第13章-水卫生生物学ppt课件

第十三章 水卫生生物学第十三章第十三章 水水卫卫生生物学生生物学1一、水中的病原微生物及其危害一、水中的病原微生物及其危害一、水中的病原微生物及其危害一、水中的病原微生物及其危害13.1 水中的病原微生物 水中的微生物包括致病性微生物和非致病性微生物。水中的微生物包括致病性微生物和非致病性微生物。n水中的病原微生物一般是从外界环境污染而来的，水中的病原微生物一般是从外界环境污染而来的，特别是人和其他温血动物的粪便污染。特别是人和其他温血动物的粪便污染。细菌细菌 病毒病毒原生动物原生动物n致病性微生物致病性微生物一、水中的病原微生物及其危害一、水中的病原微生物及其危害13.1 水中的病原微生物水中的病原微生物2与水有关的疾病与水有关的疾病n饮水传播性疾病饮水传播性疾病：通过摄入被污染的水而被传染和：通过摄入被污染的水而被传染和传播的疾病。传播的疾病。流行性霍乱、伤寒流行性霍乱、伤寒n洗水性疾病洗水性疾病：与恶劣卫生条件和不适当的环境卫生：与恶劣卫生条件和不适当的环境卫生相关的疾病。相关的疾病。结膜炎、砂眼、腹泻结膜炎、砂眼、腹泻与水有关的疾病与水有关的疾病饮饮水水传传播性疾病：通播性疾病：通过摄过摄入被入被污污染的水而被染的水而被传传染和染和传传3与水有关的疾病与水有关的疾病n水依赖性疾病水依赖性疾病：由生活在水中或依赖水生存的病原：由生活在水中或依赖水生存的病原体引起的疾病。体引起的疾病。血吸虫病、军团病血吸虫病、军团病n水相关性疾病水相关性疾病：通过在水中繁殖或靠近水边生活的：通过在水中繁殖或靠近水边生活的某些昆虫传播的疾病。某些昆虫传播的疾病。黄热病黄热病、登革热、丝虫病、疟疾、昏睡病、登革热、丝虫病、疟疾、昏睡病与水有关的疾病水依与水有关的疾病水依赖赖性疾病：由生活在水中或依性疾病：由生活在水中或依赖赖水生存的病原体水生存的病原体4n致病性大肠杆菌致病性大肠杆菌二、水中的病原细菌二、水中的病原细菌二、水中的病原细菌二、水中的病原细菌 腹泻腹泻血性腹泻血性腹泻致病性大致病性大肠肠杆菌二、水中的病原杆菌二、水中的病原细细菌菌 腹泻腹泻5n伤寒杆菌（沙门氏菌）伤寒杆菌（沙门氏菌）发烧发烧脾脏肿大脾脏肿大红斑红斑腹泻腹泻伤伤寒杆菌（沙寒杆菌（沙门门氏菌）氏菌）发烧发烧6n痢疾杆菌（志贺氏菌）痢疾杆菌（志贺氏菌）发病急发病急腹痛腹痛腹泻腹泻呈现全身中毒呈现全身中毒症状症状感染剂量小感染剂量小痢疾杆菌（志痢疾杆菌（志贺贺氏菌）氏菌）发发病急病急7n霍乱弧菌霍乱弧菌呕吐呕吐腹泻腹泻失水失水死亡率甚高死亡率甚高 霍乱弧菌呕吐霍乱弧菌呕吐8n军团菌军团菌咳嗽咳嗽胸痛胸痛血痰血痰呼吸困难呼吸困难休克休克军团军团菌咳嗽菌咳嗽9n粪链球菌（粪肠球菌）粪链球菌（粪肠球菌）尿路感染尿路感染化脓性腹部感染化脓性腹部感染败血症败血症心内膜炎心内膜炎腹泻发烧腹泻发烧 粪链粪链球菌（球菌（粪肠粪肠球菌）尿路感染球菌）尿路感染10三、水中病毒三、水中病毒n肠道病毒肠道病毒 （脊髓灰质炎病毒）（脊髓灰质炎病毒）（柯萨奇病毒）（柯萨奇病毒）（埃可病毒）（埃可病毒）n肝炎病毒肝炎病毒n轮状病毒轮状病毒nSARS冠状病毒冠状病毒nMERS冠状病毒冠状病毒三、水中病毒三、水中病毒肠肠道病毒道病毒 （脊髓灰（脊髓灰质质炎病毒）炎病毒）11四、水中的病原性原生动物四、水中的病原性原生动物n隐孢子虫与贾第鞭毛虫（两虫）隐孢子虫与贾第鞭毛虫（两虫）“两虫两虫”属水媒性寄生原生动物中最容易属水媒性寄生原生动物中最容易通过饮用通过饮用水传播水传播给人、动物和禽畜的。给人、动物和禽畜的。“两虫两虫”其孢囊和卵囊在人和动物其孢囊和卵囊在人和动物粪便中数量大粪便中数量大，在，在外界环境中外界环境中抵抗力强抵抗力强，感染途径和方式简单，感染途径和方式简单，流行流行分布广泛分布广泛。四、水中的病原性原生四、水中的病原性原生动动物物隐孢隐孢子虫与子虫与贾贾第鞭毛虫（两虫）第鞭毛虫（两虫）12n症状：严重腹泻、恶心、呕吐或低度发烧症状：严重腹泻、恶心、呕吐或低度发烧n特点特点：发病率高（：发病率高（40%40%），治疗效果差。），治疗效果差。1993年年4月美国密尔沃基地区爆发涉及月美国密尔沃基地区爆发涉及40万人万人的隐孢子虫病；的隐孢子虫病；1996年年6月日本琦玉县发生隐虫污染自来水，月日本琦玉县发生隐虫污染自来水，8800人受感染人受感染；1998年年7月澳大利亚悉尼发生月澳大利亚悉尼发生“两虫两虫”污染供污染供水事故，劝告市民饮用煮沸的自来水。水事故，劝告市民饮用煮沸的自来水。症状：症状：严严重腹泻、重腹泻、恶恶心、呕吐或低度心、呕吐或低度发烧发烧1993年年4月美国密月美国密尔尔沃沃13五、水中的寄生虫五、水中的寄生虫五、水中的寄生虫五、水中的寄生虫n蛔虫、血吸虫等蛔虫、血吸虫等粪便施肥：曝晒、堆肥粪便施肥：曝晒、堆肥城市污水：不能直接用于灌溉城市污水：不能直接用于灌溉饮用水：必须过滤、消毒饮用水：必须过滤、消毒五、水中的寄生虫蛔虫、血吸虫等五、水中的寄生虫蛔虫、血吸虫等14 13.2 水质生物学指标n水的生物学指标水的生物学指标主要是用来评价水中的病原微生物，主要是用来评价水中的病原微生物，预防流行性传染病的大范围爆发。预防流行性传染病的大范围爆发。n在当前技术水平下，如果要对水中每一种可能的病在当前技术水平下，如果要对水中每一种可能的病原微生物都进行监测不切实际。原微生物都进行监测不切实际。n评价水中的病原微生物的评价水中的病原微生物的合理办法合理办法是：检测人和其是：检测人和其他温血动物的粪便中通常存在的他温血动物的粪便中通常存在的非致病微生物非致病微生物，作，作为指示微生物。为指示微生物。一、水质生物学指标概述一、水质生物学指标概述 13.2 水水质质生物学指生物学指标标水的生物学指水的生物学指标标主要是用来主要是用来评评价价15一般来说，一般来说，指示微生物指示微生物除了本身不能是致病微生物外，除了本身不能是致病微生物外，还应具备以下特征：还应具备以下特征：n这类微生物仅存在于粪便等污染源中，且数量较多；这类微生物仅存在于粪便等污染源中，且数量较多；n与病原微生物的生理特性相似；与病原微生物的生理特性相似；n在洁净水体中不存在、与病原微生物相当在外界的在洁净水体中不存在、与病原微生物相当在外界的存活能力相似；存活能力相似；n在宿主外不繁殖；在宿主外不繁殖；n容易检测。容易检测。一般来一般来说说，指示微生物除了本身不能是致病微生物外，指示微生物除了本身不能是致病微生物外，还应还应具具备备以下以下16二、病原细菌的指示微生物二、病原细菌的指示微生物二、病原细菌的指示微生物二、病原细菌的指示微生物（一）菌落总数（一）菌落总数（一）菌落总数（一）菌落总数（standard plate-count bacteriastandard plate-count bacteria）n水样在营养琼脂上有氧条件下水样在营养琼脂上有氧条件下37373737培养培养48h48h48h48h后，所得后，所得1ml1ml水样所含菌落的总数。水样所含菌落的总数。n注意：上述定义与课本上定义不同。课本上指标名注意：上述定义与课本上定义不同。课本上指标名为为“细菌总数细菌总数”，培养时间为，培养时间为24h24h。n该检测作为指示致病菌存在的指标意义不大，该检测作为指示致病菌存在的指标意义不大，不能不能说明污染来源说明污染来源，必须结合其他指标如总大肠菌群、，必须结合其他指标如总大肠菌群、耐热大肠菌群来判断水质污染的来源。耐热大肠菌群来判断水质污染的来源。二、病原二、病原细细菌的指示微生物（一）菌落菌的指示微生物（一）菌落总总数（数（standard p17指示意义指示意义指示意义指示意义n该指标可以作为判断被检水样该指标可以作为判断被检水样污染程度污染程度的标志。的标志。n评价水质评价水质清洁程度清洁程度和考核和考核水处理或消毒效果水处理或消毒效果的指标。的指标。菌落总数增多说明水被有机物污染程度大。菌落总数增多说明水被有机物污染程度大。n还可用于评价还可用于评价输配水系统清洁度输配水系统清洁度、完整性完整性以及以及是否是否存在生物膜存在生物膜。在输配水系统中，菌落总数的增加意。在输配水系统中，菌落总数的增加意味着水清洁度恶化、水流可能停滞和有生物膜形成。味着水清洁度恶化、水流可能停滞和有生物膜形成。指示意指示意义该义该指指标标可以作可以作为为判断被判断被检检水水样污样污染程度的染程度的标标志。志。18（二）总大肠菌群（二）总大肠菌群（二）总大肠菌群（二）总大肠菌群n总大肠菌群总大肠菌群又称大肠菌群，是指一群在又称大肠菌群，是指一群在37373737培养培养24h24h24h24h能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。阴性无芽孢杆菌。1 1 1 1、为什么以大肠菌群作为指示微生物呢？、为什么以大肠菌群作为指示微生物呢？、为什么以大肠菌群作为指示微生物呢？、为什么以大肠菌群作为指示微生物呢？n肠道正常细菌有肠道正常细菌有3 3类：类：大肠菌群、肠球菌、产气荚膜杆菌大肠菌群、肠球菌、产气荚膜杆菌（二）（二）总总大大肠肠菌群菌群总总大大肠肠菌群又称大菌群又称大肠肠菌群，是指一群在菌群，是指一群在37培养培养19n大肠菌群的生理习性与伤寒杆菌、副伤寒杆菌和痢大肠菌群的生理习性与伤寒杆菌、副伤寒杆菌和痢疾杆菌等病原菌的生理特性较为相似，在外界生存疾杆菌等病原菌的生理特性较为相似，在外界生存条件也与上述病原菌基本一致；条件也与上述病原菌基本一致；n另外大肠菌群在人的粪便中数量很大，检验技术并另外大肠菌群在人的粪便中数量很大，检验技术并不复杂。不复杂。n而而肠球菌肠球菌抵抗力弱，生存时间比病原菌短，水中若抵抗力弱，生存时间比病原菌短，水中若未检出肠球菌，并不能说明未受粪便污染。未检出肠球菌，并不能说明未受粪便污染。n产气荚膜杆菌产气荚膜杆菌因为有芽孢，能在自然环境中长期生因为有芽孢，能在自然环境中长期生存，它的存在不能说明水是近期受粪便污染的。存，它的存在不能说明水是近期受粪便污染的。大大肠肠菌群的生理菌群的生理习习性与性与伤伤寒杆菌、副寒杆菌、副伤伤寒杆菌和痢疾杆菌等病原菌的寒杆菌和痢疾杆菌等病原菌的202 2 2 2、大肠菌群的主要特征、大肠菌群的主要特征、大肠菌群的主要特征、大肠菌群的主要特征n一群在一群在37培养培养24 h能发酵乳糖、产酸产气、需氧能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。主要包括主要包括大肠埃希氏杆菌大肠埃希氏杆菌、柠檬酸杆菌和副大肠杆、柠檬酸杆菌和副大肠杆菌等。菌等。n分解葡萄糖、甘露醇及乳糖的能力有差别分解葡萄糖、甘露醇及乳糖的能力有差别n在在远藤氏远藤氏培养基上所形成的菌落不同培养基上所形成的菌落不同n在在EMB培养基上所形成的菌落不同培养基上所形成的菌落不同2、大、大肠肠菌群的主要特征一群在菌群的主要特征一群在37培养培养24 h能能发发酵乳糖、酵乳糖、产产21生活饮用水卫生标准生活饮用水卫生标准 GB 57492006表表表表1 1 水质微生物常规指标及限值水质微生物常规指标及限值水质微生物常规指标及限值水质微生物常规指标及限值指指 标 限限 值总大大肠菌群（菌群（MPN/100mL或或CFU/100mL）不得不得检出出耐耐热大大肠菌群（菌群（MPN/100mL或或CFU/100mL）不得不得检出出大大肠埃希氏菌（埃希氏菌（MPN/100mL或或CFU/100mL）不得不得检出出菌落菌落总数（数（CFU/mL）100在在常常规规项项目目中中，20062006标标准准增增加加了了大大肠肠埃埃希希氏氏菌菌、耐耐热热大大肠肠菌群菌群；修订了总大肠菌群修订了总大肠菌群生活生活饮饮用水用水卫卫生生标标准准 GB 57492006表表1 水水质质微生微生22思考：为什么会增加这两项指标呢？思考：为什么会增加这两项指标呢？世界卫生组织世界卫生组织2005年年饮用水水质准则饮用水水质准则第第三版（第一次增补本）中则指出：三版（第一次增补本）中则指出：n总大肠菌群包括能够在水中存活和生长的微生物，总大肠菌群包括能够在水中存活和生长的微生物，因此，它们不能作为粪便致病菌的指标。因此，它们不能作为粪便致病菌的指标。n大肠菌群总数不适宜作为供水卫生质量的指标，特大肠菌群总数不适宜作为供水卫生质量的指标，特别是在热带地区，几乎所有未经处理的供水中均存别是在热带地区，几乎所有未经处理的供水中均存在大量无卫生学意义的细菌。在大量无卫生学意义的细菌。思考：思考：为为什么会增加什么会增加这这两两项项指指标标呢？世界呢？世界卫卫生生组织组织2005年年23（三）耐热大肠菌群（粪大肠菌群）（三）耐热大肠菌群（粪大肠菌群）（三）耐热大肠菌群（粪大肠菌群）（三）耐热大肠菌群（粪大肠菌群）n耐热大肠菌群耐热大肠菌群：耐热大肠菌群是总大肠菌群的一部：耐热大肠菌群是总大肠菌群的一部分，用提高培养温度的方法将自然环境中的大肠菌分，用提高培养温度的方法将自然环境中的大肠菌群与粪便中的大肠菌群区分开，在群与粪便中的大肠菌群区分开，在44.5仍能生长仍能生长的大肠菌群，称为耐热大肠菌群。的大肠菌群，称为耐热大肠菌群。n它们由它们由埃希氏菌属埃希氏菌属以及以及克雷伯菌属克雷伯菌属、肠杆菌属肠杆菌属和和柠柠檬酸杆菌属檬酸杆菌属中的一些菌种组成。中的一些菌种组成。n耐热大肠杆菌中的主要优势菌耐热大肠杆菌中的主要优势菌为为大肠大肠埃埃希希氏菌氏菌。（三）耐（三）耐热热大大肠肠菌群（菌群（粪粪大大肠肠菌群）耐菌群）耐热热大大肠肠菌群：耐菌群：耐热热大大肠肠菌群是菌群是24（四）大肠埃希氏菌（四）大肠埃希氏菌（四）大肠埃希氏菌（四）大肠埃希氏菌n大肠埃希菌是粪便污染最有意义的指示菌，已被世大肠埃希菌是粪便污染最有意义的指示菌，已被世界上许多组织、国家和地区使用。界上许多组织、国家和地区使用。n若水样检出大肠埃希菌说明水质可能受到严重污染。若水样检出大肠埃希菌说明水质可能受到严重污染。n耐热大肠菌群比总大肠菌群能耐热大肠菌群比总大肠菌群能更确切地反映饮用更确切地反映饮用水受人和动物粪便的近期污染及污染的程度水受人和动物粪便的近期污染及污染的程度，也，也较为实用和可行。较为实用和可行。（四）大（四）大肠肠埃希氏菌大埃希氏菌大肠肠埃希菌是埃希菌是粪粪便便污污染最有意染最有意义义的指示菌，已被的指示菌，已被25关于耐热大肠菌群与大肠埃希氏菌的检验关于耐热大肠菌群与大肠埃希氏菌的检验n当水样检出总大肠菌群时，应进一步检验大肠埃希当水样检出总大肠菌群时，应进一步检验大肠埃希氏菌或耐热大肠菌群；氏菌或耐热大肠菌群；n水样未检出总大肠菌群，不必检验大肠埃希氏菌或水样未检出总大肠菌群，不必检验大肠埃希氏菌或耐热大肠菌群。耐热大肠菌群。关于耐关于耐热热大大肠肠菌群与大菌群与大肠肠埃希氏菌的埃希氏菌的检验检验当水当水样检样检出出总总大大肠肠菌群菌群时时，26三、病毒的指示微生物三、病毒的指示微生物n目前仅有美国、加拿大等极少数国家在饮用水标准目前仅有美国、加拿大等极少数国家在饮用水标准中明确规定了对病毒的处理要求。中明确规定了对病毒的处理要求。n我国最新的我国最新的生活饮用水卫生标准生活饮用水卫生标准(GB5749-2006)并未将其列入。并未将其列入。nWHO的的饮用水水质准则饮用水水质准则2008年的增补本中关于年的增补本中关于病毒类列举了腺病毒、肠道病毒等病毒类列举了腺病毒、肠道病毒等8种，然而许多指种，然而许多指标并标并未做出明确的限值规定。未做出明确的限值规定。nWHO针对病毒提出针对病毒提出绩效目标绩效目标的概念，即测定微生物的概念，即测定微生物数量减少程度以确保水的安全性。数量减少程度以确保水的安全性。三、病毒的指示微生物目前三、病毒的指示微生物目前仅仅有美国、加拿大等极少数国家在有美国、加拿大等极少数国家在饮饮用水用水27目前以目前以噬菌体噬菌体作为人体病毒的指示物。作为人体病毒的指示物。SC噬菌体可以反映水受粪便污染的程度噬菌体可以反映水受粪便污染的程度 F-噬菌体在性质和对消毒的抗性上最接近肠道病毒，噬菌体在性质和对消毒的抗性上最接近肠道病毒，适宜作为肠道病毒的指示物。适宜作为肠道病毒的指示物。脆弱拟杆菌脆弱拟杆菌噬菌体噬菌体仅在人类粪便中被分离仅在人类粪便中被分离出来，在出来，在其他动物粪便中未被分离其他动物粪便中未被分离出来，出来，因此因此可专门作为人可专门作为人类粪便污染的指标。类粪便污染的指标。目前以噬菌体作目前以噬菌体作为为人体病毒的指示物。人体病毒的指示物。SC噬菌体可以反映水受噬菌体可以反映水受粪粪便便28四、病原性原生动物指标四、病原性原生动物指标n目前采用的目前采用的US-EPA 1623方法是标准化的方法，可方法是标准化的方法，可同时检测同时检测“两虫两虫”。n该方法的主要步骤为过滤、洗脱、浓缩、分离纯化、该方法的主要步骤为过滤、洗脱、浓缩、分离纯化、荧光显色和镜检。荧光显色和镜检。n美国美国EPA研究表明，研究表明，降低出厂水浑浊度至降低出厂水浑浊度至0.5NTU 可可大大降低原虫的传播危险大大降低原虫的传播危险，浊度低于，浊度低于0.3NTU，原虫，原虫去除率达去除率达99%，浊度，浊度0.1NTU，去除率达，去除率达99.9%。四、病原性原生四、病原性原生动动物指物指标标目前采用的目前采用的US-EPA 1623方法是方法是29生活饮用水卫生标准生活饮用水卫生标准 GB 57492006表表表表2 2 水质微生物非常规指标及限值水质微生物非常规指标及限值水质微生物非常规指标及限值水质微生物非常规指标及限值指指 标限限 值贾第鞭毛虫（个第鞭毛虫（个/10L）1隐孢子虫（个子虫（个/10L）1“水水质质非非常常规规指指标标及及限限值值”所所规规定定指指标标的的实实施施项项目目和和日日期期由由省省级级人人民民政政府府根根据据当当地地实实际际情情况况确确定定，并并报报卫卫生生部部、建建设设部部和和国国家家标标准准委委备备案案，自自2008年年起起三三个个部部门门对对各各省省非非常常规规指指标标实实施情况进行通报，全部指标最迟于施情况进行通报，全部指标最迟于2012年年7月月1日实施。日实施。生活生活饮饮用水用水卫卫生生标标准准 GB 57492006表表2 水水质质微生微生30一、菌落总数的测定一、菌落总数的测定13.3 水的卫生学检验方法 n水样在营养琼脂上有氧条件下水样在营养琼脂上有氧条件下3737培养培养48h48h后，所得后，所得1ml1ml水样所含菌落的总数。水样所含菌落的总数。n测定生活饮用水的方法测定生活饮用水的方法无菌操作将无菌操作将1ml水样注入灭菌平皿，以水样注入灭菌平皿，以45营养琼脂营养琼脂培养基倒平板，并立即旋摇混均。培养基倒平板，并立即旋摇混均。37倒置培养倒置培养48h后，计菌落总数后，计菌落总数一、菌落一、菌落总总数的数的测测定定13.3 水的水的卫卫生学生学检验检验方法方法 水水样样在在31二、大肠菌群数测定二、大肠菌群数测定（一）发酵法（一）发酵法（1）初发酵试验）初发酵试验n本试验是将水样置于糖类液体培养基中，在一定温度本试验是将水样置于糖类液体培养基中，在一定温度下，经一定时间培养后，观察有无酸和气体产生，即下，经一定时间培养后，观察有无酸和气体产生，即有无发酵，而初步确定有无大肠菌群存在。有无发酵，而初步确定有无大肠菌群存在。n 取取10 mL水样接种到水样接种到10 mL双料乳糖蛋白胨培养液中，双料乳糖蛋白胨培养液中，取取1 mL水样接种到水样接种到10 mL单料乳糖蛋白胨培养液中，单料乳糖蛋白胨培养液中，另取另取l mL水样注入到水样注入到9 mL灭菌生理盐水中，混匀后灭菌生理盐水中，混匀后吸取吸取l mL（即（即0.1 mL水样）注入到水样）注入到10 mL单料乳糖蛋单料乳糖蛋白胨培养液中，每一稀释度接种白胨培养液中，每一稀释度接种5管。管。二、大二、大肠肠菌群数菌群数测测定（一）定（一）发发酵法酵法32产酸产气情况：产酸产气情况：如无气体和酸产生，则为阴性反应，即可报告如无气体和酸产生，则为阴性反应，即可报告为总大肠菌群阴性。为总大肠菌群阴性。如有气体和酸产生，或虽无气体但有酸产生，如有气体和酸产生，或虽无气体但有酸产生，则初定为阳性反应，需作进一步检验。则初定为阳性反应，需作进一步检验。n对已处理过的出厂自来水，需经常检验或每天检对已处理过的出厂自来水，需经常检验或每天检验一次的，可直接种验一次的，可直接种5份份10 mL水样双料培养基，水样双料培养基，每份接种每份接种10 mL水样。水样。n将接种管置将接种管置361培养箱内，培养培养箱内，培养24 h2 h如有气体产生，但没有酸，溶液也不浑浊，则操如有气体产生，但没有酸，溶液也不浑浊，则操作技术上有问题，须重作检验。作技术上有问题，须重作检验。产产酸酸产产气情况：如无气体和酸气情况：如无气体和酸产产生，生，则为则为阴性反阴性反应应，即可，即可报报告告为总为总大大33第第13章章-水水卫卫生生物学生生物学ppt课课件件34（2）平板分离）平板分离n这一阶段的检验主要是根据大肠菌群在固体培养基上这一阶段的检验主要是根据大肠菌群在固体培养基上可以在空气中生长，在鉴别培养基上有典型菌落，革可以在空气中生长，在鉴别培养基上有典型菌落，革兰氏染色呈阴性和不生芽孢的特性来进行的。兰氏染色呈阴性和不生芽孢的特性来进行的。n将产酸产气的发酵管分别转移在伊红美蓝琼脂平板上，将产酸产气的发酵管分别转移在伊红美蓝琼脂平板上，于于371培养箱内培养培养箱内培养18h24h，观察菌落形态，观察菌落形态，挑取挑取符合下列符合下列特征的菌落作革兰氏染色、镜检和证实特征的菌落作革兰氏染色、镜检和证实试验。试验。深紫黑色、具有金属光泽的菌落；深紫黑色、具有金属光泽的菌落；紫黑色、不带或略带金属光泽的菌落；紫黑色、不带或略带金属光泽的菌落；淡紫红色、中心较深的菌落。淡紫红色、中心较深的菌落。（2）平板分离）平板分离这这一一阶阶段的段的检验检验主要是根据大主要是根据大肠肠菌群在固体培养基上菌群在固体培养基上35（3）复发酵试验）复发酵试验n本试验是将可疑的菌落再移植于糖类培养基中，观察本试验是将可疑的菌落再移植于糖类培养基中，观察其是否发酵，是否产酸产气而最后肯定有无大肠菌群其是否发酵，是否产酸产气而最后肯定有无大肠菌群存在。存在。n经上述染色镜检为革兰氏阴性无芽饱杆菌，同时接种经上述染色镜检为革兰氏阴性无芽饱杆菌，同时接种乳糖蛋白胨培养液置乳糖蛋白胨培养液置361培养箱中培养培养箱中培养24h2h有产酸产气者，即证实有总大肠菌群存在。有产酸产气者，即证实有总大肠菌群存在。革兰氏染色、镜检结果革兰氏染色、镜检结果（3）复）复发发酵酵试验试验本本试验试验是将可疑的菌落再移植于糖是将可疑的菌落再移植于糖类类培养基中，培养基中，36第第13章章-水水卫卫生生物学生生物学ppt课课件件37革兰氏阴性菌革兰氏阴性菌革兰氏阳性菌革兰氏阳性菌革革兰兰氏阴性菌革氏阴性菌革兰兰氏阳性菌氏阳性菌38u阳性的最终确定阳性的最终确定初发酵初发酵EMB平板检验平板检验产酸产气或产酸不产气产酸产气或产酸不产气典型菌落革兰氏染色：典型菌落革兰氏染色：G、无芽孢、杆菌者、无芽孢、杆菌者阳性阳性深紫黑色，具有金属光泽的菌落；深紫黑色，具有金属光泽的菌落；紫黑色，不带或略带金属光泽的菌落；紫黑色，不带或略带金属光泽的菌落；淡紫红色，中心色较深的菌落。淡紫红色，中心色较深的菌落。复发酵复发酵：产酸产气产酸产气阳性的最阳性的最终终确定初确定初发发酵酵EMB平板平板检验产检验产酸酸产产气或气或产产酸不酸不产产气典型菌气典型菌39n n 结果报告结果报告结果报告结果报告 p根据证实为总大肠菌群阳性的管数，查根据证实为总大肠菌群阳性的管数，查MPN（most-probable number，最可能数）检索表，报告每，最可能数）检索表，报告每100mL水样中的总大肠菌群最可能数（水样中的总大肠菌群最可能数（MPN）值。）值。p15管发酵法结果见管发酵法结果见P370。p5管发酵法结果见下表。管发酵法结果见下表。5个个10mL管中管中阳性管数阳性管数MPN5个个10mL管中管中阳性管数阳性管数MPN016 结结果果报报告告 根据根据证实为总证实为总大大肠肠菌群阳性的管数，菌群阳性的管数，查查MPN（mos40（二）滤膜法（二）滤膜法n用孔径为用孔径为0.45m的微孔滤膜过滤水样，将滤膜贴在的微孔滤膜过滤水样，将滤膜贴在选择性培养基上选择性培养基上37培养培养24h，能形成特征性菌落，能形成特征性菌落的需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌以检测的需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌以检测水中总大肠菌群的方法。水中总大肠菌群的方法。n有可能在有可能在30h内完成内完成n受水中悬浮物的影响受水中悬浮物的影响n目前在一些大型水厂有应用目前在一些大型水厂有应用（二）（二）滤滤膜法用孔径膜法用孔径为为0.45m的微孔的微孔滤滤膜膜过滤过滤水水样样，将，将滤滤膜膜贴贴41病毒：专性活细胞内寄生病毒：专性活细胞内寄生必须是相应的活敏感细胞必须是相应的活敏感细胞水质检测中使用猴子的肾脏水质检测中使用猴子的肾脏空斑形成单位（空斑形成单位（空斑形成单位（空斑形成单位（Plaque-forming unit,PFUPlaque-forming unit,PFU）：每每每每毫升样品中所含有的具侵染性的病毒（噬菌毫升样品中所含有的具侵染性的病毒（噬菌毫升样品中所含有的具侵染性的病毒（噬菌毫升样品中所含有的具侵染性的病毒（噬菌体）粒子数。体）粒子数。体）粒子数。体）粒子数。三、病毒的检测方法三、病毒的检测方法每升水中无每升水中无1 1个病毒蚀斑个病毒蚀斑（PFU）饮用才安全。饮用才安全。病毒：病毒：专专性活性活细细胞内寄生胞内寄生必必须须是相是相应应的活敏感的活敏感细细胞水胞水质检测质检测中使中使42单层细胞单层细胞培养培养培养培养计数蚀斑计数蚀斑计数蚀斑计数蚀斑蚀斑蚀斑数试样中病毒数数试样中病毒数动物病毒动物病毒的检测方法的检测方法软琼脂软琼脂软琼脂软琼脂病毒试样病毒试样病毒试样病毒试样单层细单层细胞培养胞培养计计数数蚀蚀斑斑蚀蚀斑数斑数试样试样中病毒数中病毒数动动物病毒的物病毒的检测检测方法方法软软43噬菌斑：由于噬菌体的作用而使布满细菌细胞的菌噬菌斑：由于噬菌体的作用而使布满细菌细胞的菌苔上，出现肉眼可见的一个个透亮的小圆斑。苔上，出现肉眼可见的一个个透亮的小圆斑。四、噬菌体的检测方法四、噬菌体的检测方法噬菌斑：由于噬菌体的作用而使布噬菌斑：由于噬菌体的作用而使布满细满细菌菌细细胞的菌苔上，出胞的菌苔上，出现现肉眼可肉眼可44琼脂平板琼脂平板琼脂平板琼脂平板软琼脂软琼脂软琼脂软琼脂+宿主菌液宿主菌液宿主菌液宿主菌液+噬菌体试样噬菌体试样噬菌体试样噬菌体试样培养培养培养培养10101010余小时余小时余小时余小时计数噬菌斑计数噬菌斑计数噬菌斑计数噬菌斑噬菌斑数试样中噬菌体数噬菌斑数试样中噬菌体数双层平板法双层平板法琼琼脂平板脂平板软琼软琼脂脂+宿主菌液宿主菌液+噬菌体噬菌体试样试样培养培养10余小余小时计时计数噬菌斑数噬菌斑45五、原生动物的检测方法五、原生动物的检测方法n主要是指对隐孢子虫卵囊与贾第鞭毛虫孢囊主要是指对隐孢子虫卵囊与贾第鞭毛虫孢囊n目前国标中规定的是：目前国标中规定的是：US-EPA1623方法方法n两虫的检测对设备要求较高，检测费用也比较高两虫的检测对设备要求较高，检测费用也比较高五、原生五、原生动动物的物的检测检测方法主要是指方法主要是指对隐孢对隐孢子虫卵囊与子虫卵囊与贾贾第鞭毛虫第鞭毛虫孢孢囊囊46