食用菌菌种标准使用指南课件

食用菌菌种标准食用菌菌种标准使用指南使用指南 食用菌菌种标准使用指南 1金科玉律种子法种子法食用菌菌种管理办法食用菌菌种管理办法黑木耳菌种黑木耳菌种 GB 19169-2003香菇菌种香菇菌种 GB 19170-2003双孢蘑菇菌种双孢蘑菇菌种 GB 19171-2003平菇菌种平菇菌种 GB 19172-2003杏鲍菇和白灵菇菌种杏鲍菇和白灵菇菌种 NY 862-2004金科玉律种子法2一、术语和定义一、术语和定义我国食用菌菌种繁育体系我国食用菌菌种繁育体系菌种菌种culture 生长在适宜基质上生长在适宜基质上具结实性的菌丝培具结实性的菌丝培养物，包括母种、养物，包括母种、原种和栽培种。原种和栽培种。一、术语和定义我国食用菌菌种繁育体系菌种culture 3一、术语和定义一、术语和定义母种母种stock culture经各种方法选育得到经各种方法选育得到的具有结实性的菌丝的具有结实性的菌丝体纯培养物及其继代体纯培养物及其继代培养物，也称一级种、培养物，也称一级种、试管种。试管种。一、术语和定义母种stock culture4一、术语和定义一、术语和定义原种原种mother spawn由母种移植、扩大培由母种移植、扩大培养而成的菌丝体纯培养而成的菌丝体纯培养物。也称二级种。养物。也称二级种。一、术语和定义原种5一、术语和定义一、术语和定义栽培种栽培种spawn由原种移植、扩由原种移植、扩大培养而成的菌大培养而成的菌丝体纯培养物。丝体纯培养物。栽培种只能用于栽培种只能用于栽培，栽培，不可再次不可再次扩大繁殖菌种。扩大繁殖菌种。也称三级种。也称三级种。一、术语和定义栽培种spawn6一、术语和定义一、术语和定义拮抗现象拮抗现象antagonism具有不同遗传基因的菌落间互相抑制产生不生长区具有不同遗传基因的菌落间互相抑制产生不生长区带或形成不同形式线形边缘的现象。带或形成不同形式线形边缘的现象。一、术语和定义拮抗现象antagonism7一、术语和定义一、术语和定义角变角变sectoring 因菌丝体局部变异或因菌丝体局部变异或感染病毒而导致菌丝感染病毒而导致菌丝变细、生长缓慢、菌变细、生长缓慢、菌丝体表面特征成角状丝体表面特征成角状异常的现象。异常的现象。一、术语和定义角变sectoring 8一、术语和定义一、术语和定义高温抑制线高温抑制线（高温圈）（高温圈）high-temperatured line食用菌菌种在培养过程中受高温和通气不足的不食用菌菌种在培养过程中受高温和通气不足的不良影响，培养物出现的圈状发黄、发暗或菌丝变良影响，培养物出现的圈状发黄、发暗或菌丝变稀弱的现象。稀弱的现象。一、术语和定义高温抑制线（高温圈）9一、术语和定义一、术语和定义生物学效率生物学效率biological efficiency单位数量培养料的风干物质所培养产生出的子单位数量培养料的风干物质所培养产生出的子实体或菌丝体质量（鲜重），常用百分数表示。实体或菌丝体质量（鲜重），常用百分数表示。如风干料如风干料100100千克产生了新鲜子实体千克产生了新鲜子实体5050千克，即千克，即为生物学效率为生物学效率5050。种性种性characters of variety指食用菌的品种特性。一般包括生理特性、农指食用菌的品种特性。一般包括生理特性、农艺性状和商品性状。艺性状和商品性状。一、术语和定义生物学效率biological effici10二、检测内容二、检测内容 容器容器感官检验感官检验微生物学检验微生物学检验菌丝生长速度菌丝生长速度母种母种农艺性状和商品性状农艺性状和商品性状二、检测内容 容器11二、检测内容二、检测内容 母种质量要求母种质量要求容器：容器：使用玻璃试管和棉塞使用玻璃试管和棉塞试管试管18mm180mm或或20mm200mm棉塞要使用梳棉，不应使用脱脂棉。棉塞要使用梳棉，不应使用脱脂棉。二、检测内容 母种质量要求12二、检测内容二、检测内容 母种质量要求母种质量要求感官要求：感官要求：二、检测内容 母种质量要求13二、检测内容二、检测内容 二、检测内容 14二、检测内容二、检测内容 母种质量要求：母种质量要求：菌丝生长速度：菌丝生长速度：在在PDA上，在适温下，长满斜面上，在适温下，长满斜面10d14d。香菇：香菇：241 10d14d平菇：平菇：252 6d8d黑木耳：黑木耳：262 10d15d双孢蘑菇：双孢蘑菇：241 15d20d母种栽培性状：母种栽培性状：供种单位，需经试验确证农艺性状和商品性等种性合格供种单位，需经试验确证农艺性状和商品性等种性合格后，方可用于扩大繁殖或出售。后，方可用于扩大繁殖或出售。产量性状：平菇产量性状：平菇 生物学效率不低于生物学效率不低于10双孢蘑菇需进行双孢蘑菇需进行EST同工酶类型鉴定，判定与对照相同同工酶类型鉴定，判定与对照相同生物学效率不低于生物学效率不低于3.二、检测内容 母种质量要求：15二、检测内容二、检测内容 原种质量要求原种质量要求容器：容器：使用使用650ml-750ml，耐，耐126高温的无色或近无色的高温的无色或近无色的玻璃菌种瓶，玻璃菌种瓶，或或850ml耐耐126高温白色半透明符合高温白色半透明符合GB9678卫生规卫生规定的塑料菌种瓶；定的塑料菌种瓶；或或15cm28cm耐耐126高温符合高温符合GB9688卫生规定的卫生规定的聚丙烯塑料袋；聚丙烯塑料袋；棉塞要使用梳棉，不应使用脱脂棉。棉塞要使用梳棉，不应使用脱脂棉。也可以使用能满足滤菌和透气要求的无棉塑料盖代替棉塞也可以使用能满足滤菌和透气要求的无棉塑料盖代替棉塞二、检测内容 原种质量要求16二、检测内容二、检测内容 原种质量要求原种质量要求感官要求：感官要求：二、检测内容 原种质量要求17原基原基primordium尚未分化的原始子实体的组织团尚未分化的原始子实体的组织团。原基primordium尚未分化的原始子实体的组织团。18原种质量要求原种质量要求 和母种质量要求相同和母种质量要求相同微生物学要求：微生物学要求：原种质量要求 和母种质量要求相同19二、检测内容二、检测内容 原种质量要求：原种质量要求：菌丝生长速度：菌丝生长速度：在适宜培养基上，在适温（在适宜培养基上，在适温（232）下，长满容器）下，长满容器35d-50d。香菇（香菇（232）35d-50d。平菇（平菇（252）25d-30d。黑木耳（黑木耳（262）40d-45d。双孢蘑菇（双孢蘑菇（241）45d。栽培性状（无），与母种不同栽培性状（无），与母种不同二、检测内容 原种质量要求：20二、检测内容二、检测内容 栽培种质量要求：栽培种质量要求：容器：容器：可以使用原种规定使可以使用原种规定使用的容器用的容器；或或17cm35cm耐耐126高温符合高温符合 GB 9688 卫生规定的聚丙卫生规定的聚丙烯塑料袋；烯塑料袋；二、检测内容 栽培种质量要求：21二、检测内容二、检测内容 栽培种质量要求栽培种质量要求感官要求：感官要求：二、检测内容 栽培种质量要求22二、检测内容二、检测内容 栽培种质量要求栽培种质量要求 和母种、原种质量要求相同和母种、原种质量要求相同微生物学要求：微生物学要求：二、检测内容 栽培种质量要求 和母种、原种质量要求相同23二、检测内容二、检测内容 栽培种质量要求：栽培种质量要求：菌丝生长速度：菌丝生长速度：在适宜培养基上，在适温（在适宜培养基上，在适温（232）下，长满容器）下，长满容器40d-50d。栽培性状（无），栽培性状（无），与母种不同，和原种相同与母种不同，和原种相同二、检测内容 栽培种质量要求：24三、抽样三、抽样 质检部门的抽样应具有代表性；质检部门的抽样应具有代表性；母种按品种、培养条件、接种时间分批编号；母种按品种、培养条件、接种时间分批编号；原种、栽培种按菌种来源、制种方法和接种时原种、栽培种按菌种来源、制种方法和接种时间分批编号。间分批编号。按批随机抽取被检样品按批随机抽取被检样品母种、原种、栽培种抽样量母种、原种、栽培种抽样量10、5、1抽样数量不得少于抽样数量不得少于10支支(瓶、袋瓶、袋)超过超过100支支(瓶、袋瓶、袋)的，可进行两级抽样的，可进行两级抽样.三、抽样 质检部门的抽样应具有代表性；25四、试验方法四、试验方法感官检验感官检验微生物学检验微生物学检验菌丝生长速度菌丝生长速度母种农艺性状和商品性状母种农艺性状和商品性状留样留样四、试验方法感官检验26四、试验方法四、试验方法感官检验感官检验肉眼观察肉眼观察必要时使用必要时使用5放大镜放大镜鼻嗅鼻嗅四、试验方法感官检验27母种感官检验方法（一）母种感官检验方法（一）n n1.1.棉塞或无棉塑料盖检测方法棉塞或无棉塑料盖检测方法棉塞或无棉塑料盖检测方法棉塞或无棉塑料盖检测方法肉眼观察棉塞的材料、洁净度和干燥与否，手捏棉塞是否肉眼观察棉塞的材料、洁净度和干燥与否，手捏棉塞是否松紧适度，是否有弹性松紧适度，是否有弹性,手提棉塞外露部分，棉塞应不松动手提棉塞外露部分，棉塞应不松动、不脱落。、不脱落。n n2.2.培养基灌入量培养基灌入量培养基灌入量培养基灌入量按常规做培养基斜面的方法目测判断培养基灌入量，应为按常规做培养基斜面的方法目测判断培养基灌入量，应为试管总容积的四分之一至五分之一。试管总容积的四分之一至五分之一。n n3.3.斜面长度斜面长度斜面长度斜面长度用游标卡尺测量斜面的最上端量起至棉塞的最底部的距离用游标卡尺测量斜面的最上端量起至棉塞的最底部的距离（mmmm）。）。母种感官检验方法（一）1.棉塞或无棉塑料盖检测方法28母种感官检验（二）母种感官检验（二）n n4.4.接种块大小（接种量）接种块大小（接种量）接种块大小（接种量）接种块大小（接种量）在无菌条件下挑出接种块在无菌条件下挑出接种块,用游标卡尺测量接种菌丝面的用游标卡尺测量接种菌丝面的长和宽，用长和宽，用mmmmmmmm表示，保留整数位表示，保留整数位。n n5.5.菌种外观检测菌种外观检测菌种外观检测菌种外观检测5.1 5.1 菌丝生长量菌丝生长量菌丝生长量菌丝生长量 观察菌丝是否长满整个斜面。观察菌丝是否长满整个斜面。5.25.2菌丝体特征菌丝体特征菌丝体特征菌丝体特征 肉眼观察菌丝体的颜色、密集程度，菌丝体是否舒展、肉眼观察菌丝体的颜色、密集程度，菌丝体是否舒展、旺健及其形态（棉毛状、细羊毛状等）。旺健及其形态（棉毛状、细羊毛状等）。母种感官检验（二）4.接种块大小（接种量）29母种感官检验（三）母种感官检验（三）n n5.35.35.35.3菌丝体表面菌丝体表面菌丝体表面菌丝体表面肉眼观察菌丝体是否生长均匀、平整，有无角变现象。肉眼观察菌丝体是否生长均匀、平整，有无角变现象。n n5.45.45.45.4菌丝分泌物菌丝分泌物菌丝分泌物菌丝分泌物肉眼观察有无分泌物，如有则记录分泌物的颜色和数肉眼观察有无分泌物，如有则记录分泌物的颜色和数量。量。n n5.55.55.55.5菌落边缘菌落边缘菌落边缘菌落边缘肉眼观察菌落边缘是否整齐。肉眼观察菌落边缘是否整齐。n n5.65.65.65.6杂菌菌落杂菌菌落杂菌菌落杂菌菌落用放大镜观察菌丝体颜色和外观形态，根据颜色和形用放大镜观察菌丝体颜色和外观形态，根据颜色和形态是否有差异判定是否有杂菌菌落。态是否有差异判定是否有杂菌菌落。母种感官检验（三）5.3菌丝体表面30母种感官检验（四）母种感官检验（四）n n5.75.75.75.7虫（螨）体虫（螨）体虫（螨）体虫（螨）体用放大镜观察培养物上有无虫（螨）体。用放大镜观察培养物上有无虫（螨）体。n n6.6.斜面背面外观斜面背面外观根据培养基是否与试管相脱离判断是否干缩；根据培养基是否与试管相脱离判断是否干缩；在充足的光线下，对着光源方向，观察颜色是否在充足的光线下，对着光源方向，观察颜色是否均匀，有无色素和暗斑。均匀，有无色素和暗斑。n n7.7.气味气味在无菌条件下打开棉塞（或无棉塑料盖），在无菌条件下打开棉塞（或无棉塑料盖），闻试管内气味是否正常。闻试管内气味是否正常。母种感官检验（四）5.7虫（螨）体31菌种退化在母种阶段的表现菌种退化在母种阶段的表现n n1.1.菌落形态不正常，如本来菌落平展的品种表现为菌落紧菌落形态不正常，如本来菌落平展的品种表现为菌落紧皱；丝状的气生菌丝变为雪花状；气生菌丝变多或变少甚皱；丝状的气生菌丝变为雪花状；气生菌丝变多或变少甚至没有了；菌丝色泽变化，如多数种和品种在母种斜面上至没有了；菌丝色泽变化，如多数种和品种在母种斜面上菌丝呈白色，退化了品种常呈现微黄色、浅褐色或其他色菌丝呈白色，退化了品种常呈现微黄色、浅褐色或其他色泽，或由鲜亮变暗淡；泽，或由鲜亮变暗淡；n n2.2.菌丝倒伏，生长势弱；菌丝倒伏，生长势弱；n n3.3.长速变慢长速变慢,过快或过慢都是不正常的；过快或过慢都是不正常的；n n4.4.个体间长速和长相不均一；个体间长速和长相不均一；n n5.5.色素的出现。多数食用菌菌种在母种阶段不形成色素色素的出现。多数食用菌菌种在母种阶段不形成色素,如果出现色素如果出现色素,说明品种退化严重。说明品种退化严重。菌种退化在母种阶段的表现1.菌落形态不正常，如本来菌落平展的32四、试验方法四、试验方法微生物学检验微生物学检验菌丝生长状态和锁状联合菌丝生长状态和锁状联合用用1040的光学显微镜对培养的光学显微镜对培养物的物的水封片水封片进行观察，每一检样应观察不少于进行观察，每一检样应观察不少于50个视野个视野。细菌检验：取少量细菌检验：取少量疑有细菌污染疑有细菌污染的培养物，按无菌操作的培养物，按无菌操作接种于接种于(营养肉汤培养液营养肉汤培养液)GB/T 4789.28，25-28振荡振荡培养培养1d-2d，观察培养液，观察培养液是否混浊是否混浊。若混浊，则有细菌。若混浊，则有细菌污染。污染。霉菌检验：取少量霉菌检验：取少量疑有霉菌污染疑有霉菌污染的培养物，按无菌操作的培养物，按无菌操作接种于接种于(PDA)GB/T 4789.28，25-28培养培养5d-7d，菌落，菌落出现白色以外的杂色者，或有异味者为霉菌污染。必要出现白色以外的杂色者，或有异味者为霉菌污染。必要时进行时进行水封片水封片进行观察。进行观察。四、试验方法微生物学检验33菌丝生长状态菌丝生长状态n n取干净载波片，滴取干净载波片，滴1 1滴无菌水，用无菌操作方法挑滴无菌水，用无菌操作方法挑取少量菌丝涂于水滴中，盖上盖玻片，置于取少量菌丝涂于水滴中，盖上盖玻片，置于10401040显微镜下观察菌丝形态，是否粗壮、丰满、显微镜下观察菌丝形态，是否粗壮、丰满、均匀，是否有均匀，是否有锁状联合锁状联合锁状联合锁状联合。n n每一检样应检查不少于每一检样应检查不少于5050个视野。个视野。菌丝生长状态取干净载波片，滴1滴无菌水，用无菌操作方法挑取少34锁状联合锁状联合锁状联合35杂菌杂菌 细菌检验细菌检验n n根据不同菌种选择适用的方法根据不同菌种选择适用的方法n n1.11.1在无菌条件下，挑取少许疑有细菌污染的培养物接种在无菌条件下，挑取少许疑有细菌污染的培养物接种至肉汤培养液中，于至肉汤培养液中，于25282528振荡培养振荡培养1212天，观察培养液天，观察培养液是否浑浊，若浑浊则有细菌污染，澄清透明为未污染细菌。是否浑浊，若浑浊则有细菌污染，澄清透明为未污染细菌。n n1.21.2在无菌条件下，挑取可疑或有代表性的样品，接种于在无菌条件下，挑取可疑或有代表性的样品，接种于肉汤培养基斜面或平板肉汤培养基斜面或平板，于，于25282528振荡培养振荡培养1212天，观察天，观察培养基斜面是否有细菌菌落长出，有细菌菌落长出者做显培养基斜面是否有细菌菌落长出，有细菌菌落长出者做显微镜检查，确认是细菌，则判定为细菌污染；否则为无细微镜检查，确认是细菌，则判定为细菌污染；否则为无细菌污染。菌污染。杂菌细菌检验根据不同菌种选择适用的方法36杂菌杂菌 霉菌检验霉菌检验n n挑取少许可疑的霉菌污染的培养物或有代表性的挑取少许可疑的霉菌污染的培养物或有代表性的样品接至样品接至PDAPDA培养基中，于培养基中，于25282528培养培养4 4天，出现天，出现其他色泽的菌落或其他形态的菌落或有异味的为其他色泽的菌落或其他形态的菌落或有异味的为霉菌污染物，必要时进行水封片镜检。霉菌污染物，必要时进行水封片镜检。杂菌霉菌检验挑取少许可疑的霉菌污染的培养物或有代表性的样品37食用菌菌种标准使用指南课件38四、试验方法四、试验方法菌丝生长速度菌丝生长速度母种：母种：PDA 24 1原种和栽培种：规定的培养基原种和栽培种：规定的培养基（24 1）计算长满天数。计算长满天数。四、试验方法菌丝生长速度39母种生长速度检测方法母种生长速度检测方法n n菌种不同菌种不同,对母种生长速度的测定方法和要求亦不同：对母种生长速度的测定方法和要求亦不同：n n选择选择A.1A.1或或A.2A.2培养基配方，配制后按菌种生产标准要求分培养基配方，配制后按菌种生产标准要求分装于试管（装于试管（18180 mm18180 mm或或20200 mm20200 mm）中，）中，121121灭菌灭菌30min30min，n n取出摆成斜面或制备培养基平板（取出摆成斜面或制备培养基平板（9090mmmm），冷却，随机），冷却，随机抽取抽取10201020支斜面或支斜面或3 3个培养基平板置于个培养基平板置于282822培养培养2424小时，确认灭菌良好后使用。小时，确认灭菌良好后使用。n n将待检菌种接种于将待检菌种接种于PDAPDA培养基或培养基或CPDACPDA培养基上，接种块培养基上，接种块（3535）（3535）mm mm，置于斜面中央偏下或培养皿中央，置于斜面中央偏下或培养皿中央，恒温培养箱适宜条件下培养，计算长满斜面的天数。三个恒温培养箱适宜条件下培养，计算长满斜面的天数。三个重复。重复。母种生长速度检测方法菌种不同,对母种生长速度的测定方法和要求40四、试验方法四、试验方法母种农艺性状和商品性状母种农艺性状和商品性状将被检母种制成原种。将被检母种制成原种。规定的培养基；规定的培养基；菌棒菌棒45根根接种后，分三组进行管理接种后，分三组进行管理做好栽培记录做好栽培记录与该母种的出发菌株设为对照与该母种的出发菌株设为对照黑木耳黑木耳 含水量含水量622双孢蘑菇双孢蘑菇 含水量含水量68360kg，分，分3组，每组组，每组2m2双孢蘑菇双孢蘑菇 酯酶同工酶酯酶同工酶四、试验方法母种农艺性状和商品性状41四、试验方法四、试验方法母种农艺性状和商品性状母种农艺性状和商品性状判定：判定：以时间计的项目，不得推迟以时间计的项目，不得推迟5d（含（含5d）产量显著低于对照的；产量显著低于对照的；子实体形态明显与对照不同或畸形的子实体形态明显与对照不同或畸形的四、试验方法母种农艺性状和商品性状42四、试验方法四、试验方法留样留样各级菌种均要留样备查各级菌种均要留样备查留样数量：留样数量：3-5支（瓶），于支（瓶），于46时间：时间：香菇：母种、原种香菇：母种、原种 7个月；栽培种个月；栽培种5个月个月平菇：母种平菇：母种5个月、原种个月、原种 4个月；栽培种个月；栽培种2个月个月黑木耳：母种、原种黑木耳：母种、原种 6个月；栽培种个月；栽培种4个月个月双孢蘑菇：母种双孢蘑菇：母种5个月、原种个月、原种 4个月；栽培种个月；栽培种2个月个月四、试验方法留样43五、检验规则五、检验规则判定规则按照质量要求进行。判定规则按照质量要求进行。全部合格的，为合格菌种；全部合格的，为合格菌种；任何一项不合格，则为不合格。任何一项不合格，则为不合格。五、检验规则判定规则按照质量要求进行。44六、标签、包装、运输、贮存六、标签、包装、运输、贮存标签标签产品标签产品标签5 5要素：产品名称；品种名称；生产单位；接种日期；要素：产品名称；品种名称；生产单位；接种日期；执行标准执行标准包装标签包装标签7 7要素：产品名称；品种名称；厂名、厂址、联系电话；要素：产品名称；品种名称；厂名、厂址、联系电话；出厂日期；保质期、贮存条件；数量；执行标准出厂日期；保质期、贮存条件；数量；执行标准包装储运图示标志包装储运图示标志5 5要点（要点（GB/T 191GB/T 191）:小心轻放标志；防水、防潮、防小心轻放标志；防水、防潮、防冻标志；防晒、防高温标志；防止倒置标志；防止重冻标志；防晒、防高温标志；防止倒置标志；防止重压标志。压标志。六、标签、包装、运输、贮存标签45六、标签、包装、运输、贮存六、标签、包装、运输、贮存包装包装母种：木盒或纸箱；缓冲的轻质材料填满母种：木盒或纸箱；缓冲的轻质材料填满原种、栽培种：纸箱；缓冲的轻质材料填满；原种、栽培种：纸箱；缓冲的轻质材料填满；8cm8cm胶带封口；产品胶带封口；产品合格证和使用说明书（种性、培养基配方及使用范围）合格证和使用说明书（种性、培养基配方及使用范围）运输运输不得与有毒品混装不得与有毒品混装气温高于气温高于3030，须用，须用0-200-20冷藏车运输冷藏车运输防震、防晒、防尘、防雨淋、防冻、防杂菌污染的措施防震、防晒、防尘、防雨淋、防冻、防杂菌污染的措施贮存贮存母种母种 4-6 3 4-6 3个月个月原种原种 0-10 40d 0-10 40d栽培种，必须尽快使用，栽培种，必须尽快使用，14d14d内在温度不超过内在温度不超过2525、洁净、通风、洁净、通风、干燥、避光的室内存放。在干燥、避光的室内存放。在1-6 1-6 贮存时贮存时 45d 45d六、标签、包装、运输、贮存包装46参考：农业部微生物肥料和食用菌菌种参考：农业部微生物肥料和食用菌菌种质量监督检验测试中心质量监督检验测试中心 黄晨阳黄晨阳特此感谢！特此感谢！参考：农业部微生物肥料和食用菌菌种质量监督检验测试中心 47Thanks for your attention!Agaricus bisporus Thanks for your attention!Aga48