第三章-药物的杂质检查课件

第三章药物的杂质检查药物分析教研室物分析教研室刘巍刘巍第一节、药物的杂质和限量第一节、药物的杂质和限量第三节、药物中一般杂质的检查第三节、药物中一般杂质的检查第二节、第二节、杂质杂质的检查方法的检查方法第四节、特殊杂质的检查和鉴定方法第四节、特殊杂质的检查和鉴定方法主要内容主要内容 药物的纯度药物的纯度是是指药物纯净的程度。是反映药品质指药物纯净的程度。是反映药品质量的一项重要指标。量的一项重要指标。杂质超标可使药物的杂质超标可使药物的外观性状、物理化学常数发外观性状、物理化学常数发生变化生变化，甚至影响，甚至影响药物的稳定性、使活性降低、毒副药物的稳定性、使活性降低、毒副作用增加作用增加一、药物的杂质与纯度一、药物的杂质与纯度：第一节药物的杂质与限量 影响药物纯度的物质统称为影响药物纯度的物质统称为杂质杂质，是指药物中，是指药物中存在的存在的无治疗作用无治疗作用或或影响药物的稳定性和疗效影响药物的稳定性和疗效，甚至甚至对人体健康有害对人体健康有害的微量物质。的微量物质。为保证药品质量，确保用药安全、有效，必须为保证药品质量，确保用药安全、有效，必须检查杂质，控制药物纯度。检查杂质，控制药物纯度。注意：药物纯度与试剂纯度共同点均规定所含杂质的种类和限量不同点药物纯度从用药安全、有效和对药物稳定性等方面考虑 试剂纯度是从杂质可能引起的化学变化对使用的影响以及试剂的使用范围和使用目的加以规定,它不考虑杂质对生物体的生理作用及毒副作用.化学试剂不能代替药品！例.临床所用药物的纯度与化学品及试剂纯度的主要区别是（）A.所含杂质的生理效应不同B.所含有效成分的量不同C.所含杂质的绝对量不同D.化学性质及化学反应速度不同E.所含有效成分的生理效应不同A了解药物中杂质的来源与种类了解药物中杂质的来源与种类 有针对性地制订杂质检查项目的有针对性地制订杂质检查项目的方法方法和和限度限度了解药物中可能存在的杂质了解药物中可能存在的杂质 决定杂质检查的决定杂质检查的项目项目二、杂质的来源与种类二、杂质的来源与种类二、药物杂质的来源二、药物杂质的来源杂质的来源生产过程储藏过程1.合成过程中，原料不纯或反应不完全，中间体、副产物在精制中未除尽2.制剂过程3.试剂、溶剂、还原剂残留4.异构体、多晶体5.使用的金属器皿、装置、工具引入的金属杂质在温度、湿度、日光、空气等外界条件影响下，或因微生物的作用，引起药物发生水解、氧化、分解、异构化、晶型转变、聚合、潮解和发霉等变化生生产过程中引入程中引入杂质例子例子1:双双氯非那胺非那胺阿司匹林及双水阿司匹林及双水杨酯的合成路的合成路线：生产过程中引入杂质例子生产过程中引入杂质例子2：（第六章）：（第六章）(1)(1)保管不善或贮存时间过长保管不善或贮存时间过长 (2)(2)包装不当包装不当2.2.贮藏过程中引入贮藏过程中引入药品外界条件温度、湿度、日光、空气、微生物等水解、氧化、分解、聚合、异构化、晶型转化、潮解、发霉。产生杂质水解：具有酯键、酰胺键、苷键结构的药物容易发生水解，酸、碱催化下及加热下水解更甚氧化：具有酚羟基、巯基、亚硝基、醛基、不饱和键结构的药物，容易在空气中氧化水解和氧化水解和氧化是药物贮存过程常见的杂质来源是药物贮存过程常见的杂质来源贮藏藏过程中引入的程中引入的杂质例子例子1:抗甲状腺抗甲状腺药卡比卡比马唑贮藏过程中引入的杂质例子贮藏过程中引入的杂质例子2：（第八章）：（第八章）贮藏过程中水解盐酸普鲁卡因注射剂 进一步脱羧转化对氨基苯甲酸 苯胺 引起毒性反应三、药物杂质的分类三、药物杂质的分类按来源分按来源分类一般一般杂质特殊特殊杂质（有关物（有关物质）可用于考核生产工艺和生产可用于考核生产工艺和生产控制是否正常控制是否正常指示性杂指示性杂质质如：如：水分、水分、Cl Cl-、SOSO4 42-2-等等特定药物特定药物在生产和贮藏过程在生产和贮藏过程中引入的杂质，随药物的不中引入的杂质，随药物的不同而不同同而不同按毒性分按毒性分类有毒有毒杂质信号信号杂质重金属、砷盐等重金属、砷盐等一般无毒，含量多少可反映一般无毒，含量多少可反映出药物的纯度情况出药物的纯度情况按化学按化学类别和特性分和特性分类有机有机杂质无机无机杂质残留溶残留溶剂影响药品的稳定性，影响药品的稳定性，并反映生产工艺本并反映生产工艺本身的情况身的情况特定杂质非特定杂质四、四、杂质的限量杂质的限量1.1.杂质限量杂质限量 在在不不影影响响药药物物疗疗效效、稳稳定定性性及及不不发发生生毒毒性性的的前前提下，药物中所含杂质的提下，药物中所含杂质的最大允许量最大允许量。杂质量杂质量 杂质限量杂质限量 杂质量杂质量药品合格药品合格药品不合格药品不合格百分之几表示（百分之几表示（%）百万分之几表示（百万分之几表示（ppmppm）限量表示方法：限量表示方法：杂质限量控制方法杂质限量控制方法定量测定定量测定限量检查法限量检查法比较法比较法灵敏度法灵敏度法标准对照法标准对照法杂质的限量检测方法：杂质的限量检测方法：灵敏度法：灵敏度法：在供试品溶液中加入试剂，在试验条件下反应，不得出在供试品溶液中加入试剂，在试验条件下反应，不得出现现正（负）反应正（负）反应。既以检测条件下反应灵敏度控制杂质限既以检测条件下反应灵敏度控制杂质限量。量。如：乳酸中杂酸的检查如：乳酸中杂酸的检查葡萄糖酸度检查（实验二）：葡萄糖酸度检查（实验二）：取本品取本品2.0g2.0g，加新沸过，加新沸过的冷水的冷水20ml20ml溶解后，加酚酞指示剂液溶解后，加酚酞指示剂液3 3滴与氢氧化钠滴滴与氢氧化钠滴定液（定液（0.02mol/ml0.02mol/ml）0.2ml0.2ml，应显粉红色。，应显粉红色。例：肾上腺素中肾上例：肾上腺素中肾上腺酮的检查腺酮的检查 供试品液供试品液(2.0mg/ml)盐酸溶液盐酸溶液样品样品 (0.05mol/L)A A310nm310nm规定：规定：A A310nm310nm0.050.05比较法：比较法：取一定量供试品，在规定条件下测定待检取一定量供试品，在规定条件下测定待检杂质的杂质的参数（如吸光度），参数（如吸光度），与规定限量比较，判断供试品与规定限量比较，判断供试品中杂质限量。中杂质限量。葡萄糖注射液中葡萄糖注射液中5-5-羟甲基糠醛的检测（实验二）：羟甲基糠醛的检测（实验二）：精密称取本品适量（约相当于葡萄糖精密称取本品适量（约相当于葡萄糖1.0g1.0g），置于），置于100ml100ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，照分光光度容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，照分光光度法在法在284nm284nm波长处测定，吸光度不得大于波长处测定，吸光度不得大于0.320.32操作操作:平平行行试试验验比比较较两两比比色色管管的的颜颜色色或或浊浊度度，判判断断杂杂质质限限量量是否符合规定。是否符合规定。管管2（对照管）（对照管）管管1（样品管）（样品管）标准对照标准对照法：最常用法：最常用取限度量的待检杂质对照品配成的对照溶液，取限度量的待检杂质对照品配成的对照溶液，与一定量供试品配成的供试品容液在相同条件下处与一定量供试品配成的供试品容液在相同条件下处理，比较反应结果，判断供试液中所含杂质限度是理，比较反应结果，判断供试液中所含杂质限度是否符合规定。否符合规定。或：或：2.2.限量计算公式限量计算公式（标准对照法）（标准对照法）L：杂质限量S：供试品量C：标准溶液的浓度V：标准溶液的体积示例示例3-1：茶苯海明中：茶苯海明中氯化物的化物的检查（求（求杂质限量）限量）管管2（对照管照管）：）：取取标准准NaCl溶液（溶液（10gCl/ml）1.5ml按相同步按相同步骤制制备成成对照液照液管管1（样品管品管）：）：取本品取本品0.30g，加水，加水50ml、氨、氨试液液3ml、10%硝酸硝酸铵溶液溶液6ml，水浴加，水浴加热5min，加硝酸，加硝酸银试液液25ml，水浴，水浴15min，放冷后定，放冷后定容至容至200ml，取，取滤液液25ml置于置于50ml纳氏比色管氏比色管中，加稀硝酸中，加稀硝酸10ml，加水至，加水至50ml，暗，暗处放置放置5minC=10 g/mlV=1.5 mlS=?示例示例3-2：谷氨酸：谷氨酸钠中重金属的中重金属的检查（求取（求取样量）量）管管2（对照管照管）：）：取取标准准铅溶液（溶液（10gPb/ml）体）体积为V ml，平行操作后比，平行操作后比较颜色色管管1（样品管品管）：）：取本品取本品1.0g，加水，加水23ml溶解后，溶解后，加醋酸加醋酸盐buffer（pH3.5）2ml，依法，依法检查，与，与对照管比色，照管比色，颜色不得更深色不得更深已知：重金属限量已知：重金属限量为10ppm示例示例3-3：肾上腺素中上腺素中酮体的体的检查取本品取本品0.2g，加，加盐酸溶液（酸溶液（92000）定容至）定容至100ml，在，在310nm处测定定 A 0.05，求，求酮体限量体限量V样品=100 mlC酮体=?S样品=0.2 g一般杂质检查规则一般杂质检查规则 药品检验操作标准药品检验操作标准规定：规定：1.1.遵循遵循平行操作原则平行操作原则 (1)(1)仪器的配对仪器的配对性：如性：如纳氏比色管应配对，刻度纳氏比色管应配对，刻度线高低相差不超过线高低相差不超过2mm2mm (2)(2)对照品与供试品的同步操作对照品与供试品的同步操作 2.2.正确的取样及供试品的称量范围正确的取样及供试品的称量范围 3.3.正确的比色、比浊方法正确的比色、比浊方法 黑色的背景上黑色的背景上自上而下观察自上而下观察比比浊法法比色法比色法白色白色的背景上的背景上自上而下观察自上而下观察第二节杂质的检查方法一、杂质的研究规范一、杂质的研究规范（一）有机杂质在药品质量标准中的项目名称（一）有机杂质在药品质量标准中的项目名称1.1.以杂质的化学名称作为项目名称以杂质的化学名称作为项目名称2.2.以某类杂质的总称作为项目的名称以某类杂质的总称作为项目的名称3.3.以检测方法作为项目名称以检测方法作为项目名称（二）杂质检查项目的确定（二）杂质检查项目的确定（三）杂质限度的确定（三）杂质限度的确定（四）杂质检查方法的选择与验证（四）杂质检查方法的选择与验证杂质的检查方法杂质的检查方法 要求：专属、灵敏要求：专属、灵敏常用方法：常用方法：化学分析法化学分析法色谱分析法色谱分析法光谱分析法光谱分析法其它分析其它分析法法二、杂质的常用检查方法二、杂质的常用检查方法（一）化学方法：（一）化学方法：颜色、沉淀、气体颜色、沉淀、气体1.显色反应检查法：显色反应检查法：目视比色法目视比色法5-氯水杨酸2-氯-4硝基苯胺二盐酸萘基乙二胺杂质：2-氯-4硝基苯胺5-5-氯水杨酸检查（灵敏度法）：氯水杨酸检查（灵敏度法）：取本品0.50g，加水10ml，煮沸2min，放冷，滤过，滤液加三氯化铁试液数滴，不得显红色或紫色2-2-氯氯-4-4硝基苯胺检查（标准对照法）：硝基苯胺检查（标准对照法）：取本品0.10g，加甲醇20ml，煮沸2min，放冷，加盐酸溶液（9 100）使成50ml，滤过，取滤液10ml，加亚硝酸钠试液5滴，放置10min，加2%氨基磺酸铵溶液1ml，振摇，再放置10min，加0.5%二盐酸萘基乙二胺溶液1ml，如显色，与2-氯-4-硝基苯胺10 g，加甲醇4ml和盐酸溶液（9 100）使成10ml溶液，用同一方法处理后的颜色比较，不得更深（0.05%）2.沉淀反应检查法：沉淀反应检查法：例：盐酸肼屈嗪中游离肼的检查例：盐酸肼屈嗪中游离肼的检查方法：取本品0.10g，加水5ml与水杨醛的乙醇溶液（1 20）0.1ml，1min内不得出现沉淀3.生成气体的检查法：生成气体的检查法：例：古蔡（例：古蔡（Gutzeit）氏法检查砷盐）氏法检查砷盐原理：微量砷盐与新生态氢（Zn+酸）生成具有挥发性的砷化氢，遇溴化汞试纸产生黄色至棕色砷斑，与标准砷溶液生成的标准砷斑比较4.滴定法：滴定法：定量测定杂质含量定量测定杂质含量例例3-7：硫酸亚铁中高铁盐的检查：硫酸亚铁中高铁盐的检查碘的显色薄层色谱法薄层色谱法(TLC)高效液相色谱法高效液相色谱法(HPLC)气相色谱法气相色谱法(GC)毛细管电泳法（毛细管电泳法（CE）药物药物中中有关物质有关物质的检查的检查首选色谱法首选色谱法（二）色谱方法（二）色谱方法根据药物与杂质对吸附剂的吸附或对展开剂的根据药物与杂质对吸附剂的吸附或对展开剂的解析能力不同解析能力不同(R(Rf f值的差异值的差异),),加以分离和检查。加以分离和检查。1.1.薄层色谱法薄层色谱法(TLC)(TLC)灵敏、简便、快速灵敏、简便、快速不需特殊的设备、费用低不需特殊的设备、费用低分离分离和鉴别同步和鉴别同步进行进行TLCTLC法特点：法特点：供 对LL0Rf=L/L0薄层色谱法薄层色谱法在杂质检查中的应用在杂质检查中的应用 1)1)杂质对照品法杂质对照品法 适用于杂质已知并有杂质对适用于杂质已知并有杂质对照品的情况。照品的情况。方法：方法：根据杂质限量根据杂质限量,取供取供试品溶液和一定浓度的杂质对试品溶液和一定浓度的杂质对照品溶液照品溶液,分别点于同一薄层板分别点于同一薄层板上展开上展开,定位后进行检查。定位后进行检查。供 对供 对示例示例3-8：枸：枸橼酸乙胺酸乙胺嗪中中N-甲基甲基哌嗪的的检查10 l 对照品溶液（50 g/ml）10 l 供试品溶液（50 mg/ml）展开剂：三氯甲烷-甲醇-氨溶液（13:5:1）供试品溶液如显相应杂供试品溶液如显相应杂质点，其颜色与对照品质点，其颜色与对照品溶液主斑点比较，不得溶液主斑点比较，不得更深（更深（0.1%）示例示例3-10：盐酸阿米洛利中有关物酸阿米洛利中有关物质检查杂质对照品通常用来控制供试杂质对照品通常用来控制供试品中与之相同的杂质，但品中与之相同的杂质，但有时也有时也用来控制有关物质用来控制有关物质供 对1 对210g/ml4g/mlABCDA斑点与斑点与C斑点对比斑点对比，荧光强度不，荧光强度不得更强；得更强；B斑点与斑点与D斑点对比斑点对比，荧光强度不，荧光强度不得更强得更强2mg/ml 适用于杂质的适用于杂质的结构不能确定或无杂质对照品结构不能确定或无杂质对照品的的情况。情况。2)2)供试品溶液自身稀释对照法供试品溶液自身稀释对照法将一定将一定浓度供度供试品溶液品溶液进行稀行稀释并作并作为对照溶液，然后与供照溶液，然后与供试品溶液品溶液在同一板上展开比在同一板上展开比较注意：注意：仅限于限于杂质斑点的斑点的颜色与主成色与主成分斑点分斑点颜色相同或者相近的情况色相同或者相近的情况供 对供 对示例示例3-11：吡：吡罗昔康中有关物昔康中有关物质检查取本品，加三氯甲烷制取本品，加三氯甲烷制成每成每1ml中含中含20mg溶液溶液稀释供试品稀释供试品，加三氯甲，加三氯甲烷制成每烷制成每1ml中含中含0.2mg溶液溶液ABCDA、B、C斑点与斑点与D斑点斑点对比对比，荧光强度不得更，荧光强度不得更强强3)3)杂质对照品与供试品溶液自身稀释对照并用法杂质对照品与供试品溶液自身稀释对照并用法供 对1 对23-甲基黄酮甲基黄酮-8羧酸羧酸ABCD示例示例3-13：盐酸黄酸黄酮哌酯中有关物中有关物质检查供试品溶液稀释液供试品溶液稀释液A斑点与斑点与C斑点（斑点（3-甲基黄酮甲基黄酮-8羧羧酸）对比酸）对比，颜色不得更深；，颜色不得更深；B斑点与斑点与D斑点对比斑点对比，颜色不得更，颜色不得更深深 无合适杂质对照品，或供试品显示的杂质斑无合适杂质对照品，或供试品显示的杂质斑点颜色与主成分斑点颜色有差异时，采用点颜色与主成分斑点颜色有差异时，采用与供试与供试品相同药物作为对照作为品相同药物作为对照作为对照品对照品。4)4)对照药物法对照药物法供 对供 对供 对符合杂质符合杂质限量要求限量要求的对照品的对照品供1 供2 对示例示例3-14：马来酸麦角新碱来酸麦角新碱符合杂质限量要求的符合杂质限量要求的马来来酸麦角新碱酸麦角新碱对照品对照品5mg/ml5mg/ml0.2mg/ml不得显示杂质斑点不得显示杂质斑点TLCTLC在在杂质检查中的杂质检查中的应用应用杂质对杂质对照品法照品法自身稀自身稀释对照释对照二者并二者并用用对照药对照药物法物法已知杂质并已知杂质并能制备杂质能制备杂质对照品对照品无杂质对照无杂质对照品且杂质斑品且杂质斑点与主成分点与主成分斑点相近斑点相近多个杂质点，多个杂质点，有的有对照有的有对照品，有的没品，有的没有对照品有对照品无杂质对照无杂质对照品，杂质斑品，杂质斑点与主成分点与主成分斑点有差异斑点有差异2.高效液相色谱法高效液相色谱法(HPLC)分离效能高分离效能高专属性强专属性强灵敏度高灵敏度高分离分析同时进行分离分析同时进行特点特点:HPLC检测杂质的方法：检测杂质的方法：外外标法：法：也叫也叫杂质对照品法，要求照品法，要求进样精确精确加校正因子的主成分自身加校正因子的主成分自身对照法：照法：杂质已知，以已知，以主成分主成分为对照（稀照（稀释的供的供试品溶液），用校正因品溶液），用校正因子校正子校正杂质峰的峰的实测面面积不加校正因子的主成分自身不加校正因子的主成分自身对照法：照法：无无杂质对照照品品时适用适用面面积归一化法：一化法：只用于只用于结构相似，含量构相似，含量较高且限高且限度范度范围较宽的的杂质，粗略定量，不用于微量，粗略定量，不用于微量杂质的的检查外标法外标法供试品：供试品：杂质主成分主成分对照品：对照品：杂质限量：限量：示例示例3-15：卡托普利中二硫化物的：卡托普利中二硫化物的检查供试品溶液：供试品溶液：0.5mg/ml对照品溶液：卡托普利二硫化物对照品浓度对照品溶液：卡托普利二硫化物对照品浓度5g/ml色谱柱：色谱柱：ODS柱柱流动相：流动相：0.01M硫酸二氢钠硫酸二氢钠-甲醇甲醇-乙腈（乙腈（70:25:5）检测波长：检测波长：215nm按峰面积计算，原料药中二硫化物含量不得超过按峰面积计算，原料药中二硫化物含量不得超过1.0%，片剂中不得超过，片剂中不得超过标示量标示量的的3.0%不加校正因子的主成分自身对照法：不加校正因子的主成分自身对照法：供试品：供试品：杂质主成分主成分对照品：对照品：稀稀释杂质限量：限量：注意：注意：杂质与主成分响与主成分响应因子相近因子相近（0.91.1）示例示例3-18：利巴：利巴韦林中有关物林中有关物质检查供试品溶液：供试品溶液：0.4mg/ml对照品溶液：供试品溶液稀释至对照品溶液：供试品溶液稀释至4g/ml色谱柱：色谱柱：SCX（离子交换柱）（离子交换柱）流动相：稀硫酸溶液（流动相：稀硫酸溶液（pH2.50.1）检测波长：检测波长：207nm供试品溶液色谱图中如有杂质峰，单个峰面积不得大供试品溶液色谱图中如有杂质峰，单个峰面积不得大于对照液主峰面积的于对照液主峰面积的0.25倍（倍（0.25%），各杂质峰面积），各杂质峰面积之和不得大于对照液主峰面积（之和不得大于对照液主峰面积（1%）加校正因子的主成分自身对照法：加校正因子的主成分自身对照法：CR=CSS（药物对照品）的相应因子（药物对照品）的相应因子为为R（杂质对照品）的一半（杂质对照品）的一半 AR=AS/2杂质与主成分响与主成分响应因子相差因子相差较远时S：药物对照品R：杂质对照品X：未知杂质S：另一已知药物不加校正因子时：不加校正因子时：加校正因子时：加校正因子时：f 的测定：的测定：供试品供试品稀稀释对照液对照液杂质定量：定量：杂质限量：限量：杂质的校正因子直接的校正因子直接载入各入各品种品种质量量标准中准中示例示例3-16：红霉素霉素A有关有关杂质检查供试品溶液：供试品溶液：4mg/ml对照品溶液：供试品溶液稀释至对照品溶液：供试品溶液稀释至0.2mg/ml色谱柱：色谱柱：ODS流动相：磷酸缓冲溶液流动相：磷酸缓冲溶液-乙腈（乙腈（40:60）检测波长：检测波长：215nm红霉素红霉素B和红霉素和红霉素C按校正后的峰面积计算（分别乘按校正后的峰面积计算（分别乘以校正因子以校正因子0.7、1.0），均不得大于对照溶液主峰面积），均不得大于对照溶液主峰面积（5%）ABC面积归一化法：面积归一化法：主成分主成分溶溶剂峰峰 供试品中结构相似、相对含量较高且限度范供试品中结构相似、相对含量较高且限度范围较宽的杂质含量的粗略参考。结构相差较大时围较宽的杂质含量的粗略参考。结构相差较大时可能会有较大的定量误差。可能会有较大的定量误差。HPLCHPLC在在杂质检查中的杂质检查中的应用应用外标法外标法加校正因加校正因子主成分子主成分自身对照自身对照法法不加校正不加校正因子主成因子主成分自身对分自身对照法照法面积归一面积归一化化有杂质对照品，有杂质对照品，且进样量能够且进样量能够精确控制精确控制没有对照品的没有对照品的已知杂质控制，已知杂质控制，杂质的杂质的校正因校正因子子和相对保留和相对保留时间载入质量时间载入质量标准中标准中没有杂质对照没有杂质对照品，且杂质与品，且杂质与主成分响应因主成分响应因子相近子相近供试品中结构供试品中结构相似、相对含相似、相对含量较高且限度量较高且限度范围较宽的杂范围较宽的杂质含量的粗略质含量的粗略参考参考3.气相色谱法气相色谱法(GC)检查方法检查方法:除与除与HPLCHPLC相同的方法外，还有相同的方法外，还有标准溶液加入法。标准溶液加入法。用于药物中用于药物中挥发性杂质挥发性杂质的检查的检查,如药物中残如药物中残留溶剂、农药残留量等。留溶剂、农药残留量等。标准溶液加入法：标准溶液加入法：消除基体干扰消除基体干扰供试品供试品定量加入杂质定量加入杂质杂质定量：定量：4.毛细管电泳法毛细管电泳法(CE)外标法外标法加校正因加校正因子主成分子主成分自身对照自身对照法法不加校正不加校正因子主成因子主成分自身对分自身对照法照法面积归面积归一化一化例例3-21:地蒽酚中二地蒽酚中二羟基蒽基蒽醌的的检查（三）光谱分析（三）光谱分析法法1.紫外分光光度法紫外分光光度法地蒽酚地蒽酚二二羟基蒽基蒽醌0.001%地蒽酚地蒽酚0.0009%二二羟基蒽基蒽醌432nmA0.12两性霉素两性霉素A和两性霉素和两性霉素B的的UV-VIS图谱例例3-21:两性霉素两性霉素B中两中两性霉素性霉素A的的检查取本品，加少量取本品，加少量DMSO溶解后，加甲醇定溶解后，加甲醇定量稀量稀释为100g/ml的溶液，的溶液，于于305nm波波长处测定吸光定吸光度，不得超度，不得超过0.40两性霉两性霉素素A两性霉两性霉素素B305nm2.红外分光光度法外分光光度法用于用于药物中无效或低晶型的物中无效或低晶型的检查，如甲苯达，如甲苯达唑3.原子吸收分光光度法原子吸收分光光度法（四）其它方法（四）其它方法1.1.热分析热分析法（法（Thermal analysisThermal analysis）测定物质的物理化学性质与温度关系的仪器分析方法热重分析法重分析法(Thermogravimetric Analysis,TGA)差差热分析法分析法(DifferentialThermal Analysis,DTA)差示差示扫描量描量热法法(DifferentialScanning Calorimetry,DSC)1 1）热重分析）热重分析法法 (TGA)供试品TGA热重曲线W 应用应用热天平在程序控温热天平在程序控温的条件下测量物质的质的条件下测量物质的质量随温度变化的热分析技术量随温度变化的热分析技术,可计算出样品在相应可计算出样品在相应温度范围内减失质量的百分率温度范围内减失质量的百分率.升华、气化、分解升华、气化、分解出气体、失去水等出气体、失去水等G1G2G310008006004002000WT1T2T3398838635478134226T()草酸钙(CaC2O4H2O)的热重曲线在温度T1时CaC2O4H2OCaC2O4+H2O在温度T2时CaC2O4CaCO3+CO在温度T3时CaCO3CaO+CO2特 点分析分析样品用量少品用量少,适用于适用于贵重重药材或在空气中容易氧化材或在空气中容易氧化药物干燥失物干燥失重重测定定测定速度快定速度快 可用可用于判断于判断结晶水或吸附水晶水或吸附水,并推断并推断结晶水含量晶水含量.2 2）差热分析）差热分析法法 (DTA)在程序控制温度下在程序控制温度下，测量供量供试品和惰品和惰性参比物性参比物(常用石常用石英砂、煅制英砂、煅制MgO)之之间的的温度差温度差与与温温度度(或或时间)关系的关系的热分析技分析技术TT供试品发生吸热反应温度低于参比物质从而产生吸热峰参比物质供试品发生放热反应温度高于参比物质从而产生放热峰草酸钙(CaC2O4H2O)TG和DTA曲线DTA用途：熔点测定熔程TT=0定性和纯度检定根据峰的数目、形状、位置对供试品进行纯度判别T供试品对照品3 3）差示扫描量热法）差示扫描量热法 (DSC)测量保持供试品和惰性参比物的温度相同,系统所需输给供试品或参比物的能量差随温度(或时间)变化的热分析技术.样品参比加热炉至信号放大器加热器导线炉温控制器T供试品发生吸热反应温度低于参比物质从而产生吸热峰参比物质供试品发生放热反应温度高于参比物质从而产生放热峰DSC峰的正负与峰的正负与DTA峰正负物理意义正好相反峰正负物理意义正好相反不同纯度苯甲酸的DSC曲线温度97.2%98.6%标准品低共熔杂质用于待用于待测物物质的的鉴别、晶型、晶型鉴别、纯度度检查以及熔点和水分以及熔点和水分等的等的测定，更适合于定，更适合于测量物量物质在物理在物理变化或化学化或化学变化中化中焓的的变化。化。T对乙酰氨基酚阿司匹林熔点测定、药品真伪鉴别熔点测定、药品真伪鉴别多晶型及其转变表征多晶型及其转变表征应用热分析法检查药物纯度的条件样品纯度在98.0%以上杂质不与主成分反应杂质不与主成分形成共晶或固熔体杂质与熔融试样有化学相似性药物在熔融过程中化学性质稳定药物如存在多晶现象则必须全部转变成某一晶型2.酸碱度检查法：酸碱度检查法：（1）酸碱滴定法（2）指示液法（3）pH测定法3.物理性状检查法：物理性状检查法：臭味与挥发性的差异（残渣）颜色的差异（溶液颜色检查）溶解行为的差异（澄清度检查）旋光性的差异第三节药物中一般杂质的检查按来源分按来源分类一般一般杂质（信号（信号杂质）特殊特殊杂质（有关物（有关物质）氯化物化物硫酸硫酸盐铁盐重金属重金属砷砷盐干燥失重干燥失重水分水分炽灼残渣灼残渣易碳化物易碳化物残留溶残留溶剂溶液溶液颜色色澄清度澄清度一、氯化物检查法一、氯化物检查法药物：药物：对照：对照：比浊法原理比浊法原理：是利用氯化物在是利用氯化物在硝酸硝酸酸性溶液中与酸性溶液中与硝酸银硝酸银试液试液作用作用,生成氯化银的白色浑浊液，与一定量生成氯化银的白色浑浊液，与一定量标准氯标准氯化钠溶液化钠溶液在相同条件下生成的氯化银混浊液比较，在相同条件下生成的氯化银混浊液比较，以判断供试品中氯化物是否超过限量以判断供试品中氯化物是否超过限量。供供试试品品稀稀HNO310mlH2OAgNO31ml标标准准溶溶液液稀稀HNO310mlH2OAgNO31ml暗处放置暗处放置5min5min(避免避免AgClAgCl分解分解)例：葡萄糖中例：葡萄糖中氯化物化物检查0.6g样品加样品加水至水至25ml6ml（10 gCl/ml）40ml40mlH2OH2O50ml50ml限度：限度：0.010%注意注意事项及讨论事项及讨论 为了保证样品管与对照管的反应条件一致为了保证样品管与对照管的反应条件一致,要求样品管与要求样品管与对照管要平行操作。对照管要平行操作。平行试验平行试验加稀硝酸的目的加稀硝酸的目的 避免弱酸银盐如碳酸银、氧化银、磷酸银沉淀的产生；避免弱酸银盐如碳酸银、氧化银、磷酸银沉淀的产生；加速加速氯化银混浊的生成，产生较好的乳氯化银混浊的生成，产生较好的乳浊。浊。50ml50ml供试液含稀硝酸供试液含稀硝酸10ml10ml为宜。过多会增大氯化银的溶为宜。过多会增大氯化银的溶解度，使浊度降低。解度，使浊度降低。氯化物氯化物的最适检测浓度的最适检测浓度范围范围 50ml 50ml供试液中含供试液中含0.050.05-0.08mg0.08mg的的ClCl-，相当于标准氯化钠溶，相当于标准氯化钠溶液液(10(10 gClgCl-/ml)/ml)5.0-8.0ml5.0-8.0ml时，所显浑浊梯度明显。时，所显浑浊梯度明显。根据限量取用适宜的供试品量，使氯化物的浓度在适宜的根据限量取用适宜的供试品量，使氯化物的浓度在适宜的范围内。范围内。稀释到稀释到40ml40ml后再加硝酸银试液的目的后再加硝酸银试液的目的 使产生的使产生的AgClAgCl浑浊均匀。浑浊均匀。硝酸银加得过早，由于氯化物浓硝酸银加得过早，由于氯化物浓度过大而产生度过大而产生AgClAgCl沉淀而影响比浊。沉淀而影响比浊。供试品溶液不澄清处理方法供试品溶液不澄清处理方法 供试品溶解后溶液不澄清，应过滤，过滤时的滤纸要先用供试品溶解后溶液不澄清，应过滤，过滤时的滤纸要先用含硝酸的水溶液含硝酸的水溶液(1100)(1100)洗涤，除去滤纸中含有的氯化物。洗涤，除去滤纸中含有的氯化物。供试品溶液有色时的处理方法供试品溶液有色时的处理方法 向供试品溶液中加入某种试剂向供试品溶液中加入某种试剂,使溶液颜色褪去后再依法使溶液颜色褪去后再依法检查。检查。a.a.外消色法外消色法例例：高锰酸钾中氯化物的检查：高锰酸钾中氯化物的检查因溶液呈紫色，加入适量乙醇，使因溶液呈紫色，加入适量乙醇，使还原褪色后还原褪色后再检查。再检查。b.b.内消色法内消色法 如枸橼酸铁如枸橼酸铁铵（铵（棕黄色棕黄色）中）中氯化物的检查：氯化物的检查：供供试试品品稀稀AgNO31mlH2O标标准准溶溶液液稀稀AgNO31ml过滤过滤规定量规定量NaClVmlH2O50ml50mlVml二、硫酸盐检查法二、硫酸盐检查法样品管样品管对照管对照管用水稀释至用水稀释至50mL浓度浓度：100 gSO42/ml注意注意事项及讨论事项及讨论 为了保证样品管与对照管的反应条件一致为了保证样品管与对照管的反应条件一致,要求样品管与要求样品管与对照管要平行操作。对照管要平行操作。平行试验平行试验加盐酸的目的加盐酸的目的 可防止可防止BaCOBaCO3 3或磷酸钡等弱酸形成钡盐沉淀；或磷酸钡等弱酸形成钡盐沉淀；酸度过大可使硫酸钡溶解，降低检查灵敏度。酸度过大可使硫酸钡溶解，降低检查灵敏度。50ml 50ml溶液含稀盐酸溶液含稀盐酸2ml2ml为宜。为宜。不溶性药物的处理不溶性药物的处理 加入适量的有机溶剂将药物溶解后中依法检查加入适量的有机溶剂将药物溶解后中依法检查供试品溶液有色时的处理方法供试品溶液有色时的处理方法三、铁盐检查法三、铁盐检查法1.硫氰酸铁法(Ch.P 和USP采用)供试品显色，立即与同法制成的对照溶液比较加水溶解25ml稀HCl 4ml过硫酸铵 50mg加水稀释35ml30%硫氰酸铵溶液3ml加水至50ml注意注意事项及讨论事项及讨论 为了保证样品管与对照管的反应条件一致为了保证样品管与对照管的反应条件一致,要求样品管与要求样品管与对照管要平行操作。对照管要平行操作。平行试验平行试验硫酸铁铵硫酸铁铵最适检测浓度范围最适检测浓度范围 50ml 50ml供试液中供试液中含含1010-5050g g的的FeFe3+3+，所显色泽梯度明显，所显色泽梯度明显，易于区别（吸光度易于区别（吸光度A A与浓度与浓度c c线性关系良好）。线性关系良好）。根据限量取用适宜的供试品量，根据限量取用适宜的供试品量，使使FeFe3+3+的的浓度在适宜浓度在适宜的范围内。的范围内。防止防止FeFe3 3+水解水解HCl的作用的作用过硫酸铵的作用过硫酸铵的作用 将供试品中的二价铁氧化为将供试品中的二价铁氧化为FeFe3 3+，同时防止光照条件，同时防止光照条件下硫氰酸铁还原火分解褪色下硫氰酸铁还原火分解褪色不溶解或对检查有干扰的药物不溶解或对检查有干扰的药物 经炽灼破坏后将铁盐转变为三氧化二铁后检查残渣经炽灼破坏后将铁盐转变为三氧化二铁后检查残渣2.巯基醋酸法(BP采用)红色四、重金属检查法四、重金属检查法（PbPb）重金属是指在实验条件下能重金属是指在实验条件下能与与S S2-2-作用呈色作用呈色的金的金属。属。如：如：AgAg、PbPb、HgHg、CuCu、CdCd、BiBi、SbSb、SnSn、AsAs、NiNi、CoCo、ZnZn等。等。重金属的存在影响药物的重金属的存在影响药物的稳定性稳定性及及安全性安全性。生产过程中遇到铅生产过程中遇到铅(Pb)(Pb)最多，又易在体内积蓄最多，又易在体内积蓄中毒中毒,故检查时以铅为代表，故检查时以铅为代表，以铅的限量表示重金以铅的限量表示重金属限度属限度。第一法 硫代乙酰胺法条件：介质：醋酸盐缓冲液(pH 3.5)2ml 试剂：硫代乙酰胺(CH3CSNH2)2ml 杂质对照液：PbNO3(10g/ml)25ml纳氏比色管黄色至棕黑色混悬液适用于溶于水、稀酸和乙醇的药物甲甲乙乙丙丙对照品溶液对照品溶液供试品溶液供试品溶液供试品供试品+对照品对照品当丙管中当丙管中显出的出的颜色不浅于甲管色不浅于甲管时，乙管中乙管中显出的出的颜色与色与甲管比，不得更深；甲管比，不得更深；当丙管中当丙管中显出的出的颜色浅于甲管色浅于甲管时，应取取样按第二法重新按第二法重新检测例：采用硫代乙酰胺法检查重金属时，供试品如有微量例：采用硫代乙酰胺法检查重金属时，供试品如有微量高铁盐存在，需加入的是（高铁盐存在，需加入的是（）A碘试液碘试液 B重铬酸钾溶液重铬酸钾溶液 C高锰酸钾溶液高锰酸钾溶液 D维生素维生素C E过硫酸铵过硫酸铵D例：例：采用硫代乙酰胺法检查重金属时，供试品如有色需在采用硫代乙酰胺法检查重金属时，供试品如有色需在加硫代乙酰胺前在对照溶液管中加入的是加硫代乙酰胺前在对照溶液管中加入的是（）A过氧化氢溶液过氧化氢溶液 B稀焦糖溶液稀焦糖溶液 C盐酸羟胺溶液盐酸羟胺溶液 D抗坏血酸抗坏血酸 E过硫酸铵过硫酸铵B第二法 炽灼后的硫代乙酰胺法缓缓炽灼放冷H2SO40.5-1.0ml供试品炭化加热HNO3500-600H2SO4除尽放冷完全灰化蒸干HCl2ml水15ml中性按第一法检查蒸干氨试液注意：温控；除尽氧化氮温控；除尽氧化氮适用于含有芳环、杂环、难溶于水、稀酸及乙醇药物第三法 硫化钠法适用于溶于碱液，难溶于稀酸或酸中沉淀的药物取供试品适量，加取供试品适量，加NaOH试液试液5ml和水和水20ml溶解后，置于纳氏比色管中，加硫化钠试液溶解后，置于纳氏比色管中，加硫化钠试液5滴，滴，摇匀，与一定量的标准铅溶液同法处理后的摇匀，与一定量的标准铅溶液同法处理后的颜色颜色比较。比较。五、砷盐五、砷盐检查法检查法古蔡氏古蔡氏法法白田道夫法白田道夫法Ag-DDCAg-DDC法法（二乙基二硫代氨基甲酸银法）（二乙基二硫代氨基甲酸银法）也可用作微量砷盐的含量测定也可用作微量砷盐的含量测定次磷酸法次磷酸法(奇列氏法奇列氏法)（BPBP）古蔡氏法（古蔡氏法（Gutzeit）（1 1）原理）原理 金属锌与酸作用产生的新生态氢与药物中微量金属锌与酸作用产生的新生态氢与药物中微量砷盐反应生成具挥发性的砷盐反应生成具挥发性的砷化氢砷化氢,遇遇溴化汞试纸溴化汞试纸产产生黄色至棕色的砷斑生黄色至棕色的砷斑,与同条件下一定量标准砷溶与同条件下一定量标准砷溶液所生成的砷斑比较液所生成的砷斑比较,判断砷盐的含量。判断砷盐的含量。黄色黄色棕色棕色黑色黑色8cm有孔玻璃旋塞导气管AsH3发生瓶溴化汞试纸醋酸铅棉花(60mg)标准砷溶液（或供试品溶液）HCl 2ml，H2O 21ml碘化钾试液5ml酸性氯化亚锡试液5滴室温放置10minZn 粒2540 水浴45min生成砷斑吸收硫化氢气体（2 2）装置）装置（3 3）操作）操作 搭装置（装醋酸铅棉花，放溴化汞试纸）搭装置（装醋酸铅棉花，放溴化汞试纸）加试剂（加盐酸与水加试剂（加盐酸与水,再加碘化钾试液与酸性氯化亚再加碘化钾试液与酸性氯化亚锡试液锡试液,放置放置10min)10min)加锌粒加锌粒2g2g，密闭反应，密闭反应45min45min 分别取出溴化汞试纸分别取出溴化汞试纸,比较砷斑比较砷斑视频（4 4）讨论）讨论试剂试剂的作用的作用a.KIa.KI的作用的作用还原剂还原剂：AsAs5+5+AsAs3+3+五价砷生成五价砷生成AsHAsH3 3的反应速度比三价砷速度慢的反应速度比三价砷速度慢,加入加入KIKI使五价砷还原为三价砷后再与活泼氢反应使五价砷还原为三价砷后再与活泼氢反应,以增大以增大AsHAsH3 3的生成速度。的生成速度。还原剂还原剂(表现在表现在3 3方面方面).将五价砷还原为三价砷将五价砷还原为三价砷(As(As5+5+AsAs3+3+)b.b.酸性酸性SnClSnCl2 2的作用的作用进而促进进而促进AsH3不断不断生成生成.将将KIKI被氧化生成的被氧化生成的I I2 2再还原为再还原为I I-稳定的络离子稳定的络离子 H2阻碍酸与锌粒反应阻碍酸与锌粒反应SnCl2.SnCl2与与Zn粒表面形成粒表面形成Zn-Sn齐齐起去极化起去极化作用，使作用，使氢气均匀而连续地氢气均匀而连续地发生发生抑制锑化氢的生成抑制锑化氢的生成 锑化氢也可能与溴化汞试纸作用生成锑斑干扰测定锑化氢也可能与溴化汞试纸作用生成锑斑干扰测定c.PbAcc.PbAc2 2棉花的作用棉花的作用 排除排除硫化物的干扰硫化物的干扰(0.1mgS(0.1mgS2-2-)d.HgBrd.HgBr2 2试纸的作用试纸的作用 与与AsHAsH3 3作用生成砷斑。作用生成砷斑。a.a.供试品是硫化物供试品是硫化物,亚硫酸盐亚硫酸盐,硫代硫酸盐硫代硫酸盐排除方法：排除方法：加入浓硝酸处理加入浓硝酸处理干扰干扰物的排除物的排除FeFe3+3+能消耗还原剂能消耗还原剂(KI(KI、SnClSnCl2 2),),并能氧化砷化氢。并能氧化砷化氢。排除方法：先加酸性排除方法：先加酸性SnClSnCl2 2试液使试液使FeFe3+3+FeFe2+2+后再检查后再检查b.b.供试品是铁盐供试品是铁盐(Fe(Fe3+3+)c.c.共价键结合的砷化物共价键结合的砷化物排除方法：进行有机破坏排除方法：进行有机破坏 酸破坏法或酸破坏法或碱破坏法碱破坏法碱破坏碱破坏法：法：ChPa加入氢氧化钙加入氢氧化钙500-600 C灼烧灼烧例：酚磺酞例：酚磺酞b加入无水碳酸钠碱融加入无水碳酸钠碱融例：苯甲酸钠例：苯甲酸钠酸破坏法酸破坏法加稀硫酸与溴化钾加稀硫酸与溴化钾例：葡萄糖中砷盐检查例：葡萄糖中砷盐检查古蔡古蔡氏法特点氏法特点优点优点：操作简单，灵敏度操作简单，灵敏度高高(1(1 gAs)gAs)缺点：缺点：锑（锑（SbSb）干扰）干扰 对含锑药物中砷盐的检查不能用古蔡氏法对含锑药物中砷盐的检查不能用古蔡氏法,需需用用白田道夫法白田道夫法。1.1.原理原理 2As3+3SnCl2+6HCl2As+3SnCl4+6H+棕棕褐色褐色SnClSnCl2 2在在HClHCl中能将砷盐还原为棕褐色的胶态砷中能将砷盐还原为棕褐色的胶态砷,与一定量的标准砷溶液按同法处理后进行比色与一定量的标准砷溶液按同法处理后进行比色,判判断供试品中砷盐的限量。断供试品中砷盐的限量。白田道夫法（白田道夫法（Betterdorff）（胶态）（胶态）2.2.白田道夫法的特点白田道夫法的特点优点：优点：不受不受SbSb干扰干扰缺点：缺点：灵敏度低灵敏度低2020 gAsgAs2 2O O3 3/10ml/10ml 加入少量加入少量HgClHgCl2 2,灵敏度提高至灵敏度提高至2 2 gAsgAs2 2O O3 3/10ml/10mlZn+HCl二乙基二硫代氨基甲酸银法二乙基二硫代氨基甲酸银法Ag-diethyldithiocarbamateAg-DDC法1.1.原理原理砷化氢还原Ag-DDC溶液,产生红色红色的胶态银胶态银。目视目视比色法比色法仪器分析仪器分析（510nm510nm测吸测吸光度）光度）标准砷溶液（或供试品溶液）HCl 2ml，H2O 21ml碘化钾试液5ml酸性氯化亚锡试液5滴室温放置10minZn 粒2540 水浴45min导气管AsH3发生瓶醋酸铅棉花2.Ag-DDC2.Ag-DDC法的特点法的特点a a 灵敏度高灵敏度高 0.5 0.5 gAs/30ml gAs/30ml b b 可仪器测定可仪器测定,还可定量还可定量 c c 锑（锑（SbSb）干扰小）干扰小用用有机碱吸收反应产生的有机碱吸收反应产生的HDDC有利于反应的进行。有利于反应的进行。USP（24）用吡啶，灵敏但试剂恶臭用吡啶，灵敏但试剂恶臭ChP（2000）用三乙胺。灵敏度低用三乙胺。灵敏度低本法适用于含本法适用于含Sb量小于量小于500g的供试品。的供试品。次磷酸法（奇列氏法）次磷酸法（奇列氏法）1.1.原理原理 在盐酸酸性溶液中在盐酸酸性溶液中,次磷酸还原砷盐为棕色的游次磷酸还原砷盐为棕色的游离砷离砷,与标准砷溶液同法处理后比较颜色。与标准砷溶液同法处理后比较颜色。NaH2PO2+HClH3PO2+NaCl3H3PO2+H3AsO33H3PO3+2As棕色棕色2.2.特点特点不受不受S S2-2-,SO,SO3 32-2-,Sb,Sb干扰干扰灵敏度较古蔡氏法低灵敏度较古蔡氏法低六、干燥失重测定法六、干燥失重测定法 干燥失重是指药物在规定条件下经干燥后干燥失重是指药物在规定条件下经干燥后所减失的重量，以百分率表示。检查药物中的所减失的重量，以百分率表示。检查药物中的水分及其他挥发性物质水分及其他挥发性物质中国药典采用的测定中国药典采用的测定法法适用于适用于受热较稳定的药物受热较稳定的药物。干燥温度一般为。干燥温度一般为105。（一）常压恒温干燥法（一）常压恒温干燥法（二）减压干燥和恒温减压干燥法（二）减压干燥和恒温减压干燥法适用于适用于低熔点和受热分解的样品。低熔点和受热分解的样品。（三）干燥剂干燥法（三）干燥剂干燥法适用于适用于受热易分解和易升华的样品。受热易分解和易升华的样品。干燥剂：硅胶、浓硫酸、P2O5。1.硅胶：吸水率居中，变色硅胶，加有氯化钴（CoCl2），无水氯化钴蓝色，吸水后含二分子结晶水呈淡红色。105干燥后可恢复使用。价廉、方便、无腐蚀性、可重复，最常用的干燥剂。2.浓硫酸：吸水率低，有腐蚀性。3.P2O5：吸水性好，不能反复使用。七、水分测定法七、水分测定法费休氏法（卡休氏法（卡尔费休法）休法）（karl fischer）:可以可以测定定结晶水、吸附水和游离水晶水、吸附水和游离水。根据根据消耗碘的量消耗碘的量来测定水分的含量。来测定水分的含量。A供试品消耗的Fisher试液的体积B空白消耗的Fisher试液的体积F每1mlFisher试剂相当于水的重量(mg)W供试品的重量总反反应：卡卡尔费休休试剂：碘碘-二氧化硫二氧化硫-甲醇甲醇-吡吡啶定量吸收定量吸收HI和和SO3硫酸硫酸酐吡吡啶不不稳定定稳定的甲基硫定的甲基硫酸酸氢吡吡啶八、炽灼残渣检查法八、炽灼残渣检查法用于控制有机药物经炭化或挥发性无机药物中非挥用于控制有机药物经炭化或挥发性无机药物中非挥发性无机杂质。发性无机杂质。原理原理 样品炭化后品炭化后+H2SO4湿湿润700800炽灼灼至恒重至恒重炽灼残渣（或硫酸灰分）灼残渣（或硫酸灰分）限量一般限量一般为0.1%0.2%无机无机杂质的硫酸的硫酸盐。H2SO4湿湿润（低温加（低温加热至硫酸蒸汽除尽）至硫酸蒸汽除尽）炽灼残渣（灼残渣（USP）,硫酸灰分（硫酸灰分（BP）注意事注意事项（1）供）供试品的取品的取样量量应根据根据炽灼残渣限量和称量灼残渣限量和称量误差决定。差决定。（2）含氟的）含氟的药物物对瓷坩瓷坩埚有腐有腐蚀，应采用采用铂坩坩埚。（3）若残渣需留作重金属）若残渣需留作重金属检查，则500600炽灼灼至恒重。至恒重。（重金属（重金属（铅）在高温下易）在高温下易挥发）检查结果偏低果偏低（4）加硫酸）加硫酸处理是使理是使杂质转化化为稳定的硫酸定的硫酸盐，并，并帮助有机物炭化。帮助有机物炭化。九、易炭化物检查法九、易炭化物检查法检查药物中遇检查药物中遇H2SO4易炭化或易被氧化呈色易炭化或易被氧化呈色的微量有机杂质。的微量有机杂质。方法：方法：H2SO4炭化后与炭化后与对照液比照液比较。对照液：有三照液：有三类（1）“溶液溶液颜色色检查”项下的下的标准比色液；准比色液；（2）由比色用）由比色用氯化化钴液，比色用重液，比色用重铬酸酸钾液，液，比色用硫酸比色用硫酸铜液按液按规定方法配成的定方法配成的对照液；照液；（3）高）高锰酸酸钾液液比色：同置白色背景前，平比色：同置白色背景前，平视观察比察比较。不不得更深得更深十、残留溶剂测定法十、残留溶剂测定法残留溶剂：在合成原料药，辅料或制剂生产的过程中使用的，但在工艺中未能完全除去的有机溶剂。进行有机溶行有机溶剂限度限度测定定时，根据残留溶，根据残留溶剂的限度的限度规定来确定定来确定对照品溶液的照品溶液的浓度度进行定量行定量测定定时，应根据供根据供试品中品中实际残留溶残留溶剂的的实际残留残留量确定量确定对照品溶液的照品溶液的浓度度对照品溶液的色照品溶液的色谱峰面峰面积与供与供试品溶液中品溶液中对应的残留溶的残留溶剂的的色色谱峰面峰面积以不超以不超过2倍倍为宜宜色色谱系系统适用性适用性试验：中国中国药典典规定，在残留溶定，在残留溶剂测定前定前应作色作色谱系系统适用性适用性试验。（1）用待）用待测物的色物的色谱峰峰计算的算的理理论塔板数塔板数填充柱填充柱应大于大于1000，毛，毛细管柱管柱应大于大于5000（2）分离度分离度应大于大于1.5（3）用内）用内标法法测定定时，每个，每个标准溶液（限量待准溶液（限量待测溶溶剂与内与内标液）液）进样5次，待次，待测物与内物与内标物峰面物峰面积之比的之比的相相对标准偏差准偏差应不大于不大于5；若用外；若用外标法法测定，待定，待测物峰面物峰面积的相的相对标准准偏差偏差应不大于不大于10（4）拖尾因子：拖尾因子：0.951.05十一、溶液颜色检查法十一、溶液颜色检查法 溶液颜色检查法是控制药物中溶液颜色检查法是控制药物中有色杂质量有色杂质量的方法。的方法。中国药典收载有三种方法：中国药典收载有三种方法：1.1.目视比色法（标准比色液进行比较的方法）目视比色法（标准比色液进行比较的方法）标准比色液：标准比色液：K K2 2CrCr2 2O O7 7 CoCl CoCl2 2 CuSO CuSO4 4 2.2.分光光度法分光光度法 测定某波长处的吸收度测定某波长处的吸收度 3.3.色差计法色差计法 直接测定溶液的直接测定溶液的透射透射三刺激值对其颜色进行三刺激值对其颜色进行定量分析的方法。要求供试品溶液与水的色差值不超过相应标定量分析的方法。要求供试品溶液与水的色差值不超过相应标准比色液与水的色差值。准比色液与水的色差值。十二、溶液澄清度检查法十二、溶液澄清度检查法 是是检查药品溶液的混品溶液的混浊程度，可以反映程度，可以反映药物溶液中物溶液中微量不溶性微量不溶性杂质的存在情况，在一定程度上可以反映的存在情况，在一定程度上可以反映药品的品的质量和生量和生产工工艺水平，是控制注射用原料水平，是控制注射用原料药纯度的度的重要指重要指标。原理：原理：光的散射光的散射 方法：方法：供供试品溶液与品溶液与浊度度标准液准液对照。照。乌洛乌洛托品托品(CH2)6N4+6H2O6HCHO+4NH3HCHO+H2N-NH2H2C=N-NH2+H2O甲醛腙甲醛腙白色混浊白色混浊标准储备液制备：标准储备液制备：第四节特殊杂质的检查与鉴定方法一、特殊杂质的研究规范一、特殊杂质的研究规范含量在含量在0.1%0.1%以上的杂质，或者含量在以上的杂质，或者含量在0.1%0.1%以下具有强烈生物作用的杂质，要求定性以下具有强烈生物作用的杂质，要求定性或确证其结构或确证其结构二、特殊杂质的鉴定二、特殊杂质的鉴定1 1、合成杂质，再用、合成杂质，再用LC/MSLC/MS鉴定鉴定2 2、制备色谱进行分离、制备，