第四章反义核酸与核酶课件

l第四章第四章 反义核酸与核酶反义核酸与核酶l反义药物反义药物主要内容主要内容一、反义核酸与反义技术一、反义核酸与反义技术一、反义核酸与反义技术一、反义核酸与反义技术uu反义核酸和反义技术概念反义核酸和反义技术概念反义核酸和反义技术概念反义核酸和反义技术概念uu反义核酸的基本原理反义核酸的基本原理反义核酸的基本原理反义核酸的基本原理uu反义核酸的种类反义核酸的种类反义核酸的种类反义核酸的种类uu反义核酸与反义技术的应用反义核酸与反义技术的应用反义核酸与反义技术的应用反义核酸与反义技术的应用二、核酶技术及其应用二、核酶技术及其应用二、核酶技术及其应用二、核酶技术及其应用uu核酶概述核酶概述核酶概述核酶概述uu核酶与核酶与核酶与核酶与RNARNA修复修复修复修复uu核酶技术在临床上的应用核酶技术在临床上的应用核酶技术在临床上的应用核酶技术在临床上的应用uu核酶技术面临的问题核酶技术面临的问题核酶技术面临的问题核酶技术面临的问题反义核酸和反义技术反义核酸和反义技术uu反义核酸反义核酸反义核酸反义核酸(antisense nucleic acid)(antisense nucleic acid)是一段与靶基因的某段序列是一段与靶基因的某段序列是一段与靶基因的某段序列是一段与靶基因的某段序列互补的天然存在或人工合成的核苷酸序列互补的天然存在或人工合成的核苷酸序列互补的天然存在或人工合成的核苷酸序列互补的天然存在或人工合成的核苷酸序列 它可通过碱基配对与细胞内核酸特异结合形成杂交分子，从而在它可通过碱基配对与细胞内核酸特异结合形成杂交分子，从而在它可通过碱基配对与细胞内核酸特异结合形成杂交分子，从而在它可通过碱基配对与细胞内核酸特异结合形成杂交分子，从而在转录和翻译水平调节靶基因的表达，具有合成方便、序列设计转录和翻译水平调节靶基因的表达，具有合成方便、序列设计转录和翻译水平调节靶基因的表达，具有合成方便、序列设计转录和翻译水平调节靶基因的表达，具有合成方便、序列设计简单、容易修饰、选择性高、亲和力高等特点简单、容易修饰、选择性高、亲和力高等特点简单、容易修饰、选择性高、亲和力高等特点简单、容易修饰、选择性高、亲和力高等特点uu反义核酸技术（反义核酸技术（反义核酸技术（反义核酸技术（antisense nucleic acids technology)antisense nucleic acids technology)是根据是根据是根据是根据核酸杂交原理设计的，以选择性地抑制特定基因表达为目的的核酸杂交原理设计的，以选择性地抑制特定基因表达为目的的核酸杂交原理设计的，以选择性地抑制特定基因表达为目的的核酸杂交原理设计的，以选择性地抑制特定基因表达为目的的一类核酸研究新技术一类核酸研究新技术一类核酸研究新技术一类核酸研究新技术 包括包括包括包括反义反义反义反义RNA(asRNA)RNA(asRNA)、反义、反义、反义、反义DNA(asDNA)DNA(asDNA)、核酶、核酶、核酶、核酶(Rz)(Rz)反义核酸的基本原理反义核酸的基本原理uu绝大多数绝大多数绝大多数绝大多数DNADNA由两条碱基互补的单链组成，生物信息以核苷酸由两条碱基互补的单链组成，生物信息以核苷酸由两条碱基互补的单链组成，生物信息以核苷酸由两条碱基互补的单链组成，生物信息以核苷酸不同排列顺序编码在不同排列顺序编码在不同排列顺序编码在不同排列顺序编码在DNADNA链上，基因组形成单顺反子结构链上，基因组形成单顺反子结构链上，基因组形成单顺反子结构链上，基因组形成单顺反子结构uu在在在在DNADNA双链上被转录为双链上被转录为双链上被转录为双链上被转录为RNARNA的链为正义链，与其相对应的链为的链为正义链，与其相对应的链为的链为正义链，与其相对应的链为的链为正义链，与其相对应的链为反义链反义链反义链反义链uu精心设计一段寡核苷酸与正义链互补，一般由精心设计一段寡核苷酸与正义链互补，一般由精心设计一段寡核苷酸与正义链互补，一般由精心设计一段寡核苷酸与正义链互补，一般由7 7到到到到3030个核苷酸组个核苷酸组个核苷酸组个核苷酸组成成成成，将会阻断基因转录；或将含有反义序列的载体导入细胞内，将会阻断基因转录；或将含有反义序列的载体导入细胞内，将会阻断基因转录；或将含有反义序列的载体导入细胞内，将会阻断基因转录；或将含有反义序列的载体导入细胞内，干扰特定基因表达干扰特定基因表达干扰特定基因表达干扰特定基因表达uu利用这一原理可以在基因位点、前体利用这一原理可以在基因位点、前体利用这一原理可以在基因位点、前体利用这一原理可以在基因位点、前体mRNAmRNA、mRNAmRNA及蛋白水及蛋白水及蛋白水及蛋白水平，通过干扰特定基因功能限制细胞增殖、分化和凋亡平，通过干扰特定基因功能限制细胞增殖、分化和凋亡平，通过干扰特定基因功能限制细胞增殖、分化和凋亡平，通过干扰特定基因功能限制细胞增殖、分化和凋亡反义基因治疗反义基因治疗 DNA DNA RNA RNA 反义RNA 阻断表达 uu利用人工合成的反义利用人工合成的反义利用人工合成的反义利用人工合成的反义RNARNA或或或或DNADNA导入靶细胞，控制细胞导入靶细胞，控制细胞导入靶细胞，控制细胞导入靶细胞，控制细胞的中间阶段使编码蛋白的基因不能转录为的中间阶段使编码蛋白的基因不能转录为的中间阶段使编码蛋白的基因不能转录为的中间阶段使编码蛋白的基因不能转录为mRNA mRNA 或阻断或阻断或阻断或阻断翻译相应蛋白翻译相应蛋白翻译相应蛋白翻译相应蛋白反义技术的两种技术路线反义技术的两种技术路线uu将表达与体内基因或将表达与体内基因或将表达与体内基因或将表达与体内基因或mRNAmRNA互补序列的基因转入体内，使细胞互补序列的基因转入体内，使细胞互补序列的基因转入体内，使细胞互补序列的基因转入体内，使细胞表达与目标基因互补的表达与目标基因互补的表达与目标基因互补的表达与目标基因互补的mRNAmRNA，从而阻断目标基因的表达，从而阻断目标基因的表达，从而阻断目标基因的表达，从而阻断目标基因的表达uu体外合成体外合成体外合成体外合成mRNAmRNA互补的核苷酸类似物，通过静脉注射等途径进互补的核苷酸类似物，通过静脉注射等途径进互补的核苷酸类似物，通过静脉注射等途径进互补的核苷酸类似物，通过静脉注射等途径进入细胞，特异性地与目标入细胞，特异性地与目标入细胞，特异性地与目标入细胞，特异性地与目标mRNAmRNA作用作用作用作用uu以第二种为主来介绍以第二种为主来介绍以第二种为主来介绍以第二种为主来介绍反义核酸的种类反义核酸的种类uu反义反义反义反义RNARNA：一类能与特异：一类能与特异：一类能与特异：一类能与特异mRNAmRNA互补的小分子质量的、可扩散互补的小分子质量的、可扩散互补的小分子质量的、可扩散互补的小分子质量的、可扩散的的的的DNADNA转录物，能够从翻译、转录和核酸复制水平上高度特异转录物，能够从翻译、转录和核酸复制水平上高度特异转录物，能够从翻译、转录和核酸复制水平上高度特异转录物，能够从翻译、转录和核酸复制水平上高度特异地抑制靶基因表达地抑制靶基因表达地抑制靶基因表达地抑制靶基因表达uu反义反义反义反义DNADNA：人工合成一小段反义寡核苷酸，与：人工合成一小段反义寡核苷酸，与：人工合成一小段反义寡核苷酸，与：人工合成一小段反义寡核苷酸，与DNADNA或或或或mRNAmRNA序序序序列互补结合，封闭靶基因表达（列互补结合，封闭靶基因表达（列互补结合，封闭靶基因表达（列互补结合，封闭靶基因表达（ASODNASODN）理论上认为寡核苷酸与其意义链互补，会象理论上认为寡核苷酸与其意义链互补，会象理论上认为寡核苷酸与其意义链互补，会象理论上认为寡核苷酸与其意义链互补，会象“封条封条封条封条”一样，阻一样，阻一样，阻一样，阻断断断断mRNAmRNA拼接、转录、翻译，下调特定基因表达拼接、转录、翻译，下调特定基因表达拼接、转录、翻译，下调特定基因表达拼接、转录、翻译，下调特定基因表达反义反义RNA的最初发现的最初发现uu反义反义反义反义RNARNA最先发现于原核细胞，是由最先发现于原核细胞，是由最先发现于原核细胞，是由最先发现于原核细胞，是由TomizarnaTomizarna在在在在19811981年对质粒年对质粒年对质粒年对质粒ColE1ColE1复制的研究过程中发现的复制的研究过程中发现的复制的研究过程中发现的复制的研究过程中发现的c-myc基因基因真核细胞中天然反义真核细胞中天然反义真核细胞中天然反义真核细胞中天然反义RNARNA调节调节调节调节uuc-mycc-myc基因是禽类髓细胞病毒基因是禽类髓细胞病毒基因是禽类髓细胞病毒基因是禽类髓细胞病毒(AMN)MC-29(AMN)MC-29的的的的V-mycV-myc的细胞同的细胞同的细胞同的细胞同源序列，与多种肿瘤发生发展有关源序列，与多种肿瘤发生发展有关源序列，与多种肿瘤发生发展有关源序列，与多种肿瘤发生发展有关uuSaitoSaito等研究发现，等研究发现，等研究发现，等研究发现，c-mycc-myc基因有基因有基因有基因有3 3个外显子，第一个外显子不个外显子，第一个外显子不个外显子，第一个外显子不个外显子，第一个外显子不编码蛋白质，它的序列与第二个外显子互补，通过反义编码蛋白质，它的序列与第二个外显子互补，通过反义编码蛋白质，它的序列与第二个外显子互补，通过反义编码蛋白质，它的序列与第二个外显子互补，通过反义RNARNA与与与与第二个外显子第二个外显子第二个外显子第二个外显子mRNAmRNA的碱基配对而抑制基因表达的碱基配对而抑制基因表达的碱基配对而抑制基因表达的碱基配对而抑制基因表达uu在人在人在人在人BurkittBurkitt淋巴瘤中发现淋巴瘤中发现淋巴瘤中发现淋巴瘤中发现c-mycc-myc基因失去了第一个外显子，从基因失去了第一个外显子，从基因失去了第一个外显子，从基因失去了第一个外显子，从而使而使而使而使c-mycc-myc基因表达失控基因表达失控基因表达失控基因表达失控uu由此可见，反义由此可见，反义由此可见，反义由此可见，反义RNARNA的负调节被解除是细胞恶性转变的原因之的负调节被解除是细胞恶性转变的原因之的负调节被解除是细胞恶性转变的原因之的负调节被解除是细胞恶性转变的原因之一一一一c-myc基因基因真核细胞中天然反义真核细胞中天然反义真核细胞中天然反义真核细胞中天然反义RNARNA调节调节调节调节c-mycc-myc互补互补互补互补RNARNAC-MYCC-MYC反义反义RNA的作用机制的作用机制uu作用于外显子和内含子的连接区，阻止作用于外显子和内含子的连接区，阻止作用于外显子和内含子的连接区，阻止作用于外显子和内含子的连接区，阻止mRNAmRNA前体的剪接前体的剪接前体的剪接前体的剪接uu反义反义反义反义RNARNA与与与与DNADNA结合时能阻止转录因子与结合时能阻止转录因子与结合时能阻止转录因子与结合时能阻止转录因子与DNADNA的结合，从而阻的结合，从而阻的结合，从而阻的结合，从而阻止特定基因的转录止特定基因的转录止特定基因的转录止特定基因的转录uu互补于特定互补于特定互补于特定互补于特定mRNAmRNA的非编码区，如的非编码区，如的非编码区，如的非编码区，如SDSD序列或核糖体结合位点及序列或核糖体结合位点及序列或核糖体结合位点及序列或核糖体结合位点及其上游区，影响核糖体结合，从而抑制翻译其上游区，影响核糖体结合，从而抑制翻译其上游区，影响核糖体结合，从而抑制翻译其上游区，影响核糖体结合，从而抑制翻译uu互补于特定互补于特定互补于特定互补于特定mRNAmRNA的编码区，抑制翻译或激活的编码区，抑制翻译或激活的编码区，抑制翻译或激活的编码区，抑制翻译或激活RNase HRNase H使使使使mRNAmRNA易被核酸酶降解易被核酸酶降解易被核酸酶降解易被核酸酶降解uu作用于靶作用于靶作用于靶作用于靶mRNAmRNA的的的的55端，阻止帽子结构形成，影响端，阻止帽子结构形成，影响端，阻止帽子结构形成，影响端，阻止帽子结构形成，影响mRNAmRNA的成熟的成熟的成熟的成熟uu作用于作用于作用于作用于PoIy APoIy A形成位点，阻止靶形成位点，阻止靶形成位点，阻止靶形成位点，阻止靶mRNAmRNA成熟及向胞浆内的转运成熟及向胞浆内的转运成熟及向胞浆内的转运成熟及向胞浆内的转运反义反义RNA的作用机制的作用机制DNApreRNARNAProteinm7G5pppAAAArRNA反义反义RNA的获得途径的获得途径uu化学会成法化学会成法化学会成法化学会成法：利用核酸合成仪直接合成反义利用核酸合成仪直接合成反义利用核酸合成仪直接合成反义利用核酸合成仪直接合成反义RNARNAuu体外转录法体外转录法体外转录法体外转录法：利用带有噬菌体利用带有噬菌体利用带有噬菌体利用带有噬菌体SP6SP6或或或或T7T7等启动子序列的质粒，等启动子序列的质粒，等启动子序列的质粒，等启动子序列的质粒，将特异基因的将特异基因的将特异基因的将特异基因的DNADNA片段反向插入其多克隆位点中，在片段反向插入其多克隆位点中，在片段反向插入其多克隆位点中，在片段反向插入其多克隆位点中，在RNARNA聚合聚合聚合聚合酶的作用下体外合成特异性反义酶的作用下体外合成特异性反义酶的作用下体外合成特异性反义酶的作用下体外合成特异性反义RNARNAuu细胞内转录法细胞内转录法细胞内转录法细胞内转录法：利用基因重组技术，在适宜启动子和转录终止利用基因重组技术，在适宜启动子和转录终止利用基因重组技术，在适宜启动子和转录终止利用基因重组技术，在适宜启动子和转录终止子之间反向插人一段靶基因，人工构建反义子之间反向插人一段靶基因，人工构建反义子之间反向插人一段靶基因，人工构建反义子之间反向插人一段靶基因，人工构建反义RNARNA表达载体表达载体表达载体表达载体(病病病病毒表达载体或质粒表达载体毒表达载体或质粒表达载体毒表达载体或质粒表达载体毒表达载体或质粒表达载体)，然后转染细胞并使之在细胞中稳，然后转染细胞并使之在细胞中稳，然后转染细胞并使之在细胞中稳，然后转染细胞并使之在细胞中稳定表达反义定表达反义定表达反义定表达反义RNARNA反义反义RNA的临床作用的临床作用uu抗病毒：抗病毒：抗病毒：抗病毒：uu将特定的病毒基因反向插入到表达性载体中，以构建反义将特定的病毒基因反向插入到表达性载体中，以构建反义将特定的病毒基因反向插入到表达性载体中，以构建反义将特定的病毒基因反向插入到表达性载体中，以构建反义RNARNA表达载体表达载体表达载体表达载体uu再将重组体导入真核细胞再将重组体导入真核细胞再将重组体导入真核细胞再将重组体导入真核细胞(病毒宿主细胞病毒宿主细胞病毒宿主细胞病毒宿主细胞)中表达特异性反义中表达特异性反义中表达特异性反义中表达特异性反义RNARNAuu从而抑制特异有害基因的表达或抑制病毒复制（疱疹病毒、流从而抑制特异有害基因的表达或抑制病毒复制（疱疹病毒、流从而抑制特异有害基因的表达或抑制病毒复制（疱疹病毒、流从而抑制特异有害基因的表达或抑制病毒复制（疱疹病毒、流感病毒、人类免疫缺陷病毒）感病毒、人类免疫缺陷病毒）感病毒、人类免疫缺陷病毒）感病毒、人类免疫缺陷病毒）uu抗肿瘤：抗肿瘤：抗肿瘤：抗肿瘤：uu设计出针对肿瘤细胞的癌基因、突变基因、非正常表达基因及设计出针对肿瘤细胞的癌基因、突变基因、非正常表达基因及设计出针对肿瘤细胞的癌基因、突变基因、非正常表达基因及设计出针对肿瘤细胞的癌基因、突变基因、非正常表达基因及某些肿瘤相关病毒的癌基因反义某些肿瘤相关病毒的癌基因反义某些肿瘤相关病毒的癌基因反义某些肿瘤相关病毒的癌基因反义RNARNAuu以阻断这些有害基因的表达，达到治疗肿瘤的目的以阻断这些有害基因的表达，达到治疗肿瘤的目的以阻断这些有害基因的表达，达到治疗肿瘤的目的以阻断这些有害基因的表达，达到治疗肿瘤的目的反义反义DNA与靶基因结合形式与靶基因结合形式uu寡核苷酸与双股寡核苷酸与双股寡核苷酸与双股寡核苷酸与双股DNADNA结合，形成三股螺旋结构，竞争抑制激活结合，形成三股螺旋结构，竞争抑制激活结合，形成三股螺旋结构，竞争抑制激活结合，形成三股螺旋结构，竞争抑制激活转录蛋白与基因启动子结合，发挥其生物活性转录蛋白与基因启动子结合，发挥其生物活性转录蛋白与基因启动子结合，发挥其生物活性转录蛋白与基因启动子结合，发挥其生物活性uu寡核苷酸与寡核苷酸与寡核苷酸与寡核苷酸与mRNAmRNA杂交形成了核糖核苷酸酶杂交形成了核糖核苷酸酶杂交形成了核糖核苷酸酶杂交形成了核糖核苷酸酶H(RNase H)H(RNase H)底物，底物，底物，底物，激活激活激活激活RNase HRNase H识别杂交体特异性地剪切杂交分子中的识别杂交体特异性地剪切杂交分子中的识别杂交体特异性地剪切杂交分子中的识别杂交体特异性地剪切杂交分子中的mRNAmRNARNase HRNase HASODNASODNmRNAmRNATFO反义寡聚核苷酸与反义寡聚核苷酸与反义寡聚核苷酸与反义寡聚核苷酸与mRNAmRNA特异性结合，特异性结合，特异性结合，特异性结合，阻断翻译过程阻断翻译过程阻断翻译过程阻断翻译过程ANTISENSE ANTISENSE TECHNOLOGIESTECHNOLOGIESGENOMICS BASED GENOMICS BASED DRUG DISCOVERYDRUG DISCOVERYPHARMACEUTICALSPHARMACEUTICALSMOLECULAR MOLECULAR DIAGNOSTICSDIAGNOSTICSGENE THERAPYGENE THERAPYDRUG DELIVERY DRUG DELIVERY SYSTEMSSYSTEMSRelation of antisense technologies to other segments of Relation of antisense technologies to other segments of biopharmaceutical industrybiopharmaceutical industry反义技术与反义核酸的应用反义技术与反义核酸的应用uu利用反义利用反义利用反义利用反义RNARNA的原癌基因失活疗法：的原癌基因失活疗法：的原癌基因失活疗法：的原癌基因失活疗法：阻止或抑制原癌基因的过度表达及抑制癌基因突变体阻止或抑制原癌基因的过度表达及抑制癌基因突变体阻止或抑制原癌基因的过度表达及抑制癌基因突变体阻止或抑制原癌基因的过度表达及抑制癌基因突变体mRNAmRNA成熟成熟成熟成熟uu原癌基因原癌基因原癌基因原癌基因uu 调控细胞生长，增殖与分化调控细胞生长，增殖与分化调控细胞生长，增殖与分化调控细胞生长，增殖与分化uu 正常情况下，表达受严格控制正常情况下，表达受严格控制正常情况下，表达受严格控制正常情况下，表达受严格控制uu 一旦调节失控，基因产物（生长因子，生长因子受体，胞内外传递信一旦调节失控，基因产物（生长因子，生长因子受体，胞内外传递信一旦调节失控，基因产物（生长因子，生长因子受体，胞内外传递信一旦调节失控，基因产物（生长因子，生长因子受体，胞内外传递信 号等癌蛋白）分泌过剩，细胞恶性增生，致癌号等癌蛋白）分泌过剩，细胞恶性增生，致癌号等癌蛋白）分泌过剩，细胞恶性增生，致癌号等癌蛋白）分泌过剩，细胞恶性增生，致癌uu 治疗方法治疗方法治疗方法治疗方法uu 根据已知癌基因的核苷酸序列合成反义根据已知癌基因的核苷酸序列合成反义根据已知癌基因的核苷酸序列合成反义根据已知癌基因的核苷酸序列合成反义RNARNAuu 相应的反义寡聚核苷酸与肿瘤癌基因活化表达的相应的反义寡聚核苷酸与肿瘤癌基因活化表达的相应的反义寡聚核苷酸与肿瘤癌基因活化表达的相应的反义寡聚核苷酸与肿瘤癌基因活化表达的mRNAmRNA的起始翻译位的起始翻译位的起始翻译位的起始翻译位 点结合成点结合成点结合成点结合成RNA/RNARNA/RNA双链体双链体双链体双链体uu 双链体阻止启动子与核糖体结合，或核糖体沿双链体阻止启动子与核糖体结合，或核糖体沿双链体阻止启动子与核糖体结合，或核糖体沿双链体阻止启动子与核糖体结合，或核糖体沿mRNAmRNA上移，抑制翻译上移，抑制翻译上移，抑制翻译上移，抑制翻译反义反义RNA的应用（一）的应用（一）反义反义RNA的应用（二）的应用（二）反义反义RNA的应用（二）的应用（二）反义反义RNA的应用（二）的应用（二）uu抗抗抗抗HIV-lHIV-l的作用的作用的作用的作用 ：从翻译水平封闭基因表达，并干扰：从翻译水平封闭基因表达，并干扰：从翻译水平封闭基因表达，并干扰：从翻译水平封闭基因表达，并干扰mRNAmRNA的剪切、加工而实的剪切、加工而实的剪切、加工而实的剪切、加工而实现抗病毒作用现抗病毒作用现抗病毒作用现抗病毒作用 uutattat为为为为HIV-lHIV-l重要的调节基因，编码反式激活因子重要的调节基因，编码反式激活因子重要的调节基因，编码反式激活因子重要的调节基因，编码反式激活因子 TatTat蛋白蛋白蛋白蛋白uu在逆转录病毒启动子在逆转录病毒启动子在逆转录病毒启动子在逆转录病毒启动子LTRLTR之后连接反义之后连接反义之后连接反义之后连接反义tattat与多聚与多聚与多聚与多聚TARTAR的构建物的构建物的构建物的构建物(LTR-25TAR-LTR-25TAR-AS-TAT)AS-TAT)，具有反义具有反义具有反义具有反义tattat及及及及TARTAR诱饵的双重作用诱饵的双重作用诱饵的双重作用诱饵的双重作用uu由于由于由于由于LTRLTR启动子受启动子受启动子受启动子受TatTat蛋白反式激活，使蛋白反式激活，使蛋白反式激活，使蛋白反式激活，使tattat在在在在HIV-lHIV-l感染的细胞中得以高表达感染的细胞中得以高表达感染的细胞中得以高表达感染的细胞中得以高表达uu将这种外源基因导入将这种外源基因导入将这种外源基因导入将这种外源基因导入Molt-3 TMolt-3 T细胞系、细胞系、细胞系、细胞系、CEM-SS TCEM-SS T细胞系及健康人外周血单个细胞系及健康人外周血单个细胞系及健康人外周血单个细胞系及健康人外周血单个核细胞核细胞核细胞核细胞(PBMCs)PBMCs)，对实验及临床分离病毒株均有抑制作用对实验及临床分离病毒株均有抑制作用对实验及临床分离病毒株均有抑制作用对实验及临床分离病毒株均有抑制作用uugaggag是是是是HIV-1HIV-1的结构基因，编码的结构基因，编码的结构基因，编码的结构基因，编码p24p24等病毒结构蛋白等病毒结构蛋白等病毒结构蛋白等病毒结构蛋白uuVeresVeres等构建了逆转录病毒载体，在细胞内表达互补于等构建了逆转录病毒载体，在细胞内表达互补于等构建了逆转录病毒载体，在细胞内表达互补于等构建了逆转录病毒载体，在细胞内表达互补于gaggag区不同长度的反义区不同长度的反义区不同长度的反义区不同长度的反义RNA(225-1225nt)RNA(225-1225nt)uu在在在在CEM-SS TCEM-SS T细胞及外周血细胞及外周血细胞及外周血细胞及外周血CD4CD4细胞均有抑制细胞均有抑制细胞均有抑制细胞均有抑制HIV-lHIV-l复制的作用复制的作用复制的作用复制的作用uu长片段反义长片段反义长片段反义长片段反义RNARNA的抗的抗的抗的抗HIV-lHIV-l作用更好，可能由于它能与不同种的作用更好，可能由于它能与不同种的作用更好，可能由于它能与不同种的作用更好，可能由于它能与不同种的HIV-l RNAHIV-l RNA结结结结合而限制了病毒的逃逸合而限制了病毒的逃逸合而限制了病毒的逃逸合而限制了病毒的逃逸 部分反义药物部分反义药物OligoOligoCompanyCompanyStatus/RemarksStatus/RemarksISIS 3521ISIS 3521ISIS 2503ISIS 2503ISIS 5132ISIS 5132AP12009AP12009Oncomyg NGOncomyg NGAVI 4557AVI 4557GenasenseGenasenseGEM 231GEM 231GTI 2040GTI 2040GTI 2501GTI 2501LEafAONLEafAONPAN 346PAN 346HERZYMEHERZYMEANGIOZYMEANGIOZYMEISIS PharmaISIS PharmaISIS PharmaISIS PharmaISIS PharmaISIS PharmaAntisense PharmaAntisense PharmaAVI BIoPharmaAVI BIoPharmaAVI BIoPharmaAVI BIoPharmaGentaGentaHybridonHybridonLorus TherapeuticsLorus TherapeuticsLorus TherapeuticsLorus TherapeuticsNeoPharmNeoPharmPanacea PharmaPanacea PharmaRibozyme PharmaRibozyme PharmaRibozyme PharmaRibozyme PharmaPIII(Affinitak)PIII(Affinitak)PIIIPIIIPIIIPIII针对肿瘤的反义药物针对肿瘤的反义药物针对其他疾病的反义药物针对其他疾病的反义药物OligoOligoCompanyCompanyIndicationsIndicationsResten NGResten NGE2F DecoyE2F DecoyAVI BioPharmaAVI BioPharmaCorgentechCorgentechCardiovascular disorderCardiovascular disorderISIS 2302ISIS 2302ISIS 104838ISIS 104838AVI 4014AVI 4014ISIS PharmaISIS PharmaISIS PharmaISIS PharmaAVI BIoPharmaAVI BIoPharmaAutoimmune&InflammatoryAutoimmune&InflammatoryDurasonDurasonEpiGenesisEpiGenesisRespiratory disorderRespiratory disorderAVI 4126AVI 4126AVI BioPharmaAVI BioPharmaUrological DiseaseUrological DiseaseISIS 14803ISIS 14803HEPTAZYMEHEPTAZYMEHepBzymeHepBzymePNAbioticsPNAbioticsNeuBioticsNeuBioticsISIS PharmaISIS PharmaRibozyme PharmaRibozyme PharmaRibozyme PharmaRibozyme PharmaPanthecoPanthecoAVI BiopharmaAVI BiopharmaInfectious DiseaseInfectious DiseaseGEM 92GEM 92HGTV43HGTV43HybridonHybridonEnzoEnzoAIDS&Related diseaseAIDS&Related disease第一个反义药物第一个反义药物福米韦生福米韦生uuFomivirsenFomivirsen（ISIS2922ISIS2922）是）是）是）是FDAFDA批准上市的第批准上市的第批准上市的第批准上市的第1 1个反义药物个反义药物个反义药物个反义药物uu商品名商品名商品名商品名VitraveneVitraveneuu美国美国美国美国ISIS PharmaISIS Pharma公司研制公司研制公司研制公司研制uu瑞士瑞士瑞士瑞士Ciba Vision OphthalmicsCiba Vision Ophthalmics公司申请公司申请公司申请公司申请uu19981998年年年年8 8月在美国首次上市月在美国首次上市月在美国首次上市月在美国首次上市uu核苷酸序列为核苷酸序列为核苷酸序列为核苷酸序列为5-GCGTTTGCTCTTCTTCTTGCG-35-GCGTTTGCTCTTCTTCTTGCG-3uu硫代磷酸化修饰硫代磷酸化修饰硫代磷酸化修饰硫代磷酸化修饰uu主要用于治疗艾滋病主要用于治疗艾滋病主要用于治疗艾滋病主要用于治疗艾滋病(AIDS)(AIDS)病人并发的巨细胞病毒病人并发的巨细胞病毒病人并发的巨细胞病毒病人并发的巨细胞病毒(CMV)(CMV)性视网膜炎性视网膜炎性视网膜炎性视网膜炎第一个反义药物第一个反义药物福米韦生福米韦生uu1 1 药效学药效学药效学药效学uu1.1 1.1 抗病毒作用机制抗病毒作用机制抗病毒作用机制抗病毒作用机制 主要依赖于反义作用，福米韦生与主要依赖于反义作用，福米韦生与主要依赖于反义作用，福米韦生与主要依赖于反义作用，福米韦生与CMV mRNACMV mRNA特异序列互补结合，特异序列互补结合，特异序列互补结合，特异序列互补结合，被被被被RNARNA酶酶酶酶H H识别，并使识别，并使识别，并使识别，并使mRNAmRNA水解失活水解失活水解失活水解失活 抑制抑制抑制抑制CMVCMV进入宿主细胞是序列非依赖性的非反义作用进入宿主细胞是序列非依赖性的非反义作用进入宿主细胞是序列非依赖性的非反义作用进入宿主细胞是序列非依赖性的非反义作用uu1.2 1.2 抗病毒活性抗病毒活性抗病毒活性抗病毒活性 对人类对人类对人类对人类CMVCMV病毒株病毒株病毒株病毒株AD169AD169的的的的EC50EC50为为为为0.37moL0.37moL 此此此此EC50EC50为更昔洛韦（为更昔洛韦（为更昔洛韦（为更昔洛韦（ganciclovirganciclovir）的）的）的）的l30l30190190uu1.3 1.3 耐药性耐药性耐药性耐药性 耐受高浓度福米韦生的病毒突变株与福米韦生互补的基因区并无改变，耐受高浓度福米韦生的病毒突变株与福米韦生互补的基因区并无改变，耐受高浓度福米韦生的病毒突变株与福米韦生互补的基因区并无改变，耐受高浓度福米韦生的病毒突变株与福米韦生互补的基因区并无改变，这表明耐药性不是互补基因区发生改变而引起的这表明耐药性不是互补基因区发生改变而引起的这表明耐药性不是互补基因区发生改变而引起的这表明耐药性不是互补基因区发生改变而引起的第一个反义药物第一个反义药物福米韦生福米韦生uu2 2 药动学药动学药动学药动学uu2.1 2.1 兔体内药动学兔体内药动学兔体内药动学兔体内药动学uu以以以以1414C C标记的福米韦生单次标记的福米韦生单次标记的福米韦生单次标记的福米韦生单次6666g g剂量，玻璃体液中消除剂量，玻璃体液中消除剂量，玻璃体液中消除剂量，玻璃体液中消除t1/2t1/2为为为为62h62huu给药给药给药给药1010天后，仍对天后，仍对天后，仍对天后，仍对CMVCMV复制有抑制作用，有复制有抑制作用，有复制有抑制作用，有复制有抑制作用，有22%22%的福米韦生存在，其的福米韦生存在，其的福米韦生存在，其的福米韦生存在，其余余余余78%78%则降解为短链代谢物则降解为短链代谢物则降解为短链代谢物则降解为短链代谢物uu视网膜中消除视网膜中消除视网膜中消除视网膜中消除t1/2t1/2约为约为约为约为79h79huu2.2 2.2 猴体内药动学猴体内药动学猴体内药动学猴体内药动学uu玻璃体液药物浓度与剂量曲线几乎为直线关系玻璃体液药物浓度与剂量曲线几乎为直线关系玻璃体液药物浓度与剂量曲线几乎为直线关系玻璃体液药物浓度与剂量曲线几乎为直线关系uu峰值浓度出现在给药峰值浓度出现在给药峰值浓度出现在给药峰值浓度出现在给药2 23 3天后，天后，天后，天后，1414天后基本检测不到天后基本检测不到天后基本检测不到天后基本检测不到uu在每周或每在每周或每在每周或每在每周或每2 2周玻璃体内注入周玻璃体内注入周玻璃体内注入周玻璃体内注入1111、5757和和和和115g115g后，玻璃体液中未发现药后，玻璃体液中未发现药后，玻璃体液中未发现药后，玻璃体液中未发现药物累积现象物累积现象物累积现象物累积现象uu但多次注射后，视网膜上出现药物累积现象但多次注射后，视网膜上出现药物累积现象但多次注射后，视网膜上出现药物累积现象但多次注射后，视网膜上出现药物累积现象uu福米韦生福米韦生福米韦生福米韦生115g115g单次给药，在视网膜中消除单次给药，在视网膜中消除单次给药，在视网膜中消除单次给药，在视网膜中消除t1/2t1/2为为为为78h78h第一个反义药物第一个反义药物福米韦生福米韦生uu3 3 临床疗效临床疗效临床疗效临床疗效uu前前前前3 3周每周福米韦生周每周福米韦生周每周福米韦生周每周福米韦生165g165g玻璃体内注射，以后每玻璃体内注射，以后每玻璃体内注射，以后每玻璃体内注射，以后每2 2周给药周给药周给药周给药1 1次，用药组次，用药组次，用药组次，用药组和对照组病情进展时间中位数分别为和对照组病情进展时间中位数分别为和对照组病情进展时间中位数分别为和对照组病情进展时间中位数分别为7171和和和和1414天天天天uu福米韦生可以降低病人体内的福米韦生可以降低病人体内的福米韦生可以降低病人体内的福米韦生可以降低病人体内的CMVCMV活性，呈剂量活性，呈剂量活性，呈剂量活性，呈剂量-效应关系效应关系效应关系效应关系uu病情发展到威胁视力的病人，使用福米韦生后症状有所好转，病情进病情发展到威胁视力的病人，使用福米韦生后症状有所好转，病情进病情发展到威胁视力的病人，使用福米韦生后症状有所好转，病情进病情发展到威胁视力的病人，使用福米韦生后症状有所好转，病情进展明显延缓展明显延缓展明显延缓展明显延缓uu4 4 不良反应不良反应不良反应不良反应uu最常见不良反应是暂时性眼内压升高和轻、中度眼前、后房炎症反应最常见不良反应是暂时性眼内压升高和轻、中度眼前、后房炎症反应最常见不良反应是暂时性眼内压升高和轻、中度眼前、后房炎症反应最常见不良反应是暂时性眼内压升高和轻、中度眼前、后房炎症反应uu所有研究对象均未发生视网膜剥脱和全身毒性反应所有研究对象均未发生视网膜剥脱和全身毒性反应所有研究对象均未发生视网膜剥脱和全身毒性反应所有研究对象均未发生视网膜剥脱和全身毒性反应uu高剂量可引起少数病人外周视网膜色素沉着及周边视力下降高剂量可引起少数病人外周视网膜色素沉着及周边视力下降高剂量可引起少数病人外周视网膜色素沉着及周边视力下降高剂量可引起少数病人外周视网膜色素沉着及周边视力下降uu与眼外科手术相比，玻璃体内注射发生出血、眼内炎和视网膜剥脱的与眼外科手术相比，玻璃体内注射发生出血、眼内炎和视网膜剥脱的与眼外科手术相比，玻璃体内注射发生出血、眼内炎和视网膜剥脱的与眼外科手术相比，玻璃体内注射发生出血、眼内炎和视网膜剥脱的风险要小得多风险要小得多风险要小得多风险要小得多第一个反义药物第一个反义药物福米韦生福米韦生uu5 5 适应证和禁忌证适应证和禁忌证适应证和禁忌证适应证和禁忌证uu福米韦生为二线治疗药物，适用于对其他治疗措施不能耐受或没有效福米韦生为二线治疗药物，适用于对其他治疗措施不能耐受或没有效福米韦生为二线治疗药物，适用于对其他治疗措施不能耐受或没有效福米韦生为二线治疗药物，适用于对其他治疗措施不能耐受或没有效果或有禁忌的病人；禁用于果或有禁忌的病人；禁用于果或有禁忌的病人；禁用于果或有禁忌的病人；禁用于2 24 4周内使用西多福韦（周内使用西多福韦（周内使用西多福韦（周内使用西多福韦（cidofovircidofovir）治疗）治疗）治疗）治疗的病人，以免增加发生眼内炎的危险性的病人，以免增加发生眼内炎的危险性的病人，以免增加发生眼内炎的危险性的病人，以免增加发生眼内炎的危险性uu6 6 与治疗与治疗与治疗与治疗CMVCMV视网膜炎的其他药物比较视网膜炎的其他药物比较视网膜炎的其他药物比较视网膜炎的其他药物比较uu更昔洛韦、西多福韦和膦甲酸钠是更昔洛韦、西多福韦和膦甲酸钠是更昔洛韦、西多福韦和膦甲酸钠是更昔洛韦、西多福韦和膦甲酸钠是CMVCMV抑制剂，而非杀死剂；具有交抑制剂，而非杀死剂；具有交抑制剂，而非杀死剂；具有交抑制剂，而非杀死剂；具有交叉耐药性；可产生肾毒性；插管给药、植入制剂费用昂贵、重复手术叉耐药性；可产生肾毒性；插管给药、植入制剂费用昂贵、重复手术叉耐药性；可产生肾毒性；插管给药、植入制剂费用昂贵、重复手术叉耐药性；可产生肾毒性；插管给药、植入制剂费用昂贵、重复手术以及视网膜剥脱发生率高（以及视网膜剥脱发生率高（以及视网膜剥脱发生率高（以及视网膜剥脱发生率高（28%28%）使应用受限）使应用受限）使应用受限）使应用受限uu福米韦生具有阻止病毒复制，疗效持久、用药次数少，不良反应少而福米韦生具有阻止病毒复制，疗效持久、用药次数少，不良反应少而福米韦生具有阻止病毒复制，疗效持久、用药次数少，不良反应少而福米韦生具有阻止病毒复制，疗效持久、用药次数少，不良反应少而轻，局部玻璃体内注射给药优于其他上述提及的给药方法轻，局部玻璃体内注射给药优于其他上述提及的给药方法轻，局部玻璃体内注射给药优于其他上述提及的给药方法轻，局部玻璃体内注射给药优于其他上述提及的给药方法uu7 7 展望展望展望展望受体介导的转移技术受体介导的转移技术uu受体介导受体介导受体介导受体介导DNADNA转运技术的启发实现转运技术的启发实现转运技术的启发实现转运技术的启发实现DNADNA和和和和RNARNA的转运的转运的转运的转运uu例：脱唾液酸血清类粘蛋白例：脱唾液酸血清类粘蛋白例：脱唾液酸血清类粘蛋白例：脱唾液酸血清类粘蛋白(ASGP)(ASGP)受体受体受体受体 唾液酸血清类粘蛋白唾液酸血清类粘蛋白唾液酸血清类粘蛋白唾液酸血清类粘蛋白 唾液酸唾液酸唾液酸唾液酸 ASGPASGP ASGPASGP +PL+PL（多聚赖氨酸）（多聚赖氨酸）（多聚赖氨酸）（多聚赖氨酸）ASGP-PLASGP-PL复合物复合物复合物复合物 反义反义反义反义RNARNA +ASGP-PL+ASGP-PL复合物复合物复合物复合物 ASGP-PL-ASGP-PL-反义反义反义反义RNARNA复合物复合物复合物复合物 ASGP-PL-ASGP-PL-反义反义反义反义RNARNA复合物复合物复合物复合物 肝细胞表面肝细胞表面肝细胞表面肝细胞表面ASGPASGP受体识别受体识别受体识别受体识别 吞噬吞噬吞噬吞噬 释放释放释放释放 发挥作用发挥作用发挥作用发挥作用uu优点：优点：优点：优点：专一性强，抗降解能力强专一性强，抗降解能力强专一性强，抗降解能力强专一性强，抗降解能力强以聚合物微球为载体的输送系统以聚合物微球为载体的输送系统 u目前研究最多的聚合物微球是聚丙交酯及乳酸一羟乙酸（目前研究最多的聚合物微球是聚丙交酯及乳酸一羟乙酸（LA-GA）u以丙交酯和乙交酯为单体形成的共聚物，降解属于水解反应以丙交酯和乙交酯为单体形成的共聚物，降解属于水解反应u产物均为人体正常代谢物，降解时间取决于两种单体的配比和产物均为人体正常代谢物，降解时间取决于两种单体的配比和聚合物的分子量聚合物的分子量u构成的结合复合体具有潜在的转运反义核苷酸和核酶的作用构成的结合复合体具有潜在的转运反义核苷酸和核酶的作用 核酶技术及其应用核酶技术及其应用uu核酶核酶核酶核酶(Ribozyme)(Ribozyme)一种具有核酸内切酶活性的一种具有核酸内切酶活性的一种具有核酸内切酶活性的一种具有核酸内切酶活性的RNARNA分子分子分子分子，可特，可特，可特，可特异性地切割靶异性地切割靶异性地切割靶异性地切割靶RNARNA序列，具有解离后重复切割相同靶序列，具有解离后重复切割相同靶序列，具有解离后重复切割相同靶序列，具有解离后重复切割相同靶分子的能力分子的能力分子的能力分子的能力核酶发展简史核酶发展简史uu19681968年，年，年，年，Francis CrickFrancis Crick在他的论文在他的论文在他的论文在他的论文“基因密码的起源基因密码的起源基因密码的起源基因密码的起源”一文中提到：一文中提到：一文中提到：一文中提到：“可能第一个酶是具有复制能力的可能第一个酶是具有复制能力的可能第一个酶是具有复制能力的可能第一个酶是具有复制能力的RNA”RNA”，没有人予以注意，没有人予以注意，没有人予以注意，没有人予以注意uu19871987年，第年，第年，第年，第5252届冷泉港定量生物学国际讨论会上，届冷泉港定量生物学国际讨论会上，届冷泉港定量生物学国际讨论会上，届冷泉港定量生物学国际讨论会上，Alan Alan WeinerWeiner做会议总结时重复了做会议总结时重复了做会议总结时重复了做会议总结时重复了2020年前年前年前年前Francis CrickFrancis Crick的话，的话，的话，的话，会议注意力已集中到最近发现的具有酶活性会议注意力已集中到最近发现的具有酶活性会议注意力已集中到最近发现的具有酶活性会议注意力已集中到最近发现的具有酶活性RNARNA分子上分子上分子上分子上uu19891989年，诺贝尔化学奖授予了分别独立地发现具有酶活年，诺贝尔化学奖授予了分别独立地发现具有酶活年，诺贝尔化学奖授予了分别独立地发现具有酶活年，诺贝尔化学奖授予了分别独立地发现具有酶活性的性的性的性的RNARNA分子的分子的分子的分子的Thomas.R.CechThomas.R.Cech（Colorado Colorado UniversityUniversity）Sidney AltmanSidney Altman（Yale UniversityYale University）Thomas R.Cechuu切赫，美国人切赫，美国人切赫，美国人切赫，美国人uu因发现因发现因发现因发现RNARNA生物催化作用与生物催化作用与生物催化作用与生物催化作用与S.AltmanS.Altman同获同获同获同获19891989年诺贝尔化学奖年诺贝尔化学奖年诺贝尔化学奖年诺贝尔化学奖uu独立发现独立发现独立发现独立发现RNARNA不仅被动地传递遗传信不仅被动地传递遗传信不仅被动地传递遗传信不仅被动地传递遗传信息，还能催化细胞内生命所必需的化息，还能催化细胞内生命所必需的化息，还能催化细胞内生命所必需的化息，还能催化细胞内生命所必需的化学反应，学反应，学反应，学反应，19821982年公布其研究结果，年公布其研究结果，年公布其研究结果，年公布其研究结果，19831983年证实年证实年证实年证实RNARNA的酶活动的酶活动的酶活动的酶活动uu此前，人们认为仅蛋白质才能起酶的作此前，人们认为仅蛋白质才能起酶的作此前，人们认为仅蛋白质才能起酶的作此前，人们认为仅蛋白质才能起酶的作用用用用核酶的发现核酶的发现uu研究目的：研究目的：研究目的：研究目的：r rRNARNA中一些无意义的序列，或中一些无意义的序列，或中一些无意义的序列，或中一些无意义的序列，或内含子内含子内含子内含子(intronintron)，如何从，如何从，如何从，如何从RNARNA分子中剪切下来？分子中剪切下来？分子中剪切下来？分子中剪切下来？uu研究对象：研究对象：研究对象：研究对象：原生动物四膜虫原生动物四膜虫原生动物四膜虫原生动物四膜虫(Tetrahymena ThermophilaTetrahymena Thermophila)，只含一种，只含一种，只含一种，只含一种RNARNA，除，除，除，除r rRNARNA外还有一个由外还有一个由外还有一个由外还有一个由413413个核苷酸组成的插入序列个核苷酸组成的插入序列个核苷酸组成的插入序列个核苷酸组成的插入序列(interveningsequencinterveningsequenc，IVSIVS)uu研究发现：研究发现：研究发现：研究发现：转录产物转录产物转录产物转录产物rRNArRNA前体很不稳定，在鸟苷和前体很不稳定，在鸟苷和前体很不稳定，在鸟苷和前体很不稳定，在鸟苷和Mg2+Mg2+存在下切除存在下切除存在下切除存在下切除自身的自身的自身的自身的IVSIVS，使两个外显子拼接起来，变成成熟的使两个外显子拼接起来，变成成熟的使两个外显子拼接起来，变成成熟的使两个外显子拼接起来，变成成熟的rRNArRNA分子。催化反分子。催化反分子。催化反分子。催化反应是在无任何蛋白质酶存在下发生的，称为应是在无任何蛋白质酶存在下发生的，称为应是在无任何蛋白质酶存在下发生的，称为应是在无任何蛋白质酶存在下发生的，称为自我剪接自我剪接自我剪接自我剪接uu研究结论：研究结论：研究结论：研究结论：I IVSVS具有类似蛋白酶的功能，能够打断及重建磷酸二脂键具有类似蛋白酶的功能，能够打断及重建磷酸二脂键具有类似蛋白酶的功能，能够打断及重建磷酸二脂键具有类似蛋白酶的功能，能够打断及重建磷酸二脂键 r rRNARNA前体能靠自己完成剪接过程前体能靠自己完成剪接过程前体能靠自己完成剪接过程前体能靠自己完成剪接过程，在一定条件下在一定条件下在一定条件下在一定条件下按一定方式盘绕，进按一定方式盘绕，进按一定方式盘绕，进按一定方式盘绕，进而切割自己，以后再把保留部分连接起来。可以催化自由底物的具有酶而切割自己，以后再把保留部分连接起来。可以催化自由底物的具有酶而切割自己，以后再把保留部分连接起来。可以催化自由底物的具有酶而切割自己，以后再把保留部分连接起来。可以催化自由底物的具有酶活性的活性的活性的活性的RNARNA RNARNA分子具有自身断裂的催化作用，以及酶活性的另一个重要方面即分子具有自身断裂的催化作用，以及酶活性的另一个重要方面即分子具有自身断裂的催化作用，以及酶活性的另一个重要方面即分子具有自身断裂的催化作用，以及酶活性的另一个重要方面即催化其他分子的反应催化其他分子的反应催化其他分子的反应催化其他分子的反应Sidney Altman uu奥尔特曼（奥尔特曼（奥尔特曼（奥尔特曼（19391939）美国人美国人美国人美国人uu因发现因发现因发现因发现RNARNA的生物催化作用而获的生物催化作用而获的生物催化作用而获的生物催化作用而获19891989年诺贝尔化学奖年诺贝尔化学奖年诺贝尔化学奖年诺贝尔化学奖uu19781978年奥尔特曼发现了核糖核酸年奥尔特曼发现了核糖核酸年奥尔特曼发现了核糖核酸年奥尔特曼发现了核糖核酸(RNA)(RNA)自身具有的生物催化作用自身具有的生物催化作用自身具有的生物催化作用自身具有的生物催化作用uu不仅为探索不仅为探索不仅为探索不仅为探索RNARNA的复制能力提供了的复制能力提供了的复制能力提供了的复制能力提供了线索，而且说明了最早的生命物质是线索，而且说明了最早的生命物质是线索，而且说明了最早的生命物质是线索，而且说明了最早的生命物质是同时具有生物催化功能和遗传功能的同时具有生物催化功能和遗传功能的同时具有生物催化功能和遗传功能的同时具有生物催化功能和遗传功能的RNARNA，打破了蛋白质是生物起源的，打破了蛋白质是生物起源的，打破了蛋白质是生物起源的，打破了蛋白质是生物起源的定论定论定论定论S.Altman的研究工作的研究工作uu研究目的：研究目的：研究目的：研究目的：t-RNAt-RNA分子的剪接过程分子的剪接过程分子的剪接过程分子的剪接过程 uu研究发现：研究发现：研究发现：研究发现：在较高浓度的镁离子和适量精氨酸参与下，核酸酶在较高浓度的镁离子和适量精氨酸参与下，核酸酶在较高浓度的镁离子和适量精氨酸参与下，核酸酶在较高浓度的镁离子和适量精氨酸参与下，核酸酶P P（ribonuclease Pribonuclease P，RNase P RNase P