肿瘤学动物实验技能培训课件

肿瘤学瘤学动物物实验技能培技能培训肿肿瘤学瘤学动动物物实验实验技能培技能培训肿训肿瘤学瘤学动动物物实验实验技能培技能培训肿训肿瘤学瘤学动动物物实验实验技技一、常用实验动物及选择一、常用实验动物及选择品系选择品系选择名称名称毛色毛色免疫特性免疫特性适合实验适合实验白色野生型同基因型肿瘤实验C57C57黑色野生型同基因型肿瘤实验,裸鼠裸鼠无毛胸腺缺陷，T细胞缺陷人移植瘤实验白色T、B细胞减少，细胞免疫和体液免疫缺陷，巨噬细胞和细胞正常免疫功能重建，肿瘤学白色与相比，细胞减少免疫功能重建，肿瘤学白色2受体缺陷，与相比，天然和获得性免疫缺陷更高免疫功能重建，肿瘤细胞治疗C57裸鼠裸鼠2一、常用一、常用实验动实验动物及物及选择选择品系品系选择选择名称毛色免疫特性适名称毛色免疫特性适成年动物的年龄、体重和寿命比较成年动物的年龄、体重和寿命比较小鼠小鼠大鼠大鼠豚鼠豚鼠兔兔狗狗成年日龄（天）成年日龄（天）65908511090120120180250360成年体重（成年体重（g）202820028035060020003500800015000平均寿命（年）平均寿命（年）12232561317最高寿命（年）最高寿命（年）3461334一、常用实验动物及选择一、常用实验动物及选择年龄选择年龄选择一般购买一般购买6-8周小鼠，用于实验周小鼠，用于实验3小鼠小鼠大鼠大鼠豚鼠豚鼠兔兔狗狗二、小鼠的饲养二、小鼠的饲养环境环境n 微生物控制等级选择微生物控制等级选择 v 普通级动物：示教、预实验普通级动物：示教、预实验v 清洁级动物：适用大多数科研。清洁级动物：适用大多数科研。v 无特定病原体动物（）：为理想的健康动物，适用于所有科研、检定。无特定病原体动物（）：为理想的健康动物，适用于所有科研、检定。v 无菌动物（）：适用于特殊研究。无菌动物（）：适用于特殊研究。4二、小鼠的二、小鼠的饲饲养养环环境境微生物控制等微生物控制等级选择级选择普通普通级级n动物室环境控制要求值动物室环境控制要求值项目项目控制要求值控制要求值备注备注温度温度2127按动物品种而有若干差别按动物品种而有若干差别湿度湿度4555%气流速度气流速度1025秒秒避免直吹风避免直吹风换气次数换气次数815次次/小时小时100%新鲜空气（如使用循环空气，不应超过总空气量新鲜空气（如使用循环空气，不应超过总空气量的的1/3）照明照明75300定时人工照明（分置小瓦数日光灯）定时人工照明（分置小瓦数日光灯）氨浓度氨浓度20以下以下噪音噪音50分贝以下分贝以下无动物时（有动物时，除狗居外，不高于无动物时（有动物时，除狗居外，不高于65分贝）分贝）二、小鼠的饲养二、小鼠的饲养环境环境5动动物室物室环环境控制要求境控制要求值项值项目控制要求目控制要求值备值备注温度注温度2127按按动动n 动物饲养密度动物饲养密度 动物饲养密度应符合卫生标准，有一定的活动面积，不能过分拥挤。动物饲养密度应符合卫生标准，有一定的活动面积，不能过分拥挤。各种动物所需笼具的面积和体积因饲养目的而异，哺乳期所需面积较大，一般小鼠各种动物所需笼具的面积和体积因饲养目的而异，哺乳期所需面积较大，一般小鼠4-6只只/笼。笼。二、小鼠的饲养二、小鼠的饲养密度密度6动动物物饲饲养密度养密度动动物物饲饲养密度养密度应应符合符合卫卫生生标标准，有准，有二、小鼠的饲养二、小鼠的饲养垫料、饲料、水垫料、饲料、水n垫料、饲料均需经过辐照并密封包装。垫料、饲料均需经过辐照并密封包装。n水，自来水水，自来水121度高压灭菌度高压灭菌20。n饲料选择营养均衡的配方饲料即可，特殊情况才选饲料选择营养均衡的配方饲料即可，特殊情况才选n择高蛋白，高脂肪饲料。择高蛋白，高脂肪饲料。7二、小鼠的二、小鼠的饲饲养养垫垫料、料、饲饲料、水料、水垫垫料、料、饲饲料均需料均需经过经过三、肿瘤建模三、肿瘤建模n 肿瘤模型类型：皮下移植瘤、肺转移模型、原位移植瘤；肿瘤模型类型：皮下移植瘤、肺转移模型、原位移植瘤；n 查阅文献确定细胞接种浓度：一般查阅文献确定细胞接种浓度：一般1*106 1*106 个细胞左右；个细胞左右；n 预实验：以预实验：以2 2倍比例选择三个细胞浓度开展预实验；倍比例选择三个细胞浓度开展预实验；n 准备细胞：细胞重悬于、生理盐水或基础培养基中，定量；准备细胞：细胞重悬于、生理盐水或基础培养基中，定量；n 接种：皮下接种可选择乙醚麻醉，接种：皮下接种可选择乙醚麻醉，100 100 位点；肺转移位点；肺转移n 尾静脉注射，用小鼠固定器，尾静脉注射，用小鼠固定器，200200只；只；n 对于皮下移植瘤，如需细胞数量较大，可以接种组织块儿；对于皮下移植瘤，如需细胞数量较大，可以接种组织块儿；n 皮下接种部位：，背颈部，腋窝。皮下接种部位：，背颈部，腋窝。8三、三、肿肿瘤建模瘤建模肿肿瘤模型瘤模型类类型：皮下移植瘤、肺型：皮下移植瘤、肺转转移模型、移模型、四、标记四、标记及及分组分组n n 编号编号编号编号及及及及标记方法标记方法标记方法标记方法 染色法染色法染色法染色法 剪耳法剪耳法剪耳法剪耳法 穿耳孔法穿耳孔法穿耳孔法穿耳孔法 标牌法标牌法标牌法标牌法 烙印法烙印法烙印法烙印法 剪毛法剪毛法剪毛法剪毛法9四、四、标记标记及分及分组组编编号及号及标记标记方法染色法方法染色法9 在每组动物不超过在每组动物不超过在每组动物不超过在每组动物不超过l0l0l0l0只或一个实验不超过只或一个实验不超过只或一个实验不超过只或一个实验不超过40404040只的情况下适用只的情况下适用只的情况下适用只的情况下适用 染色剂：染色剂：染色剂：染色剂：3-53-53-53-5苦味酸溶液，可染成黄色苦味酸溶液，可染成黄色苦味酸溶液，可染成黄色苦味酸溶液，可染成黄色n n 染色法：单色涂染法染色法：单色涂染法染色法：单色涂染法染色法：单色涂染法四、标记及分组四、标记及分组单色染色法单色染色法10在每在每组动组动物不超物不超过过l0只或一个只或一个实验实验不超不超过过40只的情况下适用只的情况下适用染染 涂染原则：从左到右、从上到下涂染原则：从左到右、从上到下涂染原则：从左到右、从上到下涂染原则：从左到右、从上到下 左前肢为左前肢为左前肢为左前肢为1 1 1 1号、左侧腹部号、左侧腹部号、左侧腹部号、左侧腹部2 2 2 2号、左后肢号、左后肢号、左后肢号、左后肢3 3 3 3号，号，号，号，两耳后部两耳后部两耳后部两耳后部4 4 4 4号、背部号、背部号、背部号、背部5 5 5 5号、后肢背部号、后肢背部号、后肢背部号、后肢背部6 6 6 6号，号，号，号，右前肢右前肢右前肢右前肢7 7 7 7号、右侧腹部号、右侧腹部号、右侧腹部号、右侧腹部 8 8 8 8号、右后肢号、右后肢号、右后肢号、右后肢9 9 9 9号号号号 头部为头部为头部为头部为40404040号、尾巴根为号、尾巴根为号、尾巴根为号、尾巴根为10101010号。号。号。号。n n 方法步骤方法步骤方法步骤方法步骤四、标记及分组四、标记及分组单色染色法单色染色法11涂染原涂染原则则：从左到右、从上到下：从左到右、从上到下方法步方法步骤骤四、四、标记标记及分及分组组单单色色 在每组动物不超过在每组动物不超过在每组动物不超过在每组动物不超过100100100100只的情况下适用只的情况下适用只的情况下适用只的情况下适用 常用染色剂：常用染色剂：常用染色剂：常用染色剂：3-53-53-53-5苦味酸溶液，可染成黄色，作为苦味酸溶液，可染成黄色，作为苦味酸溶液，可染成黄色，作为苦味酸溶液，可染成黄色，作为“个个个个”位数位数位数位数 常用染色剂：常用染色剂：常用染色剂：常用染色剂：0.5%0.5%0.5%0.5%中性红或品红溶液，可染成红色，作为中性红或品红溶液，可染成红色，作为中性红或品红溶液，可染成红色，作为中性红或品红溶液，可染成红色，作为“十十十十”位数位数位数位数四、标记及分组四、标记及分组双色染色法双色染色法12在每在每组动组动物不超物不超过过100只的情况下适用四、只的情况下适用四、标记标记及分及分组组双色染双色染 用两种颜色同时进行染色标记用两种颜色同时进行染色标记用两种颜色同时进行染色标记用两种颜色同时进行染色标记 用苦味酸用苦味酸用苦味酸用苦味酸(黄色黄色黄色黄色)染色标记作为个位数，个位数的染色标记方法同单色涂染法染色标记作为个位数，个位数的染色标记方法同单色涂染法染色标记作为个位数，个位数的染色标记方法同单色涂染法染色标记作为个位数，个位数的染色标记方法同单色涂染法 用品红用品红用品红用品红(红色红色红色红色)染色标记作为十位数染色标记作为十位数染色标记作为十位数染色标记作为十位数四、标记及分组四、标记及分组双色染色法双色染色法n n 方法步骤方法步骤方法步骤方法步骤13用两种用两种颜颜色同色同时进时进行染色行染色标记标记四、四、标记标记及分及分组组 左前肢为左前肢为左前肢为左前肢为10101010号、号、号、号、左侧腹部左侧腹部左侧腹部左侧腹部20202020号、左后肢号、左后肢号、左后肢号、左后肢30303030号号号号 两耳后部两耳后部两耳后部两耳后部40404040号、号、号、号、背部背部背部背部50505050号、号、号、号、后肢背部后肢背部后肢背部后肢背部60606060号号号号 右前肢右前肢右前肢右前肢70707070号、右侧腹部号、右侧腹部号、右侧腹部号、右侧腹部 80808080号、右后肢号、右后肢号、右后肢号、右后肢90909090号号号号 第第第第100100100100号不作染色标记号不作染色标记号不作染色标记号不作染色标记方法步骤方法步骤方法步骤方法步骤14左前肢左前肢为为10号、号、左左侧侧腹部腹部20号、左后肢号、左后肢30号方法步号方法步骤骤14 穿耳孔法：用专用耳空器在动物耳朵不同部位打一小孔或缺口表示一定号码的方法。原则是：左耳代表穿耳孔法：用专用耳空器在动物耳朵不同部位打一小孔或缺口表示一定号码的方法。原则是：左耳代表穿耳孔法：用专用耳空器在动物耳朵不同部位打一小孔或缺口表示一定号码的方法。原则是：左耳代表穿耳孔法：用专用耳空器在动物耳朵不同部位打一小孔或缺口表示一定号码的方法。原则是：左耳代表十位，右耳代表个位。十位，右耳代表个位。十位，右耳代表个位。十位，右耳代表个位。标牌法：一般挂在动物的颈部、耳朵、脚上。标牌法：一般挂在动物的颈部、耳朵、脚上。标牌法：一般挂在动物的颈部、耳朵、脚上。标牌法：一般挂在动物的颈部、耳朵、脚上。烙印法烙印法烙印法烙印法 剪毛法剪毛法剪毛法剪毛法四、标记及分组四、标记及分组其他方法其他方法15穿耳孔法：用穿耳孔法：用专专用耳空器在用耳空器在动动物耳物耳朵朵不同部位打一小孔或缺口表示一不同部位打一小孔或缺口表示一四、标记及分组四、标记及分组分组分组n一致性原则一致性原则n差异是绝对的，一致是相对的差异是绝对的，一致是相对的n利用随机数字表进行随机分组，最大限度避免人为因素利用随机数字表进行随机分组，最大限度避免人为因素16四、四、标记标记及分及分组组分分组组一致性原一致性原则则16五、治疗、给药五、治疗、给药n治疗起点和途经根据不同的肿瘤和治疗药物不同而定；治疗起点和途经根据不同的肿瘤和治疗药物不同而定；n皮下移植瘤，尾静脉给药：皮下移植瘤，尾静脉给药：503,1003；n皮下移植瘤，瘤内给药：皮下移植瘤，瘤内给药：200-3003；n腹腔给药。腹腔给药。17五、治五、治疗疗、给药给药治治疗疗起点和途起点和途经经根据不同的根据不同的肿肿瘤和治瘤和治疗药疗药物物六、肿瘤的测量六、肿瘤的测量n皮下移植瘤：游标卡尺测量，称重，小动物活体成像；皮下移植瘤：游标卡尺测量，称重，小动物活体成像；n肺转移瘤：肺表面结节数，小动物活体成像；肺转移瘤：肺表面结节数，小动物活体成像；18六、六、肿肿瘤的瘤的测测量量皮下移植瘤：游皮下移植瘤：游标标卡尺卡尺测测量，称重，小量，称重，小动动物物n皮下移植瘤实验：生存期较长，有如下情况者处死小鼠，皮下移植瘤实验：生存期较长，有如下情况者处死小鼠，n记为死亡：记为死亡：n肿瘤长径达到肿瘤长径达到2，或体积大于，或体积大于13；n蜷缩不动；蜷缩不动；n毛发蓬松脏乱无光；毛发蓬松脏乱无光；n对外界刺激无反应；对外界刺激无反应；n体重明显下降的（体重明显下降的（24h内下降内下降2-3g）。）。七、小鼠生存期统计七、小鼠生存期统计治疗终点治疗终点n转移瘤实验：一般生存期较短；转移瘤实验：一般生存期较短；19皮下移植瘤皮下移植瘤实验实验：生存期：生存期较长较长，有如下情况者，有如下情况者处处死小鼠，七、小鼠生死小鼠，七、小鼠生八、动物组织标本采集八、动物组织标本采集l收集心、肝、脾、肺、肾等主要脏器，福尔马林固定，收集心、肝、脾、肺、肾等主要脏器，福尔马林固定，l染色观察治疗毒性；染色观察治疗毒性；n治疗实验：治疗实验：l收集肿瘤组织，福尔马林固定，观察肿瘤指标；收集肿瘤组织，福尔马林固定，观察肿瘤指标；n免疫荧光实验：收集新鲜组织，做冰冻切片；免疫荧光实验：收集新鲜组织，做冰冻切片；20八、八、动动物物组织标组织标本采集本采集收集心、肝、脾、肺、收集心、肝、脾、肺、肾肾等主要等主要脏脏器器九、动物实验伦理九、动物实验伦理n悉心照料动物，保证正常生存条件；悉心照料动物，保证正常生存条件；n皮下移植瘤体积最大长至长径皮下移植瘤体积最大长至长径2或体积或体积13；n实验结束对小鼠进行安乐死，拖颈或实验结束对小鼠进行安乐死，拖颈或2处死；处死；21九、九、动动物物实验伦实验伦理理悉心照料悉心照料动动物，保物，保证证正常生存条件；正常生存条件；21十、动物实验安全十、动物实验安全n抓取小鼠时小心被小鼠咬伤；抓取小鼠时小心被小鼠咬伤；n注射给药时注意给药安全；注射给药时注意给药安全；n实验过程中有毒化学试剂、标本的存放；实验过程中有毒化学试剂、标本的存放；22十、十、动动物物实验实验安全安全抓取小鼠抓取小鼠时时小心被小鼠咬小心被小鼠咬伤伤；2223祝大家祝大家实验顺实验顺利，利，硕硕果累累！果累累！23谢谢谢谢谢谢