应医学院医检专微生物检验课件

第三章第三章 细菌感染的病原学诊断细菌感染的病原学诊断褚云卓褚云卓6/26/20241第三章 细菌感染的病原学诊断褚云卓8/11/2023本章内容本章内容第一节第一节第一节第一节 标本的采集和处理原则标本的采集和处理原则标本的采集和处理原则标本的采集和处理原则第二节第二节第二节第二节 细菌的形态学检查细菌的形态学检查细菌的形态学检查细菌的形态学检查第三节第三节第三节第三节 细菌的分离培养和鉴定细菌的分离培养和鉴定细菌的分离培养和鉴定细菌的分离培养和鉴定第四节第四节第四节第四节 细菌的非培养检测方法细菌的非培养检测方法细菌的非培养检测方法细菌的非培养检测方法6/26/20242本章内容第一节 标本的采集和处理原则8/11/20232第一节第一节 标本的采集和处理原则标本的采集和处理原则一、标本采集的一般原则一、标本采集的一般原则1 1早期采集早期采集 2 2无菌采集无菌采集 3 3根据目的菌的特性用不同的方法采集根据目的菌的特性用不同的方法采集4 4采集适量标本采集适量标本 5 5安全采集安全采集 6/26/20243第一节 标本的采集和处理原则一、标本采集的一般原则8/11第一节第一节 标本的采集和处理原则标本的采集和处理原则二、标本的处理二、标本的处理1.1.对环境敏感的细菌如脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌对环境敏感的细菌如脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌和流感嗜血杆菌等应保温并立即送检和流感嗜血杆菌等应保温并立即送检2.2.其他所有的标本采集后最好在其他所有的标本采集后最好在2h2h之内送到实验室之内送到实验室3.3.若不能及时送检，标本应置于一定环境中保存若不能及时送检，标本应置于一定环境中保存4.4.一般情况下，用于细菌培养的标本保存时间不应一般情况下，用于细菌培养的标本保存时间不应超过超过24h24h6/26/20244第一节 标本的采集和处理原则二、标本的处理8/11/202.病人标本中可能含有大量致病菌，必须注意安全病人标本中可能含有大量致病菌，必须注意安全防护防护.标本切勿污染容器的瓶口和外壁，容器必须包装标本切勿污染容器的瓶口和外壁，容器必须包装好，防止送检过程中倒翻或碰破流出好，防止送检过程中倒翻或碰破流出.对于烈性传染病标本运送时更要特别严格，必须对于烈性传染病标本运送时更要特别严格，必须按规定包装，由专人运送按规定包装，由专人运送.厌氧性标本应放在专门的运送瓶或试管内运送，厌氧性标本应放在专门的运送瓶或试管内运送，有时可直接用抽取标本的注射器运送有时可直接用抽取标本的注射器运送6/26/20245.病人标本中可能含有大量致病菌，必须注意安全防护8/11/第二节第二节 细菌的形态学检查细菌的形态学检查1.1.包括不染色标本检查法和染色标本检查法包括不染色标本检查法和染色标本检查法2.2.镜检可以了解有无细菌及大致的菌量镜检可以了解有无细菌及大致的菌量3.3.根据细菌形态、结构和染色性有助于对病原菌的根据细菌形态、结构和染色性有助于对病原菌的初步识别和分类初步识别和分类4.4.通过形态学检查可得到初步诊断，对临床早期诊通过形态学检查可得到初步诊断，对临床早期诊断和治疗疾病有一定的参考意义断和治疗疾病有一定的参考意义6/26/20246第二节 细菌的形态学检查1.包括不染色标本检查法和染色标本第二节第二节 细菌的形态学检查细菌的形态学检查一、不染色标本一、不染色标本1.1.细菌不经染色直接镜检，主要用于检查生活状态细菌不经染色直接镜检，主要用于检查生活状态下细菌的动力及运动状况下细菌的动力及运动状况2.2.常用的方法有压滴法和悬滴法常用的方法有压滴法和悬滴法 有动力：可看到细菌自一处移至另一处，有明显有动力：可看到细菌自一处移至另一处，有明显 的方向性位移的方向性位移 无动力：细菌呈现布朗运动，只在原地颤动而无无动力：细菌呈现布朗运动，只在原地颤动而无 位置的改变位置的改变6/26/20247第二节 细菌的形态学检查一、不染色标本8/11/20237第二节第二节 细菌的形态学检查细菌的形态学检查3.3.有些病原菌通过不染色标本的动力检查可作有些病原菌通过不染色标本的动力检查可作出初步鉴定出初步鉴定 如疑似霍乱患者，镜下观察到来回穿梭似如疑似霍乱患者，镜下观察到来回穿梭似流星状运动的细菌，流星状运动的细菌，制动试验阳性，可初步制动试验阳性，可初步推断为推断为“疑似疑似O1O1群霍乱弧菌群霍乱弧菌”。6/26/20248第二节 细菌的形态学检查3.有些病原菌通过不染色标本的动力第二节第二节 细菌的形态学检查细菌的形态学检查二、染色标本二、染色标本（一）常用染料（一）常用染料1 1碱性染料：碱性复红、结晶紫、美蓝等碱性染料：碱性复红、结晶紫、美蓝等2 2酸性染料：有伊红、刚果红等酸性染料：有伊红、刚果红等3 3复合染料（中性染料）及荧光染料：复合染料有复合染料（中性染料）及荧光染料：复合染料有瑞氏染料（伊红美蓝）、姬姆萨染料（伊红天青）瑞氏染料（伊红美蓝）、姬姆萨染料（伊红天青）等；荧光染料有荧光标记的抗体等；荧光染料有荧光标记的抗体 6/26/20249第二节 细菌的形态学检查二、染色标本8/11/20239第二节第二节 细菌的形态学检查细菌的形态学检查（二）常用的染色方法（二）常用的染色方法1 1革兰染色（革兰染色（gram staingram stain）革兰阳性球菌革兰阳性球菌 革兰阴性杆菌革兰阴性杆菌6/26/202410第二节 细菌的形态学检查（二）常用的染色方法8/11/20第二节第二节 细菌的形态学检查细菌的形态学检查2抗酸染色 （acid-fast stain）可将细菌分为两大类：即-抗酸性细菌 -非抗酸性细菌6/26/202411第二节 细菌的形态学检查2抗酸染色8/11/202311第二节第二节 细菌的形态学检查细菌的形态学检查3 3荧光染色荧光染色 （1 1）荧光染色法敏感性强，效率高而且容易观察）荧光染色法敏感性强，效率高而且容易观察结果，在临床细菌鉴定中有很大的实用价值。结果，在临床细菌鉴定中有很大的实用价值。（2 2）主要用于结核分枝杆菌、麻风分枝杆菌、白）主要用于结核分枝杆菌、麻风分枝杆菌、白喉棒状杆菌及痢疾志贺菌等的检测。喉棒状杆菌及痢疾志贺菌等的检测。6/26/202412第二节 细菌的形态学检查3荧光染色 8/11/20231第二节第二节 细菌的形态学检查细菌的形态学检查4.4.鞭毛染色鞭毛染色 可观察到菌体上有无鞭毛、鞭毛的位置及数可观察到菌体上有无鞭毛、鞭毛的位置及数量，在细菌鉴定中，特别是非发酵菌的鉴定中量，在细菌鉴定中，特别是非发酵菌的鉴定中很重要。很重要。5.5.异染颗粒染色异染颗粒染色 用于白喉棒状杆菌染色。用于白喉棒状杆菌染色。6/26/202413第二节 细菌的形态学检查4.鞭毛染色8/11/202313第二节第二节 细菌的形态学检查细菌的形态学检查6.芽胞染色：绿色部分 为芽胞6/26/202414第二节 细菌的形态学检查6.芽胞染色：8/11/20231第二节第二节 细菌的形态学检查细菌的形态学检查7.7.墨汁染色墨汁染色墨汁染色墨汁染色:一般用于新型隐球菌一般用于新型隐球菌一般用于新型隐球菌一般用于新型隐球菌检查检查检查检查6/26/202415第二节 细菌的形态学检查7.墨汁染色:8/11/20231第三节 细菌的分离培养和鉴定一、一、培养基的种类和选择培养基的种类和选择培养基的种类和选择培养基的种类和选择 培养基的组成成分、培养基种类、培养基的选择培养基的组成成分、培养基种类、培养基的选择培养基的组成成分、培养基种类、培养基的选择培养基的组成成分、培养基种类、培养基的选择二、分离及培养二、分离及培养二、分离及培养二、分离及培养 细菌的分离、细菌培养方法细菌的分离、细菌培养方法细菌的分离、细菌培养方法细菌的分离、细菌培养方法三、生化反应和鉴定三、生化反应和鉴定三、生化反应和鉴定三、生化反应和鉴定 碳水化合物的代谢试验碳水化合物的代谢试验碳水化合物的代谢试验碳水化合物的代谢试验 蛋白质和氨基酸的代谢试验蛋白质和氨基酸的代谢试验蛋白质和氨基酸的代谢试验蛋白质和氨基酸的代谢试验 碳源和氮源利用试验碳源和氮源利用试验碳源和氮源利用试验碳源和氮源利用试验6/26/202416第三节 细菌的分离培养和鉴定一、培养基的种类和选择8/11第三节第三节 细菌的分离培养和鉴定细菌的分离培养和鉴定一、培养基的种类和选择一、培养基的种类和选择 培养基（培养基（culture culture mediummedium）是由人工方法配制而成的，是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用专供微生物生长繁殖使用的混合营养物制品。的混合营养物制品。6/26/202417第三节 细菌的分离培养和鉴定一、培养基的种类和选择8/11第三节第三节 细菌的分离培养和鉴定细菌的分离培养和鉴定(一一)培养基的组成成分培养基的组成成分1 1营养物质营养物质 蛋白胨、肉浸液、牛肉膏、糖类、醇类、血液、蛋白胨、肉浸液、牛肉膏、糖类、醇类、血液、无机盐类、鸡蛋和动物血清生长因子无机盐类、鸡蛋和动物血清生长因子2 2凝固物质凝固物质 琼脂、明胶、卵白琼脂、明胶、卵白3 3抑制剂和指示剂抑制剂和指示剂6/26/202418第三节 细菌的分离培养和鉴定(一)培养基的组成成分8/11第三节第三节 细菌的分离培养和鉴定细菌的分离培养和鉴定（二）培养基种类（二）培养基种类1 1基础培养基（基础培养基（based mediumbased medium）2 2营养培养基（营养培养基（nutrient mediumnutrient medium）3 3鉴别培养基（鉴别培养基（diferential mediumdiferential medium）4 4选择培养基（选择培养基（selective mediumselective medium）5 5特殊培养基（特殊培养基（special mediumspecial medium）6/26/202419第三节 细菌的分离培养和鉴定（二）培养基种类8/11/20第三节第三节 细菌的分离培养和鉴定细菌的分离培养和鉴定1 1基础培养基基础培养基 含有基础生长所需的基本含有基础生长所需的基本营养成分，最常用的是肉浸营养成分，最常用的是肉浸液，俗称肉汤（液，俗称肉汤（brothbroth），主），主要成分含牛肉浸液和蛋白胨。要成分含牛肉浸液和蛋白胨。6/26/202420第三节 细菌的分离培养和鉴定1基础培养基8/11/202第三节第三节 细菌的分离培养和鉴定细菌的分离培养和鉴定2营养培养基（nutrient medium）最常用的是血琼脂平板、巧克力血平板等6/26/202421第三节 细菌的分离培养和鉴定2营养培养基（nutrien第三节第三节 细菌的分离培养和鉴定细菌的分离培养和鉴定 3鉴别培养基（diferential medium）糖发酵管、克氏双糖铁琼脂（KIA）、伊红-镁蓝琼脂和动力-吲哚-尿素（MIU）培养基等。6/26/202422第三节 细菌的分离培养和鉴定 3鉴别培养基（difere第三节第三节 细菌的分离培养和鉴定细菌的分离培养和鉴定4 4选择培选择培 （selective mediumselective medium）SS SS琼脂使致病的沙门菌、琼脂使致病的沙门菌、志贺菌容易分离到志贺菌容易分离到6/26/202423第三节 细菌的分离培养和鉴定4选择培8/11/20232第三节第三节 细菌的分离培养和鉴定细菌的分离培养和鉴定5特殊培养基 （special medium）疱肉培养基、巯基乙醇酸纳培养基6/26/202424第三节 细菌的分离培养和鉴定5特殊培养基8/11/202第三节第三节 细菌的分离培养和鉴定细菌的分离培养和鉴定（三）培养基的选择（三）培养基的选择 根据标本来源和可能存在的根据标本来源和可能存在的病原菌，确定选用各种分离培养病原菌，确定选用各种分离培养基。伊红美蓝基。伊红美蓝/麦康凯用于筛选麦康凯用于筛选革兰阴性杆菌。革兰阴性杆菌。6/26/202425第三节 细菌的分离培养和鉴定（三）培养基的选择8/11/2第三节第三节 细菌的分离培养和鉴定细菌的分离培养和鉴定（三）培养基的选择（三）培养基的选择 从血液、骨髓中从血液、骨髓中分离病原菌用血液增分离病原菌用血液增菌培养基菌培养基 6/26/202426第三节 细菌的分离培养和鉴定（三）培养基的选择8/11/2第三节第三节 细菌的分离培养和鉴定细菌的分离培养和鉴定1 1平板划线分离法平板划线分离法2 2斜面接种法斜面接种法3 3液体接种法液体接种法二、分离及培养（一）细菌的分离4穿刺接种法5倾注平板法6涂布接种法6/26/202427第三节 细菌的分离培养和鉴定1平板划线分离法二、分离及培第三节第三节 细菌的分离培养和鉴定细菌的分离培养和鉴定（二）细菌培养方法（二）细菌培养方法 1 1需氧培养法需氧培养法 2 2二氧化碳培养法二氧化碳培养法 3 3厌氧培养法厌氧培养法 6/26/202428第三节 细菌的分离培养和鉴定（二）细菌培养方法8/11/2第三节第三节 细菌的分离培养和鉴定细菌的分离培养和鉴定三、生化反应和鉴定三、生化反应和鉴定（一）碳水化合物的代谢试验（一）碳水化合物的代谢试验 1.1.糖（醇、苷）类发酵试验糖（醇、苷）类发酵试验 是鉴定细菌最主要和最基是鉴定细菌最主要和最基本的试验，特别对肠杆菌科本的试验，特别对肠杆菌科细菌的鉴定尤为重要细菌的鉴定尤为重要6/26/202429第三节 细菌的分离培养和鉴定三、生化反应和鉴定8/11/2第三节第三节 细菌的分离培养和鉴定细菌的分离培养和鉴定2氧化发酵试验（O/F试验）主要用于肠杆菌科细菌与非发酵菌的鉴别，前者均为发酵型，而后者通常为氧化型或产碱型。也可用于葡萄球菌与微球菌间的鉴别。6/26/202430第三节 细菌的分离培养和鉴定2氧化发酵试验（O/F试验第三节第三节 细菌的分离培养和鉴定细菌的分离培养和鉴定3半乳糖苷酶试验（ONPG试验）迅速及迟缓分解乳糖的细菌ONPG试验为阳性，而不发酵乳糖的细菌为阴性。本试验主要用于迟缓发酵乳糖菌株的快速鉴定。6/26/202431第三节 细菌的分离培养和鉴定3半乳糖苷酶试验（ONP第三节第三节 细菌的分离培养和鉴定细菌的分离培养和鉴定4 4七叶苷水解试验七叶苷水解试验 主要用于主要用于D D群链球菌与其他链球菌的鉴别。群链球菌与其他链球菌的鉴别。5 5甲基红试验甲基红试验 主要用于鉴别大肠埃希菌与产气肠杆菌。主要用于鉴别大肠埃希菌与产气肠杆菌。6 6VPVP试验试验 本试验常与甲基红试验一起使用，因为前者阳性的本试验常与甲基红试验一起使用，因为前者阳性的 细菌，后者通常为阴性。细菌，后者通常为阴性。6/26/202432第三节 细菌的分离培养和鉴定4七叶苷水解试验8/11/2第三节第三节 细菌的分离培养和鉴定细菌的分离培养和鉴定2吲哚(靛基质)试验 主要用于肠杆菌科细菌的鉴定。（二）蛋白质和氨基酸的代谢试验1明胶液化试验 主要用于肠杆菌科细菌的鉴别。6/26/202433第三节 细菌的分离培养和鉴定2吲哚(靛基质)试验（二）蛋第三节第三节 细菌的分离培养和鉴定细菌的分离培养和鉴定3 3硫化氢试验硫化氢试验 培养基：醋酸铅培养基培养基：醋酸铅培养基 应用：主要用于肠杆菌应用：主要用于肠杆菌 科中属及种鉴别科中属及种鉴别6/26/202434第三节 细菌的分离培养和鉴定3硫化氢试验8/11/202第三节第三节 细菌的分离培养和鉴定细菌的分离培养和鉴定4 4尿素分解试验尿素分解试验 主要用于肠杆菌科中变形杆菌属细菌的鉴定。主要用于肠杆菌科中变形杆菌属细菌的鉴定。5 5苯丙氨酸脱氨酶试验苯丙氨酸脱氨酶试验 主主要要用用于于肠肠杆杆菌菌科科细细菌菌的的鉴鉴定定。变变形形杆杆菌菌属属、普普罗罗菲菲登登斯斯菌菌属属和和摩摩根根菌菌属属细细菌菌均均为为阳阳性性，肠肠杆菌科中其他细菌均为阴性。杆菌科中其他细菌均为阴性。6 6氨基酸脱羧酶试验氨基酸脱羧酶试验 主要用于肠杆菌科细菌的鉴定。主要用于肠杆菌科细菌的鉴定。6/26/202435第三节 细菌的分离培养和鉴定4尿素分解试验8/11/20第三节第三节 细菌的分离培养和鉴定细菌的分离培养和鉴定（三）碳源和氮源利用试验（三）碳源和氮源利用试验1 1枸橼酸盐利用试验枸橼酸盐利用试验 用于肠杆菌科中菌属间的鉴定。用于肠杆菌科中菌属间的鉴定。2 2丙二酸盐利用试验丙二酸盐利用试验 肠杆菌科中属间及种的鉴别。肠杆菌科中属间及种的鉴别。6/26/202436第三节 细菌的分离培养和鉴定（三）碳源和氮源利用试验8/1第三节第三节 细菌的分离培养和鉴定细菌的分离培养和鉴定（四）各种酶类试验（四）各种酶类试验1 1氧化酶试验氧化酶试验 主要用于肠杆菌科细菌与假单胞菌的鉴别。主要用于肠杆菌科细菌与假单胞菌的鉴别。2 2过氧化氢酶试验（触酶试验）过氧化氢酶试验（触酶试验）用于革兰阳性球菌的初步分群。用于革兰阳性球菌的初步分群。6/26/202437第三节 细菌的分离培养和鉴定（四）各种酶类试验8/11/2第三节第三节 细菌的分离培养和鉴定细菌的分离培养和鉴定 3 3硝酸盐还原试验硝酸盐还原试验硝酸盐还原试验硝酸盐还原试验 本试验在细菌鉴定中广泛应用。肠杆菌科细本试验在细菌鉴定中广泛应用。肠杆菌科细本试验在细菌鉴定中广泛应用。肠杆菌科细本试验在细菌鉴定中广泛应用。肠杆菌科细菌均能还原硝酸盐为亚硝酸盐；铜绿假单胞菌、菌均能还原硝酸盐为亚硝酸盐；铜绿假单胞菌、菌均能还原硝酸盐为亚硝酸盐；铜绿假单胞菌、菌均能还原硝酸盐为亚硝酸盐；铜绿假单胞菌、嗜麦芽假单胞菌等假单胞菌可产生氮气；有些厌嗜麦芽假单胞菌等假单胞菌可产生氮气；有些厌嗜麦芽假单胞菌等假单胞菌可产生氮气；有些厌嗜麦芽假单胞菌等假单胞菌可产生氮气；有些厌氧菌如韦荣球菌等试验也为阳性。氧菌如韦荣球菌等试验也为阳性。氧菌如韦荣球菌等试验也为阳性。氧菌如韦荣球菌等试验也为阳性。6/26/202438第三节 细菌的分离培养和鉴定 3硝酸盐还原试验8/11第三节第三节 细菌的分离培养和鉴定细菌的分离培养和鉴定4 4脂酶试验脂酶试验 主要用于厌氧菌的鉴别。主要用于厌氧菌的鉴别。5 5卵磷脂酶试验卵磷脂酶试验 主要用于厌氧菌的鉴定。主要用于厌氧菌的鉴定。6 6 DNADNA酶试验酶试验 在革兰阳性球菌中只有金黄色葡萄球菌产生在革兰阳性球菌中只有金黄色葡萄球菌产生 DNADNA酶，在肠杆菌科中沙雷氏菌和变形杆菌酶，在肠杆菌科中沙雷氏菌和变形杆菌 产生此酶。产生此酶。6/26/202439第三节 细菌的分离培养和鉴定4脂酶试验8/11/2023第三节第三节 细菌的分离培养和鉴定细菌的分离培养和鉴定8 8 CAMPCAMP试验试验 在链球菌中，只有在链球菌中，只有B B群群链球菌链球菌CAMPCAMP试验阳性，试验阳性，故可作为特异性鉴定。故可作为特异性鉴定。7 凝固酶试验 作为鉴定葡萄球菌致病性的重要指标，也是葡萄球菌鉴别时常用的一个试验。6/26/202440第三节 细菌的分离培养和鉴定8 CAMP试验7 凝固第三节第三节 细菌的分离培养和鉴定细菌的分离培养和鉴定（五）抑菌试验（五）抑菌试验1 1 O/129 O/129抑菌试验抑菌试验 用于弧菌科的属间鉴别，弧菌属、邻单胞菌属用于弧菌科的属间鉴别，弧菌属、邻单胞菌属 对对O/129O/129敏感，而气单胞菌属耐药。敏感，而气单胞菌属耐药。2 2杆菌肽试验杆菌肽试验 用于用于A A群链球菌与非群链球菌与非A A群链球群的鉴别。群链球群的鉴别。3 3奥普托欣（奥普托欣（OptochinOptochin）试验）试验 主要用于肺炎链球菌与其他链球菌的鉴别。主要用于肺炎链球菌与其他链球菌的鉴别。6/26/202441第三节 细菌的分离培养和鉴定（五）抑菌试验8/11/202第四节第四节 细菌的非培养检测方法细菌的非培养检测方法一、免疫学检测一、免疫学检测 抗原检测、抗体检测抗原检测、抗体检测二、分子生物学检测二、分子生物学检测 核酸杂交、聚合酶链反应、生物芯片技术核酸杂交、聚合酶链反应、生物芯片技术三、细菌毒素的检测三、细菌毒素的检测 内毒素、外毒素内毒素、外毒素四、动物实验四、动物实验 6/26/202442第四节 细菌的非培养检测方法一、免疫学检测8/11/202第四节第四节 细菌的非培养检测方法细菌的非培养检测方法一、免疫学检测一、免疫学检测（一）抗原检测（一）抗原检测 免疫荧光技术是利用免疫学特异性反应与荧光免疫荧光技术是利用免疫学特异性反应与荧光示踪技术相结合的显微镜检查手段。既保持了血清示踪技术相结合的显微镜检查手段。既保持了血清学的高特异性，又极大地提高了检测的敏感性，在学的高特异性，又极大地提高了检测的敏感性，在细菌鉴定方面占有重要地位。常用的方法有直接细菌鉴定方面占有重要地位。常用的方法有直接法、间接法和免疫荧光菌球法。法、间接法和免疫荧光菌球法。6/26/202443第四节 细菌的非培养检测方法一、免疫学检测8/11/202第四节第四节 细菌的非培养检测方法细菌的非培养检测方法一、免疫学检测一、免疫学检测（二）抗体检测（二）抗体检测 抗体的量常随感染过程而增多，表现为效价的抗体的量常随感染过程而增多，表现为效价的升高。因此用已知的细菌或其特异性抗原检测病人升高。因此用已知的细菌或其特异性抗原检测病人血清中有无相应抗体及其效价的动态变化，可作为血清中有无相应抗体及其效价的动态变化，可作为某些传染病的辅助诊断。主要适用于抗原性较强的某些传染病的辅助诊断。主要适用于抗原性较强的致病菌和病程较长的感染性疾病。致病菌和病程较长的感染性疾病。6/26/202444第四节 细菌的非培养检测方法一、免疫学检测8/11/202第四节第四节 细菌的非培养检测方法细菌的非培养检测方法二、分子生物学检测二、分子生物学检测（一）核酸杂交（一）核酸杂交 DNADNA可可进进行行变变性性、复复性性、杂杂交交。我我们们利利用用这这一一特特性性，制制备备特特定定序序列列DNADNA片片段段，进进行行标标记记后后用用作作探探针针，在在一一定定条条件件下下，按按照照碱碱基基互互补补配配对对原原则则与与标标本本中中已已变变性性的的细细菌菌DNADNA进进行行杂杂交交，通通过过检检测测杂杂交交信信号号确确定定是是否否发发生生杂杂交交反反应应，从从而而鉴鉴定定标标本本中中有无相应的病原菌基因。有无相应的病原菌基因。6/26/202445第四节 细菌的非培养检测方法二、分子生物学检测8/11/2第四节第四节 细菌的非培养检测方法细菌的非培养检测方法二、分子生物学检测二、分子生物学检测（一）核酸杂交（一）核酸杂交 1.1.探针的种类探针的种类 （1 1）全染色体）全染色体DNADNA探针探针（2 2）染色体克隆片段）染色体克隆片段DNADNA探针探针（3 3）质粒）质粒DNADNA探针探针（4 4）rRNArRNA基因探针基因探针（5 5）寡核苷酸探针）寡核苷酸探针6/26/202446第四节 细菌的非培养检测方法二、分子生物学检测8/11/2第四节第四节 细菌的非培养检测方法细菌的非培养检测方法 2 2核酸杂交在临床细菌检测中的应用核酸杂交在临床细菌检测中的应用（1 1）细菌分类鉴定）细菌分类鉴定（2 2）细菌快速鉴定）细菌快速鉴定（3 3）细菌耐药性的检测）细菌耐药性的检测（4 4）细菌毒素的检测）细菌毒素的检测（5 5）细菌流行病学调查）细菌流行病学调查6/26/202447第四节 细菌的非培养检测方法 2核酸杂交在临床细菌检测第四节第四节 细菌的非培养检测方法细菌的非培养检测方法（二）聚合酶链反应（二）聚合酶链反应 （polymerase chain reaction,PCR polymerase chain reaction,PCR）1.1.特异性特异性DNADNA体外扩增技术体外扩增技术 2.2.特异、灵敏、快速、操作简便特异、灵敏、快速、操作简便 3.3.广泛应用于细菌的鉴定广泛应用于细菌的鉴定6/26/202448第四节 细菌的非培养检测方法（二）聚合酶链反应8/11/2第四节第四节 细菌的非培养检测方法细菌的非培养检测方法PCRPCR在临床细菌检测中的应用在临床细菌检测中的应用1.1.细菌的快速检测细菌的快速检测 2.2.细菌毒素的检测细菌毒素的检测 3.3.细菌耐药性的检测细菌耐药性的检测 4.4.细菌流行病学调查细菌流行病学调查 6/26/202449第四节 细菌的非培养检测方法PCR在临床细菌检测中的应用8第四节第四节 细菌的非培养检测方法细菌的非培养检测方法（三）生物芯片技术（三）生物芯片技术 1.1.通过微加工技术和微电子技术在固体芯片通过微加工技术和微电子技术在固体芯片 表面构建微型生物化学分析系统。表面构建微型生物化学分析系统。2.2.对细胞、蛋白质、对细胞、蛋白质、DNADNA以及其他生物组分的以及其他生物组分的 准确、快速、大信息量的检测。准确、快速、大信息量的检测。3.3.常用的生物芯片分为二大类：即基因芯片和常用的生物芯片分为二大类：即基因芯片和 蛋白芯片。蛋白芯片。6/26/202450第四节 细菌的非培养检测方法（三）生物芯片技术8/11/2第四节第四节 细菌的非培养检测方法细菌的非培养检测方法三、细菌毒素的检测三、细菌毒素的检测（一）内毒素（一）内毒素 内毒素的测定，主要用于确诊病人是否发生内毒素的测定，主要用于确诊病人是否发生革兰阴性细菌感染。另外，还可用于检测注射用革兰阴性细菌感染。另外，还可用于检测注射用液和生物制品有无内毒素污染。液和生物制品有无内毒素污染。方法：鲎试验。方法：鲎试验。6/26/202451第四节 细菌的非培养检测方法三、细菌毒素的检测8/11/2第四节第四节 细菌的非培养检测方法细菌的非培养检测方法（二）外毒素 外毒素的测定可用于待检菌的鉴定，同时可区分产毒株与非产毒株。方法：1.体内毒力试验 2.体外毒力试验 6/26/202452第四节 细菌的非培养检测方法（二）外毒素8/11/2023第四节第四节 细菌的非培养检测方法细菌的非培养检测方法四、动物实验四、动物实验1.1.用途：用途：（1 1）分离和鉴定病原微生物）分离和鉴定病原微生物（2 2）测定细菌的毒力）测定细菌的毒力（3 3）制备免疫血清）制备免疫血清（4 4）建立致病动物模型）建立致病动物模型（5 5）动物的血液是配制细菌）动物的血液是配制细菌培养基必须的实验材料培养基必须的实验材料（6 6）用于生物制品或一些药物的安全、毒性、疗效检验）用于生物制品或一些药物的安全、毒性、疗效检验2.2.常用的接种方法：常用的接种方法：皮下注射、皮内注射、肌肉注射、皮下注射、皮内注射、肌肉注射、腹腔注射、静脉注射和脑内注射等。腹腔注射、静脉注射和脑内注射等。6/26/202453第四节 细菌的非培养检测方法四、动物实验8/11/2023