流感病毒专题ppt课件

流感病毒流行历史与现状流感病毒流行历史与现状u希波拉底(古希腊医生，被誉为医学之父)记载的流感疫情最早始于公元前412年。u1933年英国人威尔逊史密斯（Wilson Smith）第一次分离出人流感病毒。u流感病毒流感病毒每隔一定的时间就会在世界不同地区发生。u自1997-至今，在亚洲及全世界暴发H5N1血清亚型的高致病禽流感流感病毒流行历史与现状希波拉底(古希腊医生，被誉为医学之父)1Influenza pandemic in historyuH1N1:The Spanish flu that killed 50 million people worldwide from 1918 to 1919(scientists identified its proteins long after the pandemic was over)uH2N2:The Asian flu that caused a pandemic from 1957 to 1958 uH3N2:The Hong Kong flu,which caused the worlds most recent pandemic in 1968 Influenza pandemic in historyH219181919年世紀西班牙流感病毒年世紀西班牙流感病毒死亡人死亡人数估计数估计2000 5000万万人人19181919年世紀西班牙流感病毒3 An Emergency Hospital for Influenza Patients An Emergency Hospital for I4流感病毒简介流感病毒简介lInfluenza Virusl有包膜的单链负义RNA病毒l正黏病毒科l直径80120nm，呈球形或丝状l分A、B、C（甲、乙、丙）三型 流感病毒简介Influenza Virus5流感病毒的分类流感病毒的分类u根据NP抗原性，将流感病毒分为A、B、C(甲、乙、丙）三型,三型病毒具有相似的生化和生物学特征。u A型流感病毒常以流行形式出现，能引起世界性流感大流行，它在动物中广泛分布，并也能在动物中引起流感流行和造成大量动物死亡。u B型流感病毒常常引起局部爆发，不引起世界性流感大流行，至今尚未找到它存在于人之外其它动物中的确凿证据。uC型流感病毒主要以散在形式出现，主要侵袭婴幼儿，一般不引起流行，猪也是它天然宿主之一。流感病毒的分类根据NP抗原性，将流感病毒分为A、B、C(甲、6Influenza Virus infection in MDCK cells狗肾细胞Influenza Virus infection in M7疾病多为自限性，主要经飞沫传播H1N1:The Spanish flu that killed 50 million people worldwide from 1918 to 1919(scientists identified its proteins long after the pandemic was over)Tissue InflammationScreening Genes of SARS-CoV that Activate COX-2 Promoter 筛选基因Cyclooxygenase-2(COX-2)基质蛋白与病毒最外层的包膜紧密结合起到保护病毒核心和维系病毒空间结构的作用。Normal mucosa花生四烯酸 Arachidonic AcidCorrect localization of SARS-N is important to stimulate COX-2 expression 蛋白正确定位是关键慢性炎症与癌症密切相关Influenza A viral genome*流感病毒的双链RNA可诱导细胞产生干扰素（INF），INF结合至细胞相应受体，使细胞产生大量蛋白激酶即PKR，PKR可磷酸化真核细胞翻译起始所必需的eIF2蛋白，从而关闭细胞蛋白合成，使病毒无法合成蛋白而死亡。A型流感病毒的抗原变异较快，23年可发生一次。双手接触呼吸道分泌物后（如打喷嚏后）应立即洗手。1、血球凝集试验，鸡红细胞(快)豚鼠，人红细胞(慢)*流感病毒的双链RNA可诱导细胞产生干扰素（INF），INF结合至细胞相应受体，使细胞产生大量蛋白激酶即PKR，PKR可磷酸化真核细胞翻译起始所必需的eIF2蛋白，从而关闭细胞蛋白合成，使病毒无法合成蛋白而死亡。所有RNA片段5末端的13个核苷酸及3末端的12个核苷酸高度保守，且5端与3端反向互补结构。located within the M gene大的抗原变异出现的亚型（质变）即称抗原转变（antigenic shift），其为H和（或）N都发生了大的变异，由此而产生新的亚型，可引起世界性大流行。What Is Influenza Virus Like?疾病多为自限性，主要经飞沫传播What Is Influen8流感病毒的结构流感病毒的结构u由三层构成 u内层为病毒核衣壳，含核蛋白（NP）、P蛋白和RNA。u NP是可溶性抗原，具有型特异性，抗原性稳定。P蛋白（PB1、PB2、PA）是病毒RNA聚合酶亚单位。流感病毒的结构由三层构成 9流感病毒的结构流感病毒的结构u中层为基质蛋白，它构成了病毒的外壳骨架。实际上骨架中除了基质蛋白(M1)之外还有膜蛋白(M2)。基质蛋白与病毒最外层的包膜紧密结合起到保护病毒核心和维系病毒空间结构的作用。u M1抗原性稳定，也具有型特异性。流感病毒的结构中层为基质蛋白，它构成了病毒的外壳骨架。实际上10病毒吸附至宿主细胞表面后，其包膜可通过与宿主细胞质膜融合形成包囊，并通过受体介导的胞吞作用进入细胞内。SARS-N activates translocation of NF-kb and the localization of SARS-N is important for the induction of IL-6 核定位信号与核输出信号都很重要在亚型内部经常发生小变异（量变），称为抗原漂移（antigenic drift）。A型流感病毒的抗原变异较快，23年可发生一次。目前尚无疫苗预防，也无特效药物治疗COX-2:参与炎症反应(疼痛和发烧)siRNA-controlInfluenza pandemic in history阿司匹林可以抑制COX-2表达起到抗炎效果。流感病毒感染与炎症基因连锁反应Sir John Vane在亚型内部经常发生小变异（量变），称为抗原漂移（antigenic drift）。Inducible NOS,iNOS or NOS-IIInfluenza A viral genomeHA和NA均有变异特性，故只有株特异的抗原性，其抗体具有保护作用。SARS-CoronavirusStomach symptoms,such as nausea,vomiting,and diarrhea,also can occur but are more common in children than adultsSARS 2002年底在佛山首次报道S Control PMAA型流感病毒常以流行形式出现，能引起世界性流感大流行，它在动物中广泛分布，并也能在动物中引起流感流行和造成大量动物死亡。希波拉底(古希腊医生，被誉为医学之父)记载的流感疫情最早始于公元前412年。所有RNA片段5末端的13个核苷酸及3末端的12个核苷酸高度保守，且5端与3端反向互补结构。流感病毒的结构流感病毒的结构u外层为病毒包膜，是包裹在基质蛋白之外的一层磷脂双分子层膜，其上具有两种不同糖蛋白构成的辐射状突起，即血凝素（hemagglutinin，HA）和神经氨酸酶(neuraminidase，NA)病毒吸附至宿主细胞表面后，其包膜可通过与宿主细胞质膜融合形成11流感病毒的结构流感病毒的结构 HA（右上）能引起红细胞凝集，是病毒吸咐于敏感细胞表面的工具。NA（右下）则能水解蛋白，水解细胞表面受体特异性糖蛋白末端的N-乙酰神经氨酸，是病毒复制完成后脱离细胞表面的工具。HA和NA均有变异特性，故只有株特异的抗原性，其抗体具有保护作用。流感病毒的结构 HA（右上）能引起红细胞凝集，是病毒12流感病毒的抗原性变异流感病毒的抗原性变异u在亚型内部经常发生小变异（量变），称为抗原漂移（antigenic drift）。u大的抗原变异出现的亚型（质变）即称抗原转变（antigenic shift），其为H和（或）N都发生了大的变异，由此而产生新的亚型，可引起世界性大流行。流感病毒的抗原性变异就是指HA和NA抗原结构的改变，主要是HA。流感病毒的抗原性变异在亚型内部经常发生小变异（量变），称为抗13流感病毒的抗原性变异流感病毒的抗原性变异u HA：15种亚型变异。NA：9种亚型变异。u A型流感病毒的抗原变异较快，23年可发生一次。u B型流感病毒的抗原变异很慢，未划分成亚型转变。u C型流感病毒尚未发现抗原变异。流感病毒的抗原性变异 HA：15种亚型变异。NA：9种亚型变14流感病毒的基因组流感病毒的基因组v8个独立的RNA片段（A型、B型）或7个独立的RNA片段（C型）v核酸总长度为约13.6 kbv所有RNA片段5末端的13个核苷酸及3末端的12个核苷酸高度保守，且5端与3端反向互补结构。v共编码10种蛋白质，其中8种（PB1、PB2、PA、HA、NA、NP、M1、M2）为结构蛋白，2种（NS1、NS2）为非结构蛋白。流感病毒的基因组8个独立的RNA片段（A型、B型）或7个独立15流感病毒的基因组流感病毒的基因组流感病毒的基因组16流感病毒的基因组流感病毒的基因组v RNA13 编码PB2、PB1和PA蛋白。v RNA4 编码HA蛋白。v RNA5 编码NP蛋白。v RNA6 编码NA蛋白。v RNA7 编码M1，M2蛋白。v RNA8 编码NS1，NS2蛋白流感病毒的基因组 RNA13 编码PB2、PB1和PA蛋白17Influenza A viral genomeNS1,NS2检测目标?Influenza A viral genomeNS1,NS18流感病毒的感染及复制过程流感病毒的感染及复制过程v 吸附v 侵入v 脱壳v 表达、复制及装配v 成熟及释放流感病毒的感染及复制过程 吸附19流感病毒的感染及复制过程流感病毒的感染及复制过程流感病毒的感染及复制过程20流感病毒的吸附流感病毒的吸附v流感病毒的NA可破坏宿主呼吸道的神经氨酸，使蛋白水解，暴露出呼吸道上皮表面特异性的含唾液酸的糖蛋白受体。这种受体与病毒包膜上HA中的糖蛋白成分可专一地结合，从而使病毒粘附至呼吸道上皮表面。流感病毒的吸附流感病毒的NA可破坏宿主呼吸道的神经氨酸，使蛋21PLoSONE 2008,e1985Discovery of signalling moleculer NOGiven nasally and should provide mucosal,humoral and cell-mediated immunity；逃逸免疫系统杀伤的机制流感病毒的抗原性变异就是指HA和NA抗原结构的改变，主要是HA。Given nasally and should provide mucosal,humoral and cell-mediated immunity；每天开窗通风数次（冬天要避免穿堂风），保持室内空气新鲜。MDCK细胞(依赖胰蛋白酶)SARS 2002年底在佛山首次报道Sometimes people may become infected by touching something with flu viruses on it and then touching their mouth or nose.正面作用：正常炎症反应可清除病毒感染，促进组织修复，对人体有益，但过度炎症反应对人体有害。病毒包膜上的NA分子可水解去处细胞膜表面的唾液酸残基，促使完整的病毒颗粒从细胞释放。Ca2/CaM activation dependence1、血球凝集试验，鸡红细胞(快)豚鼠，人红细胞(慢)？子代病毒是否会因包膜上既有HA分子又有唾液酸分子而彼此吸附形成聚集？子代病毒包膜上的的HA分子是否会与宿主细胞表面的唾液酸分子结合，从而病毒无法释放？进入宿主细胞的包囊很快与细胞的溶酶体结合，此时包囊中的pH可降至5左右。SARS-S 蛋白诱导COX-2表达*流感病毒的双链RNA可诱导细胞产生干扰素（INF），INF结合至细胞相应受体，使细胞产生大量蛋白激酶即PKR，PKR可磷酸化真核细胞翻译起始所必需的eIF2蛋白，从而关闭细胞蛋白合成，使病毒无法合成蛋白而死亡。流感病毒流行历史与现状SARS GenomeNeuronal NOS,nNOS or NOS-I流感病毒的侵入流感病毒的侵入u病毒吸附至宿主细胞表面后，其包膜可通过与宿主细胞质膜融合形成包囊，并通过受体介导的胞吞作用进入细胞内。PLoSONE 2008,e1985流感病毒的侵入病毒吸附22流感病毒的脱壳流感病毒的脱壳u进入宿主细胞的包囊很快与细胞的溶酶体结合，此时包囊中的pH可降至5左右。在这样的低pH环境下，病毒的HA裂解为HA1和HA2两个亚单位，激活存在于HA2氨基酸末端的溶解多肽，导致外壳的溶解，使病毒的内容物（vRNP）释放入胞浆中，在ATP供能的条件下通过宿主细胞的核孔复合物转运至细胞核内。流感病毒的脱壳进入宿主细胞的包囊很快与细胞的溶酶体结合，此时23流感病毒的表达、复制及装配流感病毒的表达、复制及装配病毒蛋白的合成，NP、P蛋白和NS1在感染后数小时即生成，其它蛋白如HA、NA、M1、M2和NS2合成较晚。病毒蛋白合成时间的控制可能受到病毒mRNA向核外运输的调节，并可能与病毒蛋白NS1的功能有关。流感病毒的表达、复制及装配病毒蛋白的合成，NP、P蛋白和NS24流感病毒的成熟及释放流感病毒的成熟及释放病毒成熟前，各种病毒成分已结合在细胞表面，最后通过出芽的方式，使局部的细胞膜向外隆起，包围住结合在细胞膜上的核衣壳，成为新合成的有感染力的病毒。流感病毒的成熟及释放病毒成熟前，各种病毒成分已结合在细胞表面25流感病毒的成熟及释放流感病毒的成熟及释放？子代病毒包膜上的的HA分子是否会与宿主细胞表面的唾液酸分子结合，从而病毒无法释放？子代病毒是否会因包膜上既有HA分子又有唾液酸分子而彼此吸附形成聚集？病毒包膜上的NA分子可水解去处细胞膜表面的唾液酸残基，促使完整的病毒颗粒从细胞释放。流感病毒的成熟及释放？子代病毒包膜上的的HA分子是否会与宿主26反向遗传技术-12 plasmids system 反向遗传技术-12 plasmids system 27反向遗传技术-8 plasmids system 反向遗传技术-8 plasmids system 28Symptoms of Influenzalfever(usually high)lheadache lextreme tiredness ldry cough lsore throat lrunny or stuffy nose lmuscle aches lStomach symptoms,such as nausea,vomiting,and diarrhea,also can occur but are more common in children than adults Symptoms of Influenzafever(us29病理u人体通过呼吸吸入病毒颗粒u病毒通过HA进入呼吸系统的表皮细胞u由于病毒导致细胞死亡，产生了炎症反应，咳嗽进一步加速了病毒的传播u由于dsRNA的出现触发了干扰素的生成，更多流感的症状(打喷嚏，热病，冷颤，肌肉酸疼，头疼，疲劳)产生u因为流感对呼吸系统的伤害，更多严重的疾病(如肺炎)并发。3 DAYS pi7 DAYS piNormal mucosa病理人体通过呼吸吸入病毒颗粒3 DAYS pi7 DAYS 30逃逸免疫系统杀伤的机制逃逸免疫系统杀伤的机制u 产生NS1蛋白，抑制PKR激活。NS1蛋白与双链RNA结合，防止双链RNA激活PKR*。*流感病毒的双链RNA可诱导细胞产生干扰素（INF），INF结合至细胞相应受体，使细胞产生大量蛋白激酶即PKR，PKR可磷酸化真核细胞翻译起始所必需的eIF2蛋白，从而关闭细胞蛋白合成，使病毒无法合成蛋白而死亡。u包膜上抗原蛋白突变，逃避体液免疫。逃逸免疫系统杀伤的机制 产生NS1蛋白，抑制PKR激活。31How Is the Flu Spread?Flu viruses spread mainly from person to person through coughing or sneezing of people with influenza.Sometimes people may become infected by touching something with flu viruses on it and then touching their mouth or nose.How Is the Flu Spread?Flu vir32流感病毒的传播流感病毒的传播u 患者一个激烈的咳嗽反射能将含有病毒的微液滴以每小时约100英里的速度排出，且每个微液滴中含有上百万个病毒颗粒，而启动一个个体的感染仅仅需要几个或几十个病毒颗粒。这就导致了流感病毒可快速高效地传播。流感病毒的传播 患者一个激烈的咳嗽反射能将含有病毒的微液滴以33保持良好的个人及环境卫生。在流感高发期，尽量不到人多拥挤、空气污浊的场所；因为流感对呼吸系统的伤害，更多严重的疾病(如肺炎)并发。Inducible NOS,iNOS or NOS-II接种9日龄鸡胚，收获尿囊液；希波拉底(古希腊医生，被誉为医学之父)记载的流感疫情最早始于公元前412年。Influenza Virus infection in MDCK cellsInduced by Endotoxin and cytokine在无生命物体表面可存活24h，在人类排泄物中存活4天，潜伏期112天，平均4.H3N2:The Hong Kong flu,which caused the worlds most recent pandemic in 1968RNA6 编码NA蛋白。由于dsRNA的出现触发了干扰素的生成，更多流感的症状(打喷嚏，热病，冷颤，肌肉酸疼，头疼，疲劳)产生Flu viruses spread mainly from person to person through coughing or sneezing of people with influenza.SARS-N activates translocation of NF-kb and the localization of SARS-N is important for the induction of IL-6 核定位信号与核输出信号都很重要在亚型内部经常发生小变异（量变），称为抗原漂移（antigenic drift）。希波拉底(古希腊医生，被誉为医学之父)记载的流感疫情最早始于公元前412年。Correct localization of SARS-N is important to stimulate COX-2 expression 蛋白正确定位是关键A型流感病毒的抗原变异较快，23年可发生一次。NO是人体重要的信号分子An Emergency Hospital for Influenza PatientsChronic Inflammation(lung)H3N2:The Hong Kong flu,which caused the worlds most recent pandemic in 1968流感的预防措施u自我保护u保持良好的个人及环境卫生。u勤洗手，使用肥皂或洗手液并用流动水洗手，不用污浊的毛巾擦手。双手接触呼吸道分泌物后（如打喷嚏后）应立即洗手。u打喷嚏或咳嗽时应用手帕或纸巾掩住口鼻，避免飞沫污染他人。流感患者在家或外出时佩戴口罩，以免传染他人。u均衡饮食、适量运动、充足休息，避免过度疲劳。u每天开窗通风数次（冬天要避免穿堂风），保持室内空气新鲜。u在流感高发期，尽量不到人多拥挤、空气污浊的场所；不得已必须去时，最好戴口罩。保持良好的个人及环境卫生。流感的预防措施自我保护34流感的预防措施u 疫苗接种 流感疫苗接种是世界公认的预防流感的有效方法。实践证明，免疫预防是减少流感危害的一种重要措施和手段，对高危人群、易感人群接种流感疫苗是预防流感的有效方法。流感的预防措施 疫苗接种35The inactivated vaccine 灭活疫苗Short lived protective;Usually given in the fall so that protection is high in December/January;Only certain formulations of the vaccine are FDA certified for young children The live,attenuated influenza virus(LAIV)vaccine减毒活疫苗 Only approved for healthy individuals；Given nasally and should provide mucosal,humoral and cell-mediated immunity；It needs to be given every year；ontraindicated for those allergic to eggs；Contraindicated for children and adolescents on any therapy containing aspirin The inactivated vaccine 灭活疫苗Sh36流感病毒扩增与检测扩增：接种9日龄鸡胚，收获尿囊液；MDCK细胞(依赖胰蛋白酶)检测：1、血球凝集试验，鸡红细胞(快)豚鼠，人红细胞(慢)2、ELISA(需要流感病毒抗体)3、RT-PCR检测病毒的RNA4、Real-Time PCR确定病毒RNA的数量流感病毒扩增与检测扩增：37关于禽流感（关于禽流感（AIV）u 香港1997年H5N1禽流感病毒感染人引起18人发病，至今，已有数百人感染H5N1引起死亡的报道。关于禽流感（AIV）香港1997年H5N1禽流感病毒感染人38Reservoir Hosts HumansHorses,birds,and pigs Reservoir Hosts Humans39u Avian flu H5N1 has become common in Asian poultry.Officials believe open-air poultry markets lead to the spread of the disease.高密度开放式运输和存放导致AIV快速传播 Avian flu H5N1 has become com40外层为病毒包膜，是包裹在基质蛋白之外的一层磷脂双分子层膜，其上具有两种不同糖蛋白构成的辐射状突起，即血凝素（hemagglutinin，HA）和神经氨酸酶(neuraminidase，NA)Screening Genes of SARS-CoV that Activate COX-2 Promoter 筛选基因MDCK细胞(依赖胰蛋白酶)只有NF-kB与N蛋白转录激活有关分A、B、C（甲、乙、丙）三型RNA4 编码HA蛋白。COX-1:组成性表达Inducible NOS,iNOS or NOS-II阿司匹林可以抑制COX-2表达起到抗炎效果。二、问答题，40分，每题10分流感病毒的NA可破坏宿主呼吸道的神经氨酸，使蛋白水解，暴露出呼吸道上皮表面特异性的含唾液酸的糖蛋白受体。共编码10种蛋白质，其中8种（PB1、PB2、PA、HA、NA、NP、M1、M2）为结构蛋白，2种（NS1、NS2）为非结构蛋白。located within the M gene在流感高发期，尽量不到人多拥挤、空气污浊的场所；？子代病毒是否会因包膜上既有HA分子又有唾液酸分子而彼此吸附形成聚集？双手接触呼吸道分泌物后（如打喷嚏后）应立即洗手。重症急性呼吸综合症冠状病毒SARS Coronavirus,SARS CoVCOX-1:组成性表达？子代病毒是否会因包膜上既有HA分子又有唾液酸分子而彼此吸附形成聚集？Normal mucosa慢性炎症与癌症密切相关SARS-N activates IL-6 promoter and induces protein expression（N蛋白诱导IL-6表达）Infecting Other Species.u In 2004,avian flu H5N1 infected and killed tigers,leopards and cats.The potential danger is much more severe.外层为病毒包膜，是包裹在基质蛋白之外的一层磷脂双分子层膜，其41Fear and Panic Has Induced by the Bird FluFear and Panic Has Induced by 42Does the Azrael Return?Does the Azrael Return?43流感病毒感染与炎症基因连锁反应流感病毒感染与炎症基因连锁反应 流感病毒流感病毒(dsRNA)(NS1)105 病人病人炎炎症症反反应应COX-2IL-32iNOS流感病毒感染与炎症基因连锁反应 流感病毒炎COX-2IL-344病毒感染与炎症反应病毒感染与炎症反应临床症状疼痛和发烧全身炎症反应局部炎症反应慢性炎症与癌症密切相关研究背景介绍研究背景介绍病毒感染与炎症反应研究背景介绍451.人体有两种类型COX，COX-1，COX-2 COX-1:组成性表达 COX-2:沉默，感染诱导表达2.COX-2:参与炎症反应(疼痛和发烧)3.阿司匹林可以抑制COX-2表达起到抗炎效果。全球使用最广泛的抗炎药物阿司匹林消耗17,500 吨/年 环加氧酶环加氧酶Cyclooxygenase研究背景介绍研究背景介绍人体有两种类型COX，COX-1，COX-2环加氧酶Cyc46炎症基因：环加氧酶炎症基因：环加氧酶-2Cyclooxygenase-2(COX-2)花生四烯酸花生四烯酸 Arachidonic Acid前列腺素前列腺素 ProstaglandinsLCOX-1COX-2研究背景介绍研究背景介绍Sir John Vane诺贝尔奖诺贝尔奖 炎症基因：环加氧酶-2LCOX-1COX-2研究背景介绍Si47Chronic Inflammation(lung)COX-2:involved in inflammation 炎症炎症Normal Blood VesselTissue InflammationChronic Inflammation(lung)CO48炎症反应的双面性炎症反应的双面性正面作用：正面作用：正常炎症反应可清除病毒感染，促进组织正常炎症反应可清除病毒感染，促进组织修复，对人体有益，但过度炎症反应对人体有害。修复，对人体有益，但过度炎症反应对人体有害。负面作用：负面作用：扰乱正常生理参数，感染死亡率增加。扰乱正常生理参数，感染死亡率增加。COX-2-/-COX-2-/-鼠对流感病毒感染鼠对流感病毒感染病症减轻，病症减轻，死亡率降低，死亡率降低，但是肺组织中的病毒量明显上升。但是肺组织中的病毒量明显上升。（病毒有可能与机体和平共处）（病毒有可能与机体和平共处）炎症反应的双面性49诱导型诱导型NO合成酶合成酶 iNOS:involved in inflammation诱导型NO合成酶 iNOS:involved in in50NO是人体重要的信号分子是人体重要的信号分子NO是人体重要的信号分子51三种类型的三种类型的NO合成酶合成酶 SourcesCa2/CaM activation dependenceInduced by Endotoxin and cytokineNeuronal NOS,nNOS or NOS-I +_Endothelial NOS,eNOS or NOS-III+_Inducible NOS,iNOS or NOS-II _+三种类型的NO合成酶 Ca2/CaM activatio52sore throatP蛋白（PB1、PB2、PA）是病毒RNA聚合酶亚单位。实际上骨架中除了基质蛋白(M1)之外还有膜蛋白(M2)。SARS Genome在亚型内部经常发生小变异（量变），称为抗原漂移（antigenic drift）。慢性炎症与癌症密切相关Influenza Virus infection in MDCK cellsP gene with the highest variation rateCorrect localization of SARS-N is important to stimulate COX-2 expression 蛋白正确定位是关键Sir John VaneNS1蛋白与双链RNA结合，防止双链RNA激活PKR*。病毒包膜上的NA分子可水解去处细胞膜表面的唾液酸残基，促使完整的病毒颗粒从细胞释放。基质蛋白与病毒最外层的包膜紧密结合起到保护病毒核心和维系病毒空间结构的作用。S蛋白诱导COX-2表达外层为病毒包膜，是包裹在基质蛋白之外的一层磷脂双分子层膜，其上具有两种不同糖蛋白构成的辐射状突起，即血凝素（hemagglutinin，HA）和神经氨酸酶(neuraminidase，NA)目前尚无疫苗预防，也无特效药物治疗S Control PMAMDCK细胞(依赖胰蛋白酶)人冠状病毒据中和试验至少可分三个血清型流感病毒流行历史与现状Sources只有NF-kB与N蛋白转录激活有关sore throat53Discovery of signalling moleculer NODiscovery of signalling molecu54流感病毒感染与炎症基因连锁反应流感病毒感染与炎症基因连锁反应 流感病毒流感病毒(dsRNA)(NS1)105 病人病人炎炎症症反反应应COX-2IL-32iNOS流感病毒感染与炎症基因连锁反应 流感病毒炎COX-2IL-355COX-2,IL-32 and iNOS are induced in response to AIV infection or dsRNA treatment in a time-dependent manner.ABCCOX-2,IL-32 and iNOS are indu56COX-2 is upstream of IL-32 and iNOS in inflammatory response.ABCOX-2 is upstream of IL-32 and57IL-32,up-regulation of iNOS and negative feedback to COX-2ABIL-32,up-regulation of iNOS a58Bar siRNA-control siRNA-IL-32 pCOX-2-Luc poly(IC)+IFN-Bar siRNA-control siRNA-IL-32 phiNOS-Luc poly(IC)+IFN-ABCDKnock down IL-32 by siRNA abolished feedback inhibition to COX-2 and up-regulation of iNOSBar Bar 59feedback inhibition of iNOS to IL-32 and cascade feedback from iNOS to COX-2feedback inhibition of iNOS to60 SummaryPLoSONE 2008,e1985 SummaryPLoSONE 2008,e19861H1N1:The Spanish flu that killed 50 million people worldwide from 1918 to 1919(scientists identified its proteins long after the pandemic was over)？子代病毒是否会因包膜上既有HA分子又有唾液酸分子而彼此吸附形成聚集？阿司匹林可以抑制COX-2表达起到抗炎效果。在无生命物体表面可存活24h，在人类排泄物中存活4天，潜伏期112天，平均4.A型流感病毒的抗原变异较快，23年可发生一次。SARS 2002年底在佛山首次报道SARS-Coronavirus1933年英国人威尔逊史密斯（Wilson Smith）第一次分离出人流感病毒。siRNA-controlInfluenza Virus infection in MDCK cellsScreening Genes of SARS-CoV that Activate COX-2 Promoter 筛选基因Discovery of signalling moleculer NO环加氧酶Cyclooxygenase在流感高发期，尽量不到人多拥挤、空气污浊的场所；Discovery of signalling moleculer NO在流感高发期，尽量不到人多拥挤、空气污浊的场所；MDCK细胞(依赖胰蛋白酶)阿司匹林可以抑制COX-2表达起到抗炎效果。Sources因为流感对呼吸系统的伤害，更多严重的疾病(如肺炎)并发。Inducible NOS,iNOS or NOS-IICorrect localization of SARS-N is important to stimulate COX-2 expression 蛋白正确定位是关键SARS-CoVH1N1:The Spanish flu that k62重症急性呼吸综合症冠状病毒SARS Coronavirus,SARS CoVSARS 2002年底在佛山首次报道重症急性呼吸综合症冠状病毒SARS Coronavirus63SARS-Coronavirusu早期称非典型性肺炎“非典”，后期称Severe Acute Respiratory Syndrome 英文简称是“SARS”。u 引起疾病的病原体是冠状病毒的一个变种（新型冠状病毒），科学家将其命名为“SARS-CoV”。u在无生命物体表面可存活24h，在人类排泄物中存活4天，潜伏期112天，平均4.5天。果子狸是SARS病毒的主要载体。uSARS病毒对一些普通消毒剂就很敏感，能在5min内将其杀死，如10%甲醛、10%次氯酸钠、75%乙醇和2%苯酚混合液。56以上高温可在30min内将其杀死，SARS病毒对抗菌药物不敏感。SARS-Coronavirus早期称非典型性肺炎“非典”，641.多形性，单正链RNA，不分节段，螺旋对称2.人呼吸道冠状病毒包膜表面有突起（呈花瓣状，排列为一圈）3.人冠状病毒据中和试验至少可分三个血清型4.可引起普通感冒和咽喉炎，某些血清型可致成人腹泻或胃肠炎5.疾病多为自限性，主要经飞沫传播6.目前尚无疫苗预防，也无特效药物治疗冠状病毒 Coronavirus多形性，单正链RNA，不分节段，螺旋对称冠状病毒 Coron65SARS病毒的形态病毒的形态病毒形态示意图病毒形态示意图SARS病毒的形态病毒形态示意图66SARS病毒的形态病毒的形态病毒形态电镜图病毒形态电镜图SARS病毒的形态病毒形态电镜图67SARS病毒的形态病毒的形态病毒群落示意图病毒群落示意图SARS病毒的形态病毒群落示意图68SARS GenomeSARS Genome69SARS症状SARS症状70流感病毒专题ppt课件71Normal mucosaInduced by Endotoxin and cytokineEndothelial NOS,4、Real-Time PCR确定病毒RNA的数量RNA7 编码M1，M2蛋白。Flu viruses spread mainly from person to person through coughing or sneezing of people with influenza.COX-2:involved in inflammation 炎症基质蛋白与病毒最外层的包膜紧密结合起到保护病毒核心和维系病毒空间结构的作用。IJ Biochem Cell Biol负面作用：扰乱正常生理参数，感染死亡率增加。目前尚无疫苗预防，也无特效药物治疗死亡人数估计2000 5000万人因为流感对呼吸系统的伤害，更多严重的疾病(如肺炎)并发。？子代病毒是否会因包膜上既有HA分子又有唾液酸分子而彼此吸附形成聚集？SARS Genome患者一个激烈的咳嗽反射能将含有病毒的微液滴以每小时约100英里的速度排出，且每个微液滴中含有上百万个病毒颗粒，而启动一个个体的感染仅仅需要几个或几十个病毒颗粒。Inducible NOS,iNOS or NOS-II疾病多为自限性，主要经飞沫传播炎症基因：环加氧酶-2死亡人数估计2000 5000万人An Emergency Hospital for Influenza Patients反向遗传技术-8 plasmids system中国的SARS流行Normal mucosa中国的SARS流行72SARS病毒SARS病毒73Phylogenetic analysis of genome(AY394850)(AY394850)of SARS-CoV WHU strain and other 46 isolates SARS病毒病毒WHU株基因组序列分析株基因组序列分析完成了SARS病毒WHU株的全基因组测序工作，将SARS病毒WHU株的全基因组序列与世界各地其他47株SARS病毒的全基因组序列进行了比对，分析了SARS病毒在流行传播过程中早期，中期，晚期病毒基因组遗传变异规律 Phylogenetic analysis of genom74Distribution of mutations onSARS-CoV genomes22 positions with mutation 22 positions with mutation occurred on more than occurred on more than three genomes three genomes P gene with the highest P gene with the highest variation rate variation rate Position(26477)with the Position(26477)with the highest mutation rate is highest mutation rate is located within the M genelocated within the M gene Virus Genes.2005.30(1)：93-102.Distribution of mutations on2275Role of viral proteins which induce expression of COX-2 by SARS-CoVInflammation 炎症SARS-CoV COX-2 环加氧酶Role of viral proteins which i76Screening Genes of SARS-CoV that Activate COX-2 Promoter 筛选基因筛选基因SNCtrlScreening Genes of SARS-CoV th77SARS-N activates COX-2 promoter and induces protein expression（N蛋白诱导蛋白诱导COX-2表达表达）SARS-N activates COX-2 promote78Correct localization of SARS-N is important to stimulate COX-2 expression 蛋白正确定位是关键蛋白正确定位是关键 IJ Biochem Cell Biol 2006.38(8)核定位信号核定位信号Correct localization of SARS-N79SARS-N activates IL-6 promoter and induces protein expression（N蛋白诱导蛋白诱导IL-6表达表达）SARS-N activates IL-6 promoter80NF-kB but not C/EBP is involved in SARS-N induced IL-6 expression 只有只有NF-kB与与N N蛋白转录激活有关蛋白转录激活有关NF-kB but not C/EBP is involve81SARS-N activates translocation of NF-kb and the localization of SARS-N is important for the induction of IL-6 核定位信号与核输出信号都很重要核定位信号与核输出信号都很重要Virology.2007 May 7SARS-N activates translocation82HEK293T COS-7 A549COX-2 Expression Induced by Spike of SARS-CoVanti-COX-2anti-Santi-actin S Control PMAS蛋白诱导蛋白诱导COX-2表达表达HEK293T COS-7 83Phylogenetic analysis of genome(AY394850)Only approved for healthy individuals；阿司匹林可以抑制COX-2表达起到抗炎效果。Correct localization of SARS-N is important to stimulate COX-2 expression 蛋白正确定位是关键MDCK细胞(依赖胰蛋白酶)病毒包膜上的NA分子可水解去处细胞膜表面的唾液酸残基，促使完整的病毒颗粒从细胞释放。SARS-N activates COX-2 promoter and induces protein expression（N蛋白诱导COX-2表达）引起疾病的病原体是冠状病毒的一个变种（新型冠状病毒），科学家将其命名为“SARS-CoV”。Discovery of signalling moleculer NO保持良好的个人及环境卫生。of SARS-CoV WHU strain and other 46 isolatesSARS-S 蛋白诱导COX-2表达打喷嚏或咳嗽时应用手帕或纸巾掩住口鼻，避免飞沫污染他人。二、问答题，40分，每题10分双手接触呼吸道分泌物后（如打喷嚏后）应立即洗手。SARS 2002年底在佛山首次报道在这样的低pH环境下，病毒的HA裂解为HA1和HA2两个亚单位，激活存在于HA2氨基酸末端的溶解多肽，导致外壳的溶解，使病毒的内容物（vRNP）释放入胞浆中，在ATP供能的条件下通过宿主细胞的核孔复合物转运至细胞核内。Sometimes people may become infected by touching something with flu viruses on it and then touching their mouth or nose.在流感高发期，尽量不到人多拥挤、空气污浊的场所；接种9日龄鸡胚，收获尿囊液；Summary根据NP抗原性，将流感病毒分为A、B、C(甲、乙、丙）三型,三型病毒具有相似的生化和生物学特征。SARS-S 蛋白诱导蛋白诱导COX-2表达表达FASEB J 2007;21(7):1586-1596 Phylogenetic analysis of genom84The End The End 85期末考试一、选择题，60分，每题一分二、问答题，40分，每题10分 基础类，综合类，实验设计类期末考试一、选择题，60分，每题一分86