食品与酶工程课件

食品与酶工程食品与酶工程第一部分第一部分 酶工程相关概念酶工程相关概念第一部分 酶工程相关概念酶酶：活细胞产生的具有高度催化活力和高度专一性的生物活细胞产生的具有高度催化活力和高度专一性的生物催化剂。催化剂。酶工程酶工程：酶的生产及其在生物反应器中进行催化应用技术酶的生产及其在生物反应器中进行催化应用技术的过程。的过程。酶的制备与发酵生产酶的制备与发酵生产：生物细胞内生物合成或直接提取分离生物细胞内生物合成或直接提取分离微生物发酵生产制取微生物发酵生产制取酶酶酶：活细胞产生的具有高度催化活力和高度专一性的生物催化剂。生动、植物细胞培养和微生物细胞培养比较项目项目微生物微生物动物细胞动物细胞植物细胞植物细胞大小（大小（m）1-1010-10020-300悬浮生长悬浮生长可以可以大部分附着大部分附着可以，易成团可以，易成团营养要求营养要求简单简单非常复杂非常复杂较复杂较复杂生长速率生长速率快，快，0.5-5h慢，慢，15-100h慢，慢，24-74h代谢调节代谢调节内部内部内部、激素内部、激素内部、激素内部、激素环境敏感环境敏感能忍受广范能忍受广范围围非常敏感（无细胞非常敏感（无细胞壁）壁）能忍受广泛范能忍受广泛范围围细胞分化细胞分化无无有有有有剪切力敏感剪切力敏感低低非常高非常高高高传统变异、筛传统变异、筛选选广泛使用广泛使用不常使用不常使用有时使用有时使用细胞或产物浓细胞或产物浓度度较高较高低低低低动、植物细胞培养和微生物细胞培养比较项目微生物动物细胞植物细动、植物细胞培养目的动、植物细胞培养目的动物细胞动物细胞 ：疫苗、激素、多肽药物、单克隆抗体、酶、皮疫苗、激素、多肽药物、单克隆抗体、酶、皮肤等人体组织、器官等功能性蛋白质。肤等人体组织、器官等功能性蛋白质。植物细胞植物细胞 ：色素、药物、香精、酶等次级代谢物。色素、药物、香精、酶等次级代谢物。动、植物细胞培养目的酶的制备植物细胞酶的制备植物细胞一、一、植物细胞培养产酶的工艺流程植物细胞培养产酶的工艺流程1.1.外植体的选择与处理外植体的选择与处理 外植体：是指从植株取出，经过预处理后，用于植物组外植体：是指从植株取出，经过预处理后，用于植物组 织和细胞培养的植物的组织片段或小块。织和细胞培养的植物的组织片段或小块。外植体外植体细胞获取细胞获取细胞培养细胞培养分离纯化分离纯化产物产物酶的制备植物细胞酶的制备植物细胞外植体细胞获取细胞培2.2.植物细胞的获取植物细胞的获取 获获取取细胞的方法有：直接分离法、愈伤组织诱导法和原细胞的方法有：直接分离法、愈伤组织诱导法和原生质体再生法。生质体再生法。直接分离法直接分离法 直接从外植体中获得细胞，包括直接从外植体中获得细胞，包括机械捣碎法机械捣碎法和和酶解法酶解法 愈伤组织诱导法愈伤组织诱导法 愈伤组织：一种能迅速增殖的、无特定结构和功能的薄愈伤组织：一种能迅速增殖的、无特定结构和功能的薄壁细胞团壁细胞团 原生质体再生法原生质体再生法 原生质体原生质体：除去细胞壁的微球体：除去细胞壁的微球体 植物原生质体的分离方法一般有植物原生质体的分离方法一般有机械分离法机械分离法和和酶解法酶解法酶的制备植物细胞2.植物细胞的获取酶的制备植物细胞食品与酶工程课件酶的制备植物细胞 3.3.细胞悬浮培养细胞悬浮培养 4.4.分离纯化分离纯化二、植物细胞培养的培养基二、植物细胞培养的培养基1.1.植物细胞培养基的特点植物细胞培养基的特点 生长和发酵需要大量的生长和发酵需要大量的无机盐无机盐 需要需要多种维生素多种维生素和和植物激素植物激素 氮源一般为氮源一般为无机氮无机氮 以蔗糖为碳源以蔗糖为碳源酶的制备植物细胞 3.细胞悬浮培养酶的制备植物细胞2.2.几种常见的植物细胞培养基几种常见的植物细胞培养基 MSMS、B5B5、WhiteWhite、KM-8PKM-8P培养基培养基三、温度和三、温度和pHpH 植物细胞培养温度一般在植物细胞培养温度一般在2525左右左右 pHpH一般控制在微酸性范围，一般控制在微酸性范围，5.55.5左右左右四、通风和搅拌四、通风和搅拌 耗氧速率较慢，细胞比较大，较脆弱，耗氧速率较慢，细胞比较大，较脆弱，对剪切敏感对剪切敏感，所以，通气和搅拌不能太强烈。所以，通气和搅拌不能太强烈。酶的制备植物细胞2.几种常见的植物细胞培养基酶的制备植物细胞五、光照五、光照 对一些植物酶有对一些植物酶有诱导作用诱导作用或或抑制作用抑制作用。六、前体和刺激的添加六、前体和刺激的添加 前体前体：指处于目标代谢物代谢途径上游的物质。指处于目标代谢物代谢途径上游的物质。添加剂添加剂：指可以促进植物细胞的物质代谢朝所需次级指可以促进植物细胞的物质代谢朝所需次级代谢物生成的方向发展的物质（常用的刺激剂有微生物细代谢物生成的方向发展的物质（常用的刺激剂有微生物细胞壁碎片和果胶酶、纤维素酶等胞外酶）。胞壁碎片和果胶酶、纤维素酶等胞外酶）。酶的制备植物细胞五、光照酶的制备动物细胞酶的制备动物细胞动物细胞的特性：动物细胞的特性：细胞生长速度慢（需加抗生素）细胞生长速度慢（需加抗生素）细胞体积大，无细胞壁保护，对剪切力敏感细胞体积大，无细胞壁保护，对剪切力敏感 反应过程成本高，产品价格贵反应过程成本高，产品价格贵 细胞具有群体效应，锚地依赖性、接触抑制性以及功细胞具有群体效应，锚地依赖性、接触抑制性以及功能能 全能性全能性酶的制备动物细胞酶的制备动物细胞酶的制备动物细胞动物细胞培养特点动物细胞培养特点：（1 1）主要用于功能蛋白质和多肽的生产）主要用于功能蛋白质和多肽的生产（2 2）生长较慢，）生长较慢，15-100h15-100h（3 3）需要添）需要添加抗生素以防染菌加抗生素以防染菌（4 4）无细胞壁，体积）无细胞壁，体积较大较大，对剪切力敏感对剪切力敏感，要求严格控制培养，要求严格控制培养条件如条件如pHpH、渗透压、溶解氧等、渗透压、溶解氧等（5 5）大部分动物细胞有锚地依赖性，）大部分动物细胞有锚地依赖性，需要贴壁培养需要贴壁培养（6 6）培养基成分复杂，）培养基成分复杂，分离纯化复杂，成本较高分离纯化复杂，成本较高，多用于高价，多用于高价值药物的生产值药物的生产（7 7）原代细胞）原代细胞培养培养5050代之后即会退化死亡代之后即会退化死亡，需要重新分离细胞，需要重新分离细胞酶的制备动物细胞动物细胞培养特点：酶的制备动物细胞动物细胞培养方式动物细胞培养方式：悬浮培养悬浮培养 血液、淋巴组织的细胞血液、淋巴组织的细胞 贴壁培养贴壁培养 成纤维细胞型（成纤维细胞型（fibroblastfibroblast）上皮细胞型上皮细胞型(epithilium cell type)(epithilium cell type)游走细胞型游走细胞型(wondering cell type)(wondering cell type)多形性细胞型多形性细胞型 (polymorphic cell type)(polymorphic cell type)固定化细胞培养固定化细胞培养酶的制备动物细胞动物细胞培养方式：酶的制备动物细胞动物细胞培养过程动物细胞培养过程：动物细胞培养基的组成成分动物细胞培养基的组成成分：氨基酸、维生素、无机盐、葡萄糖、激素、生长因子氨基酸、维生素、无机盐、葡萄糖、激素、生长因子种质细胞种质细胞悬浮细胞悬浮细胞细胞培养细胞培养分离纯化分离纯化产物产物酶的制备动物细胞动物细胞培养过程：种质细胞悬浮细胞细胞培酶的制备动物细胞动物细胞培养条件动物细胞培养条件：（1 1）温度：一般控制在）温度：一般控制在36.536.5，允许温度波动范围在，允许温度波动范围在0.250.25之内。之内。（2 2）pHpH值：一般控制在值：一般控制在pH7.0-7.6pH7.0-7.6微碱性微碱性范围内，通常在范围内，通常在pH7.4pH7.4的条件下生长最好。的条件下生长最好。（3 3）渗透压：培养液中渗透压应当与细胞内的渗透压处于）渗透压：培养液中渗透压应当与细胞内的渗透压处于等渗状态等渗状态，一般控制在，一般控制在700-850kPa700-850kPa范围内。范围内。（4 4）溶解氧：）溶解氧：至关重要至关重要，供氧不足时，细胞生长受到抑制，供氧不足时，细胞生长受到抑制，供氧过量时，也会对细胞产生毒害。供氧过量时，也会对细胞产生毒害。酶的制备动物细胞动物细胞培养条件：第二部分第二部分 酶工程在食品酶工程在食品工业中的应用工业中的应用第二部分 酶工程在食品工业中的应用酶法降解纤维素及其应用1 1、纤维素酶的概念、纤维素酶的概念2 2、纤维素酶的分类、纤维素酶的分类3 3、影响纤维素酶作用的因素、影响纤维素酶作用的因素4 4、纤维素酶在食品加工中的应用、纤维素酶在食品加工中的应用5 5、纤维素酶在发酵工业中的应用、纤维素酶在发酵工业中的应用酶法降解纤维素及其应用1、纤维素酶的概念纤维素酶的概念 纤维素酶是指能纤维素酶是指能水解水解纤维素纤维素-1,4-1,4-葡聚糖葡聚糖-4-4-葡聚糖苷键，葡聚糖苷键，使纤维素变成纤维二糖和葡萄糖的一组酶的总称，它是一种使纤维素变成纤维二糖和葡萄糖的一组酶的总称，它是一种起起协同作用协同作用的的多组分酶系多组分酶系。纤维素酶的概念 纤维素酶是指能水解纤维素-1,纤维素酶的分类葡萄糖内切酶：葡萄糖内切酶：随机随机水解水解-1,4-1,4糖苷键，切断长链纤维素分糖苷键，切断长链纤维素分子，产生大量非还原性末端的小分子纤维素。子，产生大量非还原性末端的小分子纤维素。葡萄糖外切酶（纤维二糖水解酶）：作用于葡萄糖外切酶（纤维二糖水解酶）：作用于纤维素线状分纤维素线状分子末端子末端，水解，水解-1,4-1,4糖苷键，每次切下糖苷键，每次切下一个一个纤维二糖分子。纤维二糖分子。一葡萄糖苷酶（纤维二糖酶）：水解一葡萄糖苷酶（纤维二糖酶）：水解纤维二糖和短链的纤纤维二糖和短链的纤维寡糖维寡糖生成葡萄糖。生成葡萄糖。纤维素酶的分类葡萄糖内切酶：随机水解-1,4糖苷键，切断长影响纤维素酶作用的因素底物的结构和浓度底物的结构和浓度：底物是纤维素，木质结构的障碍和纤：底物是纤维素，木质结构的障碍和纤维素本身的结晶度和聚合度的阻碍，使酶解效率下降。维素本身的结晶度和聚合度的阻碍，使酶解效率下降。酶的组成及浓度酶的组成及浓度：选择相应的纤维素酶：选择相应的纤维素酶pHpH：最适：最适pHpH一般在一般在4.56.54.56.5。温度温度：最适温度一般在：最适温度一般在40604060 C C重金属离子重金属离子：如铜和汞离子能抑制纤维素酶，：如铜和汞离子能抑制纤维素酶，中性盐类中性盐类：使纤维素酶活化。：使纤维素酶活化。影响纤维素酶作用的因素底物的结构和浓度：底物是纤维素，木质结纤维素酶在食品加工中的应用1 1、饮料生产：、饮料生产：促进果汁的提取与澄清、促进果汁的提取与澄清、提高可溶性固形物含量、并可提高可溶性固形物含量、并可将皮渣综合利用。将皮渣综合利用。2 2、蔬菜生产、蔬菜生产 使细胞壁膨胀、软化，提高可消化性和改进口感。使细胞壁膨胀、软化，提高可消化性和改进口感。在制备脱水蔬菜，可改进脱水蔬菜的烧煮性和复原性。在制备脱水蔬菜，可改进脱水蔬菜的烧煮性和复原性。纤维素酶在食品加工中的应用1、饮料生产：纤维素酶在食品加工中的应用3 3、种子蛋白利用、种子蛋白利用 促进脱皮，增加大豆提取优质水溶性蛋白质的得率，促进脱皮，增加大豆提取优质水溶性蛋白质的得率，也可用于回收豆渣中的蛋白质和油渣。也可用于回收豆渣中的蛋白质和油渣。4 4、速溶茶、速溶茶 用纤维素低温提取，既可提高用纤维素低温提取，既可提高得率，又可保持茶叶的色、香、味。得率，又可保持茶叶的色、香、味。纤维素酶在食品加工中的应用3、种子蛋白利用纤维素酶在发酵工业中的应用1 1、酱油酿造、酱油酿造 改善酱油质量、缩短生产周期、提高产量。改善酱油质量、缩短生产周期、提高产量。2 2、酿酒工业、酿酒工业 提高酒精和白酒的出酒率。提高酒精和白酒的出酒率。3 3、纤维素渣的转化应用、纤维素渣的转化应用 提供新能源和变为废为宝。提供新能源和变为废为宝。纤维素酶在发酵工业中的应用1、酱油酿造酶法降解甲壳素及其应用1 1、甲壳素的概念、甲壳素的概念2 2、酶在壳聚糖制备的应用、酶在壳聚糖制备的应用酶法降解甲壳素及其应用1、甲壳素的概念甲壳素的概念甲壳素又称几丁质。甲壳素又称几丁质。甲壳素具有抗癌抑制癌、瘤细胞甲壳素具有抗癌抑制癌、瘤细胞 转移，提高人体免疫力及护肝解转移，提高人体免疫力及护肝解 毒作用。毒作用。甲壳素的脱乙酰基衍生物壳聚糖。这种壳聚糖由于它的大甲壳素的脱乙酰基衍生物壳聚糖。这种壳聚糖由于它的大分子结构中存在大量氨基，从而大大改善了甲壳素的溶解分子结构中存在大量氨基，从而大大改善了甲壳素的溶解性和化学活性，因此使它在医疗、营养和保健等方面具有性和化学活性，因此使它在医疗、营养和保健等方面具有广泛的应用价值。广泛的应用价值。甲壳素的概念甲壳素又称几丁质。酶在壳聚糖制备的应用（一）酶法脱蛋白（一）酶法脱蛋白 多用于多糖的提取。多用于多糖的提取。优点：化学试剂用量少，蛋白质易回收，可有效降低加工成优点：化学试剂用量少，蛋白质易回收，可有效降低加工成本。本。缺点：虾蟹壳很难与酶反应，脱蛋白效果不好；有些酶在降缺点：虾蟹壳很难与酶反应，脱蛋白效果不好；有些酶在降解蛋白质的同时也会引起甲壳素的降解，不适用于大分子壳解蛋白质的同时也会引起甲壳素的降解，不适用于大分子壳聚糖的制备。聚糖的制备。方法：方法：1 1、直接用酶水解脱蛋白、直接用酶水解脱蛋白 2 2、利用微生物发酵脱蛋白、利用微生物发酵脱蛋白酶在壳聚糖制备的应用（一）酶法脱蛋白酶在壳聚糖制备的应用（二）酶法脱乙酰（二）酶法脱乙酰 酶法制备壳聚糖最重要的应用是以专一性酶对甲壳素酶法制备壳聚糖最重要的应用是以专一性酶对甲壳素进行脱乙酰反应。进行脱乙酰反应。但是水不溶于甲壳素，酶法脱乙酰效果并不明显。但是水不溶于甲壳素，酶法脱乙酰效果并不明显。在加酶前对甲壳素进行处理，可提高酶催化的脱乙酰的速度在加酶前对甲壳素进行处理，可提高酶催化的脱乙酰的速度和产率。和产率。酶在壳聚糖制备的应用（二）酶法脱乙酰酶在壳聚糖制备的应用（三）酶法制备低聚壳聚糖（三）酶法制备低聚壳聚糖与壳聚糖相比，低聚壳聚糖功能特性更好：与壳聚糖相比，低聚壳聚糖功能特性更好：具有物理性能稳定、良好的溶解性、亲水吸湿性、抑菌防腐、具有物理性能稳定、良好的溶解性、亲水吸湿性、抑菌防腐、生物降解性等理化性能。生物降解性等理化性能。由于壳聚糖的纯天然活性及无毒副作用，对人体有良好的亲由于壳聚糖的纯天然活性及无毒副作用，对人体有良好的亲和性，能促进机体合成分泌大量免疫球蛋白抗体，调节提高和性，能促进机体合成分泌大量免疫球蛋白抗体，调节提高人体免疫力；人体免疫力；吸附体内毒素、有害色素和辐射素；吸附体内毒素、有害色素和辐射素；螯合体内有害的重金属离子，随代谢物排出体外；螯合体内有害的重金属离子，随代谢物排出体外；调节人体调节人体pHpH值，增强免疫活性细胞的质量和数量，活化正常值，增强免疫活性细胞的质量和数量，活化正常体细胞；体细胞；延缓衰老；抑制癌细胞转移等功效。延缓衰老；抑制癌细胞转移等功效。酶在壳聚糖制备的应用（三）酶法制备低聚壳聚糖酶在壳聚糖制备的应用低聚糖一般通过降解壳聚糖的方法制备：低聚糖一般通过降解壳聚糖的方法制备：1 1、化学法：分为酸解和氧化降解。、化学法：分为酸解和氧化降解。缺点：反应条件剧烈，不好控制；缺点：反应条件剧烈，不好控制；化学试剂较多，不容易分离提纯；化学试剂较多，不容易分离提纯；废物排放多，易造成环境污染。废物排放多，易造成环境污染。酶在壳聚糖制备的应用低聚糖一般通过降解壳聚糖的方法制备：酶在壳聚糖制备的应用2 2、酶法：分为非专一性酶水解法和专一性酶水解法。、酶法：分为非专一性酶水解法和专一性酶水解法。非专一性酶水解非专一性酶水解目前已发现多种非专一性酶可以水解壳聚糖，但很难目前已发现多种非专一性酶可以水解壳聚糖，但很难得到高度水解的产物，需要专一性水解酶。得到高度水解的产物，需要专一性水解酶。专一性水解酶专一性水解酶包括溶菌酶、甲壳素酶、壳聚糖酶等。包括溶菌酶、甲壳素酶、壳聚糖酶等。酶在壳聚糖制备的应用2、酶法：分为非专一性酶水解法和专一性酶第三部分第三部分 纤维素酶在食纤维素酶在食品中应用实例品中应用实例第三部分 纤维素酶在食品中应用实例一、纤维素酶在茶叶提取加工中的应用一、纤维素酶在茶叶提取加工中的应用一、纤维素酶在茶叶提取加工中的应用茶叶的主要成分有茶多酚、碳水化合物、蛋白质、氨基酸、茶叶的主要成分有茶多酚、碳水化合物、蛋白质、氨基酸、咖啡碱、茶多糖和芳香性物质等。咖啡碱、茶多糖和芳香性物质等。一、纤维素酶在茶叶提取加工中的应用茶叶的主要成分有茶多酚、碳一、纤维素酶在茶叶提取加工中的应用 酶法提取的原理是利用纤维素酶、果胶酶、半纤维素酶酶法提取的原理是利用纤维素酶、果胶酶、半纤维素酶等水解酶分解茶叶细胞壁等水解酶分解茶叶细胞壁,使细胞结构破坏使细胞结构破坏,从而促进茶叶中从而促进茶叶中有效成分的扩散和浸出有效成分的扩散和浸出,有利于固形物的溶出和浸提率的提高。有利于固形物的溶出和浸提率的提高。同时酶法提取一般在较低温度下进行同时酶法提取一般在较低温度下进行,对茶汤香气也有积极的对茶汤香气也有积极的作用。作用。酶解过程还具有一般酶促反应的优点酶解过程还具有一般酶促反应的优点,例如反应条件温例如反应条件温和和,对环境无污染和催化效率高等。对环境无污染和催化效率高等。一、纤维素酶在茶叶提取加工中的应用 酶法提取的一、纤维素酶在茶叶提取加工中的应用 在速溶茶加工的萃取过程中添加纤维素酶在速溶茶加工的萃取过程中添加纤维素酶,在酶解参数在酶解参数为酶添加量为酶添加量2.4 U/g,2.4 U/g,底物浓度底物浓度6.5%,6.5%,酶解温度酶解温度50 C,50 C,酶解时间酶解时间8 8 h,h,酶解酶解pHpH值值5.05.0。纤维素酶可以有效提高茶汤的可溶性固形物。纤维素酶可以有效提高茶汤的可溶性固形物含量含量,茶多盼含量和速溶茶的提取率茶多盼含量和速溶茶的提取率,经酶处理的茶饮料在短期经酶处理的茶饮料在短期内可以提高其稳定性。纤维素酶酶法提取茶叶时内可以提高其稳定性。纤维素酶酶法提取茶叶时,由于细胞壁由于细胞壁多糖的水解茶叶水浸出物率和还原糖含量显著增加。多糖的水解茶叶水浸出物率和还原糖含量显著增加。一、纤维素酶在茶叶提取加工中的应用 在速溶茶二、纤维素酶在沼气发酵中的应用二、纤维素酶在沼气发酵中的应用二、纤维素酶在沼气发酵中的应用 沼气是一种是由微生物将有机物质在厌氧条件下分解代沼气是一种是由微生物将有机物质在厌氧条件下分解代谢而产生的高热值可再生的洁净生物质能源。作物秸秆发酵谢而产生的高热值可再生的洁净生物质能源。作物秸秆发酵生产沼气是利用秸秆中储存的丰富生物质能的简便途径，沼生产沼气是利用秸秆中储存的丰富生物质能的简便途径，沼气的生产不仅使生物质资源得到深度开发和循环利用，对解气的生产不仅使生物质资源得到深度开发和循环利用，对解决当今所面临的能源危机和环境污染问题具有重大的现实意决当今所面临的能源危机和环境污染问题具有重大的现实意义。义。二、纤维素酶在沼气发酵中的应用 沼气是一种是由二、纤维素酶在沼气发酵中的应用 秸秆的主要成分为纤维素、半纤维素及木质素，利用化秸秆的主要成分为纤维素、半纤维素及木质素，利用化学或生物技术转化成可溶性糖，然后利用微生物发酵技术将学或生物技术转化成可溶性糖，然后利用微生物发酵技术将可溶性糖转化为有机酸、醇、醋以及甲烷、二氧化碳、氢气可溶性糖转化为有机酸、醇、醋以及甲烷、二氧化碳、氢气等化工原料和能源。等化工原料和能源。二、纤维素酶在沼气发酵中的应用 秸秆的主要成分二、纤维素酶在沼气发酵中的应用 秸秆经过纤维素酶预处理后，破坏了包覆在纤维素分子秸秆经过纤维素酶预处理后，破坏了包覆在纤维素分子表面的半纤维素和木质素分子，使纤维素表面的半纤维素和木质素分子，使纤维素 半纤维素与木质素半纤维素与木质素分离，并且发生部分分解，改善了秸秆的厌氧消化性质，为分离，并且发生部分分解，改善了秸秆的厌氧消化性质，为厌氧菌提供了易消化的营养物质，这是秸秆产气量提高的主厌氧菌提供了易消化的营养物质，这是秸秆产气量提高的主要原因。要原因。二、纤维素酶在沼气发酵中的应用 秸秆经过纤维素第四部分第四部分 酶法降解甲壳酶法降解甲壳素的实例素的实例第四部分 酶法降解甲壳素的实例一、利用甲壳素脱乙酰酶制备壳聚糖甲壳素脱乙酰酶（甲壳素脱乙酰酶（CDACDA）：）：甲壳素脱乙酰酶甲壳素脱乙酰酶是一种催化甲壳素中是一种催化甲壳素中N N-乙酰基乙酰基-D D-葡糖胺的葡糖胺的乙酰氨基水解的酶。乙酰氨基水解的酶。广泛存在于自然界，尤其是一些真菌中。广泛存在于自然界，尤其是一些真菌中。一、利用甲壳素脱乙酰酶制备壳聚糖甲壳素脱乙酰酶（CDA）：1 1、酶的制备：、酶的制备：菌种：蓝色犁头霉和构巢曲霉菌种：蓝色犁头霉和构巢曲霉最适条件：最适条件：温度：温度：培养的最适温度是培养的最适温度是2525 2828,而最适的发酵温度是而最适的发酵温度是31313333。时间：最适的发酵时间为时间：最适的发酵时间为9696小时。小时。培养培养筛选筛选配制培养基配制培养基接种接种发酵发酵分离纯化酶分离纯化酶1、酶的制备：一、利用甲壳素脱乙酰酶制备壳聚糖培养筛选配制培一、利用甲壳素脱乙酰酶制备壳聚糖 pHpH值：培养基初始值：培养基初始pHpH值为值为6.56.5。碳源：选择可溶性壳聚糖，可提高菌种产甲壳素脱乙酞酶的碳源：选择可溶性壳聚糖，可提高菌种产甲壳素脱乙酞酶的活力。活力。氮源：蛋白胨和酵母粉。氮源：蛋白胨和酵母粉。金属离子：金属离子：MgMg2+2+作为酶活性中心的组成部分作为酶活性中心的组成部分,可以维持生物可以维持生物大分子和细胞结构的稳定性大分子和细胞结构的稳定性,调节并维持细胞的渗透压平衡、调节并维持细胞的渗透压平衡、氢离子浓度和氧化还原电位。氢离子浓度和氧化还原电位。CoCo2+2+对菌种的产酶能力有明显对菌种的产酶能力有明显的促进作用。的促进作用。一、利用甲壳素脱乙酰酶制备壳聚糖一、利用甲壳素脱乙酰酶制备壳聚糖2.2.甲壳素脱乙酰酶对甲壳素的脱乙酰化甲壳素脱乙酰酶对甲壳素的脱乙酰化 影响因素：影响因素：温度、温度、pHpH值、底物浓度、值、底物浓度、MgMg2+2+浓度、酶液量、反应时间。浓度、酶液量、反应时间。最适条件：最适条件：温度温度5050；pHpH值值4.55.04.55.0；酶液量；酶液量0.40%0.40%；底物浓度；底物浓度0.75%0.75%；反应时间；反应时间90 min90 min。一、利用甲壳素脱乙酰酶制备壳聚糖2.甲壳素脱乙酰酶对甲壳素的一、利用甲壳素脱乙酰酶制备壳聚糖 酶法制备壳聚糖是一种生物的制备方法酶法制备壳聚糖是一种生物的制备方法,此种方法不仅可此种方法不仅可以解决严重的以解决严重的环境污染问题环境污染问题,而且能而且能降低能耗降低能耗,弥补浓碱热处理弥补浓碱热处理所得产品的一些不足。随着生物技术的发展所得产品的一些不足。随着生物技术的发展,脱乙酰酶生产成脱乙酰酶生产成本的降低本的降低,未来这种不消耗氢氧化钠未来这种不消耗氢氧化钠,能在常温下脱除乙酰基的能在常温下脱除乙酰基的清洁的清洁的生物制备壳聚糖方法生物制备壳聚糖方法,将有很大的前景。将有很大的前景。一、利用甲壳素脱乙酰酶制备壳聚糖 酶法制备壳聚二、酶法制备低聚壳聚糖专一性酶（如壳聚糖酶）专一性酶（如壳聚糖酶）水解率高，是壳聚糖水解的最适合酶。但得率低，价格高，水解率高，是壳聚糖水解的最适合酶。但得率低，价格高，难以获得大量而廉价的壳聚糖专一性酶，不适宜大规模生难以获得大量而廉价的壳聚糖专一性酶，不适宜大规模生产和应用。产和应用。非专一性酶非专一性酶 种类多，来源广，廉价易得。有的酶对壳聚糖的降解活性种类多，来源广，廉价易得。有的酶对壳聚糖的降解活性与壳聚糖酶相似，甚至超过了壳聚糖酶。与壳聚糖酶相似，甚至超过了壳聚糖酶。二、酶法制备低聚壳聚糖专一性酶（如壳聚糖酶）二、酶法制备低聚壳聚糖纤维素酶降解壳聚糖纤维素酶降解壳聚糖 壳聚糖和纤维素分别是壳聚糖酶和纤维素酶的底物，它们壳聚糖和纤维素分别是壳聚糖酶和纤维素酶的底物，它们在结构上十分相似，都是在结构上十分相似，都是D-D-葡糖单元由葡糖单元由-1,4-1,4糖苷键连接，糖苷键连接，区别在于它们糖环上区别在于它们糖环上2 2位的基团分别为氨基位的基团分别为氨基(乙酰氨基乙酰氨基)和羟和羟基。基。纤维素和壳聚糖的结构式二、酶法制备低聚壳聚糖纤维素酶降解壳聚糖纤维素和壳聚糖的结构二、酶法制备低聚壳聚糖影响因素：影响因素：温度：最适温度：最适50605060 pHpH值：最适值：最适pHpH值为值为5.05.55.05.5 金属离子：金属离子：CuCu2+2+、HgHg2+2+等是酶的抑制剂等是酶的抑制剂 壳聚糖的脱乙酰度：对脱乙酰度为壳聚糖的脱乙酰度：对脱乙酰度为80%90%80%90%的壳聚糖的降的壳聚糖的降解活性较好解活性较好 酶浓度及底物浓度酶浓度及底物浓度二、酶法制备低聚壳聚糖影响因素：二、酶法制备低聚壳聚糖 纤维素酶和壳聚糖酶降解壳聚糖的纤维素酶和壳聚糖酶降解壳聚糖的条件相似条件相似，且它们，且它们一般都以一般都以内切方式内切方式断裂断裂-1,4-1,4糖苷键，以降低壳聚糖聚合度。糖苷键，以降低壳聚糖聚合度。纤维素酶纤维素酶易于制得，成本低廉易于制得，成本低廉，酶解反应容易操作，适合工，酶解反应容易操作，适合工业化生产。业化生产。二、酶法制备低聚壳聚糖 纤维素酶和壳聚糖酶降ThanksThanks！Thanks！