氯沙坦对肺纤维化大鼠一氧化氮和内皮素

氯沙坦对肺纤维化大鼠一氧化氮和内皮素 合成的影响（一）作者：裴毓华，扬春松，丁佑铭1【摘要】目的观察肺脏一氧化氮（NO）和内皮素（）在抗肿瘤药物博莱霉素（BLM）所致大鼠肺间质纤维化过程中的动态变化，探讨氯沙坦对大鼠肺纤维化模型的影响及其作用 机制。方法45只Wistar大鼠随机分为空白组、模型组和氯沙坦治疗组，气管内灌注BLM造 成肺纤维化模型，灌注次日开始灌胃给药。观察各组动物肺脏病理组织学改变、血浆及肺组 织中NO2-/NO3-、含量、肺组织羟脯氨酸含量的变化。结果肺组织及血浆中NO2-/NO3-含量在气管灌注BLM后迅速上升，第14天达高峰（与空白组相比，PV0.01），于第28天 基本恢复正常。肺中水平也明显升高（与空白组相比，PV0.01）。氯沙坦能显著降低肺中NO、的升高，延缓肺纤维化的发展。结论NO和在BLM所致肺间质纤维化的发生发展中起重要作用，氯沙坦能通过抑制NO、的产生达到治疗肺纤维化的目的。ET 1【关键词】氯沙坦肺纤维化博莱霉素一氧化氮内皮素1lintheDevelopmentofBIomycin inducedPulmonKeywords： Losartan;Pulmonaryfibrosis;bleomycin；肺间质纤维化常是博莱霉素（BLM）、平阳霉素等抗肿瘤药物引起的严重不良反应，也是多 种肺部疾病发展的最后阶段，发病机制复杂，且无有效治疗手段。血管紧张素II受体拮抗剂（ARB ）在临床应用极广，但关于其治疗肺纤维化的实验研究较少，本文拟就氯沙坦对博莱 霉素所致的大鼠肺纤维化模型中一氧化氮（Nitricoxide，NO）和内皮素（Endothelin，ET） 的影响进行研究，探讨ARB治疗肺纤维化的作用机制。1 材料与方法1.1 材料BLM为天津河北制药厂产品，使用时以生理盐水配制成5mg/L；氯沙坦为默沙东公司产品； NO羟脯氨酸检测试剂盒购于南京建成生物工程研究所；放射免疫检测试剂盒购于北京东亚免疫技术研究所。ET 11.2 实验动物及分组武汉大学医学动物中心提供的健康Wistar大鼠45只，雌雄不拘，体重180240g，按每组 15只随机分为3组：空白组（C组）、模型组（B组）和氯沙坦治疗组（L组）。大鼠用乙醚 麻醉后，按5mg/kg气管内灌注博莱霉素制作肺纤维化模型；空白组气管内注入相应体积的 生理盐水。次日开始灌胃给药，分别给予生理盐水C组，B组）、氯沙坦10mg/kg （L组）。3 组动物均在气管内灌药后第7、 14、 28d 各随机处死5 只。1.3 观测指标及方法1.3.1病理组织学改变各组动物在处死当日腹腔注射2%戊巴比妥钠（2ml/kg）麻醉，打开胸 腔，完整分离出气管和双肺，用预冷的生理盐水冲洗后滤纸吸干。摘取左肺，经主支气管向 肺内注入 10%中性福尔马林，使胸膜展开，结扎主支气管后置10%中性福尔马林液中固定， 沿肺门至胸膜行最大切面取材，常规制成5“m厚石蜡切片，行HE染色。1.3.2肺组织羟脯氨酸含量的测定将肺组织按100mg加入1ml生理盐水的比例制备组织匀浆， 用酸解法测定肺组织羟脯氨酸浓度，用考马斯亮蓝蛋白法测定匀浆组织中蛋白含量。1.3.3血浆及肺组织中NO2-/NO3-含量的测定收集左颈总动脉血，分离血浆，豊20C备用。 取右下肺组织100mg，加生理盐水1ml，碾磨匀浆后离心20min，取上清-20C保存。采用硝 酸还原酶显色法，以比色法记取OD值，用标准曲线法计算NO2-/NO3-含量代表NO含量。1.3.4血浆及肺组织中含量的测定取血2ml，分离血浆，-20C保存；测定前室温复融，3000r/min离心5min,瞰上清液测定含量。称取约100mg右下肺组织放入1mol/L醋ET 1酸1ml中略作碾磨，煮沸10min,匀浆，离心，取上清保存；则定时用5倍的O.1mol/L, pH7.4,内含1g/LBSA，1g/LNaN3，1g/LNaCl，缓冲液稀释。采用非平衡放射免疫法测定。0.1%(V/V)TritonX 1001.4 统计学处理实验数据以土s表示，采用SPSS12.0统计软件,行方差分析及q检验，P0.05为有统计学意义。2 结果2.1 病理变化2.1.1大体观察空白组双肺呈粉红色。模型组第7天双肺有散在点灶状出血，第14天仍有陈 旧出血，第28 天时双肺苍白、体积缩小、硬度增加，表面有索条状凹沟，部分肺切面见小 囊形成。氯沙坦组第7天双肺未见点灶状出血，第14天见少量点灶状出血及散在陈旧出血， 第 28 天时双肺灰白、体积略缩、硬度稍增加，表面光滑。2 . 1. 2光镜观察空白组各观察点均未出现明显病变。模型组第7天时可见肺泡间隔水肿增宽、 伴以少许巨噬细胞和淋巴细胞为主的细胞浸润，间质内开始出现成纤维细胞，肺泡腔内有巨 噬细胞；第14天时，肺泡炎仍较重，纤维组织进一步增加；第28天时肺泡炎较前减轻，而 肺纤维化程度加重，部分肺泡腔消失，为大量胶原纤维、成纤维细胞、淋巴细胞所占据。氯 沙坦组与模型组的病理变化规律基本一致，但炎症出现的较晚、较轻，纤维化程度也较轻。