药物的杂质检查课件

药物的杂质检查第一节 药物的杂质与限量一、药物的杂质与纯度药物的纯度药物杂质对药品质量的影响对药物纯度与杂质的认识是逐步发展的药物的杂质检查也会反映出药物质量的其他方面药物的纯度与试剂的纯度不同第一节 药物的杂质与限量二、药物杂质的来源（一）生产过程中引入的杂质原料或辅料及试剂不纯或反应不完成、反应的中间体与反应副产物在精制时未能完全除去。药物制剂过程中产生的新的杂质。所用的试剂、溶剂等残留在产品中。异构体与多晶型。其他途径引入的杂质。第一节 药物的杂质与限量二、药物杂质的来源（二）贮藏过程中引入的杂质温度、湿度、日光、空气等条件 影响下，或因微生物的作用，引起药物发生水解、氧化、分解、异构化、晶型转变、聚合、潮解和发霉等变化，从而引入的杂质。因贮藏而引入的杂质，有可能与生产引入的杂质相同。第一节 药物的杂质与限量三、药物杂质的分类按照杂质来源分类一般杂质：反映生产工艺水平，信号杂质。特殊杂质：随药物的不同而不同，有关物质。按照杂质毒性分类毒性杂质信号杂质按照化学类别和特性分类无机杂质：反映生产工艺水平，并可能影响药品稳定性。有机杂质：特定杂质&非特定杂质。残留溶剂第一节 药物的杂质与限量四、杂质的限量药物的纯度是相对的。药物杂质的最大允许量，即为杂质限量。药物杂质限量控制方法一般分两种：限量检查法多用对照法，须注意操作的平行原则灵敏度法比较法测定杂质含量其他检查项：安全性、有效性、均匀性第二节 杂质的检查方法一、杂质的研究规范（一）有机杂质在药品质量标准中的项目名称以杂质的化学名称为项目名称，对化学名较长者可用简称、习称或选用适当名称。以某类杂质的总称为项目名称以检测方法作为项目名称（二）杂质检查项目的确定：检查项目应具有针对性，应包括药物在质量研究和稳定性考察中检出的杂质和降解产物。（原料药&制剂、单一对映体等）第二节 杂质的检查方法一、杂质的研究规范（三）杂质限度的确定杂质限度确定的合理性根据原料药没人剂量制订质控限度（表3-1）杂质限度制订应考虑的因素（毒理、给药途径、剂量、给药周期、人群等）创新药物、仿制药物（四）杂质检查方法的选择与验证化学法、光谱法、色谱法等方法专属、灵敏。第二节 杂质的检查方法二、杂质的常用检测方法（一）化学方法药物与杂质化学性质差异大显色反应检查法（多为目视比色或对照法）沉淀反应检查法（比浊法或重量法测定杂质含量）生成气体的检查法滴定法第二节 杂质的检查方法二、杂质的常用检测方法（二）色谱法（杂质检查的首选方法）药物与杂质结构相近，化学性质相似，如有关物质薄层色谱法（TLC）杂质对照品法供试品试液自身稀释对照法杂质对照品与供试品溶液自身稀释对照并用法（多个杂质）对照药物法第二节 杂质的检查方法二、杂质的常用检测方法（二）色谱法（杂质检查的首选方法）高效液相色谱法（HPLC）分离效能高、专属性强、检测灵敏性好，可准确测定色谱峰面积。外标法（杂质对照品法）加校正因子的主成分对照法（适用于已知杂质）不加校正因子的主成分对照法（适用于没有对照品的杂质）面积归一化法（杂质含量的粗略考察）第二节 杂质的检查方法二、杂质的常用检测方法（二）色谱法（杂质检查的首选方法）气相色谱法（GC）测定药物中挥发性杂质，尤其是残留溶剂可采用“标准溶液加入法”毛细管电泳法（HPCE）酶类药物中的酶类杂质第二节 杂质的检查方法二、杂质的常用检测方法（二）光谱法基于药物中杂质对光吸收性质差异可见-紫外分光光度法（UV-Vis）红外分光光度法（IR）：主要用于药物中无效或低效晶型检查。原子吸收分光光度法（AAS）：主要用于金属杂质的检查第二节 杂质的检查方法二、杂质的常用检测方法（二）其他方法热分析（Thermal analysis）热重分析（TGA）：记录质量随温度变化的曲线差热分析（DTA）：记录试样与参比物之间温度差T与温度关系，以温差对温度作图差示扫描量热法（DSC）：记录输给待测物与参比物的能量差与温度间关系，分功率补偿型和热流型热分析法应用多晶型及其转变的表征药物的纯度测定（低共熔杂质）热分析法的结果受条件影响大第二节 杂质的检查方法二、杂质的常用检测方法（二）其他方法酸碱度检查法酸碱滴定法指示液法pH测定法物理性状检查法臭、味挥发性颜色溶解性其他物理属性（旋光性、粘度等）一般杂质的检查方法17药物的杂质检查药物的杂质检查 氯化物检查法 硫酸盐检查法 铁盐检查法 重金属检查法 砷盐检查法干燥失重测定法 溶液颜色检查法 易碳化物检查法 溶液澄清度检查法 炽灼残渣检查法 水分测定法 残留溶剂测定法p 一般杂质的检查方法18药物的杂质检查药物的杂质检查 氯化物检查法p 一般杂质的检查方法原理 中国药典对氯化物的检查是利用氯化物在硝酸酸性溶液中与硝酸银试液作用，生成氯化银白色浑浊液，与一定量标准氯化钠溶液在相同条件下生成的氯化银浑浊液比较，浊度不得更大。氯化物浓度：以50ml中含50g80g的Cl为宜。加入硝酸的作用：可避免弱酸银盐如碳酸银、磷酸银以及氧化银沉淀的形成而干扰检查，同时还可加速氯化银沉淀的生成并产生较好的乳浊。19药物的杂质检查药物的杂质检查 氯化物检查法p 一般杂质的检查方法注意事项 供试品溶液如带颜色，可采用内消色法解决。即取两份供试品溶液，于其中一份中先加入硝酸银试液1.0m1，摇匀，放置10min，如显浑浊，可反复滤过，至滤液澄清，即得无氯化物杂质又具有相同颜色的澄清溶液，再在其中加入规定量的标准氯化钠溶液与水适量使成50ml，作为对照溶液；另一份中加入硝酸银试液1.0ml与水适量使成50ml，作为供试品溶液，将两液在暗处放置5 min后比较，即可消除颜色的干扰。20药物的杂质检查药物的杂质检查 硫酸盐检查法p 一般杂质的检查方法原理 药物中存在的微量硫酸盐与氯化钡在稀盐酸酸性介质中生成硫酸钡白色浑浊，与一定量标准硫酸钾（100gSO4/mL）溶液在相同条件下生成的浑浊比较，浊度不得更大。适宜比浊的浓度范围：每50ml溶液中含0.1mg0.5mg的 ，相当于标准硫酸钾溶液1.0ml5.0ml。酸及酸度：加盐酸成酸性，可防止碳酸钡或磷酸钡等沉淀的生成。但溶液的酸度也能影响硫酸钡的溶解度，以50ml中含稀盐酸2ml，溶液的pH值约为1为宜。21药物的杂质检查药物的杂质检查硫酸盐检查法p 一般杂质的检查方法注意事项 供试品溶液如需滤过，应先用加盐酸使成酸性的水洗净滤纸中硫酸盐，再滤过。有色供试品如富马酸亚铁处理的方法与氯化物检查法相同。如果药物在水中不易溶解，可加入适宜的有机溶剂将药物溶解后再依法检查。22药物的杂质检查药物的杂质检查 铁盐检查法p 一般杂质的检查方法原理 铁盐在盐酸酸性溶液中与硫氰酸铵生成红色可溶性硫氰酸铁配位离子，再与一定量标准铁溶液用同法处理后所呈的颜色进行比较，颜色不得更深。Fe 3+浓度：当50ml溶液中Fe3+含为5g90g时，溶液的吸收度与浓度呈良好线性关系。目视比色时以50ml溶液中含10g50g Fe3+为宜。标准铁溶液每1ml相当于10g的Fe3+。23药物的杂质检查药物的杂质检查 铁盐检查法p 一般杂质的检查方法酸及酸度：在盐酸酸性条件下反应，可防止Fe 3+的水解。经试验，以50ml溶液中含稀盐酸4ml为宜。加入氧化剂：过硫酸铵既可氧化供试品中Fe 2+成Fe 3+，同时可防止由于光线使硫氰酸铁还原或分解褪色。24药物的杂质检查药物的杂质检查 铁盐检查法p 一般杂质的检查方法注意事项l某些药物（如葡萄糖、糊精和硫酸镁等）在检查过程中需加硝酸处理，则不再加过硫酸铵，但必须加热煮沸除去氧化氮，因硝酸中可能含亚硝酸，它能与硫氰酸根离子作用，生成红色亚硝酰硫氰化物，影响比色。l铁盐与硫氰酸根离子的反应为可逆反应，因此，加入过量的硫氰酸铵，不仅可以增加生成的配位离子的稳定性，提高反应灵敏度，还能消除因Cl-、PO3-、SO2-、枸橼酸根离子等与铁盐形成配位化合物而引起的干扰。l供试品处理 若供试液管与对照液管色调不一致，或所呈硫氰酸铁的颜色较浅不便比较时，可分别移入分液漏斗中，各加正丁醇或异戊醇提取，分取醇层比色。因硫氰酸铁配位离子在正丁醇等有机溶剂中的溶解度大，上述处理能增加颜色深度，同时也排除某些干扰物质的影响。25药物的杂质检查药物的杂质检查 铁盐检查法p 一般杂质的检查方法注意事项l一些金属离子可与SCN-反应而干扰检查。如Hg 2+与SCN-能生成离解度很低的Hg(SCN)2或Hg(SCN)42-，银、铜、钴、铋等离子能与硫氰酸根离子生成有色沉淀，在设计方法时应予以注意。l某些有机药物特别是具环状结构的有机药物，在实验条件下不溶解或对检查有干扰，需经炽灼破坏，使铁盐转变成三氧化二铁留于残渣中，处理后再依法检查。盐酸普鲁卡因、泛影酸、羟丙纤维素等药物中铁盐检查。26药物的杂质检查药物的杂质检查 氯化物检查法 硫酸盐检查法 铁盐检查法 重金属检查法 砷盐检查法干燥失重测定法 溶液颜色检查法 易碳化物检查法 溶液澄清度检查法 炽灼残渣检查法 水分测定法 残留溶剂测定法p 一般杂质的检查方法27药物的杂质检查药物的杂质检查重金属检查法p 一般杂质的检查方法 重金属系指在实验条件下能与S2-作用显色的金属杂质，如银、铅、汞、铜、镉、锡、锑、铋等。在药品生产过程中遇到铅的机会较多，铅在体内又易积蓄中毒，故检查时以铅为代表。中国药典对重金属的检查一共收载有四种方法：第一法 硫代乙酰胺法第二法 炽灼后的硫代乙酰胺法第一法 硫化钠法第一法 微孔滤膜法28药物的杂质检查药物的杂质检查重金属检查法p 一般杂质的检查方法第一法 硫代乙酰胺法 用于在实验条件下供试液澄清、无色，对检查无干扰或经处理后对检查无干扰的药物。原理 硫代乙酰胺在弱酸性（pH3.5醋酸盐缓冲液）条件下水解，产生硫化氢，与微量重金属离子生成黄色到棕黑色的硫化物均匀混悬液，与一定量标准铅溶液经同法处理后所呈颜色比较，颜色不得更深。29药物的杂质检查药物的杂质检查重金属检查法p 一般杂质的检查方法第一法 硫代乙酰胺法标准液：本法标准铅溶液为每lml相当于10g的Pb2+。适宜目视比色的浓度范围为每27ml溶液中含10g20g的Pb2+，相当于标准铅溶液1 ml2ml。酸度：溶液的pH值对于金属离子与硫化氢呈色影响较大。当pH3.03.5时，硫化铅沉淀较完全。酸度增大，重金属离子与硫化氢呈色变浅，甚至不显色。因此供试品若用强酸溶解，或在处理中用了强酸，在加入硫代乙酰胺试液前，应先加氨水至溶液对酚酞指示液显中性，再加pH3.5醋酸盐缓冲液调节溶液的酸度。30药物的杂质检查药物的杂质检查重金属检查法p 一般杂质的检查方法第一法 硫代乙酰胺法注意事项 供试品如有色，应在加硫代乙酰胺试液前在对照溶液管中滴加少量稀焦糖溶液或其他无干扰的有色溶液，使之与供试品溶液管的颜色一致，然后再加硫代乙酰胺试液比色。如按以上方法仍不能使两管颜色一致，可采用内消色法使对照溶液与样品溶液的颜色一致。供试品中若有微量高铁盐存在（如葡萄糖酸亚铁），在弱酸性溶液中将氧化硫化氢析出硫，产生浑浊、影响比色。可先加抗坏血酸0.5g1.0g，使高铁离子还原为亚铁离子，再按上述步骤分析。为保证分析的平行性，应在对照液中加入相同量的抗坏血酸。31药物的杂质检查药物的杂质检查重金属检查法p 一般杂质的检查方法第二法 炽灼后的硫代乙酰胺法适用于在水、乙醇中难溶，或能与重金属离子形成配位化合物的有机药物。原理 将供试品炽灼破坏后，加硝酸加热处理，使有机物分解、破坏完全后，再按第一法进行检查。32药物的杂质检查药物的杂质检查重金属检查法p 一般杂质的检查方法第二法 炽灼后的硫代乙酰胺法注意事项 炽灼温度对重金属检查影响较大，温度越高，重金属损失越多，应控制炽灼温度在500600。炽灼残渣加硝酸加热处理后，必须蒸干、除尽氧化氮，否则亚硝酸可氧化硫化氢析出硫，影响比色。蒸干后残渣加盐酸，是使重金属成为氯化物。为了消除盐酸或其他试剂中可能夹杂重金属的影响，在配制供试品溶液时，除另有规定外，对照品溶液应取同样量试剂在磁皿中蒸干后，依法检查。含钠盐或氟的有机药物在炽灼时能腐蚀瓷坩埚而引入重金属，应改用铂坩埚或硬质玻璃蒸发皿。33药物的杂质检查药物的杂质检查重金属检查法p 一般杂质的检查方法第三法 硫化钠法适用于难溶于稀酸但能溶解于碱性水溶液的药物，如磺胺类、巴比妥类药物等。原理 在碱性介质中，以硫化钠为显色剂，使Pb2生成PbS微粒的混悬液，与一定量标准铅溶液经同法处理后所呈颜色比较，不得更深。34药物的杂质检查药物的杂质检查重金属检查法p 一般杂质的检查方法第四法 微孔滤膜法适用于重金属限量低的药物。原理 使重金属生成的硫化物富集于微孔滤膜上，比较供试品和一定量的标准铅溶液同法处理后产生的色斑深浅，确定重金属是否超过限量。35C 垫圈垫圈(外径外径10mm,内径内径6mm)D 滤膜滤膜(直径直径10mm,孔径孔径3.0m)E 尼龙垫网尼龙垫网CDABFE滤器下部滤器上盖连接头 微孔滤膜过滤法检查重金属装置微孔滤膜过滤法检查重金属装置36药物的杂质检查药物的杂质检查 氯化物检查法 硫酸盐检查法 铁盐检查法 重金属检查法 砷盐检查法干燥失重测定法 溶液颜色检查法 易碳化物检查法 溶液澄清度检查法 炽灼残渣检查法 水分测定法 残留溶剂测定法p 一般杂质的检查方法37药物的杂质检查药物的杂质检查砷盐检查法p 一般杂质的检查方法l古蔡氏法 Gutzeitl白田道夫法 Bettendorffl二乙基二硫代氨基甲酸银法 Ag（DDC）l次磷酸法38药物的杂质检查药物的杂质检查砷盐检查法p 一般杂质的检查方法l古蔡(Gutzeit)氏法 原理 金属锌与酸作用产生新生态的氢，与药物中微量砷盐反应生成具挥发性的砷化氢，遇溴化汞试纸，产生黄色至棕色的砷斑，与一定量标准砷溶液所生成的砷斑比较，颜色不得更深。39 古蔡氏法检古蔡氏法检砷装置砷装置8cm18cm旋塞盖旋塞盖 旋塞旋塞导气管导气管AsH3发生瓶发生瓶40药物的杂质检查药物的杂质检查砷盐检查法p 一般杂质的检查方法l古蔡(Gutzeit)氏法 加入碘化钾及氯化亚锡的作用：将五价砷还原为三价砷，碘化钾被氧化生成的碘又可被氯化亚锡还原为碘离子，后者与反应中产生的锌离子能形成稳定的配位离子，有利于生成砷化氢的反应不断进行。还可抑制锑化氢的生成，因锑化氢也能与溴化汞试纸作用生成锑斑。氯化亚锡又可与锌作用，在锌粒表面形成锌锡齐，起去极化作用，从而使氢气均匀而连续地发生。41药物的杂质检查药物的杂质检查砷盐检查法p 一般杂质的检查方法l古蔡(Gutzeit)氏法 醋酸铅棉花的作用：锌粒及供试品中可能含有少量硫化物，在酸性液中能产生硫化氢气体，与溴化汞作用生成硫化汞的色斑，干扰试验结果，故用醋酸铅棉花吸收硫化氢。标准砷溶液：每1ml标准砷溶液相当于1g的As。中国药典制备标准砷斑采用2ml标准砷溶液（相当2g As），所得砷斑清晰。42药物的杂质检查药物的杂质检查砷盐检查法p 一般杂质的检查方法l古蔡(Gutzeit)氏法 注意事项供试品若为硫化物、亚硫酸盐、硫代硫酸盐等，在酸性溶液中生成硫化氢或二氧化硫气体，与溴化汞作用生成黑色硫化汞或金属汞，干扰砷斑检查。应先加硝酸处理，使氧化成硫酸盐，除去干扰。供试品若为铁盐，能消耗碘化钾、氯化亚锡等还原剂，影响测定条件，并能氧化砷化氢干扰测定。需先加酸性氯化亚锡试液，将高铁离子还原为低铁离子后再检查。多数环状结构的有机药物，因砷在分子中可能以共价键结合，要先进行有机破坏，否则检出结果偏低或难以检出。常用的有机破坏方法有碱破坏法和酸破坏法。43药物的杂质检查药物的杂质检查 氯化物检查法 硫酸盐检查法 铁盐检查法 重金属检查法 砷盐检查法干燥失重测定法 溶液颜色检查法 易碳化物检查法 溶液澄清度检查法 炽灼残渣检查法 水分测定法 残留溶剂测定法p 一般杂质的检查方法44药物的杂质检查药物的杂质检查 干燥失重测定法 p 一般杂质的检查方法干燥失重：指药品在规定的条件下，经干燥后所减失的量，以百分率表示。干燥失重的量应恒重。由干燥至恒重的第二次及以后各次称重均应在规定的条件下继续干燥1h后进行。干燥失重的内容物：主要指水分，也包括其它挥发性物质，如残留的挥发性有机溶剂等。干燥失重测定方法：l常压恒温干燥法l干燥剂干燥法l减压干燥法与恒温减压干燥法l热分析法 thermal analysis,TA45药物的杂质检查药物的杂质检查 干燥失重测定法 p 一般杂质的检查方法l常压恒温干燥法适用于受热较稳定的药物方法 将供试品置于相同条件下已干燥至恒重的扁形称量瓶中，在烘箱内于规定温度下干燥至恒重，由减失的重量和取样量即可计算供试品的干燥失重。注意事项 干燥温度一般为105。有的药物含有较多结晶水，在105不易除去，可提高干燥温度。某些药物中含有较大量的水分，熔点又较低，如直接在105干燥，供试品易融化，表面结成一层薄膜，使水分不易继续挥发。某些易吸湿、或受热发生相变而达不到恒重的药物，可采用一定温度下、干燥一定时间所减失的重量代表干燥失重。46药物的杂质检查药物的杂质检查 干燥失重测定法 p 一般杂质的检查方法l干燥剂干燥法适用于受热分解、或易于挥发的供试品 方法 将供试品置干燥器中，利用干燥器内的干燥剂吸收水分，干燥至恒重。注意事项 药典中常用的干燥剂有硅胶、硫酸和五氧化二磷等。五氧化二磷的吸水效率、吸水容量和吸水速度均较好，若发现干燥剂表层结块、出现液滴，应将表层刮去，另加新的五氧化二磷再使用。硫酸的吸水效率与吸水速度次于五氧化二磷，但吸水容量比五氧化二磷大。硅胶的吸水效率仅次于五氧化二磷，大于硫酸。变色硅胶具有使用方便、价廉、无腐蚀性且可重复使用的特点，为最常用的干燥剂。47药物的杂质检查药物的杂质检查 干燥失重测定法 p 一般杂质的检查方法l减压干燥法与恒温减压干燥法本法适用于熔点低、受热不稳定或难赶除水分的药物方法 在一定温度下，采用减压干燥器或恒温减压干燥箱干燥，压力应控制在2.67kPa（20mmHg）以下。注意事项 减压干燥器初次使用时，应用厚布包好再进行减压，以防炸裂伤人。开盖时，因器外压力大于内压，必须先将活塞缓缓旋开，使空气缓缓进入，勿使气流进入太快，将称量瓶中的供试品吹散；在供试品取出后应立即关闭活塞。48药物的杂质检查药物的杂质检查 干燥失重测定法 p 一般杂质的检查方法l热分析法 thermal analysis,TA在程序控制温度的情况下，测定物质的物理、化学变化与温度关系的一类仪器分析方法。该方法具有样品用量少，灵敏、快速等优点，在药物分析中广泛用于物质的熔点、多晶型、纯度、溶剂化物、水分及热解产物的测定。药物分析中常用的热分析法是：热重分析法差示热分析法差示扫描量热法49药物的杂质检查药物的杂质检查 干燥失重测定法 p 一般杂质的检查方法热重分析法（thermogravimetric analysis，TGA）TGA法是测量物质的质量随温度变化的热分析技术。热重分析仪主要由安装在程序升温炉中的微量分析天平组成。天平不受温度的影响，经过长时间加热仍有良好稳定性。好的热天平可精确称量到1g以下，供试品量可达200mg，温度可达10001500。热重分析法通常只需1mg20mg样品。分析时，将样品置于瓷坩埚或铂坩埚等适宜材料制成的容器中，放于天平盘上，按一定速度升高炉温，氮气流（或其他惰性气流）下带走挥发性物质。50草酸钙草酸钙(CaC(CaC2 2O O4 4H H2 2O)O)的热重曲线的热重曲线G1G2G310008006004002000WT1T2T3398838635478134226T()在温度在温度T1时时 CaC2O4H2O CaC2O4+H2O在温度在温度T2时时 CaC2O4 CaCO3+CO在温度在温度T3时时 CaCO3 CaO+CO251药物的杂质检查药物的杂质检查 干燥失重测定法 p 一般杂质的检查方法差示热分析法(differential thermal analysis，DTA)DTA法是测量供试品和参比物之间的温度差与温度（或时间）关系的热分析技术。参比物质应具有惰性（即在加热过程中不发生相变和化学变化），同时与被测物质具有相似的热容。DTA法所用样品量为0.1mg10mg，加热速度一般为10/min20/min。分析时，将供试品与参比物质置于同一可控制的加热器中，按一定的程序升温，用热电偶测量供试品与参比物质之间的温差（T）随温度（或时间）的变化，得到以温度（或加热时间）为横座标，T为纵座标的DTA曲线。52样品样品 参比参比加热炉加热炉至信号至信号放大器放大器加热器加热器导线导线炉温炉温控制器控制器热差曲线的直线热差曲线的直线吸热峰吸热峰放热峰放热峰T()T热差曲线示意图热差曲线示意图差示热分析仪主要结构简图差示热分析仪主要结构简图53盐酸多巴酚丁胺的DTA-TGA曲线10090807060DTAT(/min)19623354药物的杂质检查药物的杂质检查 干燥失重测定法 p 一般杂质的检查方法差示扫描量热法（differential scanning calorimetry,DSC）DSC法是测量维持样品与参比物质的温度相同，系统所需输给待测物质和参比物的能量差随温度（或时间）变化的热分析技术。DSC曲线与DTA曲线略有不同，它是以热流率（mJ/s）为纵座标，温度（或加热时间）为横座标。与DTA曲线相似，峰在横轴上的位置、形状、数目与物质的性质有关，因此也可用于药物的熔点测定、晶型鉴别以及纯度测定。55药物的杂质检查药物的杂质检查 干燥失重测定法 p 一般杂质的检查方法差示扫描量热法（differential scanning calorimetry,DSC）l物质的晶型不同，在差示扫描量热曲线上熔化吸热峰的位置也各异，据此可以鉴别、检查这些多晶型的存在。例 盐酸舍曲林两种晶型（、）的不同DSC行为。l供试品的熔点随着所含杂质量的增加而降低，其DSC曲线也会产生相应的变化。例 不同纯度苯甲酸的DSC行为。l很多物质在加热过程中同时失重，或由于化学反应产生挥发性物质，可将DSC法与TGA法结合使用，以给出正确的判断。例 甲磺酸二氢麦角毒碱的DSC-TGA曲线。温度温度()50 80 110 140 170 200 230 260 29015.000.007.50盐酸舍曲林晶型盐酸舍曲林晶型的的DSCDSC曲线曲线mcal/sec57温度温度()50 80 110 140 170 200 230 260 2905.000.002.50mcal/sec盐酸舍曲林晶型盐酸舍曲林晶型的的DSCDSC曲线曲线58不同纯度苯甲酸的DSC曲线温度温度97.2%98.6%标准品标准品59甲磺酸二氢麦角毒碱的DSC-TGA曲线50100150200DSCTGA60药物的杂质检查药物的杂质检查 氯化物检查法 硫酸盐检查法 铁盐检查法 重金属检查法 砷盐检查法干燥失重测定法 溶液颜色检查法 易碳化物检查法 溶液澄清度检查法 炽灼残渣检查法 水分测定法 残留溶剂测定法p 一般杂质的检查方法61药物的杂质检查药物的杂质检查溶液颜色检查法p 一般杂质的检查方法 有色杂质可能在药物的生产过程中引入，也可能由贮藏过程产生。对溶液颜色进行检查，可控制药物中有色杂质的含量。中国药典采用的检查方法有三种：l目视比色法 将药物溶液的颜色与规定的标准比色液的颜色相比较，根据颜色深浅来判断检查结果。l分光光度法 通过控制药物溶液在某波长处的吸收度来检查药物溶液的颜色。l色差计法 通过色差计直接测定溶液的透射三刺激值，对其颜色进行定量表述和分析。62药物的杂质检查药物的杂质检查易碳化物检查法 p 一般杂质的检查方法检查药物中遇硫酸易炭化或易氧化而呈色的微量有机杂质。这类杂质多数结构未知，用硫酸呈色的方法可以简便地控制它们的总量。注意事项 比色时，应将甲、乙两管同置白色背景前，平视观察比较，判断结果。供试品为固体时，应先研成细粉，以利于溶解、呈色和检出。如需加热才能溶解时，可取供试品与硫酸混合均匀，加热溶解，放冷至室温。再移至比色管中。硫酸的浓度、反应温度与时间均影响易炭化物所呈现的颜色，必须按规定严格控制。63药物的杂质检查药物的杂质检查溶液澄清度检查法p 一般杂质的检查方法 澄清度可反映药物溶液中的微量不溶性杂质的存在情况，在一定程度上可反映药品的质量和生产的工艺水平，对于供制备注射液用原料药物的纯度检查，尤为重要。原理 乌洛托品在偏酸性条件下水解产生甲醛，甲醛与肼缩合生成不溶于水得的甲醛腙白色混浊。通过比较供试品溶液和浊度标准液的浊度来判断供试品溶液的澄清度是否符合规定。64药物的杂质检查药物的杂质检查炽灼残渣检查法 p 一般杂质的检查方法 炽灼残渣（residue on ignition）的定义：有机药物经炭化或挥发性无机药物加热分解后，高温炽灼，所产生的非挥发性无机杂质的硫酸盐。英国药典称其为硫酸灰分（sulphated ash）。炽灼残渣检查用于控制有机药物和挥发性无机药物中存在的非挥发性无机杂质。炽灼残渣65药物的杂质检查药物的杂质检查炽灼残渣检查法 p 一般杂质的检查方法注意事项 供试品的取用量应根据炽灼残渣限量和称量误差决定。样品量过多，炭化和灰化时间太长；样品量过少，称量误差增大。一般应使炽灼残渣量为1mg2mg，残渣限量一般为0.10.2。为了避免供试品炭化时骤然膨胀而逸出，可采用将坩埚斜置方式，缓缓加热，直至完全灰化（不产生烟雾）。含氟的药品对瓷坩埚有腐蚀，应采用铂坩埚。一些重金属（如铅）于高温下易挥发，故若需将炽灼残渣留作重金属检查时，炽灼温度必须控制在500600。恒重系指供试品连续两次炽灼或干燥（见“干燥失重”）后的重量差异在0.3mg以下。炽灼至恒重的第二次称重应在继续炽灼30min后进行。66药物的杂质检查药物的杂质检查 水分测定法 药物中的水分包括结晶水和吸附水。测定方法：费休氏法可准确测定药物中的结晶水、吸附水和游离水。原理 利用碘将二氧化硫氧化为三氧化硫时，需要一定量的水分参与反应：p 一般杂质的检查方法根据消耗碘的量来测定水分的含量：供试品中水分含量=水与费休试液作用的摩尔比为：水：碘：二氧化硫：甲醇：吡啶（1:1:1:1:3）。无水吡啶与无水甲醇不仅参与反应，而且还起溶剂的作用。100%67药物的杂质检查药物的杂质检查 水分测定法 药物中的水分包括结晶水和吸附水。测定方法：费休氏法可准确测定药物中的结晶水、吸附水和游离水。原理 利用碘将二氧化硫氧化为三氧化硫时，需要一定量的水分参与反应：p 一般杂质的检查方法根据消耗碘的量来测定水分的含量：供试品中水分含量=水与费休试液作用的摩尔比为：水：碘：二氧化硫：甲醇：吡啶（1:1:1:1:3）。无水吡啶与无水甲醇不仅参与反应，而且还起溶剂的作用。100%68药物的杂质检查药物的杂质检查 残留溶剂测定法 p 一般杂质的检查方法有机溶剂毒性的程度分为三类：一类有机溶媒毒性较大，且具有致癌并对环境有害，应尽量避免使用；二类有机溶媒对人有一定的毒性，应限量使用；三类有机溶媒对人的健康危害性较小，因此推荐使用。中国药典于1995年版起正式收载“有机溶剂残留量测定法”，用以检查药物在生产过程中引入的有害有机溶剂，包括苯、氯仿、1，4-二氧六环、二氯甲烷、吡啶、甲苯及环氧乙烷等。中国药典采用气相色谱法检查残留有机溶剂。69药物的杂质检查药物的杂质检查 残留溶剂测定法 p 一般杂质的检查方法气相色谱法l 色谱系统与系统适用性试验以直径为0.250.18mm的二乙烯苯-乙基乙烯苯型高分子多孔小球作为固定相，柱温为80170；并符合下列条件：用待测物的色谱峰计算的N 应大于1000；内标物与待测物的两个色谱峰的 R 1.5；每个标准溶液进样5次，所得待测物与内标物峰面积之比的RSD5%；若以外标法测定，所得待测物峰面积的RSD 10%70药物的杂质检查药物的杂质检查 残留溶剂测定法 p 一般杂质的检查方法气相色谱法l 测定方法 毛细管柱顶空进样等温法 毛细管柱顶空进样程序升温法 溶液直接进样法71药物的杂质检查药物的杂质检查色谱分析法色谱分析法光谱分析法光谱分析法化学分析法化学分析法物理分析法物理分析法p 特殊杂质的检查方法72药物的杂质检查药物的杂质检查色谱分析法利用药物与杂质的色谱性质的差异l薄层色谱法（TLC法）l高效液相色谱法（HPLC法）l气相色谱法（GC法）p 特殊杂质的检查方法73药物的杂质检查药物的杂质检查l薄层色谱法设备简单、操作简便、分离速度快，灵敏度和分辨率高常用的方法有：（1）杂质对照品法：适用于已知杂质并能制备杂质对照品的情况。（2）供试品自身对照法：适用于杂质的结构不能确定，或无杂质对照品的情况。要求供试品与所检杂质对显色剂所显的颜色应相同，显色灵敏度也应相同或相近。p 特殊杂质的检查方法74药物的杂质检查药物的杂质检查l薄层色谱法（3）杂质对照品法与供试品溶液自身稀释对照法并用 当药物中存在多个杂质时，其中已知杂质有对照品时，采用杂质对照品法检查；共存的未知杂质或没有对照品的杂质，可用供试品溶液自身稀释对照法检查。（4）对照药物法：当无适合的杂质对照品，尤其是供试品显示的杂质斑点颜色与主成分斑点颜色有差异，难以判断限量时，可用与供试品相同的药物作为对照品，此对照药物中所含待检杂质需符合限量要求，且稳定性好。p 特殊杂质的检查方法75药物的杂质检查药物的杂质检查l薄层色谱法为保证所用TLC系统符合要求，中国药典（2005年版）增加了TLC的系统适用性试验，规定斑点的检测灵敏度、比移值（Rf）和分离效能。（1）检测灵敏度：系指杂质检查时，采用对照品溶液稀释若干倍的溶液与供试品溶液和对照溶液在规定的色谱条件下，在同一块薄层板上点样、展开、检视，前者应显示清晰的斑点。（2）比移值（Rf）：系指从基线至展开斑点中心的距离与从基线至展开剂前沿的距离的比值。（3）分离效能：鉴别时，在对照品与结构相似的药物的对照品制成对照混合溶液的色谱图中，应显示两个清晰分离的斑点。p 特殊杂质的检查方法76药物的杂质检查药物的杂质检查l高效液相色谱法分离效能高，而且可以准确地测定各组分的峰面积 杂质检查方法有五种类型。（1）峰面积归一化法：通常用于粗略考察供试品中的杂质。（2）不加校正因子的主成分自身对照法：用于没有杂质对照品时杂质的限量检查。（3）加校正因子的主成分自身对照法：用于有杂质对照品时杂质的含量测定。（4）内标法加校正因子测定供试品中杂质的含量：用于有杂质对照品时，杂质的含量测定。（5）外标法测定供试品中某个杂质或主成分的含量：用于有杂质对照品或杂质对照品易制备的情况。p 特殊杂质的检查方法77药物的杂质检查药物的杂质检查l气相色谱法气相色谱法除药物中残留溶剂外，一些挥发性特殊杂质也可以采用气相色谱法检查。检查的方法与高效液相色谱法相同的有内标法加校正因子测定法、外标法和面积归一化法，不同的有标准溶液加入法。p 特殊杂质的检查方法78药物的杂质检查药物的杂质检查光谱分析法l紫外分光光度法 当杂质在某一波长处有最大吸收，而药物在此无吸收时，可以通过控制供试品溶液在此波长处的吸收度来控制杂质的量。l红外分光光度法 红外分光光度法在杂质检查中主要用于药物中无效或低效晶型的检查。某些多晶型药物由于其晶型结构不同，一些化学键的键长、键角等发生不同程度的变化，从而导致红外吸收光谱中某些特征峰的频率、峰形和强度出现显著差异。l原子吸收分光光度法原子吸收分光光度法是通过测定药物中所含待检元素的原子蒸气，吸收发自光源的该元素特定波长光的程度，以求出供试药物中待检元素含量的方法。p 特殊杂质的检查方法79药物的杂质检查药物的杂质检查化学分析法化学分析法p 特殊杂质的检查方法酸、碱性质的差异氧化还原性的差异杂质与一定试剂产生沉淀杂质与一定试剂产生颜色反应杂质与一定试剂反应产生气体80药物的杂质检查药物的杂质检查物理分析法物理分析法p 特殊杂质的检查方法嗅味及挥发性的差异颜色的差异溶解行为的差异旋光性质的差异吸附或分配性质的差异对光选择吸收性质的差异