基本培养方法

会计学1基本培养方法基本培养方法第1页/共43页二、培养操作中注意：n n动作准确敏捷有序；n n培养用液开口后应45度倾斜，不再重复使用的应立即封口；n n一个吸管只能吸一种液体；n n不能面向操作台讲话或咳嗽。第2页/共43页基本的培养方法n悬滴培养方法：第3页/共43页悬滴培养用的凹载玻片 单位：mm第4页/共43页（一）单盖玻片培养方法（一）单盖玻片培养方法第5页/共43页左图；凹载玻片支架右图：单盖玻片培养法操作图解 1、胚胎浸出液2、血浆3、心肌块 4、混合待凝固5、涂凡士林6、扣压7热溶石蜡密封 a为正确操作 b错误操作第6页/共43页n8、将密封好的凹玻片放到凹玻片支架上，放到培养箱内培养n9、培养7-8个小时，组织块向外生长，培养24小时在组织块外周形成生长晕（一圈薄而透明的细胞圈），48小时候生长减慢甚至停止。需要重新加入鸡胚浸出液。第7页/共43页盖玻片法再培养 1、2、眼科刀切除生长晕 3 方型培养物切为两到四片 4、5培养物漂洗 6、7、再培养第8页/共43页n（二）双盖玻片悬滴培养法第9页/共43页 双盖玻片图解：1、载体盖玻片 2、带培养物盖玻片 第10页/共43页n与单盖玻片不同之处：n n1 1、载体盖玻片加一滴消毒纯水贴到、载体盖玻片加一滴消毒纯水贴到带有组织块的另一面。带有组织块的另一面。n n2 2、再培养时：直接取下带培养物的、再培养时：直接取下带培养物的盖玻片漂洗，换一张新的载体盖玻盖玻片漂洗，换一张新的载体盖玻片片,可减少污染。可减少污染。第11页/共43页n二、培养瓶培养方法n20世纪50年代Carrel设计了卡氏瓶nEarle设计了T-培养瓶第12页/共43页n用血浆固定组织块的培养方法第13页/共43页 图:卡氏瓶培养组织块 1.消毒卡氏瓶 2.火焰略烧瓶口 3.取少量血浆加入瓶底 4.再加等量胚胎浸出液 5.接种组织块 7.上盖 8.消毒 9加入培养液 10.通气第14页/共43页n用透明纸固定组织块的培养方法第15页/共43页图:内放有孔透明纸的培养瓶培养 a.一个T培养瓶内放有有孔透明纸b.卡氏瓶接种后图解 1.有孔透明纸 2.组织块 3.培养液第16页/共43页n旋转管培养法：n与前两种培养方法不同之处：细胞或组织块交替与培养液和空气直接接触，有利于细胞的生长。第17页/共43页旋转管培养方法用具 a.简易旋转鼓，可放入培养箱内 b.带旋转鼓装置的培养箱 c.培养用的旋转管 1.示血浆的高度 2.示接种组织间间距 3.示加培养液 4.示可放旋转鼓内培养 d.放旋转管的支架.(1.接种组织块时用 2.观察时用)第18页/共43页n四.灌注小室培养法优点n1.连续观察活细胞的动态变化n2.研究理化性质对培养细胞的影响和作用n3.活细胞的反应.第19页/共43页不锈钢培养小室图 A 中央切面图 B侧面图(mm)第20页/共43页灌注小室及灌注系统示意图 A.排液瓶 B.受液瓶 C.不锈钢灌注小室 D.扁锥型小孔道 E、F、J.2号注射针头 G、H.塑料导管 I玻璃导管 K、L.14号注射针头(塞以棉花)第21页/共43页n五.培养板培养方法第22页/共43页第23页/共43页培养过程：培养过程：n n1 1、取材并制备拟用于培养的细胞悬液、取材并制备拟用于培养的细胞悬液n n2 2、接种细胞，取下培养板的盖子，用吸管吸取一、接种细胞，取下培养板的盖子，用吸管吸取一定量的细胞悬液，加到培养板的各孔内定量的细胞悬液，加到培养板的各孔内n n3 3、给培养板各孔补加足够的培养液、给培养板各孔补加足够的培养液n n4 4、加盖，放入、加盖，放入CO2CO2培养箱中培养。（贴壁能力弱培养箱中培养。（贴壁能力弱的细胞在接种后放置于的细胞在接种后放置于CO2 CO2 培养箱中培养培养箱中培养3-53-5小时，小时，使细胞黏附牢靠后再补加充足的营养液，继续培使细胞黏附牢靠后再补加充足的营养液，继续培养）养）n n5 5、每隔、每隔2-32-3天换液，换液时先将旧的培养液吸出，天换液，换液时先将旧的培养液吸出，加入平衡盐溶液洗涤，吸出平衡盐溶液，再加入加入平衡盐溶液洗涤，吸出平衡盐溶液，再加入新的培养液。盖上盖子继续培养。新的培养液。盖上盖子继续培养。第24页/共43页n六、转瓶培养第25页/共43页第26页/共43页第27页/共43页第28页/共43页第29页/共43页第30页/共43页第31页/共43页第32页/共43页n生物观测台第33页/共43页第34页/共43页第35页/共43页第36页/共43页第37页/共43页第38页/共43页