实验四遗传病分析

实 验 （ 四 ） 遗 传 病 的 分 析 2细胞内微核的检测系 谱 分 析 细胞内微核的检测 原 理 环 境 中 有 害 物 质 可 导 致 细 胞 中 染 色体 或 纺 锤 体 的 损 伤 ， 产 生 的 染 色 单 体 或无 着 丝 粒 染 色 体 片 断 在 细 胞 分 裂 末 期 滞留 于 子 细 胞 胞 质 中 ， 形 成 微 核 。 原 理 本 实 验 选 用 培 养 细 胞 ， 用 环 磷 酰 胺 作诱 导 剂 （ 射 线 、 顺 铂 等 ） ， 促 使 细 胞 中染 色 体 断 裂 ， 产 生 微 核 。 微 核 经 Giemsa染 色 后 呈 紫 红 色 ， 胞质 被 染 成 淡 灰 蓝 色 。 器 材 与 试 剂 显 微 镜 、 载 玻 片 、 染 色 缸 、 滴 管 等 培 养 细 胞 （ 小 盖 片 ） 甲 醇 固 定 液 PBS（ pH7.4） Giemsa应 用 液 （ 临 用 现 配 ） Giemsa原 液 ： PBS 1： 9混 合 而 成 。 操 作 培 养 细 胞 （ 小 盖 片 ） 加 环磷 酰 胺 1mg/mlPBS洗 涤 3次 甲 醇 固 定 5minGiemsa染 色5min自 来 水 冲 洗 显 微 镜下 观 察 计 数 24h 微 核 的 计 算 先 用 低 倍 镜 粗 检 ， 后 用 高 倍 镜 ， 选择 细 胞 分 布 均 匀 ， 细 胞 无 损 ， 着 色 适 当的 区 域 ， 计 数 。 每 张 玻 片 计 数 100-200个 细 胞 ， 按“ 1 ” 计 算 微 核 的 出 现 率 ， 微 核 计 数 以“ 细 胞 ” 为 单 位 ， 即 一 个 细 胞 中 出 现 2个或 2个 以 上 微 核 时 ， 只 按 “ 1” 计 算 。 结 果 微 核 大 多 数 呈 单 个 圆 形 ， 边 缘 光 滑整 齐 ， 嗜 色 性 与 核 质 相 一 致 ， 呈 紫 红 色或 蓝 紫 色 。 注 意 事 项 正 确 掌 握 微 核 的 形 态 特 征 ， 避 免 假 阳 性 。 以 有 核 细 胞 形 态 是 否 完 好 作 为 判 断 制 片优 劣 的 标 准