医学红细胞血型系统课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,ppt课件.,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,ppt课件.,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,ppt课件.,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,ppt课件.,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,ppt课件.,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,ppt课件.,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,ppt课件.,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,ppt课件.,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,ppt课件.,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,ppt课件.,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,ppt课件.,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,ppt课件.,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,ppt课件.,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,ppt课件.,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,ppt课件.,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,二级,三级,四级,五级,ppt课件.,*,红细胞血型系统,1,ppt课件.,红细胞血型系统1ppt课件.,目的要求与教学内容,目的要求,重点掌握 红细胞血型系统概要、,ABO,及,Rh,血型系统基因、抗原、抗体的存在及特点。,熟悉,ABO,亚型分类及血型血清学特点，分泌型与非分泌型，弱,D,亚型表现及临床意义。,了解 其他血型系统抗原与抗体及其临床意义。,2,ppt课件.,目的要求与教学内容目的要求2ppt课件.,教学内容,红细胞血型系统概要,ABO,血型系统,Rh,血型系统,其他血型系统,3,ppt课件.,教学内容3ppt课件.,红细胞血型抗原和抗体,4,ppt课件.,4ppt课件.,1900,年，奥地利维也纳大学助教,Landsteiner,第一个发现,RBC,血型，只发现人类,RBC,血型、三型，,1930,年获得诺贝尔奖，并赢得了“血型之父”的美誉。,1902,年他的学生,Decastello,和,Sturli,又发现了型,国际联盟卫生保健委员会将这,4,型正式命名为、型，这就是现在人们熟知的,RBC,血型系统,血型是,人类血液的主要特征之一，表达了血液各种成分的抗原的遗传性状。,5,ppt课件.,1900年，奥地利维也纳大学助教 Landsteiner第,红细胞血型研究的百年历史大致可分为三个阶段：,1901,年到,1950,年，使用血型血清学方法发现和检测各种血型抗原，阐明它们的遗传特点：,Rh,血型系统,Levine,和,Stetson,（,1939,年）、,Landsteiner,和,Wiener,（,1940,年）,Lutheran,血型系统,Callender,等（,1945,年）,Kell,血型系统,Coombs,等（,1946,年）,Lewis,血型系统,Mourant,（,1946,年）,Duffy,血型系统,Cutbush,等（,1950,年）,Kidd,血型系统,Allen,等（,1951,年）,MN,血型和,P,血型系统,Levine,（,1987,年）,6,ppt课件.,红细胞血型研究的百年历史大致可分为三个阶段： 1901年到,60,年代到,70,年代，研究血型抗原的生物化学本质,80,年代始，血型的研究进入以分子生物学为基础的新时代，逐步集中于：,阐明血型抗原的成分,遗传多态性的分子基础,血型基因的结构和组织特异性表达,生物功能和演化等方面,7,ppt课件., 60年代到70年代，研究血型抗原的生物化学本质7ppt课,红细胞血型抗原的分类及统一命名,国际输血协会（,ISBT,）成立了,ISBT,红细胞表面抗原命名术语委员会（,the ISBT Committee on Terminology for Red Cell Surface Antigens,），规定了：,血型抗原必须是用相应抗体检测到的红细胞表面抗原,属于遗传性状,人类红细胞血型抗原分成,血型系统,（,blood group systems,）,血型集合,（,blood group collections,）,高、低二个抗原频率组,(high and low incidence antigens),更新至,2009,年,2,月，已将所发现的人类红细胞的近,260,种血型抗原，分为,30,个血型系统、,6,个集合群和高,(8,个,901 series ),低,(18,个,700 series ),两个频率组,8,ppt课件.,红细胞血型抗原的分类及统一命名 国际输血协会（ISBT）成,Updated August 2008,9,ppt课件.,Updated August 20089ppt课件.,红细胞血型抗原的生化结构,有二组基本类型：,一组血型抗原决定簇,:,结合到蛋白或脂上的碳水化合物（多糖）,，决定抗原的特异性，该组抗原基因，编码一个中间体分子，通常是酶，能转移糖分子到蛋白或脂上而产生抗原特异性，属于这一组的抗原有,ABO,、,Lewis,、,Hh,、,P,、,Ii,等,一组是由,蛋白的氨基酸序列所决定,，由基因直接控制抗原的多态性，大多数的血型抗原属于这组结构类型，如,Rh,10,ppt课件.,红细胞血型抗原的生化结构 有二组基本类型：10ppt课件.,11,ppt课件.,11ppt课件.,12,血型抗原的免疫原性,不同血型抗原的相对免疫原性如下：,12,ppt课件.,12血型抗原的免疫原性不同血型抗原的相对免疫原性如下：12p,13,抗原位点数、剂量效应、位置效应,（一）抗原位点数,取决于遗传因素和抗原种类，红细胞上抗原位点数影响其对相应抗体的反应强度。,13,ppt课件.,13抗原位点数、剂量效应、位置效应（一）抗原位点数13ppt,14,（二）剂量效应,当控制某血型抗原的基因为纯合子时，红细胞上该抗原为双剂量，杂合子时为单剂量。某些血型抗体只与纯合子红细胞发生反应，如,Kidd,系统抗体,与纯合子抗原红细胞反应较强的抗体被称为具有,“,剂量效应,”,，具有剂量效应的血型系统包括,Rh,（,D,除外）、,Kidd,、,Duffy,、,MNSs,、,Lutheran,系统,剂量效应往往出现于共显性基因的情况，在,ABO,血型系统中，,AA,和,AO,基因型之间、,BB,和,BO,基因型之间，产生的抗原强度无明显差异，反映不出剂量效应,14,ppt课件.,14（二）剂量效应14ppt课件.,（三）位置效应,指基因之间的互相影响,顺式效应：发生在同一染色体的基因之间，如,cDE,基因复合物产生的,E,抗原量比,cdE,基因复合物产生的,E,抗原量要少，系受同一染色体上,D,基因的影响,反式效应：发生在同源染色体上基因之间，如基因型为,CDe/cde,和,Cde/cDe,时，两者表型相同，但后者产生的,D,抗原较前者弱，是一条染色体的,C,基因对另一条染色体上,D,基因的影响,15,ppt课件.,（三）位置效应15ppt课件.,16,复合抗原,有些基因复合体控制的相关表面结构称为复合抗原，能引起免疫应答，产生复合抗体。如复合基因,DCe,的产物有,C, D, e,三种抗原活性，同时也有顺式产物,Ce,的抗原活性，,C,、,e,基因不在同一条染色体上时，不产生,Ce,复合抗原。同样还有,ce,、,cE,、,CE,等。复合抗体只与复合抗原起反应，如抗,Ce,只与,Ce,复合抗原发生反应。,16,ppt课件.,16复合抗原 有些基因复合体控制的相关表面结构称为复合抗,红细胞血型抗体,抗体是免疫球蛋白的主体，是体液免疫反应的主要效应分子，它们能特异性地结合或识别入侵的病原体（抗原），是免疫防御系统的重要组成部分,红细胞血型抗体的另一主要功能是与红细胞的表面抗原结合，通过补体作用，导致红细胞破坏，产生血管内或血管外溶血,17,ppt课件.,红细胞血型抗体抗体是免疫球蛋白的主体，是体液免疫反应的主要效,红细胞抗原和抗体反应基础,红细胞血型抗原和抗体在体外的试管反应中，常见有以下的几种形式：,凝集反应（,agglutination,）,沉淀反应（,precipitation,）,溶血反应（,hemolysis,）,18,ppt课件.,红细胞抗原和抗体反应基础 红细胞血型抗原和抗体在体外的试管,影响红细胞凝集反应的因素,温度,离子强度,pH,孵育时间,抗原抗体比例,红细胞间距离,蛋白水解酶的作用,正电荷分子的作用,19,ppt课件.,影响红细胞凝集反应的因素 温度 19ppt课件.,红细胞凝集反应中的特殊现象,缗钱状凝集,肉眼下与红细胞凝集无异，高倍镜下，红细胞形成钱币叠层堆积状 （,MM,，洗涤）,混合凝集现象,显微镜视野下标本中存在两群红细胞，一部分凝集，另一部分不凝集（异型输血或移植，,RBC,亚型检测,A3,与抗,A,）,20,ppt课件.,红细胞凝集反应中的特殊现象 缗钱状凝集 20p,红细胞血型学新技术的发展,-,分子生物学技术应用,血凝反应已在红细胞血型血清学技术中应用了,100,多年，但有时存在着检测样品的取材和定型血清的困难，以及只能鉴定血型抗原的表型，操作时干扰因素较多等问题，在血型工作的研究和应用上有很多限制性,分子基因定型技术,有效地克服了血型血清学技术存在的问题，对血型学的发展和应用作出了巨大的贡献,21,ppt课件.,红细胞血型学新技术的发展-分子生物学技术应用 血凝反应已,目前研究和应用较广泛的以,DNA,为基础的血型基因定型技术有,PCR-RFLP,（聚合酶链反应,-,限止性片段长度多态性）,PCR-SSP,（聚合酶链反应,-,序列特异性引物、,PCR-SSOP,（聚合酶链反应,-,序列特异性寡核苷酸探针）,SBT,（,DNA,序列测定）,22,ppt课件.,目前研究和应用较广泛的以DNA为基础的血型基因定型技术,血型基因定型技术已应用于,疑难血型基因和抗原的鉴定,非侵入性的胎儿新生儿溶血病危险性鉴定,输血后供者血型等位基因的检测,造血干细胞移植后移植标记物的鉴定和追踪,抗原阴性细胞供者的大规模筛选,亲子鉴定、个体识别、人种研究等工作,23,ppt课件.,血型基因定型技术已应用于23ppt课件.,ABO,血型系统,24,ppt课件.,24ppt课件.,ABO,血型系统有其它血型系统所没有的独特的性质，表现在,:,1,、,血清,中常存在反应强的抗体，而红细胞上通常缺乏相应的特异性抗原,2,、许多,组织细胞,上有规律地存在着,A,、,B,、,H,抗原，各种体液和分泌型分泌液中也存在着,A,、,B,、,H,物质,这两种独有的性质，形成了,不配合输血,的天然屏障，使,ABO,血型系统成为输血医学和器官移植中最重要的血型系统,25,ppt课件.,ABO血型系统有其它血型系统所没有的独特的性质，表现在:1、,常见,ABO,血型分类,26,ppt课件.,常见ABO血型分类 26ppt课件.,ABO,血型分布情况,27,ppt课件.,ABO血型分布情况27ppt课件.,ABO,血型系统的抗原和抗体,ABO,血型抗原是由,ABO,血型抗原基因编码的特异性糖基转移酶催化合成的红细胞膜表面的糖蛋白和糖脂,ABO,抗原决定簇共有,5,种类型,由单糖经转移酶转移到特定核心多糖链的末端生成,分别决定血型抗原基础物质、,H,抗原,、,A,抗原,、,A1,抗原,以及,B,抗原,的抗原表型,28,ppt课件.,ABO血型系统的抗原和抗体ABO 血型抗原是由ABO 血型抗,29,L-,岩藻糖,D-,半乳糖,N-,乙酰半乳糖胺,N-,乙酰葡萄糖胺,29,ppt课件.,29L-岩藻糖D-半乳糖N-乙酰半乳糖胺N-乙酰葡萄糖胺29,ABO,抗原决定簇的主要载体是糖蛋白,而只有,25 %,左右的,ABO,位点位于糖脂,在,5,6,周龄胚胎的红细胞上可以检测到,ABO,抗原,但婴儿一般在,18,个月后才能充分表现抗原性,A,和,B,抗原在某些组织早期发育中会消失，但有时重新出现在恶性肿瘤组织上，因此可以作为某些癌症有用的预兆检测因子，例如：在正常成人结肠组织中，,A,和,B,抗原是缺乏的，但是在结肠癌组织中,A,和,B,抗原重新表达,30,ppt课件.,ABO 抗原决定簇的主要载体是糖蛋白,而只有25 %左右的A,ABO,血型抗体的产生,在正常的情况下，每个个体可针对自己所缺乏的,A,、,B,和,H,抗原，自然地产生相对的特异性抗体,婴儿出生时，通常没有抗体，但是，由于自然界中的一些生物体（如细菌）的细胞表面上具有类似于,A,、,B,和,H,结构的抗原，人体会在不自觉中被这些外来抗原不断地免疫，开始逐渐地产生了相应的抗,-A,，抗,-B,和抗,-A,B,抗体,31,ppt课件.,ABO血型抗体的产生在正常的情况下，每个个体可针对自己所缺乏,婴儿在,510,岁时，抗体的产生达到最高峰，然后随年龄增长而逐渐下降,随着年龄的增长,抗体效价反而降低,老年人的抗,-A,和抗,-B,水平一般低于年青人,32,ppt课件.,婴儿在510岁时，抗体的产生达到最高峰，然后随年龄增长而逐,ABO,血型抗体血清学特征,型的抗,-,和型的抗,-,主要是,IgM,类抗体，在室温中反应最强,O,型的抗,-A,，抗,-B,和抗,-A,B,通常是,IgG,类抗体，能与,A,和,B,型抗原凝集反应,由于,IgG,抗体容易通过胎盘，因此,O,型的母亲容易引起,ABO-HDN,。而,A,或,B,型母亲所生的婴儿较少发现,ABO-HDN,33,ppt课件.,ABO血型抗体血清学特征型的抗-和型的抗-主要是Ig,B,型个体的血清中含有的抗,-A,及抗,-A1,两种抗体，,B,型个体的血清只能与,A1,及,A2,红细胞凝集。用,A2,红细胞吸收后的,B,型血清，只能与,A1,型红细胞反应,植物中的,双花扁豆植物凝集素,(,Dolichos Biflorus lectin),，具有与抗,-A1,相似的凝集特异性,34,ppt课件.,B型个体的血清中含有的抗-A及抗-A1两种抗体，B型,35,ppt课件.,35ppt课件.,ABO,基因及其遗传特点,ABO,基因的结构图（包括外显子、内含子）,ABO,各种等位基因的结构大多有高度的相似性，但由于点突变或缺失等原因，形成了,ABO,等位基因及各种亚型等位基因的差别，以及由它们转录产生的酶结构上的差异,36,ppt课件.,ABO基因及其遗传特点 36ppt课件.,37,ppt课件.,37ppt课件.,分子生物学以及其他领域的高新技术，特别是分子克隆、,PCR,体外扩增和,DNA,测序技术，为红细胞血型学的发展和应用带来了无限生机和前途,PCR,分型技术的应用，使,ABO,型别分析达到了更精细的水平，并因此发现了更多的,ABO,多态性。,PCR-SSP,和,PCR-RFLP,方法也在不断的发展和改进中，,ABO,的,DNA,分型技术现已成为血清学方法的竞争者和互补者,38,ppt课件.,分子生物学以及其他领域的高新技术，特别是分子克隆、P,对小量含,DNA,的任何组织样品，即可以用,DNA,分型技术对红细胞抗原的基因型作鉴定，不受血清中自身抗体、不规则抗体以及疾病和假、弱凝集的影响,红细胞血型学的基因研究，为保证输血治疗的安全和有效，作出了重大贡献，对于生命科学的发展有着无可估量的意义,39,ppt课件.,对小量含DNA的任何组织样品，即可以用DNA分型技术对,ABO,血型遗传示意,40,ppt课件.,ABO血型遗传示意40ppt课件.,分泌型和非分泌型,ABO,血型系统与,Hh,、,Lewis,血型系统,41,ppt课件.,分泌型和非分泌型ABO血型系统与Hh、Lewis血型系统 4,ABO,亚型简介,ABO,亚型（,ABO subgroups,）：,ABO,血型抗原变异体的统称，根据血型血清学试验所表现的抗原性强弱程度的分级量化等血清学特征，可鉴别出各种,ABO,亚型,A,抗原亚型最多：主要是,A1,（占,80%,）和,A2,亚型（占,20%,） ，其它的,A,亚型（,A3,、,Am,、,Ax,、,Aint,、,Ael,、,Ay,等）较少见或罕见,B,抗原的亚型比,A,亚型少，较常见的有,B1,、,B3,、,Bm,、,Bx,、,Bel,等亚型,O,型血型中，常把孟买型、类孟买型和一些,H,缺失型、,Hm,表型等归类为,H,抗原的亚型,42,ppt课件.,ABO亚型简介 ABO亚型（ABO subgroups）：,Hosoi, E. (2008). Biological and clinical aspects of ABO blood group system.,J Med Invest,55,(3-4): 174-82.,43,ppt课件.,Hosoi, E. (2008). Biological,A1,和,A2,亚型区别,A1,型红细胞平均有,100,万,A,抗原数,/,细胞,A2,型仅仅平均有,25,万,A,抗原数,/,细胞,A1,、,A2,亚型都存在的“,A”,抗原,- 2,型,A,抗原,A1,型还有另外两种抗原形式,- 3,、,4,型,A,抗原，这两种抗原在,A2,型上不存在,44,ppt课件.,A1 和 A2 亚型区别A1型红细胞平均有100万A抗原数/,45,ppt课件.,45ppt课件.,46,ppt课件.,46ppt课件.,A1,和,A2,亚型区别,各型红细胞上,H,抗原数量：,O A2 B A2B A1 A1B,A1,、,A2,转移酶（,transferases,）最佳,PH,值（酶此时具有最佳潜能和活性）：,转化,A1,和,A1B,时最佳,PH,为,6.0,转化,A2,和,A2B,时最佳,PH,为,7.0,47,ppt课件.,A1 和 A2 亚型区别47ppt课件.,A1,和,A2,亚型鉴别,最简单的方法是使用具有与抗,-A1,相似的外源性凝集素,双花扁豆植物凝集素,(,Dolichos Biflorus lectin),未稀释状态：,双花扁豆素可作为抗,-,，可以和、都出现凝集。,适当稀释：凝集素可以直接与、红细胞反应，而不与、凝集，此时出现凝集的细胞为型，如果不出现凝集，则亚型主要为型（,int,也能和,d. biflorus,发生弱凝集现象）,48,ppt课件.,A1 和 A2 亚型鉴别 最简单的方法是使用具有与抗-,其它,A,亚型,型：很罕见的亚型（,1,1000,）,主要特征：与抗,-,和抗,-,均反应呈现混合凝集现象,x,（,Ao,）型：更罕见的亚型（,1,40,000,）,主要特征：抗原十分弱，仅仅,只能通过抗,-,检测,，通常其血清中存在的抗,-,。如果未用抗,-,进行检测，则,Ax,表型易被误定为型。,Ax,表型的遗传性不总是遵循孟德尔遗传法则，近来研究提示不同的等位基因能导致该表型出现，因此不同的突变能导致相同的亚型出现，这意味着,Ax,亚型具有不同的遗传异质性,不同的等位基因可导致相同的,Ax,亚型表达。,49,ppt课件.,其它A亚型型：很罕见的亚型（11000）49ppt课件,其它,A,亚型,Aint,亚型（,A1-A2 intermediate,）：与抗,-,1,反应程度介于之间，与,x,具有类似性。,Am,亚型：更加罕见,主要特征：,Am,型红细胞在常规试验中不与抗,-,和抗,-,反应，其血清中不存在抗,-,1,50,ppt课件.,其它A亚型Aint亚型（A1-A2 intermediate,A,亚型鉴别,51,ppt课件.,A亚型鉴别51ppt课件.,B,亚型鉴别,52,ppt课件.,B亚型鉴别52ppt课件.,ABO,血型在输血医学上的意义,临床输血中必须要解决,ABO,正反定型不一致,带来的不正确的,ABO,定型问题,亚型鉴定应通过上表进行综合分析,必要时可以进行基因分型,以防止带来安全输血隐患,53,ppt课件.,ABO血型在输血医学上的意义53ppt课件.,ABO,血型在移植医学上的意义,不同血型的器官组织不能在移植中随意使用，因为可能存在免疫应答导致的免疫排斥，降低移植物的存活。,O,型器官组织可以移植到其他,ABO,血型受者（属于血液移植血型次侧不合，要考虑风险）,A,、,B,、,AB,型器官组织就应遵循同型原则（属于血液移植血型主侧不合，要考虑更大风险）,A2,亚型似乎是例外，,A2,型肝组织已经成功地移植到,O,型受者,54,ppt课件.,ABO血型在移植医学上的意义 不同血型的器官组织不能在,特殊的,ABO,亚型,1,B,（,A,）型和,A,（,B,）型,B(A),表现型在抗,-A,的,BioClone (Ortho Diagnostic System),单克隆抗体混合物上市不久之后的,1985,年被发现，这种红细胞与抗,-A,试剂发生类似,B,型的反应。,由于红细胞表面除了产生,B,抗原外，还有少量的,A,抗原，血清中含有高活性的,B,型转移酶，而,B,型转移酶在某些条件下也能合成,A,型血型物质，因此被命名为,B(A),。,55,ppt课件.,特殊的ABO亚型 1B（A）型和A（B）型 55ppt课件,特殊的,ABO,亚型,B(A),红细胞为,B,遗传型，其个体血清中含有抗,-A,。而,A,subgroup,B,个体的血清中既不含有抗,-A,和抗,-B,，偶尔含有抗,-A,。这种差异可以用于区分这些亚型。,虽然,B(A),基因是以,Cis,的方式遗传，但血清学的差异可以使其与,Cis-AB,区分。多数,Cis-AB,表现型为,A B,，而,B(A),红细胞除了含有,B,抗原外还有少量的,A,抗原。,56,ppt课件.,特殊的ABO亚型B(A)红细胞为B遗传型，其个体血清中含有抗,特殊的,ABO,亚型,2,孟买型,1952,年,Bhende,等在印度孟买市中,发现了三个男性的红细胞是,O,型，但,H,抗原为阴性，所有人的血清中均具有抗,-H,，这类,ABO,亚型后来被称为孟买型或,Oh,型,孟买型的红细胞与抗,-H,、抗,-A,、抗,-B,或抗,-A,B,都不凝集,用红细胞吸收和放散试验不能从孟买型红细胞上检出,H,、,A,或,B,抗原,57,ppt课件.,特殊的ABO亚型2孟买型57ppt课件.,孟买型红细胞通常是,Le,（,a+b-,），但也可是,Le,（,a-b-,）,孟买型的个体不分泌,Leb,，唾液中没有,H,、,A,和,B,抗原，可以有,Lea,抗原，但,没有,Leb,抗原,血清中可含有抗,-H,、抗,-A,和抗,-B,H,基因的等位基因,h,是隐性的抑制基因，孟买型是,h,因子的纯合子,hh,，因此孟买型的个体不能编码,H,糖基转移酶，不能产生,H,抗原,根据所获得的,H,、,A,和,B,基因存在的结果，孟买型可分为,OhO,、,OhA,、,OhB,和,OhAB,表型,58,ppt课件.,孟买型红细胞通常是Le（a+b-），但也可是Le（a-b-）,特殊的,ABO,亚型,3.,类孟买型（,Bombay-like phenotype,）,Levine,等在捷克人中发现了类似孟买型的红细胞亚型，红细胞上没有,H,抗原，但可以有少量,A,或,B,抗原，血清中有抗,-H,，这种红细胞亚型被称为类孟买型。,红细胞表面上有少量,A,抗原的，标记为,Ah,，有少量,B,抗原的，标记为,Bh,，有,AB,抗原的标记为,ABh,。,在与抗,-A,血清反应时，,Ah,红细胞上的弱,A,抗原的凝集情况类似于,A2,或,Ax,。在与抗,-B,血清反应时，,Bh,细胞能显示有弱,B,抗原。,59,ppt课件.,特殊的ABO亚型3. 类孟买型（Bombay-like p,类孟买型的红细胞上不能检出,H,抗原，唾液中有些个体有,ABH,物质。血清中含有抗,-H,，,Ah,个体的血清中还含抗,-B,，但没有抗,-A,。,Bh,个体的血清中没有抗,-B,，但含有抗,-A,。,类孟买型或孟买型因其血型的特殊性，在临床输血时常常难以寻找相容的血源,因此关于,H,抗原缺失型的分子生物学、遗传学和统计学的研究具有重要的意义。,60,ppt课件.,类孟买型的红细胞上不能检出H抗原，唾液中有些个体有ABH物质,副孟买型（,Para-Bombay phenotype,）：红细胞表面上表达,弱的,A,和,B,抗原,但,无,H,抗原,，在其唾液中也完全缺少,H,抗原,类孟买型（,Bombay-like phenotype,）：红细胞上,缺少或有弱的,AB,抗原表达,，而在唾液中有些个体有,ABH,物质，但也有些个体没有,ABH,物质,孟买型被定义为非分泌型,H,抗原缺乏，而类孟买型的定义尚有争议，以前一直定义为分泌型,H,抗原缺失，目前又有人将类孟买型分为两类：,分泌型,H,抗原缺失,(,常见,),分泌型,H,抗原缺失且带有少量,H,抗原转移酶活性,61,ppt课件.,副孟买型（Para-Bombay phenotype）：红细,特殊的,ABO,亚型,4,CiS-AB,型（顺式,AB,型）,1964,年,SeyFried,发现，在一个波兰人家庭，丈夫是,O,型，妻子是,A,2,B,型，妻子的母亲是,O,型，他们有,2,个孩子是,A,2,B,，显然，该妻子的一条染色体上有,A,2,B,基因。,其后，,Yamaguchi,等报道了,1,例显示弱,A,和弱,B,抗原的,A,2,B,3,的表现型，家系研究表明,A,2,和,B,3,基因是通过一条染色体遗传，这种基因构型就被称为,Cis-AB,。,1966,年，,Yamaguchi,等发现一个家庭，父亲是,O,型，母亲是,A,2,B,3,，,3,个孩子是,A,2,B,3,，是以,Cis,方式遗传的。,62,ppt课件.,特殊的ABO亚型4CiS-AB型（顺式AB型）62ppt课,Cis-AB,最主要特征,:,家族成员的特殊遗传方式,A,型和,B,型基因位于一条染色体上，,2,个基因能同时遗传给后代,通过酶学分析研究这种构型的原因,:,可能是两条相邻染色体发生不均衡的基因交换，导致,A,基因和,B,基因都在一条染色体上,基因突变引起产生一种同时具有,A,和,B,酶活性的酶,63,ppt课件.,Cis-AB最主要特征:家族成员的特殊遗传方式63p,Cis-AB,细胞上的,A,抗原虽然经常被认为是,A,2,，但,A,抗原强度强于,A,2,B,，弱于,A,1,B,Cis-AB,细胞几乎无例外地表达弱的,B,抗原性（与免疫性,A,型血清反应较强，而与自然发生的人血清抗,-B,弱凝集或不凝集）,Cis-AB,细胞有很强的,H,抗原性，程度上与,A,2,细胞基本相同，但高于正常的,A,2,B,细胞,唾液中存在正常的,A,物质、弱的,B,物质和强的,H,物质,64,ppt课件.,Cis-AB细胞上的A抗原虽然经常被认为是A2，但A抗原强度,Recently, the nucleotide sequence of the coding region in the last two coding exons of ABO genes from cisAB individuals was determined .,65,ppt课件.,Recently, the nucleotide sequ,The first substitution is identical to that previously found in the A2 allele, corresponding to the cisAB (A2B3) allele encoding a glycosyltransferase that is capable of synthesizing both A and B antigens.,66,ppt课件.,The first substitution is iden,cisAB is a very rare phenotype and has,three blood types, cisA2B3 (,A2B3 /O,), cisA2B (,A2B3 /B,), cisA1B3 (,A2B3 /A1,).,Detecting this AB variant is very important, especially in blood transfusion and in dissolving a problem of paternity in the ABO blood group system.,67,ppt课件.,cisAB is a very rare phenotype,特殊的,ABO,亚型,5.,获得性,B,（,acquired B,）,1959,年,Cameron,等报道了获得性,B,：在,A,型的病人中发现了不是自己遗传产生的,B,抗原，血清中有抗,-B,，但这抗,-B,不与自身红细胞的抗原反应。分泌型个体的分泌液中有,A,和,H,抗原但没有,B,抗原。,获得性,B,抗原：不是由病人自己遗传而得的,B,抗原,68,ppt课件.,特殊的ABO亚型5. 获得性B（acquired B） 68,特殊的,ABO,亚型,获得性,B,抗原只出现在,A,型红细胞上，减弱了,A,抗原的抗原性,获得性,B,通常发生在胃肠道疾病和有细菌感染的肿瘤病人中，细菌的,脱乙酰基转移酶,使,A,抗原的,N-,乙酰基半乳糖转化成半乳糖胺，类似于,B,抗原的决定簇，使之与抗,-B,反应,在正常的血清,pH,条件下，获得性,B,的红细胞能与抗,-B,发生凝集,在,低于,pH6.0,的酸性,条件下，半乳糖胺的,NH2,变成,NH3,基，无法与抗,-B,反应，因此凝集消失,69,ppt课件.,特殊的ABO亚型获得性B抗原只出现在A型红细胞上，减弱了A抗,Rh,血型系统,70,ppt课件.,Rh血型系统70ppt课件.,一、,Rh,血型,系统概述,Rh,血型系统是人类血型系统最复杂的一种，目前已经有明确,45,个抗原。,发现史：,Levine,和,Stetson,于,1939,年在一例,HDN,的胎儿母亲的血清中，发现了一种抗体，当她输入,ABO,同型丈夫的血液后，产生了严重的,HTR,。,经试验证实，该抗体能凝集约,80%,的,ABO,配合的供体血液,71,ppt课件.,一、Rh 血型系统概述 Rh血型系统是人类血型系统最复,1940,年,Landsteiner,和,Wiener,以恒河猴（,rhesus monkeys,）的红细胞免疫家兔和豚鼠，发现产生的抗体能凝集猴红细胞以及大约,85%,的供体红细胞。,他们把被这种抗恒河猴抗体凝集的红细胞称为,Rh,阳性，其余,15%,不凝集的红细胞称为,Rh,阴性。,72,ppt课件.,1940年Landsteiner和Wiener以恒河猴（rh,Wiener,和,Peters,在,1940,年指出，可在输过,ABO,血型相容的人的血清中发现抗,Rh,抗体,Levine,等又发现胎母之间的,Rh,血型不合，能引起新生儿溶血病。,后来证明了家兔抗,rhesus,的血清与人的抗,Rh,血清并不相同，但人们始终称人的抗体为抗,Rh,，为尊重,Landsteiner,和,Wiener,的发现，将家兔抗,rhesus,抗体称为抗,LW,73,ppt课件.,Wiener和Peters在1940年指出，可在输过ABO血,在临床输血医学上，除了,ABO,血型系统外，,Rh,血型系统是最重要的血型系统之一。,Rh,血型系统主要的抗原有：,D, C, E, c, e,。,Rh,抗原显示剂量效应（,D,除外），纯合子比杂合子反应强。,临床上称,Rh,阳性和阴性仅考虑了（或,Rh,o,）的存在或缺失,74,ppt课件.,在临床输血医学上，除了ABO血型系统外，Rh血型系统是最重要,Rh,血型命名法,Fisher-Race,Wiener,Rosenfield,D,Rh,0,Rh1,C,rh,Rh2,E,rh,Rh3,c,hr,Rh4,e,hr,Rh5,由于,Rh,血型系统的复杂性，历史上存在三种命名法,75,ppt课件.,Rh血型命名法Fisher-RaceWienerRosenf,Rh haplotypes,Fisher-Race,Weiner,Shorthand (Weiner),CDe,Rh,1,R,1,cDE,Rh,2,R,2,cDe,Rh,0,R,0,CDE,Rh,z,R,z,Cde,rh,r,cdE,rh,r,cde,rh,r,CdE,rh,y,r,y,76,ppt课件.,Rh haplotypesFisher-RaceWeiner,77,ppt课件.,77ppt课件.,二、,Rh,血型抗原多态性的基因结构和分子生物学特征,78,ppt课件.,二、Rh血型抗原多态性的基因结构和分子生物学特征 78ppt,三、,Rh,抗原的变异体、分子基础,Rh,血型的抗原存在大量的变异体，由不同的等位基因所编码，包括：,各种弱,D,表型（,weak D type,）,部分,D,表型（,partial D type,）,Del,等,RHD,等位基因在分子结构、表型和临床意义之间没有绝对的一致性,79,ppt课件.,三、Rh抗原的变异体、分子基础 Rh血型的抗原存在大量的,This wide degree of D antigen variability has confounded some serological approaches-for example it is extremely difficult to characterise partial D and D-elute phenotypes by serology alone, as a very large panel of monoclonal anti-D representing each of the different anti-epD (D-epitope) specificities would be required, over 50 of which have been described.,80,ppt课件.,This wide degree of D antigen,Partial D,因为,RhD,是多跨膜蛋白，只有部分蛋白片段暴露在红细胞表面。当氨基酸替代物位于细胞外环时，部分表型可以出现。,部分表型可以因,RHD,编码的单核苷酸错义突变引起，但更多的是,RHD-CE-D,杂交等位基因,引起。这种杂交蛋白可以和正常,RhD,蛋白一样在细胞膜上稳定，但是缺少部分抗原表位。,81,ppt课件.,Partial D因为RhD是多跨膜蛋白，只有部分蛋白片段暴,部分,D,亚型：,D,分类,(DII,到,DVII),DIII,、,DIV,、,DV,和,DVI,通常由,RHD-CE-D,杂交等位基因产生,部分表型具有重要临床意义,携带者受到正常抗原免疫可能产生抗,-,82,ppt课件.,部分D亚型：D 分类 (DII 到 DVII) 82ppt课,DVI,：最常见的,partial D,亚型之一,外显子,1-3,和,7-10,是,RHD,序列,但外显子,4-6,是,RHCE,序列。,83,ppt课件.,DVI：最常见的 partial D亚型之一, 外显子 1-,84,ppt课件.,84ppt课件.,Weak D,（,D,u,）,如果氨基酸替代物位于,RhD,蛋白跨膜区或者细胞内片段时，,interfere with the assembly or efficient insertion of the RHD protein,可能产生弱表型,抗原只是表达量减少，质通常保留不变,弱携带者通常不会产生抗,-,弱型,15,、弱型,4.2,、,DAR,型、弱型的携带者可能会产生抗,-,85,ppt课件.,Weak D（Du）如果氨基酸替代物位于RhD蛋白跨膜,D,u,表型的临床意义,供者血液必须要进行,D,u,检测，以确保,Rh,阴性患者能使用全部为,Rh,阴性血液成分与制品,受者血液也要进行,D,u,检测，一般输血时尽量采用,Rh,阴性血液成分与制品,因为一些部分,D,或,D,u,型,其携带者能被正常,D,抗原免疫而产生抗,-D,产科病人要常规检测,D,u,表型，因为,D,u,阳性胎儿可能出现严重的,HDN,86,ppt课件.,Du 表型的临床意义86ppt课件.,DEL,DEL,（,Del),表达,非常弱的抗原,，最先仅能由,洗脱技术,(elution),检测,抗原减弱，比弱表型更显著,欧洲人群中,DEL,很罕见,东亚地区阴性血供者接近,30%,属于,DEL,携带者,随着,DEL,供血者的临床意义和基因分型方法的研究， 有关于,DEL,亚型正进一步深入,87,ppt课件.,DELDEL（Del)表达非常弱的抗原，最先仅能由洗脱,RhD,阳性和阴性单倍体,88,ppt课件.,RhD阳性和阴性单倍体88ppt课件.,Rh,阴性分子机制,RHD,基因去除,出现杂交的,Rhesus box,：导致在大多数种族人群中出现,D,阴性单倍体,RHD pseudogene( RHD,),和,RHD-CE-D,杂交基因,Cde,s,：非洲相当一部分人群的原因,罕见原因：其他类型,RHD-CE-D,杂交基因的隐匿机制，以及无义或移码突变,通过血清学实验有时在鉴别,D,阴性和,DEL,表型很困难，通过分子技术可以很明确鉴定等位基因从而避免误检。,89,ppt课件.,Rh阴性分子机制RHD基因去除,出现杂交的Rhesus bo,Rh,null,Rh,蛋白不属于糖基化蛋白,Rh,蛋白与另一种红细胞表面糖蛋白紧密相关，即,Rh,相关糖蛋白,(RhAG),编码,RhAG,的基因位于,6,号染色体上，与,RHD,和,RHCE,有高度的相似性,RhAG,是形成,Rh,抗原的必要条件，,RHAG,基因如产生突变，形成了无活性的,RHAG,基因，在纯合子状态时，将产生罕见的,Rh,null,表型,Rh,系统的所有抗原均不能表达,90,ppt课件.,RhnullRh蛋白不属于糖基化蛋白90ppt课件.,RhCE variants,C,c,E,和,e,的部分抗原也有报道，类似部分,D,抗原，例如部分,C,抗原携带者可能经免疫刺激而产生抗,-C,。因为诸如此类的部分抗原携带者比部分,D,抗原更少见，而且其免疫原性更弱，因此临床重要性也并不是很大。,一些长期的血清学难题可以被分子方法解决，例如通过抗体工程技术发展更加优良的血清学试剂。,91,ppt课件.,RhCE variantsC,c,E和e的部分抗原也有报道，,Certain weak D individuals have made anti-D when transfused with D-positive blood, including weak D types 4.2, 11 and 15, and therefore these individuals should ideally receive D-negative blood. However the common weak Ds (type 1, 2, 3 and 41) do not appear to be prone to D immunisation . In fact, the Rh D protein weak D type 4.2 is identical in predicted primary amino acid sequence to the partial D DAR, so strictly should not be considered a weak D phenotype.,92,ppt课件.,Certain weak D individuals hav,Because of such a fuzzy distinction between partial and weak D phenotypes, it has been argued that the term,D variant,be used instead, with each phenotype considered individually on the merits of its clinical ability to cause alloimmunisation (if transfused) or be alloimmunised by normal D positive blood (if a patient) (Daniels et al, 2007).,93,ppt课件.,Because of such a fuzzy distin,94,ppt课件.,94ppt课件.,四、,Rh,血型系统的抗体,Rh,抗体的免疫球蛋白性质,大部份,Rh,抗体属,IgG,，与盐水悬浮的,Rh,阳性红细胞（,D,细胞例外）不起凝集反应,改变方法或试验条件：如用高分子介质（如牛白蛋白），酶试验或间接抗球蛋白试验可以检测抗原抗体的凝集反应。,95,ppt课件.,四、Rh血型系统的抗体 Rh抗体的免疫球蛋白性质 95,Rh,抗体的产生,主要通过输血或妊娠免疫产生,一般在初次免疫后,2,6,个月内出现,对,Rh,（,D,）初次免疫的人，经再次免疫后，在三周内抗体浓度可达最高峰,大约,1/3,的,Rh,阴性的人，受,Rh,阳性抗原免疫后，不产生抗,-D,96,ppt课件.,Rh抗体的产生 96ppt课件.,非补体结合性,大多数,Rh,抗体不能结合补体，因为补体连锁反应的激发，至少要求二个,IgG,分子连接于邻近的红细胞上。由于,Rh,抗原在红细胞膜上相距很远，不能让,IgG,分子相互合作，因此不能引起补体结合。 （,extravascular rather than intravascular RBC destruction,）,但是也有补体结合,Rh,抗体的报导,97,ppt课件.,非补体结合性 97ppt课件.,五、,Rh,抗体的临床意义,受血者血浆中如含有,Rh,抗体，在输入含相应抗原的血液后，将引起严重的溶血性输血反应,IgG,类的,Rh,抗体，由于能通过胎盘，从而破坏胎儿相应抗原的红细胞，引起,HDN,当少量的,Rh,阳性红细胞进入受血者循环时，可用人,Rh,免疫球蛋白来防止,Rh,阳性红细胞的初次免疫,98,ppt课件.,五、Rh抗体的临床意义 受血者血浆中如含有Rh抗体，在输入含,其它血型系统,99,ppt课件.,99ppt课件.,一、,Lewis,血型系统,1946,首次发现,主要抗原：,Le,a,(LE1),和,Le,b,(LE2),其他抗原：,Le,c,、,Le,d,、,Le,x,(LE3),常见表型：,Le(a+b-),、,Le(a-b+),、,Le(a-b-),Le(a+b+),在成人中很罕见 ，但在年幼婴儿略为多见,100,ppt课件.,一、Lewis血型系统1946首次发现100ppt课件.,Lewis,系统不同于其它血型系统,在红细胞成熟过程中，,Lewis,抗原不直接整合到细胞膜上,Lewis,抗原由组织细胞产生，最初在血浆和体液中存在,红细胞通过从其外环境血浆中吸附而获得,Lewis,抗原,101,ppt课件.,Lewis 系统不同于其它血型系统101ppt课件.,Lewis,表型 不仅由,Lele,基因座的基因控制，也由,Hh,和,Sese,基因控制：,Le,a,的存在受,FUT3,基因控制，,Le,b,的存在受,FUT2,和,FUT3,基因共同控制。,红细胞上表达的,Lewis,抗原量 与,ABO,表型抗原表达量相当。,102,ppt课件.,102ppt课件.,Lewis,表现型 和,ABH,分泌物,103,ppt课件.,Lewis 表现型 和ABH 分泌物103ppt课件.,Lewis,表型和 分布频率,104,ppt课件.,Lewis 表型和 分布频率104ppt课件.,Lewis,血型系统抗体,抗,- Le,a,非常常见的抗体，通常是自然产生,(,不需要经输血或妊娠刺激）,自然产生通常为,IgM,类，但也可以部分或完全是,IgG,型,最佳反应条件多数为室温,但在,37,也可具有一定活性,酶处理红细胞能提高其反应性和溶血活性,105,ppt课件.,Lewis 血型系统抗体 抗- Lea 105ppt课,Lewis,血型系统抗体,抗,- Le,b,类似 抗,- Le,a,通常为,IgM,类,室温条件下具有凝集反应性， 能结合补体,酶处理红细胞能提高抗,- Le,b,的反应活性,106,ppt课件.,Lewis 血型系统抗体 抗- Leb 106ppt课件,Lewis,血型系统抗体的临床意义,HDN,Lewis,抗体一般与,HDN,不相关,原因,:,多数抗,-Le,a,和抗,-Le,b,为,IgM,类，不能通过胎盘,Lewis,抗原 在胎儿红细胞上表达很少，即便,Lewis,抗体为,IgG,类，通过胎盘，也不会引起胎儿红细胞破坏,107,ppt课件.,Lewis 血型系统抗体的临床意义HDN107ppt课件.,Lewis,血型系统抗体的临床意义,HTR(hemolytic transfusion reaction),一般与,HTR,不相关,抗,-Le,a,和 抗,-Le,b,一般仅在室温时具有活性,如果,Lewis,抗体体外证实具有溶血活性或在抗球蛋白参与下具有活性，应考虑它具有提高输注红细胞清除的能力,运用常规,37,相容性实验（,compatibility test,）以选择适当的供者血液给具有潜在危险的,Lewis,抗体的患者使用,108,ppt课件.,Lewis血型系统抗体的临床意义HTR(hemolytic,二、,MNSs,血型系统,1927,年，,Landsteiner,和,Levine,用人红细胞免疫家兔，获得了兔抗人红细胞血清，可以鉴定红细胞抗原，从而发现了,M,和,N,抗原，相应的特异性抗体被称为抗,-M,和抗,-N,。,由于,MN,血型是用免疫（,immune,）的血清检出，因此取,M,和,N,两个字母作为,MN,血型的符号,M,和,N,基因等显性等位基因，所以构成,M+N-,、,M+N+,、,M-N+,三种表型,109,ppt课件.,二、MNSs血型系统1