动物的克隆(浙科版)

思考：思考：离体的植物细胞和组织可以通过组织离体的植物细胞和组织可以通过组织培养技术克隆成完整的植株，那么动物细胞和培养技术克隆成完整的植株，那么动物细胞和组织能否也进行同样的克隆？组织能否也进行同样的克隆？不能，动物细胞的全能性受到限制，到现不能，动物细胞的全能性受到限制，到现在为止将离体的动物细胞直接克隆成个体还很在为止将离体的动物细胞直接克隆成个体还很困难，所以困难，所以动物细胞和组织不能进行动物细胞和组织不能进行与植物一与植物一样的样的个体克隆个体克隆。机械消化或者胰酶消化机械消化或者胰酶消化一、动物细胞、组织培养一、动物细胞、组织培养1、什么方法取得离体的单个动物细胞？、什么方法取得离体的单个动物细胞？2、离体的动物细胞能否正常的生活、表现出正、离体的动物细胞能否正常的生活、表现出正常的生命活动？常的生命活动？能，在人工控制的培养条件下，生长、分裂乃至能，在人工控制的培养条件下，生长、分裂乃至接触抑制和衰老、死亡等，并呈现一定的组织特性。接触抑制和衰老、死亡等，并呈现一定的组织特性。3、是不是所有的动物细胞都能在离体的情况下表、是不是所有的动物细胞都能在离体的情况下表现出生命活动？现出生命活动？1、幼嫩细胞（如：、幼嫩细胞（如：动物胚胎或幼龄动物组织、器官动物胚胎或幼龄动物组织、器官）2、含全部营养物质的液体培养基和适宜的环境条件。、含全部营养物质的液体培养基和适宜的环境条件。（胰蛋白酶）（胰蛋白酶）动物细胞培养：动物细胞培养：体外培养分散后的体外培养分散后的体外培养分散后的体外培养分散后的单个细胞，单个细胞，单个细胞，单个细胞，使其得以生存，并保持生命活动现象。使其得以生存，并保持生命活动现象。使其得以生存，并保持生命活动现象。使其得以生存，并保持生命活动现象。像体内一像体内一像体内一像体内一样呈现一定的组织特性。样呈现一定的组织特性。样呈现一定的组织特性。样呈现一定的组织特性。动物组织培养：动物组织培养：体外培养体外培养体外培养体外培养动物组织，动物组织，动物组织，动物组织，使其维持使其维持使其维持使其维持生活状态或生长特性。生活状态或生长特性。生活状态或生长特性。生活状态或生长特性。可以伴随组织分化，但最可以伴随组织分化，但最可以伴随组织分化，但最可以伴随组织分化，但最终成为细胞培养。终成为细胞培养。终成为细胞培养。终成为细胞培养。动物器官培养：动物器官培养：体外培养体外培养体外培养体外培养动物器官原基、部分动物器官原基、部分动物器官原基、部分动物器官原基、部分或整个器官，或整个器官，或整个器官，或整个器官，使之得以保存、生长。使之得以保存、生长。使之得以保存、生长。使之得以保存、生长。保持器官的保持器官的保持器官的保持器官的结构、功能及分化能力。结构、功能及分化能力。结构、功能及分化能力。结构、功能及分化能力。组组织织培培养养6.19516.1951年，海拉细胞系的建成。年，海拉细胞系的建成。1.18851.1885年，鸡神经板在生理盐水中培养成活。年，鸡神经板在生理盐水中培养成活。2.19032.1903年，皮肤及白细胞在腹水及血清中存活一个月，年，皮肤及白细胞在腹水及血清中存活一个月，且观察到细胞分裂。且观察到细胞分裂。3.19073.1907年，蛙胚神经管在蛙淋巴液中悬浮培养，成功年，蛙胚神经管在蛙淋巴液中悬浮培养，成功看到神经末端的阿米巴运动。看到神经末端的阿米巴运动。4.19124.1912年，鸡胚浸出液对鸡胚心脏组织块进行原代培养年，鸡胚浸出液对鸡胚心脏组织块进行原代培养和传代培养。和传代培养。5.19435.1943年，获得长期培养细胞系（可连续传代）和细胞年，获得长期培养细胞系（可连续传代）和细胞克隆。克隆。“组织培养组织培养”一词产生一词产生真正的组织培养开始；真正的组织培养开始；创立了悬浮培养法创立了悬浮培养法成功进行了传代培养；成功进行了传代培养；发明了卡氏瓶；发明了卡氏瓶；标志着组织培养工作进入标志着组织培养工作进入全新阶段全新阶段二、动物组织培养技术的发展二、动物组织培养技术的发展2 2、适宜的环境条件、适宜的环境条件无菌、无毒环境：无菌、无毒环境：加抗生素，定期更换培养液加抗生素，定期更换培养液适宜的温度和适宜的温度和pHpH值：值：温度：温度：36.536.50.5 0.5 pHpH值：值：7.2-7.47.2-7.4适宜的气体环境：适宜的气体环境：O O2 2和和COCO2 2（95%95%空气和空气和5%CO5%CO2 2）适宜的渗透压等适宜的渗透压等（一）培养条件（一）培养条件 三、动物细胞培养过程三、动物细胞培养过程成分：成分：无机盐、葡萄糖、氨基酸、维生素和动物血清等无机盐、葡萄糖、氨基酸、维生素和动物血清等1、含全部营养物质的培养液、含全部营养物质的培养液从动物从动物胚胎或幼龄动物组织胚胎或幼龄动物组织切片中取小片样品切片中取小片样品转入特殊培养液转入特殊培养液原代培养原代培养分装到多个卡氏瓶中分装到多个卡氏瓶中传代培养传代培养单个单个细胞悬浮液细胞悬浮液CO2培养箱中培养箱中保温培养保温培养细胞系细胞系机械消化或胰酶消化机械消化或胰酶消化（胰蛋白酶）（胰蛋白酶）（二）培养过程（二）培养过程 原代培养物原代培养物选择或纯化选择或纯化选择或纯化选择或纯化细胞株细胞株细胞株细胞株如何界定原代培养和传代培养？为什么要传代培养？如何界定原代培养和传代培养？为什么要传代培养？细胞悬细胞悬浮液浮液转入特殊培养液转入特殊培养液首次培养首次培养换瓶后培养换瓶后培养原代培养原代培养传代培养传代培养为什么？为什么？原代培养原代培养传传代代培培养养原代培养物原代培养物细胞系：细胞系：可连续传代的细胞可连续传代的细胞 原代培养物在首次传代时就原代培养物在首次传代时就成为细胞系。成为细胞系。能连续能连续培养的培养的 连续细胞系连续细胞系不能连续不能连续培养的培养的 有限细胞系有限细胞系四、细胞系、细胞株四、细胞系、细胞株 （二倍体细胞）（二倍体细胞）（异倍体核型细胞）（异倍体核型细胞）（1 1）恶性细胞系，异体致瘤性）恶性细胞系，异体致瘤性）恶性细胞系，异体致瘤性）恶性细胞系，异体致瘤性 （2 2）保留接触抑制，不致癌）保留接触抑制，不致癌）保留接触抑制，不致癌）保留接触抑制，不致癌2、细胞株：、细胞株：通过一定的通过一定的通过一定的通过一定的选择或纯化选择或纯化选择或纯化选择或纯化方法，从方法，从方法，从方法，从原代培养物或原代培养物或原代培养物或原代培养物或细胞系细胞系细胞系细胞系中获得的中获得的中获得的中获得的具有特殊性质具有特殊性质具有特殊性质具有特殊性质的细胞系。的细胞系。的细胞系。的细胞系。如：单抗细胞株如：单抗细胞株如：单抗细胞株如：单抗细胞株 细胞株一般具有恒定的染色体组型、同工酶类型、细胞株一般具有恒定的染色体组型、同工酶类型、病毒敏感性和生化特性等。病毒敏感性和生化特性等。遗传物质未改变。遗传物质未改变。连续细胞株：可连续连续细胞株：可连续多次传代多次传代的细胞株。的细胞株。有限细胞株：传代有限细胞株：传代次数有限次数有限的细胞株的细胞株细胞系：细胞系：泛指可传代的细胞。泛指可传代的细胞。细胞株细胞株:具有特殊性质的细胞系。具有特殊性质的细胞系。五、克隆培养法（细胞克隆）五、克隆培养法（细胞克隆）1、概念：、概念：把一个把一个单细胞单细胞从群体中分离出来单独培养，从群体中分离出来单独培养，使之繁衍成一个使之繁衍成一个新的细胞群体新的细胞群体的技术。的技术。2、特点：、特点：遗传性状均一、表现的性状相似，便于研究遗传性状均一、表现的性状相似，便于研究异质性异质性细胞系细胞系克隆培养克隆培养纯系（克隆）纯系（克隆）3、最基本要求、最基本要求:保证所建成的克隆保证所建成的克隆来源于单个细胞来源于单个细胞4、适合于克隆的细胞：、适合于克隆的细胞：对环境有较大适应范围对环境有较大适应范围和具有和具有较强独立生存能力较强独立生存能力的细胞的细胞5、提高细胞克隆形成率的措施：、提高细胞克隆形成率的措施：选择适宜的培养基选择适宜的培养基添加血清添加血清 （胎牛血清胎牛血清）(能促进细胞的生长、增殖和贴附能促进细胞的生长、增殖和贴附)以滋养细胞支持生长（以滋养细胞支持生长（经射线照射的小鼠成纤维细胞经射线照射的小鼠成纤维细胞）激素刺激（激素刺激（胰岛素胰岛素等等）使用使用COCO2 2培养箱，调节培养箱，调节PHPH 群体细胞群体细胞 单单细胞细胞无限细胞系、转化或肿瘤细胞无限细胞系、转化或肿瘤细胞 原代细胞、有限细胞系原代细胞、有限细胞系6、细胞克隆的主要用途：、细胞克隆的主要用途：从普通细胞系中从普通细胞系中分离分离出缺乏特殊基因的出缺乏特殊基因的突变细胞系突变细胞系。用于研究细胞的遗传规律和生理特性。用于研究细胞的遗传规律和生理特性。离体动物细胞的生长特性：离体动物细胞的生长特性：（1）贴壁生长：贴壁生长：悬浮液中分散的细胞紧贴培养瓶内壁才能生长。悬浮液中分散的细胞紧贴培养瓶内壁才能生长。（2 2）接触抑制：）接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂。会停止分裂。（3 3）正常的生命活动：）正常的生命活动：生长、分裂、有规律的衰老、死亡等现象，生长、分裂、有规律的衰老、死亡等现象，但不但不分化。分化。细胞贴壁过程细胞贴壁过程 细胞在细胞在贴壁生长贴壁生长过过程中程中,随着细胞分裂随着细胞分裂,数数量不断增加量不断增加,最后最后形成形成一个单层一个单层,此时细胞间此时细胞间相互接触相互接触,细胞分裂和细胞分裂和生长停止生长停止。接触抑制接触抑制1 1、用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎、用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因是这样的组织细胞是这样的组织细胞 （）A A、容易产生各种变异、容易产生各种变异 B B、具有更强的全能性、具有更强的全能性 C C、取材十分方便、取材十分方便 D D、分裂增殖的能力强、分裂增殖的能力强D D2 2、用动、植物成体的体细胞进行离体培养，下列叙述用动、植物成体的体细胞进行离体培养，下列叙述正确的是正确的是A A都需用都需用COCO2 2培养箱培养箱 B B都须用液体培养基都须用液体培养基 C C都要在无菌条件下进行都要在无菌条件下进行 D D都可体现细胞的全能性都可体现细胞的全能性3 3、动物细胞克隆是指动物细胞克隆是指 A A一个单细胞培养成一个新的细胞群的技术一个单细胞培养成一个新的细胞群的技术 B B一个重组细胞经分裂、分化发育成一个动物个体的一个重组细胞经分裂、分化发育成一个动物个体的技术技术 C C几个同种动物的细胞培养成一个新的细胞群的技术几个同种动物的细胞培养成一个新的细胞群的技术 D D一个卵裂球经胚胎分割发育成四个细胞群的技术一个卵裂球经胚胎分割发育成四个细胞群的技术CA4 4、某研究小组为测定药物对体外培养细胞的毒性，某研究小组为测定药物对体外培养细胞的毒性，准备对某种动物的肝肿瘤细胞准备对某种动物的肝肿瘤细胞(甲甲)和正常肝细胞和正常肝细胞(乙乙)进行动物细胞培养。下列说法正确的是进行动物细胞培养。下列说法正确的是 ()A.A.在利用两种肝组织块制备肝细胞悬液时，也可用在利用两种肝组织块制备肝细胞悬液时，也可用胃蛋白酶处理胃蛋白酶处理B.B.细胞培养应在含细胞培养应在含5%CO5%CO2 2的恒温培养箱中进行，的恒温培养箱中进行，COCO2 2的的作用是刺激细胞的呼吸作用是刺激细胞的呼吸C.C.甲、乙细胞在持续的原代培养过程中，乙会出现甲、乙细胞在持续的原代培养过程中，乙会出现停止增殖的现象停止增殖的现象D.D.仅用该培养液也能用来培养乙肝病毒仅用该培养液也能用来培养乙肝病毒C5.5.下列关于动物细胞培养的叙述，正确的是下列关于动物细胞培养的叙述，正确的是()A.A.培养中的人效应培养中的人效应T T细胞能产生单克隆抗体细胞能产生单克隆抗体B.B.培养中的人培养中的人B B细胞能够无限地增殖细胞能够无限地增殖C.C.人的成熟红细胞经过培养能形成细胞株人的成熟红细胞经过培养能形成细胞株D.D.用胰蛋白酶处理肝组织可获得单个肝细胞用胰蛋白酶处理肝组织可获得单个肝细胞D