动脉粥样硬化免疫机制的研究进展课件

动脉粥样硬化免疫机制的研究进展 南华大学心血管病研究所南华大学心血管病研究所 杨永宗杨永宗2005.8.15.2005.8.15.2005-8-151动脉粥样硬化免疫机制的研究进展 2005-8-151一、前一、前 言言ASAS病变的炎症性质以及一系列炎性因子病变的炎症性质以及一系列炎性因子在在ASAS病变形成中的关键作用几已成为共病变形成中的关键作用几已成为共识。识。但数以百计的危险因素如何启动炎症过但数以百计的危险因素如何启动炎症过程而促成程而促成ASAS病变发生发展却还是个未解病变发生发展却还是个未解的问题。的问题。天然免疫的模式识别理论的天然免疫的模式识别理论的提出将开辟提出将开辟ASAS病变发生发展机理研究的新领域。病变发生发展机理研究的新领域。2005-8-152一、前 言AS病变的炎症性质以及一系列炎性因子在AS病变二、天然免疫模式识别理论要点二、天然免疫模式识别理论要点美国免疫学家美国免疫学家JanewayJaneway提出天然免疫的模式识提出天然免疫的模式识别理论，强调天然免疫对获得性免疫的指导和别理论，强调天然免疫对获得性免疫的指导和调控作用，指出抗原递呈细胞（调控作用，指出抗原递呈细胞（APCAPC）是紧密）是紧密地连接天然免疫与获得性免疫的桥梁。地连接天然免疫与获得性免疫的桥梁。天然免疫系统通过天然免疫系统通过APCAPC上的模式识别受体上的模式识别受体(PRR)(PRR)识别病原相关分子模式识别病原相关分子模式(PAMP)(PAMP)，区别，区别“自己自己”与与“非己非己”及无害及无害“非己非己”和病原体相关和病原体相关“非非己己”,”,并籍抗原递呈和共刺激信号两个环节赋并籍抗原递呈和共刺激信号两个环节赋予获得性免疫识别予获得性免疫识别“自己自己”“”“非己非己”的能力。的能力。2005-8-153二、天然免疫模式识别理论要点美国免疫学家Janeway提出天病原相关分子模式（p pathogen-associated molecular patternathogen-associated molecular pattern）PAMPPAMP是指一大组或某几大组病原体所共是指一大组或某几大组病原体所共有的一种分子模式有的一种分子模式(molecule pattern)(molecule pattern)，而非某一特定结构。，而非某一特定结构。PAMPPAMP是病原体的保守结构成分且对其生是病原体的保守结构成分且对其生存是必要的存是必要的,如发生突变如发生突变,将使病原体死将使病原体死亡或丧失致病性。亡或丧失致病性。PAMPPAMP不同于宿主机体自身成分。不同于宿主机体自身成分。2005-8-154病原相关分子模式（pathogen-associated Janeway提出模式识别理论，将天然免疫针对的主要靶分子信号称为病提出模式识别理论，将天然免疫针对的主要靶分子信号称为病原相关分子模式（原相关分子模式（Pathogen-associated molecular pattern,PAMP），将），将其相应的识别受体称为模式识别受体（其相应的识别受体称为模式识别受体（pattern recognition receptor,PRR）。）。PAMP主要指广泛存在于病原体细胞表面的分子标志，如酵母细胞壁上主要指广泛存在于病原体细胞表面的分子标志，如酵母细胞壁上的甘露糖、以及各种细菌的细胞壁成分如脂多糖、多肽糖、胞壁酸等，的甘露糖、以及各种细菌的细胞壁成分如脂多糖、多肽糖、胞壁酸等，这些分子在进化过程中都趋于保守。这些分子在进化过程中都趋于保守。2005-8-1552005-8-155模式识别受体(pattern recognition receptor)与与PAMPPAMP相应的识别受体称为模式相应的识别受体称为模式识别受体（识别受体（PRRPRR）。）。已克隆的已克隆的PRRPRR大多属于大多属于TollToll样样受体受体(TLRs)(TLRs)家族家族,清道夫受体特清道夫受体特别是别是SR-A1SR-A1也具有也具有PRRPRR功能。功能。TLRsTLRs广泛表达在各种淋巴细胞表广泛表达在各种淋巴细胞表面，包括非特异性免疫细胞巨噬面，包括非特异性免疫细胞巨噬细胞、中性粒细胞、肥大细胞，细胞、中性粒细胞、肥大细胞，和特异性免疫淋巴细胞和淋和特异性免疫淋巴细胞和淋巴细胞。巴细胞。其中单核细胞分化的树突状细胞其中单核细胞分化的树突状细胞是唯一表达所有是唯一表达所有5 5种种TLRTLR的细胞的细胞,也是唯一表达也是唯一表达TLR3TLR3的细胞。的细胞。2005-8-156模式识别受体(pattern recognition re1.1.病原微生物感染病原微生物感染 相关病原体的研究包括肺炎衣原体、幽相关病原体的研究包括肺炎衣原体、幽门螺旋杆菌、单纯疱疹病毒、巨细胞病门螺旋杆菌、单纯疱疹病毒、巨细胞病毒、肝炎病毒等。毒、肝炎病毒等。其中肺炎衣原体在其中肺炎衣原体在ASAS斑块发生中的作用斑块发生中的作用已有较多研究，但现在认为单一的病原已有较多研究，但现在认为单一的病原体感染在体感染在ASAS中的作用可能很小，而多重中的作用可能很小，而多重感染并存则是影响心血管疾病的重要因感染并存则是影响心血管疾病的重要因素。素。2005-8-1571.病原微生物感染 相关病原体的研究包括肺炎衣原体、幽门螺旋内毒素的作用内毒素的作用Control GroupEndotoxin Group2005-8-158内毒素的作用Control GroupEndotoxin GGroupvWF(%)tPA activityPAI activity (Iu/mg protein)(Au/mg protein)Endotoxin0.5560.048*0.2270.048*5.360.28*Control0.1000.050 0.6430.0801.250.40*P0.05 compared with control.内毒素对内皮细胞功能的影响内毒素对内皮细胞功能的影响2005-8-159内毒素对内皮细胞功能的影响2005-8-159ControlCoronary Artery from Patient 肺炎衣原体肺炎衣原体2005-8-1510ControlCoronary Artery from PaA1:ControlA2:106 IFUs/L AR-39B1:10 mg/L LDLB2:10 mg/L LDL+106 IFUs/L AR-39C1:10 mg/L oxLDLC2:10 mg/L oxLDL+106 IFUs/L AR-39肺炎衣原体对细胞胆固醇蓄积的影响肺炎衣原体对细胞胆固醇蓄积的影响2005-8-1511A1:Control肺炎衣原体对细胞胆固醇蓄积的影响200A1:A1:对照组对照组 A2:cpn A2:cpn B1:LDL B2:LDL+cpn B1:LDL B2:LDL+cpn C1:ox-LDL C2:ox-LDL+cpnC1:ox-LDL C2:ox-LDL+cpn肺炎衣原体对肺炎衣原体对C57 BL/6JC57 BL/6J小鼠腹膜巨噬细胞泡沫化的影响小鼠腹膜巨噬细胞泡沫化的影响2005-8-1512A1:对照组 A2:cpn 肺炎衣原体对C57 BL/多重感染并存多重感染并存流行病学资料显示，冠心病流行病学资料显示，冠心病患病危险度与感染病原体的患病危险度与感染病原体的种类多少相关，而且存在多种类多少相关，而且存在多种感染是冠心病患者发生心种感染是冠心病患者发生心肌梗死的独立危险因素。肌梗死的独立危险因素。现在认为单一的病原体感染现在认为单一的病原体感染在在AS中的作用可能很小，而中的作用可能很小，而多重感染并存则是影响心血多重感染并存则是影响心血管疾病的重要因素。管疾病的重要因素。Circulation.2001;103:45-51.Prospective Study of Pathogen Burden and Risk of Myocardial Infarction or Death2005-8-1513多重感染并存流行病学资料显示，冠心病患病危险度与感染病原体的 2.2.氧化修饰低密度脂蛋白氧化修饰低密度脂蛋白 A 对照组 B 实验组小鼠腹腔巨噬小鼠腹腔巨噬细胞细胞猪主动脉平滑猪主动脉平滑肌细胞肌细胞2005-8-1514 2.氧化修饰低密度脂蛋白 A 对照组 B人U937细胞透射电镜照片透射电镜照片人外周血单核巨噬细胞人外周血单核巨噬细胞人人THP-1细胞细胞2005-8-1515人U937细胞透射电镜照片人外周血单核巨噬细胞人THP-1细Proc.Natl.Acad.Sci.USA Vol.92,pp.3893-3897,April 1995T lymphocytes from human atherosclerotic plaques recognize oxidized low density lipoprotein2005-8-1516Proc.Natl.Acad.Sci.USA VolASAS患者血清和斑块可检测到患者血清和斑块可检测到oxLDLoxLDL抗体。抗体。斑块中分离出的斑块中分离出的CD4CD4+T T 细胞可识别细胞可识别oxLDLoxLDL。oxLDLoxLDL抗体可分为抗体可分为IgGIgG和和IgMIgM型。型。IgGIgG抗体抗体水平增高与水平增高与ASAS病变程度加重相关，而病变程度加重相关，而IgMIgM型型oxLDLoxLDL抗体与抗体与ASAS病变呈负相关。病变呈负相关。2005-8-1517AS患者血清和斑块可检测到oxLDL抗体。2005-8-15用用oxLDLoxLDL免免疫疫兔兔可可减减少少40%40%50%AS50%AS病病变变，在在apoEapoE和和LDLRLDLR敲敲除除小小鼠鼠的的研研究究中中也也获获得得类类似似结果。结果。Shaw Shaw 等等人人用用肺肺炎炎链链球球菌菌感感染染LDLRLDLR缺缺乏乏小小鼠鼠，诱诱导导小小鼠鼠体体内内高高水水平平IgMIgM型型oxLDLoxLDL抗抗体体产产生生。伴伴随随脾脾脏脏内内B B淋淋巴巴细细胞胞持持续续分分泌泌IgMIgM增增高高，ASAS病病变变程程度度降低。降低。用用apoB-100apoB-100肽肽链链免免疫疫apoEapoE缺缺陷陷小小鼠鼠，可可减减少少60%60%的的ASAS病病变变形形成成，并并特特异异性性增增加加IgGIgG抗抗体体水平水平77。Arterioscler Thromb Vasc Biol.2003;23:879-884.Inhibition of Atherosclerosis in ApoE-Null Mice by Immunization with ApoB-100 Peptide Sequences2005-8-1518用oxLDL免疫兔可减少40%50%AS病变，在apoE和斑块内的斑块内的OxLDL可可影响影响DC的成熟和活的成熟和活化，氧化过程产生化，氧化过程产生的溶血磷脂酰胆碱的溶血磷脂酰胆碱（LPCLPC）可直接通过）可直接通过G蛋白偶联受体途径蛋白偶联受体途径诱导诱导DC成熟。成熟。oxLDL还可以增加还可以增加DC表面呈递抗原以表面呈递抗原以及协同信号分子的及协同信号分子的表达。表达。The Journal of Immunology,2002,169:16881695.Mature Dendritic Cell Generation Promoted by Lysophosphatidylcholine2005-8-1519The Journal of Immunology,2003.3.热休克蛋白热休克蛋白HSPHSP可与多种抗原肽结合产生免可与多种抗原肽结合产生免疫原性，诱导抗原特异性免疫反疫原性，诱导抗原特异性免疫反应。应。Berberian 最先报道在人类和兔最先报道在人类和兔斑块中存在斑块中存在HSP70，而且，而且HSP的的分布与斑块中细胞坏死、脂质聚分布与斑块中细胞坏死、脂质聚集相关。集相关。Kleindienst 研究表明颈动脉的研究表明颈动脉的内皮细胞、平滑肌细胞和单核细内皮细胞、平滑肌细胞和单核细胞胞HSP60表达量与表达量与ASAS严重程度呈严重程度呈正相关。正相关。斑块中大量存在的斑块中大量存在的T淋巴细胞对淋巴细胞对HSP60/65可发生特异性反应。可发生特异性反应。临床研究也表明临床研究也表明HSP60抗体与冠抗体与冠状动脉疾病严重程度相关，是冠状动脉疾病严重程度相关，是冠脉临床事件发生的重要危险因素。脉临床事件发生的重要危险因素。Arterioscler Thromb Vasc Biol.2002;22:1547-1559.Role of Heat Shock Proteins in Atherosclerosis2005-8-15203.热休克蛋白HSP可与多种抗原肽结合产生免疫原性，诱导抗原微生物微生物HSP65/60HSP65/60和人和人HSP60HSP60的抗体之间存的抗体之间存在交叉反应，抗微生在交叉反应，抗微生物物HSP65/60HSP65/60的抗体可的抗体可以引发自身免疫反应。以引发自身免疫反应。除了广泛关注的肺炎除了广泛关注的肺炎衣原体和巨细胞病毒衣原体和巨细胞病毒编码编码HSP60HSP60与人与人HSP60HSP60分子模拟作用。分子模拟作用。除上述交叉反应引起除上述交叉反应引起免疫反应外，免疫反应外，HSPHSP可可被被TLR4TLR4识别通过天然识别通过天然免疫在免疫在ASAS发生中发挥发生中发挥关键作用。关键作用。Arterioscler Thromb Vasc Biol.2002;22:1547-1559.Role of Heat Shock Proteins in Atherosclerosis2005-8-1521微生物HSP65/60和人HSP60的抗体之间存在交叉反应，4.4.2糖蛋白糖蛋白I I 2糖蛋白糖蛋白是一种含是一种含326个氨基酸的血浆蛋白，主个氨基酸的血浆蛋白，主要合成部位在肝脏，一般要合成部位在肝脏，一般以游离形式存在于血浆，以游离形式存在于血浆，少量与脂质结合。少量与脂质结合。2GpI是抗磷脂综合症是抗磷脂综合症（APS）的主要抗原。多）的主要抗原。多种炎症性疾病，包括种炎症性疾病，包括AS、狼疮、狼疮、APS血浆中都能血浆中都能检测到抗检测到抗2GpI抗体，人抗体，人AS斑块内也检测到斑块内也检测到2GPI。DOMAIN STRUCTURE OF 2-GLYCOPROTEIN I 2005-8-15224.2糖蛋白I 2糖蛋白是一种含326个氨基酸的血浆蛋GeorgeGeorge用人用人2 2GpIGpI免疫免疫LDLRLDLR-/-/-鼠，抗鼠，抗2 2GpIGpI抗抗体显著增高，血管内体显著增高，血管内皮下较多皮下较多CD4CD4+T T细胞浸细胞浸润，润，ASAS斑块形成明显斑块形成明显加快。加快。用用2 2GpIGpI免疫免疫apoEapoE-/-/-鼠鼠也同样显示斑块形成也同样显示斑块形成速度加快，抗速度加快，抗2 2GpIGpI抗抗体水平增高。体水平增高。Circulation.1998;98:1108-1115.Induction of Early Atherosclerosis in LDL-ReceptorDeficient Mice Immunized With b2-Glycoprotein I2005-8-1523George用人2GpI免疫LDLR-/-鼠，抗2GpI 用用2 2GpIGpI免疫普免疫普通小鼠，再将其淋通小鼠，再将其淋巴结和脾脏处的淋巴结和脾脏处的淋巴细胞注入巴细胞注入LDLRLDLR-/-/-小鼠的腹腔，发现小鼠的腹腔，发现LDLRLDLR-/-/-小鼠早期小鼠早期ASAS斑块增加。说明斑块增加。说明2 2GpIGpI通过淋巴细通过淋巴细胞在动脉粥样硬化胞在动脉粥样硬化的形成中发挥作用。的形成中发挥作用。Circulation.2000;102:1822-1827.Adoptive Transfer of b2-Glycoprotein IReactive Lymphocytes Enhances Early Atherosclerosis in LDL ReceptorDeficient Mice2005-8-1524 用2GpI免疫普通小鼠，再将其淋巴结和脾脏处的淋四、四、ASAS与天然免疫与天然免疫天天然然免免疫疫是是机机体体的的第第一一道道防防线线，它它通通过过天天然然免免疫疫效效应应细细胞胞和和效效应应分分子子发发挥挥作作用。用。天天然然免免疫疫效效应应细细胞胞包包括括单单核核/巨巨噬噬细细胞胞、NKNK细细胞胞，树树突突状状细细胞胞、肥肥大大细细胞胞、B1B1细胞等；细胞等；天天然然免免疫疫效效应应分分子子则则有有炎炎症介质、补体等。症介质、补体等。单单核核/巨巨噬噬细细胞胞在在ASAS发发病病中中具具有有重重要要地地位位，其其他他效效应应细细胞胞同同样样可可能能发发挥挥一一定定作作用。用。2005-8-1525四、AS与天然免疫天然免疫是机体的第一道防线，它通过天然免疫KristinaKristina用用半半定定量量PCRPCR和和免免疫疫组组化化方方法法发发现现，人人ASAS斑斑块块中中TLR1TLR1、TLR2TLR2、TLR4TLR4表表达达明明显显增增加加，同同时时也也伴伴随随有有NF-NF-B B的的表达。表达。推推测测TLRsTLRs在在斑斑块块炎炎症症活活化化过过程程中中天天然然免免疫疫机机制制发挥作用。发挥作用。Circulation.2002;105:1158-1161.Expression of Toll-Like Receptors in Human Atherosclerotic Lesions:A Possible Pathway for Plaque Activation2005-8-1526Circulation.2002;105:1158-116 TLRTLR信号转导信号转导 TLRTLR和和PAPMsPAPMs结合后形成二聚体结合后形成二聚体,随后转接蛋白随后转接蛋白MyD88MyD88通过通过C C末端的末端的Toll/IL-1RToll/IL-1R（TIRTIR）结构域与）结构域与TLRTLR的胞内段相互作用，介导的胞内段相互作用，介导LPSLPS诱诱导的单核细胞或内皮细胞导的单核细胞或内皮细胞NF-BNF-B活化，激活细胞因子基因转录，活化，激活细胞因子基因转录，介导共刺激信号介导共刺激信号B7B7分子表达，进分子表达，进而通过而通过APCAPC而活化细胞。而活化细胞。TLRTLR细胞内信号传导分子细胞内信号传导分子MyD88MyD88参参与与ASAS进程。进程。MyD88MyD88缺乏可使斑块缺乏可使斑块面积缩小，脂质成分降低，促炎面积缩小，脂质成分降低，促炎介质以及细胞因子和趋化因子如介质以及细胞因子和趋化因子如IL-12IL-12和和MCP-1MCP-1的表达减少。的表达减少。2005-8-1527 TLR信号转导 2005-8-1527Frank Frank 分别以野生型牙龈卟啉单胞菌和毒性减弱的牙龈卟啉单胞菌菌毛缺失突变体分别以野生型牙龈卟啉单胞菌和毒性减弱的牙龈卟啉单胞菌菌毛缺失突变体(FimA-)(FimA-)感染感染apoE-/-apoE-/-小鼠。感染野生型牙龈卟啉单胞菌的小鼠。感染野生型牙龈卟啉单胞菌的apoE-/-apoE-/-小鼠小鼠ASAS斑块增加，主动脉壁斑块增加，主动脉壁TLR2TLR2和和TLR4TLR4表达上调；表达上调；而后者尽管在而后者尽管在apoE-/-apoE-/-小鼠血液和主动脉弓组织内检测到小鼠血液和主动脉弓组织内检测到FimA-FimA-突变株存在，但是没有出现突变株存在，但是没有出现TLRsTLRs表达上调，斑块病变无明显进展；表达上调，斑块病变无明显进展；提示由提示由TLRsTLRs介导的天然免疫在介导的天然免疫在ASAS发展中发挥重要作用。发展中发挥重要作用。Circulation.2004;109:2801-2806.)Innate Immune Recognition of Invasive Bacteria Accelerates Atherosclerosis in Apolipoprotein EDeficient Mice2005-8-1528Circulation.2004;109:2801-280清道夫受体清道夫受体巨噬细胞清道夫受体在生物学巨噬细胞清道夫受体在生物学方面的最新进展是发现，它既能方面的最新进展是发现，它既能识别感染性非自身物质（病原体）识别感染性非自身物质（病原体），又能识别修饰后自身物质，又能识别修饰后自身物质(凋凋亡样细胞和修饰后亡样细胞和修饰后LDL)，是模式，是模式识别受体家族中的一员。识别受体家族中的一员。AS斑块内的巨噬细胞表达大量斑块内的巨噬细胞表达大量清道夫受体。特别是清道夫受体。特别是SR-A，在天，在天然免疫，凋亡样细胞的清除，以然免疫，凋亡样细胞的清除，以及组织自稳态方面也发挥着重要及组织自稳态方面也发挥着重要作用。作用。2005-8-1529清道夫受体巨噬细胞清道夫受体在生物学方面的最新进展是发现，它SR-A1SR-A1转基因鼠转基因鼠 转转SR-A1SR-A1的的C57BL/6C57BL/6小鼠喂养高脂饲料小鼠喂养高脂饲料2424周周后，主动脉瓣膜附着处后，主动脉瓣膜附着处血管壁增厚，明显的粘血管壁增厚，明显的粘液样变性，冠脉内膜增液样变性，冠脉内膜增厚，泡沫细胞聚集、中厚，泡沫细胞聚集、中膜粘液样变性；主动脉膜粘液样变性；主动脉苏丹苏丹染色表明有明显染色表明有明显的脂纹形成。的脂纹形成。2005-8-1530SR-A1转基因鼠 转SR-A1的C57BL/6Control grouptransgenic groupTransgenic highcholesterol groupHigh cholesterol group2005-8-1531Control grouptransgenic groupT小鼠主动脉粥样硬化斑块小鼠主动脉粥样硬化斑块2005-8-1532小鼠主动脉粥样硬化斑块2005-8-1532SR-ASR-A对对ox-LDLox-LDL诱导诱导TPH-1TPH-1细胞细胞MMP-9MMP-9表达的影响表达的影响 明胶酶谱MMP-9活性1 1：对照：对照2 2：OX-LDLOX-LDL3 3：OX-LDL+SR-AOX-LDL+SR-A正义寡核苷酸正义寡核苷酸4 4：OX-LDL+SR-AOX-LDL+SR-A反义寡核苷酸反义寡核苷酸5 5：OX-LDL+SR-AOX-LDL+SR-A抗体抗体123542005-8-1533SR-A对ox-LDL诱导TPH-1细胞MMP-9表达的影SR-ASR-A对对ox-LDLox-LDL诱导诱导TPH-1TPH-1细胞细胞MMP-2MMP-2活性影响活性影响2005-8-1534SR-A对ox-LDL诱导TPH-1细胞MMP-2活性影响SR-SR-对对ox-LDLox-LDL诱导诱导TPH-1TPH-1细胞细胞TIMP-1TIMP-1表达的影响表达的影响 TIMP-1 Western BlotTIMP-1 Western Blot1：对照2：OX-LDL3：OX-LDL+SR-A正义寡核苷酸4：OX-LDL+SR-A反义寡核苷酸5：OX-LDL+SR-A抗体123452005-8-1535SR-对ox-LDL诱导TPH-1细胞TIMP-1表达的影肥大细胞肥大细胞肥大细胞表达肥大细胞表达Fc-RFc-R，Fc-RFc-R，TLR-2TLR-2，TLR-4TLR-4，作为微环境感应细胞在天然作为微环境感应细胞在天然免疫和获得性免疫都起直接免疫和获得性免疫都起直接作用。作用。外源凝集素、补体活化产物外源凝集素、补体活化产物C5a、C3a等多种刺激物均可等多种刺激物均可通过通过Fc-激活肥大细胞。促激活肥大细胞。促进肥大细胞脱颗粒。进肥大细胞脱颗粒。活化的肥大细胞脱颗粒释放活化的肥大细胞脱颗粒释放大量生物活性物质，包括血大量生物活性物质，包括血管活性物质、中性蛋白酶、管活性物质、中性蛋白酶、炎症因子和生长因子等，促炎症因子和生长因子等，促进进AS病变形成和破裂。病变形成和破裂。2005-8-1536肥大细胞肥大细胞表达Fc-R，Fc-R，TLR-2，Circulation.1996;94:2787-2792.)Mast Cells in Rupture-Prone Areas of Human Coronary Atheromas Produce and Store TNF-2005-8-1537Circulation.1996;94:2787-2792 对照组对照组对照组对照组 ox-LDL(48h)ox-LDL(48h)ox-LDL(48h)ox-LDL(48h)透射电镜透射电镜甲苯胺蓝甲苯胺蓝染色染色2005-8-1538 对照组 对照组 实验组 主动脉病变HE染色 实验组 主动脉甲苯胺蓝染色Compound48/80Compound48/80对对apoEapoE基因敲除鼠主动脉斑快的影响基因敲除鼠主动脉斑快的影响2005-8-1539 对照组 虽然虽然NK细胞存在细胞存在于斑块处的直接证于斑块处的直接证据很少，但最近报据很少，但最近报道道NK细胞功能抑细胞功能抑制时，制时，LDLR-/-小小鼠体内鼠体内AS病变减病变减少，少，NK细胞可能细胞可能有致有致AS的作用。的作用。Arterioscler Thromb Vasc Biol.2004;24:1049-1054.Depletion of Natural Killer Cell Function Decreases Atherosclerosis in Low-Density Lipoprotein Receptor Null Mice2005-8-1540 虽然NK细胞存在于斑块处的直接证据很少，但最近报道NK细五、五、ASAS与抗原呈递细胞与抗原呈递细胞 APC在连接天然免疫和获得性免疫中起桥梁作用，它能摄取、加工、处理抗原并将抗原信息呈递给淋巴细胞，促使特异性淋巴细胞活化，产生获得性免疫应答。巨噬细胞、树突状细胞、B淋巴细胞是专职抗原呈递细胞，内皮细胞、成纤维细胞、上皮及间皮细胞等抗原呈递作用较弱，为非专职性抗原呈递细胞。2005-8-1541五、AS与抗原呈递细胞 APC在连接天然免疫和获得性免疫中起 获得性免疫应答需要双获得性免疫应答需要双信号启动，即特异性抗信号启动，即特异性抗原的刺激和来自抗原递原的刺激和来自抗原递呈细胞的共刺激信号，呈细胞的共刺激信号，这些信号多要这些信号多要APC APC 特别特别走走DCDC提供。提供。APCAPC通过其通过其PRRPRR的模式识的模式识别作用内在化病原体，别作用内在化病原体，并将其加工成并将其加工成MHCMHC：肽复：肽复合物，之后递呈给合物，之后递呈给ThTh细细胞，并且只有在将某一胞，并且只有在将某一物质识别为有害物后才物质识别为有害物后才表达共刺激信号表达共刺激信号7 7分子。分子。2005-8-1542 2005-8-1542人和鼠人和鼠AS斑块均可检斑块均可检测到测到DC，并且，并且DC与与T淋巴细胞同时存在于淋巴细胞同时存在于易破裂的斑块肩部。易破裂的斑块肩部。DC还可能通过抗原呈还可能通过抗原呈递作用刺激递作用刺激T淋巴细胞淋巴细胞活化，影响斑块的稳活化，影响斑块的稳定性。定性。DCDC在摄取微环境中的在摄取微环境中的抗原后进一步分化成抗原后进一步分化成熟，促进熟，促进 T T淋巴细胞淋巴细胞活化，激活获得性免活化，激活获得性免疫反应。疫反应。J Pathol.2002 Dec;198(4):511-6.Human atherosclerotic plaques express DC-SIGN,a novel protein found on dendritic cells and macrophages.2005-8-1543人和鼠AS斑块均可检测到DC，并且DC与T淋巴细胞同时存在于六、六、ASAS与与获得性免疫获得性免疫2005-8-1544六、AS与获得性免疫2005-8-1544 Zhou等将等将apoE-/-鼠与鼠与scid/scid免疫缺陷小鼠杂交其后代小鼠大动脉斑块面免疫缺陷小鼠杂交其后代小鼠大动脉斑块面积与积与apoE-/-鼠相比减少鼠相比减少73，而将，而将apoE-/-鼠鼠CD4T细胞移植到细胞移植到apoE-/-/scid/scid小鼠体内，斑块增加小鼠体内，斑块增加164。Circulation.2000;102:2919-2922.Transfer of CD41 T Cells Aggravates Atherosclerosis in Immunodeficient Apolipoprotein E Knockout Mice2005-8-1545 Zhou等将apoE-/-鼠与scid/sc七、七、AS临床事件与免疫反应临床事件与免疫反应 免疫细胞在斑块部位的聚集，提示免疫在AS发展和转归中起作用。Yuri 发现，NKT细胞和DC在AS斑块肩部聚集，CD1+NKT细胞参与AS斑块的破裂，推测NKT细胞和DC间存在直接的联系，共同参与AS斑块破裂过程。J Histochem Cytochem.2005 Jun;53(6):781-5.Co-accumulation of dendritic cells and natural killer T cells within rupture-prone regions in human atherosclerotic plaques.2005-8-1546七、AS临床事件与免疫反应 免疫细胞在斑块部位的聚集，提示免而而INF-抑制胶原合成，抑制抑制胶原合成，抑制SMCs增殖，增殖，还可以与还可以与TNF-和和IL-1一起促进一起促进SMCs凋凋亡，使纤维帽变薄，易于破裂。亡，使纤维帽变薄，易于破裂。免疫介质可通过调节基质金属蛋白酶、免疫介质可通过调节基质金属蛋白酶、组织蛋白酶和肥大细胞蛋白水解酶可降组织蛋白酶和肥大细胞蛋白水解酶可降解纤维帽胶原的释放影响斑块的稳定。解纤维帽胶原的释放影响斑块的稳定。2005-8-1547而INF-抑制胶原合成，抑制SMCs增殖，还可以与TNF-人人AS晚期病变中晚期病变中T细胞数量占细胞总数的细胞数量占细胞总数的10到到20，同时表达，同时表达CD3、CD4和和T细胞抗原受体细胞抗原受体（TCR+）的）的T细胞占所有细胞占所有CD3+T细胞的比例高达细胞的比例高达2/3（在（在apoE-/-鼠中可超过鼠中可超过90）。）。AS的大部分临床并发症都涉及血栓形成，的大部分临床并发症都涉及血栓形成，T细胞在细胞在AS斑块破裂处聚集可引发致命性的动脉粥样血栓形斑块破裂处聚集可引发致命性的动脉粥样血栓形成。成。先天性免疫介质可影响血栓形成的一些环节，组织先天性免疫介质可影响血栓形成的一些环节，组织因子（因子（TF）是动脉粥样血栓形成的主要因子，）是动脉粥样血栓形成的主要因子，LPS、TNF-、IL-1、INF-和和PTX-3都可诱导人都可诱导人ECs表达表达TF，CD40L可诱导单核巨噬细胞表达可诱导单核巨噬细胞表达TF。2005-8-1548人AS晚期病变中T细胞数量占细胞总数的10到20，同时表而在动脉粥样瘤内而在动脉粥样瘤内M、Ecs、SMCs和活和活化的血小板都可以表达化的血小板都可以表达CD40L42。可溶性细胞因子如可溶性细胞因子如IL-1和和TNF-可改变可改变纤维酶原激活物的活性，也可改变凝血纤维酶原激活物的活性，也可改变凝血调节因子及凝血抑制物的活性。调节因子及凝血抑制物的活性。免疫细胞因子增加内源性纤维酶原激活免疫细胞因子增加内源性纤维酶原激活物抑制物的表达。物抑制物的表达。2005-8-1549而在动脉粥样瘤内M、Ecs、SMCs和活化的血小板都可以表八、问题与展望 病病原原体体所所特特有有的的PAMPsPAMPs被被TKRsTKRs识识别别后后可可诱诱导导活活性性氧氧中中间间物物(ROI)和和活活性性氮氮中中间间物物(RNI)的的产产生生、促促炎炎因因子子的的释释放放并并上上调调共共刺刺激激分分子子的的表表达达,随随后后启动获得性免疫。启动获得性免疫。从而有利于病原体的清除。从而有利于病原体的清除。PAMPsPAMPs可可作作为为一一种种天天然然佐佐剂剂应应用用于于感感染染性性疾疾病病的的治治疗疗，为为PAMPsPAMPs作作为为一一种种新新型型佐佐剂剂在在抗抗感感染染、抗抗癌疫苗的制备中提供新的思路。癌疫苗的制备中提供新的思路。2005-8-1550八、问题与展望 病原体所特有的PAMPs被TKRs识别后可诱实验证明实验证明HSPHSP肽复合物的抗原性来自于多肽肽复合物的抗原性来自于多肽,而而非非HSPHSP本身。本身。HSP HSP 肽复合物能够引起肽复合物能够引起MHC1MHC1类分类分子限制的子限制的CTLCTL应答。用应答。用HSPHSP 肽复合物免疫接种引肽复合物免疫接种引起强有力的抗肿瘤、抗病毒和抗寄生虫效应。起强有力的抗肿瘤、抗病毒和抗寄生虫效应。HSPHSP 肽复合物可在体外组装肽复合物可在体外组装,免疫接种量非常小免疫接种量非常小(几百皮克几百皮克)。由于由于HSPsHSPs是非多态性的，自感染细胞中产生的是非多态性的，自感染细胞中产生的 肽复合物可直接针对细胞内的全部抗肽复合物可直接针对细胞内的全部抗原原,能够减少或消除突变体逃逸的可能性。能够减少或消除突变体逃逸的可能性。2005-8-1551实验证明HSP肽复合物的抗原性来自于多肽,而非HSP本身。人人工工合合成成的的含含有有CpGCpG基基序序的的寡寡核核苷苷酸酸可可以以通通过过改改变变碱碱基基的的序序列列、长长度度、CpGCpG基基序序的的位位置置和和数数目来调节其诱导的细胞因子类型。目来调节其诱导的细胞因子类型。AS免免疫疫机机制制观观点点的的提提出出为为的的防防治治提提供供了了新新思思路路。免免疫疫调调节节剂剂、抗抗生生素素在在防防治治中中的的作作用用已已受受到到关关注注,他他汀汀类类及及阿阿司司匹匹林林抗抗炎炎、调调节节免疫作用正在得到验证。免疫作用正在得到验证。2005-8-1552人工合成的含有CpG基序的寡核苷酸可以通过改变碱基的序列、长2 2GpIGpI是动脉粥样硬化发展过程中一种重是动脉粥样硬化发展过程中一种重要的免疫原。要的免疫原。采用口服给予采用口服给予LDLRLDLR-/-/-小鼠小鼠2 2GpIGpI，造成免，造成免疫耐受，发现小鼠早期疫耐受，发现小鼠早期ASAS斑块面积减少，斑块面积减少，病变处病变处IL-4IL-4、IL-10IL-10表达上调。表达上调。2 2GpIGpI免免疫耐受状态下的疫耐受状态下的LDLRLDLR-/-/-小鼠还可以降低免小鼠还可以降低免疫系统对疫系统对oxLDLoxLDL的反应。的反应。2005-8-15532GpI是动脉粥样硬化发展过程中一种重要的免疫原。2005总之，动脉粥样硬化免疫机制的研究尽管有较总之，动脉粥样硬化免疫机制的研究尽管有较大进展，但还很不成熟。大进展，但还很不成熟。一些必需确定的基本事实还未能取得一致的结一些必需确定的基本事实还未能取得一致的结果，同时也缺少足够的人群研究资料的支持，果，同时也缺少足够的人群研究资料的支持，以致一些重要的观点尚未获得共识。以致一些重要的观点尚未获得共识。尽管如此，加强动脉粥样硬化免疫机制的研究，尽管如此，加强动脉粥样硬化免疫机制的研究，确定动脉粥样硬化的免疫学性质，尤其探索天确定动脉粥样硬化的免疫学性质，尤其探索天然免疫在动脉粥样硬化发生早期的作用，仍是然免疫在动脉粥样硬化发生早期的作用，仍是一个不可懈怠的研究领域。一个不可懈怠的研究领域。2005-8-1554总之，动脉粥样硬化免疫机制的研究尽管有较大进展，但还很不成熟谢谢！2005-8-1555谢谢！2005-8-1555