药物的特殊杂质检查方法--课件

药物的特殊杂质检查方法药物的特殊杂质检查方法特殊杂质检查特殊杂质检查 特殊杂质特殊杂质 指在该药物的生产或贮存过程中，根指在该药物的生产或贮存过程中，根据药物的性质、生产方法和工艺条件，有可据药物的性质、生产方法和工艺条件，有可能引入的杂质。能引入的杂质。阿司匹林阿司匹林水杨酸水杨酸盐酸普鲁卡因盐酸普鲁卡因对氨基苯甲酸对氨基苯甲酸特殊杂质检查特殊杂质检查检查方法：检查方法：一、利用药物和杂质在一、利用药物和杂质在物理性质物理性质上的差异上的差异二、利用药物和杂质在二、利用药物和杂质在化学性质化学性质上的差异上的差异三、利用药物和杂质在三、利用药物和杂质在色谱行为色谱行为上的差异上的差异（一）臭味及挥发性质的差异（一）臭味及挥发性质的差异 例如：间苯二酚中苯酚检查：本品例如：间苯二酚中苯酚检查：本品0.250.25g g，缓缓加热不得，缓缓加热不得有苯酚臭。浓过氧化氢中不挥发性杂质检查：有苯酚臭。浓过氧化氢中不挥发性杂质检查：1010mlml水浴蒸干水浴蒸干残渣残渣1515mgmg。（二）颜色差异（二）颜色差异 例如：磺胺嘧啶中有色偶氮苯化合物的检查：取本品例如：磺胺嘧啶中有色偶氮苯化合物的检查：取本品2.02.0g g，加，加NaOHNaOH试液试液1010mlml，加水，加水2525mlml，与黄色，与黄色3 3号比色液比，不号比色液比，不得更深。得更深。一、利用药物和杂质在物理性质上的差异一、利用药物和杂质在物理性质上的差异（三）溶解行为的差异（三）溶解行为的差异 例如：葡萄糖中糊精检查：乙醇溶液应澄清。例如：葡萄糖中糊精检查：乙醇溶液应澄清。（四）旋光性质的差异（四）旋光性质的差异 例如：硫酸阿托品中莨菪碱的检查：本品溶液例如：硫酸阿托品中莨菪碱的检查：本品溶液(50(50mg/ml)mg/ml)-0.4-0.40 0度。度。一、利用药物和杂质在物理性质上的差异一、利用药物和杂质在物理性质上的差异（五）对光吸收性质的差异（五）对光吸收性质的差异 1.1.紫外分光光度法紫外分光光度法 当杂质在某一波长处有最大吸收，而药物在此无当杂质在某一波长处有最大吸收，而药物在此无吸收时，可以通过控制供试品溶液在此波长处的吸收吸收时，可以通过控制供试品溶液在此波长处的吸收度来控制杂质的量。度来控制杂质的量。一、利用药物和杂质在物理性质上的差异一、利用药物和杂质在物理性质上的差异例例:肾上腺素中肾上腺酮的检查肾上腺素中肾上腺酮的检查肾上腺素的盐酸溶液肾上腺素的盐酸溶液（2mg/ml2mg/ml）在）在310nm310nm处处的吸光度不得过的吸光度不得过0.050.05。已知酮体在该波长处的已知酮体在该波长处的吸收系数为吸收系数为453453，计算，计算出酮体的出酮体的限量限量。有的杂质紫外吸收光谱与药物的紫外吸收有的杂质紫外吸收光谱与药物的紫外吸收光谱重叠，但可以通过控制供试品溶液的吸收度光谱重叠，但可以通过控制供试品溶液的吸收度比值来控制杂质的量。比值来控制杂质的量。如：苯丙醇中苯丙酮的检查，苯丙醇溶液如：苯丙醇中苯丙酮的检查，苯丙醇溶液测定吸收度比值测定吸收度比值A247nm/A258nmA247nm/A258nm不得大于不得大于0.790.79。（五）对光吸收性质的差异（五）对光吸收性质的差异 1.1.紫外分光光度法紫外分光光度法 2.2.原子吸收分光光度法原子吸收分光光度法 是通过测定药物中所含待测元素原子蒸气，吸收是通过测定药物中所含待测元素原子蒸气，吸收发自光源的该元素特定波长的程度，以求出药物中待发自光源的该元素特定波长的程度，以求出药物中待测元素的含量。测元素的含量。限量检查时：对照品液限量检查时：对照品液=供试品供试品+限量限量-a a 供试品液供试品液=-=-b b 符合规定时符合规定时 b b(a-b);b(a-b);b(a-b)(a-b)不合格。不合格。（五）对光吸收性质的差异（五）对光吸收性质的差异3.3.红外分光光度法红外分光光度法 主要用于药物中主要用于药物中无效或低效晶型无效或低效晶型检查，如甲检查，如甲苯咪唑中苯咪唑中A A晶型检查晶型检查（五）对光吸收性质的差异（五）对光吸收性质的差异 A A 晶型晶型 C C 晶型晶型 在在640640cmcm-1 -1 有强吸收有强吸收 吸收很弱吸收很弱 在在662662cmcm-1 -1 吸收很弱吸收很弱 有强吸收有强吸收 662 662cmcm-1-1 640 640cmcm-1 -1 662662cmcm-1-1 640 640cmcm-1-1 供试品供试品+10%+10%A A晶型晶型 D D2 2 D D1 1 供试品供试品 D D2 2 D D1 1 10%10%R=DR=D1 1/D/D2 2 R R=D=D1 1/D/D2 2（五）对光吸收性质的差异（五）对光吸收性质的差异3.3.红外分光光度法红外分光光度法 4.4.荧光分析法荧光分析法 利用物质的激发和发射光谱，对物质进行分析。利用物质的激发和发射光谱，对物质进行分析。药物无荧光，特殊杂质有荧光，可将供试品置紫药物无荧光，特殊杂质有荧光，可将供试品置紫外灯下检视，不得显明显的荧光。外灯下检视，不得显明显的荧光。利血平中氧化产物检查：利血平中氧化产物检查：3,4-3,4-二去氢利血平利血平二去氢利血平利血平(无荧光无荧光)()(I)(I)(黄绿色荧光黄绿色荧光)3,4,5,6-3,4,5,6-四去氢利血平四去氢利血平 (II)(II)(蓝色荧光蓝色荧光)（五）对光吸收性质的差异（五）对光吸收性质的差异二、利用药物和杂质在化学性上的差异二、利用药物和杂质在化学性上的差异（一）酸碱性的差异（一）酸碱性的差异 利用杂质的酸、碱性。规定消耗滴定液的体积、规利用杂质的酸、碱性。规定消耗滴定液的体积、规定定PHPH值范围、指示剂法。值范围、指示剂法。例如：乙琥胺中例如：乙琥胺中2-2-甲基甲基-2-2-乙基丁二酸检查：乙基丁二酸检查：0.010.01g/ml pH3.0g/ml pH3.04.54.5。例如：苯巴比妥中苯基丙二酰脲检查：其水溶液不例如：苯巴比妥中苯基丙二酰脲检查：其水溶液不得使甲基橙显红色。得使甲基橙显红色。（二）氧化还原性的差异（二）氧化还原性的差异 利用药物与杂质之间的氧化还原性的差异进行利用药物与杂质之间的氧化还原性的差异进行 检查。检查。再如：盐酸吗啡中阿朴吗啡的检查：后者可被碘氧化再如：盐酸吗啡中阿朴吗啡的检查：后者可被碘氧化生成水溶性绿色化合物。生成水溶性绿色化合物。因此因此ChP规定：本品规定：本品 50mg+4mlH2O+1dI2+5ml乙醚乙醚 乙醚层不得显红色；水层不得显绿色。乙醚层不得显红色；水层不得显绿色。二、利用药物和杂质在化学性上的差异二、利用药物和杂质在化学性上的差异（三）杂质与一定试剂反应产生沉淀：（三）杂质与一定试剂反应产生沉淀：如氯化钠中如氯化钠中 钡盐的检查。钡盐的检查。（四）杂质与一定试剂反应产生颜色：（四）杂质与一定试剂反应产生颜色：阿司匹林中阿司匹林中 游离水杨酸的测定。游离水杨酸的测定。（五）杂质与一定试剂反应产生气体：（五）杂质与一定试剂反应产生气体：盐酸乙基吗盐酸乙基吗 啡中铵盐检查。啡中铵盐检查。二、利用药物和杂质在化学性上的差异二、利用药物和杂质在化学性上的差异 （六）药物经有机破坏后检查杂质（六）药物经有机破坏后检查杂质 含环状结构的有机药物中磷、硫、卤素及硒含环状结构的有机药物中磷、硫、卤素及硒等杂质；不溶药物等。需进行有机破坏后检查，等杂质；不溶药物等。需进行有机破坏后检查，各国药典所采用的方法为各国药典所采用的方法为氧瓶燃烧法氧瓶燃烧法。二、利用药物和杂质在化学性上的差异二、利用药物和杂质在化学性上的差异 例如：例如：有机氟药物有机氟药物 F F-+茜素氟蓝茜素氟蓝+硝酸亚铈硝酸亚铈 紫色配位化合物（紫色配位化合物（610610nmnm）OpH4.3返 回 （六）药物经有机破坏后检查杂质（六）药物经有机破坏后检查杂质二、利用药物和杂质在化学性上的差异二、利用药物和杂质在化学性上的差异（一）薄层色谱法（一）薄层色谱法（二）纸色谱法（二）纸色谱法（三）高效液相色谱法（三）高效液相色谱法（四）气相色谱法（四）气相色谱法三、利用药物和杂质在三、利用药物和杂质在色谱行为色谱行为上的差异上的差异（一）薄层色谱法（一）薄层色谱法根据药物与杂质对吸附剂的吸附或对展开根据药物与杂质对吸附剂的吸附或对展开剂的解析能力不同（剂的解析能力不同（RfRf值的差异），加以值的差异），加以分离和检查。分离和检查。本法灵敏、简便、快速；不需特殊的设备、本法灵敏、简便、快速；不需特殊的设备、费用低；分离和鉴别同步进行。费用低；分离和鉴别同步进行。（1 1）杂质对照品法）杂质对照品法 适用于已知杂质并能制备杂质对照品的适用于已知杂质并能制备杂质对照品的情况。要求供试品中所检杂质斑点的大小与情况。要求供试品中所检杂质斑点的大小与颜色，不得超过相应杂质的对照斑点。颜色，不得超过相应杂质的对照斑点。方法：根据限量，取供试品溶液和限度方法：根据限量，取供试品溶液和限度量的杂质对照品溶液，分别点样于同一薄层量的杂质对照品溶液，分别点样于同一薄层板上，展开、定位、检查。板上，展开、定位、检查。（一）薄层色谱法（一）薄层色谱法供试品供试品 杂质对照品杂质对照品（2 2）供试品自身对照法）供试品自身对照法 适用于杂质的结构不能确定，或无杂质对照品的适用于杂质的结构不能确定，或无杂质对照品的情况。情况。方法：将供试品溶液按限量要求稀释至一定浓方法：将供试品溶液按限量要求稀释至一定浓度作为对照溶液，与供试品溶液分别点加于同一薄度作为对照溶液，与供试品溶液分别点加于同一薄层板上，展开、定位、检查。供试品溶液所显杂质层板上，展开、定位、检查。供试品溶液所显杂质斑点不得深于对照溶液所显示斑点颜色。斑点不得深于对照溶液所显示斑点颜色。（一）薄层色谱法（一）薄层色谱法对照液对照液(稀释液稀释液)供试品液供试品液（3 3）对照药物）对照药物法法 当无适合的杂质对照品，尤其是供试品当无适合的杂质对照品，尤其是供试品显示的杂质斑点颜色与主成分斑点颜色有差显示的杂质斑点颜色与主成分斑点颜色有差异，难以判断限量时，可用与供试品相同的异，难以判断限量时，可用与供试品相同的药物作为对照品，此对照物中所含待检杂质药物作为对照品，此对照物中所含待检杂质需符合限量要求，且稳定性好。需符合限量要求，且稳定性好。（一）薄层色谱法（一）薄层色谱法供试品供试品 符合要求药物符合要求药物2 2、灵敏度、灵敏度法法 少数药物还利用试验条件下显色剂对杂少数药物还利用试验条件下显色剂对杂质的检测限来控制其限量。质的检测限来控制其限量。盐酸阿米替林，一定浓度点样于硅胶盐酸阿米替林，一定浓度点样于硅胶G G薄层板上，以氯仿：甲苯展开，喷甲醛薄层板上，以氯仿：甲苯展开，喷甲醛-硫硫酸显色，紫外灯下检视，除主斑点外，不得酸显色，紫外灯下检视，除主斑点外，不得显其他斑点。显其他斑点。（一）薄层色谱法（一）薄层色谱法 （二）纸色谱法（二）纸色谱法 用于极性较大物质的分离、分析。用于极性较大物质的分离、分析。有时也用于检查放射性药物注射液中有时也用于检查放射性药物注射液中的放射化学杂质。的放射化学杂质。（三）高效液相色谱法（三）高效液相色谱法(HPLC)HPLC)分离效能高，专属性强和检测灵敏度高，根据供分离效能高，专属性强和检测灵敏度高，根据供试品和杂质对照品保留时间相同测定各杂质峰面积。试品和杂质对照品保留时间相同测定各杂质峰面积。1 1）峰面积归一化法）峰面积归一化法（粗略测量杂质的含量）（粗略测量杂质的含量）2 2）不加校正因子的主成分自身对照法）不加校正因子的主成分自身对照法（无杂质对（无杂质对照品）照品）3 3）加校正因子的内标法）加校正因子的内标法（有杂质对照品）（有杂质对照品）4 4）外标法）外标法（有杂质对照品）（有杂质对照品）高效液相色谱法工作流程高效液相色谱法工作流程 峰面积归一化法：峰面积归一化法：杂质峰占所有峰总面积杂质峰占所有峰总面积中比例不超过一定数值来限量。中比例不超过一定数值来限量。杂质含量杂质含量=（杂质峰面积（杂质峰面积/总峰面积）总峰面积）100%100%样品样品流动相流动相（6mg/ml）溶液溶液取取10l记录图谱记录图谱进样进样规定规定 杂质峰面积总和杂质峰面积总和/总峰面积总峰面积20%合格合格例：例：中国药典中国药典阿司帕坦中有关物质的检查阿司帕坦中有关物质的检查不加校正因子的主成分自身对照法：不加校正因子的主成分自身对照法：无杂质对无杂质对照品照品，以供试品稀溶液为对照溶液，比较杂质以供试品稀溶液为对照溶液，比较杂质峰与对照液中主峰面积。峰与对照液中主峰面积。例：例：中国药典中国药典中吉非罗齐的有关杂质检查：中吉非罗齐的有关杂质检查：供试品供试品流动相流动相（10mg/ml）待测液待测液对照液对照液色图谱色图谱(1)进样进样规定规定 所有杂质峰的面积和不得大于对照液主峰的面积所有杂质峰的面积和不得大于对照液主峰的面积取取5l精密定量精密定量（0.2mg/ml）5l色图谱色图谱(2)内标法加校正因子：内标法加校正因子：AR：待测物对照品峰面积：待测物对照品峰面积 AS：内标峰面积：内标峰面积CR：待测物对照品浓度：待测物对照品浓度 CS：内标浓度：内标浓度第一步第一步：先用待测物对照品（已知：先用待测物对照品（已知CR）和内标（已）和内标（已知知CS）混样混样进入仪器，求出进入仪器，求出杂质对照品峰杂质对照品峰内标物峰内标物峰 6min 8min第二步第二步：再用待测物（未知：再用待测物（未知C CX X）和内标（已知）和内标（已知C CS S）混样混样进入仪器代入上公式：进入仪器代入上公式：内标物峰内标物峰杂质峰杂质峰 4min 6min 8min 外标法：外标法：待测物待测物 称量称量 配成溶液配成溶液 注入仪器注入仪器 色谱图色谱图 AX精密精密对照品对照品 称量称量 配成溶液配成溶液(CR)注入仪器注入仪器 色谱图色谱图 AR精密精密 （四）气相色谱法（四）气相色谱法(GC)GC)主要用于药物中挥发性的杂质检主要用于药物中挥发性的杂质检查（如药物中残留溶剂、农药残留量查（如药物中残留溶剂、农药残留量等），其检查方法与等），其检查方法与HPLCHPLC法相同。法相同。