动物实验基本操作技术

动物实验基本操作技术动物实验基本操作技术l实验动物的捉拿和固定方法l实验动物的给药方法l实验动物的麻醉方法l实验动物的编号方法l实验动物的去毛方法l实验动物的取血方法l实验动物的处死方法一、实验动物的捉拿和固定方法1.小鼠 捉拿时先用右手将鼠尾抓住提起，放在较粗糙的台面或鼠笼上，在其向前爬行时，右手向后拉尾，用左手拇指和食指抓住小鼠的两耳和头颈部皮肤，将其固定于左手手心中，拉直四肢并用左手无名指压紧尾和后肢，右手即可作注射或其他实验操作。取尾血及尾静脉注射时，可将小鼠固定在金属或木制的固定器上。2.家兔一手抓住兔颈部的被毛与皮肤，另一手托其臀部或腹部，使其躯干的重量大部分集中在手上。兔手术固定台兔手术固定台二、实验动物的给药方法1.注射法给药：家兔耳缘静脉注射 大、小鼠尾静脉注射2.摄入法给药：家兔、大鼠、小鼠灌胃法3.涂布法给药摄入法给药自动口服给药强制灌胃给药：大鼠 小鼠 家兔经直肠给药小鼠、大鼠灌胃法器械：灌胃器 由注射器和特殊的灌胃针构成。小鼠灌胃针长45cm 直径1 mm大鼠灌胃针长68cm 直径小鼠灌胃法按正确方法用左手抓取和固定动物。使腹部朝上，颈部拉直。固定后，右手持持接灌胃针的注射器吸取药液（或事先将药液吸好），将针头从口角插入口腔内，然后用灌胃针头压其头部，使口腔与食管成一直线，再将灌胃针头沿上腭壁轻轻进入，转动针头刺激动物吞咽，然后沿咽后壁慢慢插入食道。若动物挣扎厉害，应退出后灌胃针，待动物安静后重新插入。切不可强行插入，以免损伤食道或误入气管导致动物死亡。当感觉有落空感时表明灌胃针可能进入胃内，向外抽动注射器活塞，感觉有负压说明灌胃针未插入气管，此时可将药液灌入。成年小鼠插管深度一般是：3cm小鼠灌胃量：体重大鼠灌胃法成年大鼠插管深度一般是：5cm大鼠灌胃量：12ml/100g体重兔灌胃法器械：灌胃管（特制胃管或导尿管）开口器（木质纺锤状）兔灌胃法操作方法：1.固定：动物取直立或平卧体位，固定动物头部。直立位需2人合作，一人取坐位，将兔的躯体和下肢夹在两腿之间，左手紧握双耳固定头部，右手抓住前肢，将兔固定于竖立体位。另一人将开口器横放于兔口中，让动物咬住开口器，即可开始插入灌胃管。兔灌胃法兔灌胃法操作方法：2.插管：将灌胃管由开口器的中央孔插入，沿上颚壁推进约15cm。插管过程中可将灌胃管的另一端放于一杯清水中，若连续有气泡，说明插入呼吸道，应立即拔出灌胃管，重新操作；若无气泡，说明没有插入气管，即可开始注药。沿上颚壁沿上颚壁推进约推进约15cm检查插入部位检查插入部位兔灌胃法操作方法：3.给药：灌注药后可用少量清水将灌胃管里的药全部冲入胃内，以保证灌入药的剂量准确。灌胃完毕后，先退出胃管，后退出开口器。兔灌胃法关键词：固定，插入（沿上颚壁），检查关键词：固定，插入（沿上颚壁），检查家兔耳缘静脉注射将动物固定于实验台上，剪去耳缘部位的被毛，用乙醇轻轻擦拭，耳缘静脉即清晰可见。用左手食指和中指夹住静脉近心端，拇指和小指夹住耳缘部分，以左手无名指和小指放在耳下作垫，待静脉充盈后，右手持注射器使针头尽量由静脉远心端刺入，顺血管方向平行、向心端刺入约1cm。注射完毕抽出针头，用棉球压迫注射部位数分钟，以免出血。三、实验动物的麻醉方法三、实验动物的麻醉方法u全身麻醉法：吸入法，注射法全身麻醉法：吸入法，注射法u局部麻醉法：浸润麻醉，表面局部麻醉法：浸润麻醉，表面麻醉麻醉（一）全身麻醉法（一）全身麻醉法1、吸入法、吸入法麻醉麻醉药：u乙乙醚u氯仿仿u三氟乙三氟乙烷2、注射法、注射法 麻醉药：麻醉药：u 巴比妥类药物巴比妥类药物u 氯胺酮氯胺酮u 乌拉坦乌拉坦u 水合氯醛水合氯醛（一）全身麻醉法（一）全身麻醉法（二）（二）局部麻醉法局部麻醉法u 1%盐酸普鲁卡因盐酸普鲁卡因 局部浸润麻醉局部浸润麻醉u 2盐酸可卡因盐酸可卡因 表面麻醉表面麻醉麻醉药物应用原则：麻醉药物应用原则：l依据动物体重计算麻醉药物的剂量；依据动物体重计算麻醉药物的剂量；l依据动物生命体征变化控制给药速度；依据动物生命体征变化控制给药速度；l掌握宁少勿多、分阶段给药的方式。掌握宁少勿多、分阶段给药的方式。针对不同的不同的动物，物，选择不同的麻醉不同的麻醉药物、物、实施不同的麻醉方法。施不同的麻醉方法。麻醉具体操作：麻醉具体操作：家兔全身麻醉家兔全身麻醉麻醉麻醉剂：1.5%1.5%戊巴比妥钠，戊巴比妥钠，2ml/kg2ml/kg前前1/21/2快快速速推推入入，使使动动物物能能顺顺利利、快快速速地地渡渡过过兴兴奋奋期期；后后1/21/2速速度度宜宜慢慢，且且边边注注射射边边注注意意观观察察动动物物的的生生命命体体征征变变化化，当当确确定定已已达达到到麻麻醉醉效效果果时时，即即停停止止给给药药，不不必必急急于于将将剩剩余余的麻醉药物全部推入。的麻醉药物全部推入。给药方法：方法：耳缘静脉注射耳缘静脉注射麻醉成功麻醉成功标志志角膜反射角膜反射迟钝或消失或消失肢体肌肉松弛肢体肌肉松弛疼痛反射消失疼痛反射消失呼吸呼吸变深深变慢慢 机能实验学常用手术方法一、常用手术器械二、常用手术插管技术 气管插管术 颈动脉插管术 颈静脉插管术动物实验常用手术器械动物实验常用手术器械粗剪用于蛙类实验中的剪骨、肌肉和皮肤等粗硬组织以及家兔等实验动物的剪毛。剪毛时，剪毛剪自然落下逆毛方向一次次将毛剪下即可，加力下压或一手提起被毛，均易剪破皮肤。剪下的毛应集中放入加有清水的污物盒内，避免到处飞扬。手术剪手术剪用于剪线和剪开、分离组用于剪线和剪开、分离组织。有直、弯、尖头、圆织。有直、弯、尖头、圆头、大、小之分，根据不头、大、小之分，根据不同用途选用。手术操作中同用途选用。手术操作中用于沿组织间隙进行分离用于沿组织间隙进行分离和剪断组织者称组织剪，和剪断组织者称组织剪，一般为弯形，尖端较钝圆；一般为弯形，尖端较钝圆；用于剪断缝扎线、引流物用于剪断缝扎线、引流物或敷料等用品者称剪线剪，或敷料等用品者称剪线剪，为直形。为直形。眼科剪主要用于剪血管或神经等柔软组织，眼科剪也有直头与弯头之分，正确的执剪姿势与手术剪相同，即用拇指与无名指持剪，食指置于手术剪上方。手术刀手术刀l由由刀刀片片和和刀刀柄柄组组成成，可可分分为为大大、中、小号不同类型。中、小号不同类型。l大号大号切开皮肤；切开皮肤；l中号中号切割脏器组织；切割脏器组织；l小号小号切割特殊部位。切割特殊部位。l安安装装：先先用用持持针针器器（或或直直型型止止血血钳钳）夹夹住住刀刀片片，左左手手握握住住刀刀柄柄，按按刀刀片片上上的的空空隙隙对对准准刀刀柄柄上上的的槽槽隙隙，顺顺势势推推入入即可即可。手手术刀握持方法刀握持方法执执笔笔式式：即即以以持持笔笔的的手手法法握握住住刀刀柄柄，适适用用于于小小范范围围内内的的组组织织切切开开，随随意意性性强，可作垂直或水平切割强，可作垂直或水平切割。持持弓弓式式：右右手手中中指指、无无名名指指按按压在在手手术刀刀柄柄的的外外侧缘，拇拇指指放放在在刀刀柄柄内内侧缘，食食指指按按压在在刀刀片片后后1 13 3处。适用于切开皮肤。适用于切开皮肤。组织镊组织镊l组织镊和眼科镊。组织镊和眼科镊。l组组织织镊镊钳钳夹夹组组织织，分分离离组组织和筋膜。织和筋膜。l眼科镊眼科镊分离血管。分离血管。l使使用用手手法法：以以食食指指、中中指指放放于于器器械械的的外外侧侧缘缘，拇拇指指放放于于内内侧侧缘缘，集集3指指的的力力量量实实施施操操作作动动作作，而而且且适适用用于于左左右右手手的同时操作。的同时操作。止血钳止血钳l止血和分离组织。止血和分离组织。l使使用用方方法法：以以拇拇指指、中中指指（或或无无名名指指）分分别别套套人人止止血血钳钳的的套套扣扣内内，控控制制止止血血钳钳展展开开的的力力度度，以以食食指指放放在在止止血血钳钳的的关关节节部部位位，控控制制止止血血钳钳的的方方向向和和钳钳夹夹组组织织部位的准确性。部位的准确性。l切切忌忌左左右右手手分分别别抓抓住住止止血血钳钳的的套套扣扣部部位位，用用两两手手的的合合力力进进行行止血或分离组织。止血或分离组织。缝合针缝合针l有圆针和角针两种，圆针用于缝合组织结构；有圆针和角针两种，圆针用于缝合组织结构；l角针边缘锋利，除具有穿刺功能外，还具有角针边缘锋利，除具有穿刺功能外，还具有 切割的作用；缝合针需配合持针器同时使用。切割的作用；缝合针需配合持针器同时使用。探针探针包包括括金金属属探探针针和和玻玻璃璃分分针针；用用于于对对精精细细部部位位的的分分离离和和游游离离等等操操作作。有有时时，在在实实施施血血管管插插管管技技术术时时，切切开开血血管管壁壁后后往往往往借借助助于于探探针针先先将将切切口口挑挑起起，然然后插入导管。后插入导管。支架用于蛙类及哺乳类手术中换能器及刺激电极等的固定与位置调节。由底座及支架杆构成，支架上附有万向节，可在各个方向上调节。哺乳类手术器械哺乳类手术器械气管插管急性动物实验时插入气管，以保证呼吸道畅通，一端接气鼓或呼吸换能器可记录呼吸运动。分为金属插管和玻璃插管。哺乳类手术器械哺乳类手术器械动脉夹动脉夹分大、中、小三种型号及直、弯两种，用于夹持动脉，暂时阻断动脉血流。使用时动脉夹的尖端套有塑料管，以防止夹持动脉时对血管造成损伤。哺乳类手术器械哺乳类手术器械动脉插管用于在急性动物实验时插入动脉。可用金属、玻璃以及塑料等不同材料制成，常用细塑料管自行拉制而成。在哺乳类动物实验中，插管一端插入动脉，另一端接压力换能器以记录血压，插管内充满肝素以防止插管内血液凝固，插管腔内不可有气泡，以免影响结果。哺乳类手术器械哺乳类手术器械三通管用于改变实验中液体流动方向，以便输液、给药或描记血压。可随意将三个通道中的任何两个通道口相通，另一个不通；也可使三个通道同时都通或都不通。哺乳动物手术器材清单金属用品玻璃用品消耗品手术剪1把气管插管1个纱布眼科剪1把动脉插管1根棉签血管钳4把尿道插管1根丝线手术镊1把玻璃分针1根动脉夹1个注射器1 支（1ml/5ml）手术刀1把三通管一个动物实验常用插管技术动物实验常用插管技术u 气管插管术气管插管术u 颈动脉插管术颈动脉插管术u 颈静脉插管术颈静脉插管术u 导尿管插管术导尿管插管术插管技术的基本步骤插管技术的基本步骤1.动物称重、麻醉、固定。动物称重、麻醉、固定。2.插管部位皮肤去毛、备皮。插管部位皮肤去毛、备皮。3.皮肤切开。皮肤切开。4.皮下组织结构的分离。皮下组织结构的分离。5.目标器官或组织结构的游离。目标器官或组织结构的游离。6.导管的插入或固定。导管的插入或固定。家兔家兔颈部神部神经和血管的解剖位置和血管的解剖位置迷走神经迷走神经 交感神经交感神经减减压压神神经经气管插管术气管插管术1 1、麻醉固定、麻醉固定、颈部部皮肤去毛、皮肤去毛、备皮皮2 2、在、在颈前区正前区正中作一中作一约5-7cm5-7cm的切口的切口3 3、钝性分离皮下性分离皮下组织、肌肉，游离出气管，、肌肉，游离出气管，穿穿线备用。用。4 4、在在甲甲状状软骨骨下下方方第第3-43-4个个环状状软骨骨上上作作一一倒倒“T”“T”形形切切口口，插插入入“Y”“Y”形形气气管管插插管管，并并用用线固定好。固定好。颈动脉插管技术颈动脉插管技术1、颈正中作一约、颈正中作一约5-7cm的切口的切口2、钝性分离皮下筋膜、钝性分离皮下筋膜3 3、分离一、分离一侧颈总动脉，穿双脉，穿双线备用。用。4 4、结扎扎远心心端端，在在距距结扎扎线约2-3cm2-3cm处用用动脉脉夹夹闭颈总动脉近心端脉近心端。5 5、在在靠靠近近结扎扎线处用用眼眼科科剪剪剪剪一一“v”“v”形形切切口口，切口大小切口大小约为动脉口径的脉口径的1/31/21/31/2。6 6、将将压力力换能能器器与与动脉脉插插管管连接接好好并并充充满肝肝素，素，向近心端插入向近心端插入动脉插管脉插管，用，用线结扎牢固。扎牢固。三通的使用：三通的使用：u进入入BLBL410/420410/420系系统。u选择“实验项目目”选择“循循环实验”“兔兔动脉血脉血压调节”实验模模块；7 7、打开、打开换能器开关，能器开关，观察并察并记录动脉血脉血压。或或选择“输入入信信号号”选择“通通道道”“压力力”点点击“开开始始”实验按按钮，即即可可在在屏屏幕幕上上观察到正常的血察到正常的血压曲曲线。动脉插管注意事脉插管注意事项l动脉插管和血脉插管和血压换能器内注能器内注满肝素生理肝素生理盐水以排气抗凝。水以排气抗凝。l压力力换能器与能器与动物心物心脏等高。等高。l动脉插管与脉插管与颈总动脉呈一条直脉呈一条直线，方向，方向一致一致 。l掌握好三通管的方向。掌握好三通管的方向。l结扎固定牢固。扎固定牢固。颈静脉插管术颈静脉插管术操作练习操作练习 小鼠的抓取和灌胃小鼠的抓取和灌胃 家兔的抓取和灌胃家兔的抓取和灌胃 家兔的全身麻醉家兔的全身麻醉 家兔的气管插管家兔的气管插管 家兔的颈总动脉插管家兔的颈总动脉插管