试议肿瘤的基因诊断培训ppt课件

Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,*,试议肿瘤的基因诊断,*,Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,*,试议肿瘤的基因诊断,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,试议肿瘤的基因诊断,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,试议肿瘤的基因诊断,*,试议肿瘤的基因诊断,试议肿瘤的基因诊断,1,肿瘤是细胞的异常增生,有结构、功能和代谢的异常,具有超过正常细胞增生能力,肿瘤概念,2,试议肿瘤的基因诊断,肿瘤是细胞的异常增生肿瘤概念2试议肿瘤的基因诊断,2,在细胞内核酸代谢的异常:,肿瘤细胞和正常细胞的核酸代谢有显著的不同；,不同类型肿瘤细胞的核酸代谢也有较大的差异；,相同恶性程度肿瘤细胞的核酸代谢也有所不同。,肿瘤是一种分子病,3,试议肿瘤的基因诊断,在细胞内核酸代谢的异常:肿瘤是一种分子病3试议肿瘤的基因诊,3,癌基因的激活,抑癌基因的失活（或缺失）,肿瘤发生机理,4,试议肿瘤的基因诊断,癌基因的激活肿瘤发生机理4试议肿瘤的基因诊断,4,原癌基因,癌基因,病毒癌基因,肿瘤抑制基因,肿瘤转移相关基因,肿瘤耐药基因等,肿瘤相关基因,5,试议肿瘤的基因诊断,原癌基因肿瘤相关基因5试议肿瘤的基因诊断,5,细胞基因组中具有能够使正常细胞发生恶性转化的基因,癌基因在正常细胞的基因组中,存在,不表达状态,表达水平不足以引起细胞的恶性转化,癌基因：,6,试议肿瘤的基因诊断,细胞基因组中具有能够使正常细胞发生恶性转化的基因癌基因：6试,6,定位,功能,癌基因，产物,分泌蛋白,生长因子,sis PDGF链,跨膜蛋白,受体型酪氨酸激酶,erb B ,EGF受体,erb B2 ,EGF样受体,(neu),fms ,CSF-1受体,膜结合蛋白,G-蛋白,非受体型酪氨酸激酶,ras p21ras,src pp60src,胞浆可溶性蛋白,非受体型酪氨酸激酶,丝氨酸/苏氨酸激酶,信号转导连接蛋白,ab1,raf,crk,SH2/SH3调节蛋白,vav ,SH2调节蛋白,胞核蛋白,转录因子,myc,myb,fos,jun,erb A,T3受体,表1细胞癌基因按其产物定位和功能分类,7,试议肿瘤的基因诊断,定位功能癌基因，产物分泌蛋白生长因子sis PDGF链跨膜,7,能够抑制细胞恶性转化或抑制细胞异常,增殖的基因,目前研究较多的有p53基因、pRB基因、p16蛋白、p15蛋白、p21等。,抑癌基因,8,试议肿瘤的基因诊断,能够抑制细胞恶性转化或抑制细胞异常抑癌基因8试议肿瘤的基因诊,8,基因,染色体定位,相关肿瘤,基因产物及功能,RB,13q14,RB、成骨肉瘤、胃癌、SCLC、乳癌、结肠癌,p105，控制生长,WT,11p13,WT、横纹肌肉瘤、肺癌、膀胱癌、乳癌、肝母细胞瘤,WT-ZFP，负调控转录因子,NF-1,17p12,神经纤维瘤、嗜铬细胞瘤、雪旺氏细胞瘤、神经纤维肉瘤,GAP，拮抗p21rasB,DCC,18q21.3,结肠瘤,P192, 细胞粘附分子,p53,17p13,星状细胞瘤、胶质母细胞瘤、结肠癌、乳癌、成骨肉瘤、SCLC、胃癌、磷状细胞肺癌,P53 控制肿瘤生长,erb A,17q21,ANLL,T3受体，含锌指结构的转录因子,表,2,已确定的几种抑癌基因,9,试议肿瘤的基因诊断,基因染色体定位相关肿瘤基因产物及功能RB13q14RB、成骨,9,野生型P53生物学活性,当DNA损伤的时候,P53基因就明显表达使细胞在G1期生长阻滞，促使细胞凋亡。,抑制肿瘤细胞生长,保持DNA完整性,10,试议肿瘤的基因诊断,野生型P53生物学活性当DNA损伤的时候,P53基因就明显表,10,包括肿瘤转移促进基因或肿瘤转移抑制,基因,。,肿瘤转移相关基因,11,试议肿瘤的基因诊断,包括肿瘤转移促进基因或肿瘤转移抑制肿瘤转移相关基因11试议肿,11,其表达使肿瘤细胞对药物产生耐药的基因。,肿瘤耐药基因,12,试议肿瘤的基因诊断,其表达使肿瘤细胞对药物产生耐药的基因。 肿瘤耐药基因12试议,12,血小板衍生生长因子（PDGF）,表皮生长因子（EGF）,VGF基因等,肿瘤生长因子,13,试议肿瘤的基因诊断,血小板衍生生长因子（PDGF）肿瘤生长因子 13试议肿瘤的,13,肿瘤的基因诊断,肿瘤的基因诊断目前主要集中在以下几个方面：,肿瘤转移标志物,肿瘤抗药基因,突变的癌基因,肿瘤相关的病毒基因,14,试议肿瘤的基因诊断,肿瘤的基因诊断肿瘤的基因诊断目前主要集中在以下几个方面：1,14,标志分类,机制,分子标志,应用于癌症诊断,分子遗传性,染色体易位,t(9；22)，t（14；18），t(11；12)等,白血病、淋巴瘤等,点突变,p53,ER ras等,胃癌、膀胱癌、乳腺癌、前列腺癌、结肠癌、胰腺癌、肺癌等,缺失,BRCA1，BRCA2，DCC等,乳腺癌、结肠癌,改变拼接,CD44，muc-1,VLA-4等,结肠癌、肾癌、乳腺癌、脑瘤等,扩增,erb-B2,EGFR,N-myc,ras,乳腺癌、脑瘤、神经母细胞瘤,比例改变,明胶酶A/TIMP2,乳腺癌转移等,病毒性,病毒转化,HPV,HCV,HBV，EBV,宫颈癌、肝癌、鼻咽癌等,组织性,组织分化,PSA,PSMA,前列腺癌,muc-18,酪氨酸酸酶，Mage-3,黑素瘤,AFP,白蛋白,肝癌,甲状腺球蛋白,甲状腺癌,NPGP9.5，酪氨酸羟化酶表面活性物质等,神经母细胞瘤,肿瘤性,肿瘤细胞特征,CEA,肺癌、,结肠癌、胃癌、乳腺癌,-HCG,黑素瘤等,CK-19,肺鳞癌,端粒酶,结肠癌、乳腺癌、头颈部癌等,微卫星体等,结肠癌、乳腺癌、头颈部癌等,表3 肿瘤基因诊断的分子标志及其应用,15,试议肿瘤的基因诊断,标志分类机制分子标志应用于癌症诊断分子遗传性染色体易位t(,15,可分为四大类,组织特异性基因标志,肿瘤特异性基因标志,血管生成因子,其它与肿瘤转移相关的分子及基质蛋白酶及其抑制剂,肿瘤转移基因标志物,16,试议肿瘤的基因诊断, 可分为四大类 肿瘤转移基因标志物16试议肿瘤,16,组织特异性基因标志物,指肿瘤组织和/或起源正常组织所特有，在淋巴组织和血细胞中不存在的。如角质蛋白家族（CK）mRNA、粘蛋白基因、表皮生长因子受体（EGFR）mRNA等。,.,17,试议肿瘤的基因诊断,组织特异性基因标志物指肿瘤组织和/或起源正常组织所特有，在淋,17,肿瘤特异性基因标志物,存在于肿瘤及其起源的正常细胞中，不存在于其他细胞。,如CEA mRNA、AFP mRNA、PSA mRNA等。,18,试议肿瘤的基因诊断,肿瘤特异性基因标志物存在于肿瘤及其起源的正常细胞中，不存在于,18,血管生成因子,如血管内皮细胞生长因子（VEGF）等。,19,试议肿瘤的基因诊断,血管生成因子如血管内皮细胞生长因子（VEGF）等。 19试议,19,肿瘤抗药基因,对于肿瘤化疗效果及预后进行推测；,还可以将肿瘤抗药基因导人骨髓细胞，特别是骨髓干细胞中，提高机体对于抗肿瘤化疗药物的耐受程度，如此可以加大抗肿瘤化疗药物的使用剂量，提高抗肿瘤化疗的治疗效果。,20,试议肿瘤的基因诊断,肿瘤抗药基因对于肿瘤化疗效果及预后进行推测；20试议肿瘤的基,20,肿瘤抗药基因,多药抗性基因一l（MDR1），其编码的蛋白如P-糖蛋白起排流泵作用。,.,其它一些与细胞内药物代谢有关的基因也可以看作是肿瘤抗药基因，如谷胱苷肽S一转移酶（GST），可使机体解毒功能增强；癌基因 bcl-2的表达可抑制肿瘤化疗药物所诱导的肿瘤细胞程序化死亡等。,.,21,试议肿瘤的基因诊断,肿瘤抗药基因多药抗性基因一l（MDR1），其编码的蛋白如P-,21,突变的癌基因,癌基因的突变是癌基因激活的重要方式和途径。除了见到较大范围片段的缺失或插人以及染色体转位之外，大多数情况下，都是少数核苷酸或单个碱基的突变。,.,癌基因点突变的检测,单链构象多态性（SSCP）检测技术等,.,22,试议肿瘤的基因诊断,突变的癌基因癌基因的突变是癌基因激活的重要方式和途径。除了见,22,肿瘤相关的病毒基因,EB病毒（EBV）,人乳头瘤病毒（HPV）,乙型肝炎病毒（HBV）、丙型肝炎病毒（HCV）感染,对于这些肿瘤组织细胞中相关病毒基因及其编 码产物的检测，可以作为这些类型的肿瘤诊断的标志。,致瘤病毒引起的恶性转化作用引起了人们极大的关注,23,试议肿瘤的基因诊断,肿瘤相关的病毒基因EB病毒（EBV）对于这些肿瘤组织细胞中相,23,肿瘤基因诊断的常用方法,PCR、RT-PCR,Southern blot杂交技术、Northern blot杂交技术,基因芯片,基因测序。,24,试议肿瘤的基因诊断,肿瘤基因诊断的常用方法PCR、RT-PCR24试议肿瘤的基因,24,肿瘤基因的分子诊断意义,1.肿瘤的早期诊断和筛选,2.肿瘤疗效监测,3.肿瘤的预后判断,4.肿瘤微转移检测,25,试议肿瘤的基因诊断,肿瘤基因的分子诊断意义 1.肿瘤的早期诊断和筛选25试议肿瘤,25,试议肿瘤的基因诊断培训ppt课件,26,27,试议肿瘤的基因诊断,27试议肿瘤的基因诊断,27,前列腺癌特异性基因DD3,PCA3,DD3,PCA3,是一种非编码RNA的基因，定位于9q2122染色体。它为前列腺癌特异性基因之一，DD3,PCA3,mRNA仅在前列腺癌细胞中表达，而在其它正常组织和癌组织以及细胞系中均不表达。,28,试议肿瘤的基因诊断,前列腺癌特异性基因DD3PCA3 DD3PCA3是一种非编码,28,DD3 mRNA 14外显子扩增结果,M,：,50bp DNA Ladder,；,1,：,LNCaP,阳性对照；,2,3,：,PCa,；,4,：,PIN,；,5,6,：,BPH,；,7,：直肠癌；,8,：直肠癌癌旁；,9,：结肠癌；,10,：结肠癌癌旁；,11,：乳腺癌；,12,：甲状腺癌；,13,：胃癌；,14,：胃癌癌旁；,15,：膀胱癌；,16,：软组织纤维肉瘤；,17,：转移性腺癌；,18,：淋巴结转移性黑色素瘤；,19,：卵巢成熟性畸胎瘤；,20,：正常肝脏；,21,：胆囊；,22,：胎盘；,23,：试剂空白。,29,试议肿瘤的基因诊断,DD3 mRNA 14外显子扩增结果M：50bp DNA,29,DD3 mRNA 13外显子扩增结果,M,：,50bp DNA Ladder,；,1,：,LNCaP,阳性对照；,2,3,：,PCa,；,4,：,PIN,；,5,6,：,BPH,；,7,：直肠癌；,8,：直肠癌癌旁；,9,：结肠癌；,10,：结肠癌癌旁；,11,：乳腺癌；,12,：甲状腺癌；,13,：胃癌；,14,：胃癌癌旁；,15,：膀胱癌；,16,：软组织纤维肉瘤；,17,：转移性腺癌；,18,：淋巴结转移性黑色素瘤；,19,：卵巢成熟性畸胎瘤；,20,：正常肝脏；,21,：胆囊；,22,：胎盘；,23,：试剂空白。,30,试议肿瘤的基因诊断,DD3 mRNA 13外显子扩增结果M：50bp DNA,30,DD3 mRNA 34外显子扩增结果,M,：,50bp DNA Ladder,；,1,：,LNCaP,阳性对照；,2,3,：,PCa,；,4,：,PIN,；,5,6,：,BPH,；,7,：直肠癌；,8,：直肠癌癌旁；,9,：结肠癌；,10,：结肠癌癌旁；,11,：乳腺癌；,12,：甲状腺癌；,13,：胃癌；,14,：胃癌癌旁；,15,：膀胱癌；,16,：软组织纤维肉瘤；,17,：转移性腺癌；,18,：淋巴结转移性黑色素瘤；,19,：卵巢成熟性畸胎瘤；,20,：正常肝脏；,21,：胆囊；,22,：胎盘；,23,：试剂空白。,31,试议肿瘤的基因诊断,DD3 mRNA 34外显子扩增结果M：50bp DNA,31,前列腺组织和其他肿瘤组织及癌旁组织DD3 mRNA检测结果,32,试议肿瘤的基因诊断,前列腺组织和其他肿瘤组织及癌旁组织DD3 mRNA检测结果3,32,M：50bp DNA标准；1：LNCaP阳性对照；2：BPH；3：健康男性志愿者；410为PCa；11为试剂空白。,外周血DD3 mRNA的RT-PCR扩增电泳图,33,试议肿瘤的基因诊断,M：50bp DNA标准；1：LNCaP阳性对照；2：BP,33,RT-PCR检测结果,44例PCa组中13例可见DD3 mRNA阳性结果(其中B期、C期及D期分别有为0例、2例，11例)。,30例BPH患者和18名健康男性志愿者标本中均未检出DD3 mRNA。,34,试议肿瘤的基因诊断,RT-PCR检测结果 44例PCa组中13例可见DD3 mR,34,外周血DD3 mRNA的巢式RT-PCR扩增电泳图,M：50bp DNA分子量标准；1：LNCaP阳性对照；2：阴性对照(女性)；3：BPH患者；,4：健康男性志愿者；58：未治疗的PCa；9：试剂空白,35,试议肿瘤的基因诊断,外周血DD3 mRNA的巢式RT-PCR扩增电泳图 M：50,35,巢式RT-PCR检测结果,44例PCa组中21例可见DD3 mRNA阳性结果(其中B期、C期、D期分别有1例、5例、15例),30例BPH患者和18名健康男性志愿者均未见阳性结果,36,试议肿瘤的基因诊断,巢式RT-PCR检测结果44例PCa组中21例可见DD3 m,36,两种方法对PCa患者外周血DD3 mRNA检出率比较,RT-PCR,巢式RT-PCR,+,-,+,13,0,-,8,23,注：,2,=20.2，,P,0.001；Kappa0.629，,P,0.001,37,试议肿瘤的基因诊断,两种方法对PCa患者外周血DD3 mRNA检出率比较巢式RT,37,外周血DD3 mRNA巢式RT-PCR方法的灵敏度,M:50bp DNA分子量标准；16:依次为10,5,、10,4,、10,3,、10,2,、10,1,、1个LNCaP细胞/ml全血； 7:阴性对照；8:试剂空白,38,试议肿瘤的基因诊断,外周血DD3 mRNA巢式RT-PCR方法的灵敏度 M:50,38,组别,DD3 mRNA检出率(%，例数),PCa（未治疗）,100%（11/11）,BPH,0%（0/30）,健康男性志愿者,（对照）,0%（0/18）,注：经卡方检验，,2,59.0,P,0.01,不同前列腺疾病患者其外周血DD3 mRNA检出率比较,巢式RT-PCR,39,试议肿瘤的基因诊断,组别 DD3 mRNA检出率(%，例数) PCa（未治疗）,39,PCa不同临床分期未治疗组和治疗组DD3 mRNA阳性率比较(%,例数),临床分期,DD3 mRNA,未治疗组,内分泌治疗组,B期,100.0(1/1),0.0（0/2）,C期,100.0(3/3),25.0（2/8）*,D期,100.0(7/7),34.8(8/23) *,合计,100.0(11/11),30.3(10/33) *,注：内分泌治疗组与未治疗组比较， *,P,0.05，*,P,0.01,巢式RT-PCR,40,试议肿瘤的基因诊断,PCa不同临床分期未治疗组和治疗组DD3 mRNA阳性率比较,40,谢 谢 !,41,试议肿瘤的基因诊断,谢 谢 !41试议肿瘤的基因诊断,41,