孢克肟、环丙沙星和四环素,从试验报告,C,组移到试验报告,A,组，并注明,不需要进行常规试验,，,根据疾病预防控制中心,(CDC),指南推荐仅考虑用作治疗失败的备选 。,不需要常规试验。,38,4.4 淋病奈瑟氏菌药敏分析A组 淋病奈瑟菌i,4.4,淋病奈瑟氏菌药敏分析,纸片扩散法测试淋病奈瑟菌，某种抗菌药物试验结果是“中介”，提示,结果不可靠,，需要重复试验,39,4.4 淋病奈瑟氏菌药敏分析纸片扩散法测试淋病奈瑟菌，某种抗,5.,布鲁氏菌,5.1,概述,5.2,生物学性状,5.3,检测方法,5.4,药敏分析,5.3,案例分析,40,5.布鲁氏菌 5.1 概述 5.2 生物,5.1,布鲁氏菌,-,概述,布鲁菌是,国家乙类传染病,，动物源性疾病，引起变态反应性人畜共患病，实验室注意生物防护。,所有操作在生物安全柜，废弃物高压灭菌；,结果上报疾控中心；,人感染后，主要表现为发热、发冷、全身痛和多汗，肝肿大，外周非侵蚀性关节炎等,反复发烧呈“波浪热”。先侵入淋巴再入血，,症状极不典型容易误诊,。,易感人群：,畜牧业及皮革加工行业,。,国内以羊型布鲁菌病最为多见，未经治疗者的,自然病程为,3,6,个月,。,细胞内寄生菌,。,布鲁菌含有两种抗原物质：,A,抗原和,M,抗原。,41,5.1 布鲁氏菌-概述布鲁菌是国家乙类传染病，动物源性疾病，,5.2,布鲁氏菌,-,生物学性状,培养条件：,CO,2,环境,，哥伦比亚血平板专性需氧。,菌落形态：,37,培养在血琼脂平板培养,5-7,天,可形成灰色不溶血菌落。在固体培养基上菌落为无色、半透明、圆形、表明光滑、边缘整齐。,涂片染色：,革兰氏阴性短小球杆菌，,革兰染色经常着色不佳，,易堆积,，吉姆染色呈紫色。,42,5.2 布鲁氏菌-生物学性状 培养条件：CO2环境，哥,5.3,布鲁氏菌,-,检测方法,第,43,页,传统手工法,1,自动化方法,2,免疫学方法,3,血清学试验在国内外用于布鲁菌的诊断,-,疾控中心,感染病原菌后，,2,周后会产生抗体。常见的血清试验有,虎红试验（,RB,）,血清凝集试验。,氧化酶阳性（,+,）,、,触酶阳性（,+,）,、,H,2,S,阳性（,+,）,血培养报阳时间,3-5,天。,直接上机鉴定,转种延长时间,涂片,5.3 布鲁氏菌-检测方法第43页传统手工法1自动化方法2免,43,5.3,布鲁氏菌,-,检测方法,第,44,页,杨铭，汪定成,邵海连等，全自动血培养仪中布鲁菌阳性报警时间及其他病原菌的比较,J.,中国感染控制杂志,2013,12,（,6,）,:451-453,5.3 布鲁氏菌-检测方法第44页杨铭，汪定成,邵海连等，全,44,5,.4,布鲁氏菌,-,药敏分析,不推荐布鲁氏菌进行体外药敏试验。,利福平对本病有效，,利福平加四环素（多西环素），疗程,6,周,，为世界卫生组织推荐的治疗方案。利福平是具有较强的胞内渗透作用。,羊、猪型感染者以四环素与链霉素合用为宜。,45,5.4 布鲁氏菌-药敏分析45,5,.5,布鲁氏菌,-,药敏分析,患者,：,男，,12,岁，因“间断右髋关节痛月余”就诊。,病史：,4,月前开始发热，关节痛间断。患儿父亲为野味加工者，患儿有羊接触史。,入院后：,1.,进行血和骨髓培养，,48h,后血培养仪报警阳性,，,涂片革兰染色镜检为阴性短小球杆菌呈细沙样堆积,。,阳性瓶转种至血平板及巧克力平板，继续培养至 ，巧克力平板上可见无色、透明、湿润、细小菌落生长，血平板菌落更小。,2.,初步生化反应,氧化酶阳性，触酶阳性。,3.,使用法国生物梅里埃,VITEK-2 COMPACT,鉴定系统，结果为羊布鲁菌。,4.,血清凝集试验滴度,1,：,800,（,1:100,为阳性）,治疗过程：,1.,间断用头孢噻肟、头孢哌酮,-,舒巴坦治疗，未出现明显缓解。,2.,利福平加四环素，疗程,6,周,，体温下降，预后较好。,第,46,页,1,2,3,4,5,6,5.5 布鲁氏菌-药敏分析患者：男，12岁，因“间断右髋关节,46,6.,放线菌属,6.1,概述,6.2,生物学形状,6.3,检测方法,6.4,药敏分析,47,6.放线菌属 6.1概述 6.2 生物学,6.1,放线菌属,-,概述,放线菌属，介于细菌与丝状真菌之间又接近细菌的一类丝状原核生物。,放线菌,属,正常寄居在口腔、上呼吸道、胃肠道和泌尿生殖道，为人体的正常菌群,，,内源性感染。,当机体抵抗力下降，口腔卫生不良、拔牙或口腔粘膜受损时，引起放线菌病。,肺部感染：症状和体征酷似肺结核。,病灶组织和瘘管的脓汁中，肉眼可见硫磺样颗粒,48,6.1 放线菌属-概述放线菌属，介于细菌与丝状真菌之间又接近,6.2,放线菌属,-,生物学性状,培养条件：,5%-10%,的,CO,2,微需氧环境，厌氧培养可生长,。培养基：,血平板，沙保罗琼脂,可生长。,菌落形态：在血平板上形成,灰白色或淡黄色粗糙而不规则的菌落,，不溶血。,涂片染色：革兰阳性，丝状或发丝状，常形成分枝状无隔菌丝 。,硫磺样颗粒压片，在镜下可见放射状排列的菌丝，形似菊花状。,49,6.2 放线菌属-生物学性状49,6.3,放线菌属,-,检测方法,第,50,页,溶血,(-),葡萄糖,(+),甘露醇,(+),吲哚,(-),过氧化氢酶试验,(-),传统手工法,1,自动化方法,2,乳胶凝集法,3,免疫学方法,4,基因检测法,5,6.3 放线菌属-检测方法第50页 溶血(-,50,6.4,放线菌属,-,药敏分析,临床常规不做药敏,羧苄西林，氯霉素，克林霉素和红霉素敏感,羧苄西林为首选药物,第,51,页,6.4 放线菌属-药敏分析第51页,51,7.,星型诺卡菌,7.1,概述,7.2,生物学性状,7.3,检测方法,7.4,药敏分析,7.5,案例分析,52,7.星型诺卡菌 7.1 概述 7.2 生,7.1,星型诺卡菌,-,概述,诺卡菌属是广泛分布与土壤中的一群需氧性放线菌。易感人群：,免疫力低下者,血行播散，引起脑膜炎与脑脓肿,侵入皮下组织引起慢性化脓性肉芽肿与瘘管形成,星形诺,卡,菌,（常见）,肺部感染,肺炎、肺脓肿，慢性者类似肺结核或肺真菌病,脑脊液，脓液，血,痰，肺泡灌洗液，穿刺液,脓液，组织,巴西,诺,卡,菌,外源性感染,足分枝菌病,53,7.1 星型诺卡菌-概述诺卡菌属是广泛分布与土壤中的一群需氧,7.2,星型诺卡菌,-,生物学性状,培养条件：,5%-10%,的,CO,2,，,专性需氧菌,。,培养基：血平板及,沙保培养基,（一周）。,菌落形态：,菌落大小不等，颗粒状。不同种类可产生不同色素，,星形诺卡菌菌落呈黄色或深橙色,，表面无白色菌丝；巴西诺卡菌菌落表面有白色菌丝生长；,涂片染色：,G+,杆菌，有细长的分支菌丝，亦或有杆状或球状存在。,诺卡菌具有,弱抗酸性,，脱色剂必须用,2,%,硫酸溶液。,第,54,页,1%,盐酸乙醇,7.2 星型诺卡菌-生物学性状培养条件：5%-10%的CO2,54,7.3,星型诺卡菌,-,鉴别要点,第,55,页,菌种,抗酸染色,尿酶,肌醇,半乳糖,葡萄糖产酸,肌醇产酸,45,生长,明胶液化,星形诺卡菌,D,+,-,D,+,-,+,-,巴西诺卡菌,D,+,+,+,+,+,-,+,7.3 星型诺卡菌-鉴别要点第55页菌种抗酸染色尿酶肌醇半乳,55,7.4,星型诺卡菌,-,药敏分析,CLSI,推荐药敏为微量稀释法。培养基：含阳离子的,MH,肉汤。,磺胺类抗生素,是治疗诺卡菌属感染的首选药,对青霉素耐药,第,56,页,7.4 星型诺卡菌-药敏分析第56页,56,7.5,星型诺卡菌,-,案例分析,2005,卫生部室间质评,0511,号：脓液,48,小时血平板：菌落呈黄色,、,圆,、,凸,、,干颗粒状，革兰染色阳性，纤细，长杆菌，抗酸染色呈一定酸性。,5,天后：沙保弱培养基：,2-4,天后呈色素的湿润菌落，触酶（,+,），七叶甘（,+,）硝还（,+,），分解各种糖类。,第,57,页,星型诺卡菌,7.5 星型诺卡菌-案例分析2005卫生部室间质评第57页星,57,8.,溶血隐秘杆菌,8.1,概述,8.2,生物学性状,8.3,检测方法,第,58,页,8.溶血隐秘杆菌 8.1 概述 8.2,58,8.1,溶血隐秘杆菌,-,概述,隐秘杆菌属目前有,8,种，与人类感染相关的有溶血隐秘杆菌，化脓隐秘杆菌及伯尔德隐秘杆菌。,溶血隐秘杆菌可引起,大龄儿童咽炎、伤口及软组织的感染、骨髓炎、心内膜炎。,实验室检出率比较低，生长缓慢。,选用红霉素、青霉素、一代头孢、万古霉素,第,59,页,8.1 溶血隐秘杆菌-概述隐秘杆菌属目前有8种，与人类感染相,59,8.2,溶血隐秘杆菌,-,生物学性状,培养条件：,5%-10%,的,CO,2,厌氧或微需氧菌。培养基：血平板。,菌落形态：在血平板上形成白色小菌落，,48h,后会形成有狭窄的,溶血环的菌落。,涂片染色：革兰阳性，呈多形性棒形，有时呈颗粒状和念珠状，,类似小链球菌,。,第,60,页,8.2 溶血隐秘杆菌-生物学性状第60页,60,8.1,溶血隐秘杆菌,-,鉴别要点,第,61,页,菌名,触酶,硝还,乳糖,葡萄糖,麦芽糖,碱性磷酸酶,木糖,明胶,溶血隐秘杆菌,-,-,+,+,+,+,-,-,化脓隐秘杆菌,-,-,-,+,V,-,+,+,伯尔德隐秘杆菌,-,-,-,+,+,-,-,V,注：,V:11%-89%,菌株阳性,8.1 溶血隐秘杆菌-鉴别要点第61页 菌名,61,Thank you!,Thank you!,62,经常,不断地学习,你就什么都知道。你知道得越多,你就越有,力量,Study Constantly, And You Will Know Everything. The More You Know, The More Powerful You Will,Be,写,在最后,经常不断地学习,你就什么都知道。你知道得越多,你就越有力量写,63,Thank,You,在别人的演说中思考,，,在自己的故事里成长,Thinking,In Other,PeopleS Speeches,，,Growing,Up In Your Own,Story,讲师,：,XXXXXX,XX,年,XX,月,XX,日,Thank You,64,