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资料仅供参考,不当之处，请联系改正。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。实验一实验一 新城疫血凝与血凝抑制试验新城疫血凝与血凝抑制试验目的意义：目的意义：目的意义：目的意义：掌握血凝试验（掌握血凝试验（HA）与血凝抑制试验（）与血凝抑制试验（HAI）的基本方法；的基本方法；体体会会HA与与HAI在在新新城城疫疫病病毒毒及及其其它它病病毒毒诊诊断断和和鉴鉴定中的应用。定中的应用。基本原理：基本原理：基本原理：基本原理：许许多多病病毒毒表表面面具具血血凝凝素素，具具有有凝凝集集某某些些动动物物或或人人红红细细胞胞的的特特性性，称称为为血血凝凝现现象象，可可用用于于鉴鉴定定病病毒毒。血血凝凝现现象象可可以以被被特特异异性性抗抗体体所所抑抑制制，称称为为血血凝凝抑抑制制现现象象，利利用用这这种种特特性性可可进进行行血血清清学学试试验验，称为血凝抑制试验。称为血凝抑制试验。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。器材及试剂器材及试剂器材及试剂器材及试剂:待检病毒待检病毒待检病毒待检病毒:鸡新城疫病毒鸡胚尿囊液；鸡新城疫病毒鸡胚尿囊液；鸡新城疫病毒鸡胚尿囊液；鸡新城疫病毒鸡胚尿囊液；待检血清：抗鸡新城疫病病毒阳性血清；待检血清：抗鸡新城疫病病毒阳性血清；待检血清：抗鸡新城疫病病毒阳性血清；待检血清：抗鸡新城疫病病毒阳性血清；生生生生理理理理盐盐盐盐水水水水、1%1%鸡鸡鸡鸡红红红红细细细细胞胞胞胞、9696孔孔孔孔V V形形形形微微微微量量量量血血血血凝凝凝凝板板板板、加样器等。加样器等。加样器等。加样器等。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。（一）血凝试验（一）血凝试验（一）血凝试验（一）血凝试验（HAHA）：）：）：）：取取取取9696孔板，按以下步孔板，按以下步孔板，按以下步孔板，按以下步 骤操作：骤操作：骤操作：骤操作：1 1、第一排、第一排、第一排、第一排1-121-12孔各加生理盐水孔各加生理盐水孔各加生理盐水孔各加生理盐水50ul50ul，第二排，第二排，第二排，第二排1-121-12 孔加生理盐水孔加生理盐水孔加生理盐水孔加生理盐水50ul50ul为红细胞对照；为红细胞对照；为红细胞对照；为红细胞对照；2 2、吸、吸、吸、吸50ul50ul病毒液于第一排第病毒液于第一排第病毒液于第一排第病毒液于第一排第1 1孔，混匀后取孔，混匀后取孔，混匀后取孔，混匀后取50ul50ul 至第至第至第至第2 2孔，依次稀释至第孔，依次稀释至第孔，依次稀释至第孔，依次稀释至第1212孔，弃去孔，弃去孔，弃去孔，弃去50ul50ul，各，各，各，各 孔经倍比稀释后稀释度依次为孔经倍比稀释后稀释度依次为孔经倍比稀释后稀释度依次为孔经倍比稀释后稀释度依次为2 2-1-122-12-12。实验步骤实验步骤资料仅供参考,不当之处，请联系改正。3 3、第一排、第一排、第一排、第一排1-121-12孔及第二排孔及第二排孔及第二排孔及第二排1-121-12孔各加孔各加孔各加孔各加1%1%鸡红细鸡红细鸡红细鸡红细 胞胞胞胞50ul50ul，微型震荡器震荡，微型震荡器震荡，微型震荡器震荡，微型震荡器震荡2min2min混匀。混匀。混匀。混匀。4 4、室温静置、室温静置、室温静置、室温静置10-3010-30分，观察结果。分，观察结果。分，观察结果。分，观察结果。5 5、结结结结果果果果判判判判定定定定：红红红红细细细细胞胞胞胞对对对对照照照照组组组组红红红红细细细细胞胞胞胞完完完完全全全全沉沉沉沉降降降降，以以以以试试试试验验验验排排排排中中中中能能能能使使使使等等等等量量量量红红红红细细细细胞胞胞胞发发发发生生生生完完完完全全全全凝凝凝凝集集集集的的的的病病病病毒毒毒毒最最最最高高高高稀稀稀稀释释释释倍倍倍倍数数数数，作作作作为为为为病病病病毒毒毒毒的的的的血血血血凝凝凝凝价价价价，即即即即HIHI效效效效价，用价，用价，用价，用2 2n n表示。表示。表示。表示。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。血凝试验流程图血凝试验流程图资料仅供参考,不当之处，请联系改正。（二）血凝抑制试验（二）血凝抑制试验（二）血凝抑制试验（二）血凝抑制试验（HAIHAI）：取一：取一：取一：取一9696孔板，按孔板，按孔板，按孔板，按以下步骤操作：以下步骤操作：以下步骤操作：以下步骤操作：1 1、4 4个单位抗原的制备：按个单位抗原的制备：按个单位抗原的制备：按个单位抗原的制备：按HAHA试验测出的病毒试验测出的病毒试验测出的病毒试验测出的病毒血凝价除以血凝价除以血凝价除以血凝价除以4 4即为即为即为即为4 4个单位血凝素的稀释度。个单位血凝素的稀释度。个单位血凝素的稀释度。个单位血凝素的稀释度。2 2、待检血清的稀释：第一、二、三排、待检血清的稀释：第一、二、三排、待检血清的稀释：第一、二、三排、待检血清的稀释：第一、二、三排1-121-12孔各加孔各加孔各加孔各加生理盐水生理盐水生理盐水生理盐水50ul50ul，于第一排第，于第一排第，于第一排第，于第一排第1 1孔中加入孔中加入孔中加入孔中加入50ul50ul待检血待检血待检血待检血清，反复吹吸清，反复吹吸清，反复吹吸清，反复吹吸3-53-5次混匀后，取次混匀后，取次混匀后，取次混匀后，取50ul50ul至第至第至第至第2 2孔混匀，孔混匀，孔混匀，孔混匀，吸取吸取吸取吸取50ul50ul至第至第至第至第3 3孔孔孔孔，依次稀释至第，依次稀释至第，依次稀释至第，依次稀释至第1212孔，弃去孔，弃去孔，弃去孔，弃去50ul50ul，经倍比稀释，血清的稀释倍数为，经倍比稀释，血清的稀释倍数为，经倍比稀释，血清的稀释倍数为，经倍比稀释，血清的稀释倍数为2 21 12212 12。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。3 3、第一、二排、第一、二排、第一、二排、第一、二排1-121-12孔各加孔各加孔各加孔各加4 4个单位血凝素个单位血凝素个单位血凝素个单位血凝素50ul50ul，微量震荡器震荡微量震荡器震荡微量震荡器震荡微量震荡器震荡2min2min混匀；混匀；混匀；混匀；4 4、室温静置、室温静置、室温静置、室温静置20min20min；5 5、第一、二、三排、第一、二、三排、第一、二、三排、第一、二、三排1-121-12孔各加孔各加孔各加孔各加1%1%鸡红细胞鸡红细胞鸡红细胞鸡红细胞50ul50ul，微量震荡器震荡，微量震荡器震荡，微量震荡器震荡，微量震荡器震荡2min2min混匀混匀。混匀混匀。混匀混匀。混匀混匀。6 6、室温静置、室温静置、室温静置、室温静置10-3010-30分，观察结果；分，观察结果；分，观察结果；分，观察结果；资料仅供参考,不当之处，请联系改正。7 7、结果判定：第二排为抗原对照，红细胞应全、结果判定：第二排为抗原对照，红细胞应全、结果判定：第二排为抗原对照，红细胞应全、结果判定：第二排为抗原对照，红细胞应全部凝集，第三排为红细胞对照，红细胞应全部部凝集，第三排为红细胞对照，红细胞应全部部凝集，第三排为红细胞对照，红细胞应全部部凝集，第三排为红细胞对照，红细胞应全部沉降。以待检血清能完全抑制病毒凝集红细胞沉降。以待检血清能完全抑制病毒凝集红细胞沉降。以待检血清能完全抑制病毒凝集红细胞沉降。以待检血清能完全抑制病毒凝集红细胞的最高稀释倍数为血清的的最高稀释倍数为血清的的最高稀释倍数为血清的的最高稀释倍数为血清的HAIHAI效价，用效价，用效价，用效价，用2 2n n表示。表示。表示。表示。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。血凝抑制试验流程资料仅供参考,不当之处，请联系改正。实验二实验二 病毒的鸡胚培养病毒的鸡胚培养目的意义：目的意义：目的意义：目的意义：了解禽源病毒鸡胚培养的意义及用途了解禽源病毒鸡胚培养的意义及用途 掌握病毒鸡胚培养的基本方法掌握病毒鸡胚培养的基本方法基本原理：基本原理：基本原理：基本原理：鸡鸡胚胚培培养养是是培培养养某某些些病病毒毒常常用用方方法法,此此方方法法可可用用于于某某些些病病毒毒的的分分离离、增增殖殖、毒毒力力滴滴定定、中中和和试试验验及及生生产产疫疫苗苗等等。病病毒毒接接种种鸡鸡胚胚的的途途径径有有多多种种，主主要要有有卵卵黄黄囊囊接接种种、绒绒毛毛尿尿囊囊腔腔接接种种、绒绒毛毛尿尿囊囊膜膜接接种种、羊膜腔接种途径等，应根据需要选择适当的途径。羊膜腔接种途径等，应根据需要选择适当的途径。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。卵黄囊胚体羊膜囊绒毛尿囊腔气室鸡胚结构模式图资料仅供参考,不当之处，请联系改正。器材及试剂器材及试剂:病毒：鸡新城疫病毒弱毒疫苗；病毒：鸡新城疫病毒弱毒疫苗；鸡胚：鸡胚：9-119-11日龄白壳受精卵；日龄白壳受精卵；孵卵箱、检卵灯、钢针、注射器、孵卵箱、检卵灯、钢针、注射器、2.5%2.5%碘酒、碘酒、75%75%乙醇、固体石蜡、眼科剪、眼科镊等。乙醇、固体石蜡、眼科剪、眼科镊等。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。实验步骤实验步骤:1.1.准备鸡胚：接种前用检卵灯观察是否为受精卵准备鸡胚：接种前用检卵灯观察是否为受精卵准备鸡胚：接种前用检卵灯观察是否为受精卵准备鸡胚：接种前用检卵灯观察是否为受精卵 及其活力。及其活力。及其活力。及其活力。2 2 接种（绒毛尿囊腔途经）：接种（绒毛尿囊腔途经）：接种（绒毛尿囊腔途经）：接种（绒毛尿囊腔途经）：（1）在检卵灯下，用铅笔勾出气室及胚胎的）在检卵灯下，用铅笔勾出气室及胚胎的 位置，并在尿囊膜血管较少的地方作记号。位置，并在尿囊膜血管较少的地方作记号。（2）消毒：用碘酒消毒气室蛋壳，酒精脱碘，）消毒：用碘酒消毒气室蛋壳，酒精脱碘，用灭菌钢针在记号处打一孔。用灭菌钢针在记号处打一孔。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。（3）接种病毒：用）接种病毒：用18mm针头的针头的1ml注射器吸注射器吸 取取鸡鸡新新城城疫疫病病毒毒，针针头头通通过过打打出出的的孔孔进进针针，刺入尿囊腔，注入刺入尿囊腔，注入0.1ml。（4）用融化的石蜡封闭小孔，）用融化的石蜡封闭小孔，39孵化器中孵化器中 孵化孵化72h。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。3 3 收获：收获：收获：收获：接种后每接种后每4小时照蛋一次，弃去小时照蛋一次，弃去24h内死亡胚。内死亡胚。（1）鸡胚放入普通冰箱内冷藏）鸡胚放入普通冰箱内冷藏12h，使胎血凝固。，使胎血凝固。（2）分分别别用用碘碘酒酒和和酒酒精精消消毒毒卵卵壳壳，用用灭灭菌菌剪剪刀刀除除去气室卵壳及壳膜，撕开下面的尿囊膜。去气室卵壳及壳膜，撕开下面的尿囊膜。（3）将将鸡鸡胚胚稍稍倾倾向向一一侧侧，用用灭灭菌菌吸吸管管吸吸出出尿尿囊囊液液待检。待检。（4）观察鸡胚的发育及是否有无病变。）观察鸡胚的发育及是否有无病变。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。实验三实验三 鸡白痢平板凝集试验鸡白痢平板凝集试验目的意义：目的意义：目的意义：目的意义：了解平板凝集试验在鸡白痢诊断及监测中的应用了解平板凝集试验在鸡白痢诊断及监测中的应用 学习鸡白痢平板凝集试验的操作方法。学习鸡白痢平板凝集试验的操作方法。基本原理：基本原理：基本原理：基本原理：细细菌菌等等颗颗粒粒性性抗抗原原与与特特异异性性抗抗体体结结合合后后，在在有有电电解解质质的的情情况况下下，会会出出现现肉肉眼眼可可见见的的凝凝集集块块，称称为为凝凝集集反反应应。直直接接凝凝集集反反应应可可分分为为玻玻片片凝凝集集与与试试管管凝凝集集。凝凝集集试验是疾病诊断及体内抗体水平测定的常用方法。试验是疾病诊断及体内抗体水平测定的常用方法。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。器材及试剂器材及试剂器材及试剂器材及试剂:抗原抗原抗原抗原和血清：和血清：和血清：和血清：鸡白痢凝集抗原、鸡白痢标准阳性血清、阴鸡白痢凝集抗原、鸡白痢标准阳性血清、阴鸡白痢凝集抗原、鸡白痢标准阳性血清、阴鸡白痢凝集抗原、鸡白痢标准阳性血清、阴 血清、待检血清血清、待检血清血清、待检血清血清、待检血清生理盐水、玻片、加液枪（生理盐水、玻片、加液枪（生理盐水、玻片、加液枪（生理盐水、玻片、加液枪（20-200ul20-200ul）、接种环等。）、接种环等。）、接种环等。）、接种环等。实验步骤实验步骤实验步骤实验步骤:1.1.取一洁净玻片，用蜡笔划成方可格，编号取一洁净玻片，用蜡笔划成方可格，编号取一洁净玻片，用蜡笔划成方可格，编号取一洁净玻片，用蜡笔划成方可格，编号2.2.各方格分别加被检血清各方格分别加被检血清各方格分别加被检血清各方格分别加被检血清0.080.08、0.040.04、0.020.02、0.01ml0.01ml。3.3.将凝集抗原摇匀，重直滴一滴于各格血清上。将凝集抗原摇匀，重直滴一滴于各格血清上。将凝集抗原摇匀，重直滴一滴于各格血清上。将凝集抗原摇匀，重直滴一滴于各格血清上。4.4.用火柴棒混匀，摊开直径用火柴棒混匀，摊开直径用火柴棒混匀，摊开直径用火柴棒混匀，摊开直径1cm1cm左右。左右。左右。左右。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。5.5.静置静置静置静置3-43-4分，再拿起玻板轻轻转动，按下列标准记反应结果：分，再拿起玻板轻轻转动，按下列标准记反应结果：分，再拿起玻板轻轻转动，按下列标准记反应结果：分，再拿起玻板轻轻转动，按下列标准记反应结果：+：出现大片凝集，液体完全透明，即：出现大片凝集，液体完全透明，即：出现大片凝集，液体完全透明，即：出现大片凝集，液体完全透明，即100%100%凝集凝集凝集凝集+：有明显凝集片和颗粒，液体几乎完全透明，即：有明显凝集片和颗粒，液体几乎完全透明，即：有明显凝集片和颗粒，液体几乎完全透明，即：有明显凝集片和颗粒，液体几乎完全透明，即75%75%凝集凝集凝集凝集+：有可见的凝集片和颗粒，液体不甚透明，即：有可见的凝集片和颗粒，液体不甚透明，即：有可见的凝集片和颗粒，液体不甚透明，即：有可见的凝集片和颗粒，液体不甚透明，即50%50%凝集凝集凝集凝集+：仅仅可以看见颗粒，液体混浊，即：仅仅可以看见颗粒，液体混浊，即：仅仅可以看见颗粒，液体混浊，即：仅仅可以看见颗粒，液体混浊，即25%25%凝集凝集凝集凝集-：液体均匀混浊，无凝集现象：液体均匀混浊，无凝集现象：液体均匀混浊，无凝集现象：液体均匀混浊，无凝集现象（同时应设阳性、阴性血清及抗原对照）（同时应设阳性、阴性血清及抗原对照）（同时应设阳性、阴性血清及抗原对照）（同时应设阳性、阴性血清及抗原对照）6.6.结果判定：结果判定：结果判定：结果判定：资料仅供参考,不当之处，请联系改正。实验四 鸡传染性法氏囊病琼脂扩散试验 目的意义：目的意义：目的意义：目的意义：掌握琼脂免疫扩散试验的操作技术掌握琼脂免疫扩散试验的操作技术 体会其在鸡传染性法氏囊病诊断及监测中的意义体会其在鸡传染性法氏囊病诊断及监测中的意义基本原理：基本原理：基本原理：基本原理：鸡鸡传传染染性性法法氏氏囊囊病病病病毒毒抗抗原原与与相相应应抗抗体体在在适适当当电电解解质质存存在在下下结结合合，在在半半固固体体琼琼脂脂中中扩扩散散,经经过过一一定定时时间间形形成成肉肉眼眼可可见见的的沉沉淀淀物物，据据此此判判断断是是否否存存在在相相应应的的抗抗原原或抗体，作为诊断鸡传染性法氏囊病的依据之一。或抗体，作为诊断鸡传染性法氏囊病的依据之一。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。器材及试剂器材及试剂:生理盐水、琼脂糖、硫柳汞、平皿、打孔器、移液生理盐水、琼脂糖、硫柳汞、平皿、打孔器、移液生理盐水、琼脂糖、硫柳汞、平皿、打孔器、移液生理盐水、琼脂糖、硫柳汞、平皿、打孔器、移液器、吸头器、吸头器、吸头器、吸头 等。等。等。等。实验步骤实验步骤:1 1、制板、制板、制板、制板:加融化的加融化的加融化的加融化的1%1%琼脂于洁净玻片或培养皿内，琼脂于洁净玻片或培养皿内，琼脂于洁净玻片或培养皿内，琼脂于洁净玻片或培养皿内，厚厚厚厚2.5-3.0mm2.5-3.0mm。2 2、打孔：待琼脂凝固后打孔，多为梅花形，一般孔、打孔：待琼脂凝固后打孔，多为梅花形，一般孔、打孔：待琼脂凝固后打孔，多为梅花形，一般孔、打孔：待琼脂凝固后打孔，多为梅花形，一般孔径径径径3-4mm3-4mm，孔距，孔距，孔距，孔距4-5mm4-5mm。3 3、加样：于中央孔加入标准沉淀抗原，周围、加样：于中央孔加入标准沉淀抗原，周围、加样：于中央孔加入标准沉淀抗原，周围、加样：于中央孔加入标准沉淀抗原，周围1 1、4 4孔孔孔孔内加阳性血清对照，内加阳性血清对照，内加阳性血清对照，内加阳性血清对照，2 2、3 3、5 5、6 6孔为待检血清。孔为待检血清。孔为待检血清。孔为待检血清。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。4 4、加加加加样样样样完完完完后后后后，将将将将琼琼琼琼脂脂脂脂板板板板置置置置于于于于湿湿湿湿盒盒盒盒中中中中，37 37 扩扩散散24-48h24-48h。5 5、结结结结果果果果判判判判定定定定：若若若若待待待待检检检检血血血血清清清清与与与与抗抗抗抗原原原原孔孔孔孔之之之之间间间间出出出出现现现现白白白白色色色色沉沉沉沉淀淀淀淀线线线线，则则则则表表表表示示示示阳阳阳阳性性性性，若若若若不不不不出出出出现现现现沉沉沉沉淀淀淀淀线线线线，为为为为阴阴阴阴性。性。性。性。若若若若用用用用于于于于检检检检测测测测血血血血清清清清效效效效价价价价，则则则则以以以以出出出出现现现现沉沉沉沉淀淀淀淀线线线线的的的的血血血血清最高稀释倍数表示（清最高稀释倍数表示（清最高稀释倍数表示（清最高稀释倍数表示（2 2n n）。）。）。）。用用用用于于于于两两两两种种种种抗抗抗抗原原原原比比比比较较较较时时时时，沉沉沉沉淀淀淀淀线线线线有有有有多多多多种种种种情情情情形形形形，应具体分析。应具体分析。应具体分析。应具体分析。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。制板打孔封底加样置湿盒中扩散琼脂扩散试验流程图资料仅供参考,不当之处，请联系改正。实验五实验五 禽霍乱的诊断禽霍乱的诊断目的意义：目的意义：目的意义：目的意义：认识禽霍乱病原巴氏杆菌两极染色的特性认识禽霍乱病原巴氏杆菌两极染色的特性 熟悉禽霍乱的诊断方法和步骤熟悉禽霍乱的诊断方法和步骤 认识病原菌分离鉴定在禽病诊断中的作用认识病原菌分离鉴定在禽病诊断中的作用基本原理：基本原理：基本原理：基本原理：禽禽巴巴氏氏杆杆菌菌病病又又称称为为禽禽霍霍乱乱，主主要要表表现现为为败败血血症症，即即实实质质器器官官的的出出血血、肿肿大大与与坏坏死死。巴巴氏氏杆杆菌菌在在病病禽禽组组织织内内呈呈典典型型的的两两极极着着色色，纯纯培培养养物物呈呈卵卵圆圆形形或或短短杆杆状状；在在血血或或血血清清琼琼脂脂上上生生长长良良好好，呈呈露露珠珠样样小小菌菌落落并并有有不不同同颜颜色色的的荧荧光光；能能发发酵酵多多种种糖糖；多多杀杀性性巴巴氏氏杆杆菌菌能能致致死死小小白白鼠鼠、家家兔兔等等。故故常常依依据据形形态态特特征征、培培养养特特性性、生化特性和动物实验等来鉴定。生化特性和动物实验等来鉴定。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。器材及试剂器材及试剂器材及试剂器材及试剂:病料：患病鸭组织（肝、脾、肺）或体液病料：患病鸭组织（肝、脾、肺）或体液病料：患病鸭组织（肝、脾、肺）或体液病料：患病鸭组织（肝、脾、肺）或体液 （血、胸腹腔渗出液）；（血、胸腹腔渗出液）；（血、胸腹腔渗出液）；（血、胸腹腔渗出液）；培养基：培养基：培养基：培养基：5-10%5-10%兔血琼脂平板；兔血琼脂平板；兔血琼脂平板；兔血琼脂平板；动物：小白鼠或成年健康家兔；动物：小白鼠或成年健康家兔；动物：小白鼠或成年健康家兔；动物：小白鼠或成年健康家兔；无菌生理盐水、吸管、注射器、针头、酒精无菌生理盐水、吸管、注射器、针头、酒精无菌生理盐水、吸管、注射器、针头、酒精无菌生理盐水、吸管、注射器、针头、酒精 灯等。灯等。灯等。灯等。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。实验步骤实验步骤:（一一）形形态态学学检检查查：病病料料或或心心血血涂涂片片，瑞瑞氏氏染色。染色。（二二）培培养养特特性性检检查查：将将病病料料接接种种于于血血琼琼脂脂平板平板 37培养培养24h。（三）生化鉴定：（三）生化鉴定：资料仅供参考,不当之处，请联系改正。鸭鸭 霍霍 乱乱 心心 血血 涂涂 片片中中的的多多杀杀性性巴巴氏氏杆杆菌菌资料仅供参考,不当之处，请联系改正。（四四四四）动动动动物物物物回回回回归归归归实实实实验验验验：将将将将病病病病料料料料剪剪剪剪碎碎碎碎并并并并研研研研磨磨磨磨，用用用用灭灭灭灭菌菌菌菌生生生生理理理理盐盐盐盐水水水水制制制制成成成成1:101:10悬悬悬悬液液液液，也也也也可可可可将将将将血血血血琼琼琼琼脂脂脂脂平平平平板板板板培培培培养养养养物物物物制制制制成成成成悬悬悬悬液液液液，皮皮皮皮下下下下注注注注射射射射小小小小白白白白鼠鼠鼠鼠，0.1-0.3ml/0.1-0.3ml/只只只只。注注注注意意意意观观观观察察察察小小小小鼠鼠鼠鼠的的的的表表表表现现现现，待待待待发发发发病病病病死死死死亡亡亡亡后后后后，即即即即行行行行解解解解剖剖剖剖，观观观观察察察察小小小小鼠鼠鼠鼠病病病病变变变变，用用用用肝肝肝肝、脾脾脾脾触触触触片片片片或或或或心心心心血血血血涂涂涂涂片片片片，瑞瑞瑞瑞氏氏氏氏染染染染色色色色镜镜镜镜检检检检，应应应应有有有有两两两两极极极极浓浓浓浓染染染染的的的的球球球球杆杆杆杆菌菌菌菌。同同同同时时时时上上上上述述述述病病病病料料料料接接接接种种种种血血血血琼琼琼琼脂脂脂脂平平平平板板板板，次次次次日日日日观观观观察察察察细细细细菌菌菌菌生生生生长长长长情情情情况况况况和和和和菌菌菌菌落特征。落特征。落特征。落特征。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。临床症状病理变化触片染色镜检培养特性生化特性血清学试验初步诊断初步诊断动物回归试验确诊确诊流行病学调查
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