高效液相色谱的维护与保养

高效液相色谱的维护与保高效液相色谱的维护与保养养色谱泵的保养色谱泵的保养流动相要过滤常用缓冲液时，停泵前要用水冲洗，并用水冲洗柱塞杆清洗孔拧紧排液阀时，不要太用力，以不渗液为准更换流动相时，要保证两种溶剂的互溶性,如不互溶，要用一种中间溶剂过渡.例如:使用无机盐缓冲液时,用前和用后均须用水过渡流动相的脱气流动相的脱气流动相脱气的目的.使色谱泵的输液准确输液均匀准确，并且脉动减小保留时间及色谱峰面积的重现性提高.提高检测的性能防止气泡引起的尖峰基线稳定，信噪比增加溶剂的紫外吸收本底降低.保护色谱柱减少死体积防止填料的氧化流动相脱气的方法流动相脱气的方法加热.简单，如同抽真空一起使用，其效果很好。但容易造成流动相组成的变化抽真空.同上，一般在溶剂抽滤的同时，也有脱气的效果超声波.简单，但效果不理想。通惰性气体（一般用氦气）.可保持连续脱气，多用于低压梯度在线脱气机.可保持连续脱气，多用于低压梯度液相色谱对流动相的要求液相色谱对流动相的要求除色谱柱对流动相的要求外，还有.与检测器匹配.脱气.避免卤素离子（不锈钢系统）.溶剂的粘度.防止细菌的生长流动相的保存流动相的保存有机溶剂流动相:.室温下密封,避光保存缓冲盐流动相:.当日现配现用.低温下密封保存,一般不超过3天.防止长菌有机溶剂与水（缓冲盐）混配的流动相:.低温密封保存.防止有机相的挥发选用适宜的容器2 星期1 天1 星期1 小时新鲜配制5101520250分保存于聚乙烯瓶中的超纯水保存于聚乙烯瓶中的超纯水测试条件测试条件水样水样:40ml trace enrichment 2.0 ml/min:40ml trace enrichment 2.0 ml/min色谱柱色谱柱:C18:C18 反相柱反相柱(Waters)(Waters)梯度梯度:线性线性 100%100%水水 100%100%乙腈乙腈波长波长:254 nm:254 nm1 天1星期新鲜配制5101520250分保存于标准棕色玻璃瓶中的超纯水保存于标准棕色玻璃瓶中的超纯水测试条件测试条件水样水样:40ml trace enrichment 2.0 ml/min:40ml trace enrichment 2.0 ml/min色谱柱色谱柱:C18:C18 反相柱反相柱(Waters)(Waters)梯度梯度:线性线性 100%100%水水 100%100%乙腈乙腈波长波长:254 nm:254 nm检测器的保养检测器的保养如长时间不用检测器可以关掉紫外灯.在4小时以上不用时，太频繁开关也不好不要让缓冲液长期停滞在检测池内.用纯水冲洗示差检测器及荧光检测器.注意流动池的耐压，不要在后面加压关于自动进样器的针清洗关于自动进样器的针清洗.Purge Injector 与 Needle Wash.洗针溶剂瓶(绿色塑料管)不要放在717plus的上部，应放于717plus同一水平面.洗针溶剂根据流动相的不同应有不同：异丙醇异丙醇？液相色谱系统的清洗与钝化液相色谱系统的清洗与钝化一般采用30磷酸作为清洗剂，用6M硝酸作为钝化剂，先清洗再钝化清洗的目的是去除不锈钢管路及系统内的污垢钝化的目的是使不锈钢管路的内表面形成光滑均匀的氧化膜高效液相色谱的维护与保养高效液相色谱的维护与保养色谱柱的使用及保养测柱效测柱效良好的色谱实验习惯良好的色谱实验习惯拿到一根新色谱柱时，先测柱效保留在新色谱柱上测得的色谱图，并记录色谱测试条件定期检测柱效定期检测仪器的谱带展宽测柱效的方法测柱效的方法色谱柱种类繁多,性能各异,测定方法亦各不相同Waters的色谱柱均附有Use and Care说明书,可按说明书所述方法测定以下是Waters反相C18柱的测定方法:.流动相:乙腈/水=60:40;流速:1ml/min.样品:50mg Acenaphthene(二氢苊)溶于100ml乙腈,加入600l丙酮.进样量5l.检测波长:254nm计算色谱柱的柱效计算色谱柱的柱效 N N理论塔板数计算公式：Ws 方法Wtan16切线法Wh5.54半峰高半峰高W3s9 3sW4s16 4sW5s25 5s色谱柱的正确使用及操作色谱柱的正确使用及操作流动相的转换.特别是GPC柱流速(压力)的变化幅度：0.1ml/min.凝胶柱（GPC及糖柱）温度的变化幅度专用色谱柱样品及溶剂的要求色谱柱的在线保护装置色谱柱的在线保护装置给色谱柱提供物理的保护.除去样品及流动相中的颗粒给色谱柱提供化学的保护.防止分析柱被化学污染装置.在线过滤器.自装填料保护柱.预装保护柱在线过滤器在线过滤器In-Line Filter，部件号 WAT084560.防止颗粒在色谱柱头累积.优点：基本不影响柱效.在需要高柱效的分析时中常用（如：氨基酸分析）可更换的消耗品.更换滤芯，部件号 WAT005139(5/pkgs).更换垫圈，部件号 WAT084567(10/pkgs)保护柱保护柱可避免化学污染新型保护柱可提高整个色谱柱的柱效，甚至可作为色谱柱使用保护柱选择：选用与色谱柱相同的填料.真正起到保护作用.保证色谱分离结果 使用保护柱延长色谱寿命实例：磺胺药物分析相同保护柱与色谱柱：第950次进样更换新Sentry Guard保护柱：第951次进样使用配Symmetry C8保护柱的色谱柱：首次进样色谱柱的保护色谱柱的保护色谱柱的清洗色谱柱的清洗对所做的样品要有充分的了解用对该样品洗脱能力最强的流动相清洗硅胶柱的一般方法先用甲醇洗去极性杂质用干燥的二氯甲烷、正庚烷100200ml依次活化键合相柱(烷基)的一般方法20倍柱体积的：甲醇-氯仿-甲醇-水依次冲洗若使用缓冲液，需先用不含盐的水溶液清洗色谱柱的存放色谱柱的存放存放前的处理.除去杂质、缓冲盐合适的存放溶剂避免色谱柱床的干涸避免机械震动防止细菌生长注意存放的温度正确使用色谱柱（一）正确使用色谱柱（一）流动相方面.除去微粒.纯度的要求超纯水，梯度实验时水中有机杂质含量要低缓冲液的pH值，在填料的允许范围内缓冲液（盐）的浓度溶剂：色谱纯，并与填料相匹配溶剂中的杂质含量.流动相对样品的溶解度有机溶剂或水的比例正确使用色谱柱（二）正确使用色谱柱（二）样品预处理.除去微粒及杂质.了解样品在流动相中的溶解度如样品的溶剂不是流动相，一定要用流动相试溶解度，防止其在流动相中析出 尽量用流动相溶解样品.了解样品与色谱柱的基质/填料是否相互作用结束语结束语谢谢大家聆听！谢谢大家聆听！30