《甾体激素类药物》PPT课件

甾体激素类药物的分析The analysis of Steroid Hormon Drugs 氢 化 可 的 松 、 醋 酸 地 塞 米 松 、 地塞 米 松 磷 酸 钠 、 曲 安 奈 德 、 甲 睾酮 、 丙 酸 睾 酮 、 苯 丙 酸 诺 龙 、 黄体 酮 、 醋 酸 甲 地 孕 酮 、 米 非 司 酮 、雌 二 醇 、 炔 雌 醇 、 炔 诺 酮 和 炔 诺孕 酮 等 甾 体 激 素 类 药 物 的 基 本 结构 与 分 类 、 鉴 别 试 验 和 含 量 测 定 。基 本 内 容 掌 握 甾 体 激 素 类 药 物 的 基 本 结 构 与分 类 ； 各 类 药 物 的 结 构 特 征 及 其 与分 析 方 法 的 关 系 。熟 悉 甾 体 激 素 类 药 物 的 紫 外 分 光 光度 法 、 四 氮 唑 比 色 法 和 异 烟 肼 比 色法 ； 柯 柏 反 应 比 色 法 。了 解 甾 体 激 素 类 药 物 的 特 殊 杂 质及 其 检 查 方 法 。基 本 要 求 第 一 节 基 本 结 构 与 分 类甾 体 激 素 是 一 类 具 有 甾 体 结 构 的激 素 类 药 物维 持 生 命调 节 性 功 能免 疫 调 节皮 肤 病 治 疗生 育 控 制甾 一 、 母 核 A B C D 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 环 戊 烷 骈 多 氢 菲 C10、 C13位 上 基 团 为 角 甲 基 C20C2119 18甾 环 上 双 键 的 表 示 方 法 ：n 用 “ ” 表 示 ,双 键 的 位 置 写 在 的 右 上 角 。 双 键 位 置 4 5 4 1 4 2 5 1,4 5 6 5 10 5 5(10) 甾环构型位取代位取代 n 二 、 分 类按 生 理 作 用 分 为 ： 肾 上 腺 皮 质 激 素 性 激 素 雄 性 激 素 雌 性 激 素 雌 激 素 孕 激 素 1 肾 上 腺 皮 质 激 素 C CH2OH O O HO 17 18 19 20 21 皮 质 酮 的 衍 生 物 4-3-酮 结 构 C CH2OH O O 去 氧 皮 质 酮 n 代 表 药 物 有 ： C CH2OH O O O OH 可 的 松 C CH2OH O O OHHO 氢 化 可 的 松 n人 工 合 成 药 物 ： C CH2OH O O OHHO CH3 F 地 塞 米 松 C CH2OH O O OHHO 氢 化 泼 尼 松(泼 尼 松 龙 ) n 结 构 特 点 ： 含 有 21个 C A环 ： 4-3-酮 结 构 （ ,-不 饱 和酮 ） 17位 ： 醇 酮 基 ， 有 还 原 性 。 C CH2OH O O HO 17 18 19 20 21 n 供 分 析 官 能 团 ： A环 的 4-3-酮 17位 的 醇 酮 基 17、 21-二 羟 基 -20-酮 11位 羟 基 或 羰 基 受 立 体 效 应 影响 ,无 利 用 价 值 。 C CH2OH O O HO 17 18 19 20 21 n2 雄 性 激 素 及 蛋 白 同 化 激 素 O OH 17 18 19 睾 丸 素 的 衍 生 物 O OH CH3 代 表 药 物 ： O OCOC2H5 甲 睾 酮丙 酸 睾 酮 蛋 白 同 化 激 素 在 睾 丸 素 基 础 上 结构 修 饰 得 到 ， 如 苯 丙 酸 诺 龙 O OCOCH2CH2 n结 构 特 点 ： 含 有 19个 C A环 的 4-3-酮 17位 羟 基 、 甲 基 、 酯 供 分 析 官 能 团 ： A环 4-3-酮 O OH 17 18 19 n 3 孕 激 素 C O O CH3 17 18 19 20 21 黄 体 酮 O CH3 H CH3H H CH3 O CH3 O CH3O 醋 酸 甲 地 孕 酮 C O O CH3 OCOCH3 CH3 安 宫 黄 体 酮米 非 司 酮 n 结 构 特 点 ： 含 有 21个 C A环 的 4-3-酮 17位 甲 酮 基 供 分 析 官 能 团 ： A环 的 4-3-酮 17位 上 的 甲 酮 基 。 C O O CH3 17 18 19 20 21 n 4 雌 激 素 O H HO 17 18 OH HO C CH 雌 二 醇炔 雌 醇 n 结 构 特 点 ： 含 有 18个 C A环 ： 苯 环 ， 3位 上 有 酚 羟 基 ， 10位 无 甲 基 17位 ： 羟 基 、 乙 炔 基 供 分 析 官 能 团 ： A环 的 酚 羟 基 及 17位 的 羟 基 乙 炔 基OH HO C CH l口 服 避 孕 药 O C OH CH O C O H CHA环 有 4-3-酮 结 构 ；有 的 第 17位 有 羟 基 和 乙炔 基 ；第 10位 无 甲 基 。炔 诺 酮 异 炔 诺 酮 小结甾 体 激 素 碳 原 子 数 A环 17位 取 代 基肾 上 腺 皮 质 激 素 21 4-3-酮 醇 酮 基雄 性 激 素 19 4-3-酮 -OH-CH3孕 激 素 21 4-3-酮 甲 酮 基雌 激 素 18 苯 环C3-酚 OH -OH-CCH 第 二 节 鉴 别 试 验一 、 呈 色 反 应 黄 褐 色醋 酸 可 的 松 42SOCon.H 1 母 核能 与 H2SO4， H3PO4， HClO4， HCl等呈 色 和 荧 光 ； 机 制 ： 母 核 的 质 子 化 。 如 ： 显 色 荧 光 加 水 稀 释 - nm51542 nm46542 max maxSOHor -SOH 荧 光 性 红 色稀 释 稀水 黄 色乙 醇雌 激 素 类 药 物 vKober反 应 ： 指 雌 激 素 与 硫 酸 乙 醇 共 热 呈 色 ，用 水 或 稀 硫 酸 稀 释 后 ， 重 新 加 热 发生 颜 色 改 变 ， 并 在 515nm附 近 有 最 大吸 收 的 反 应 。 （ 特 征 反 应 ） C C O O H O H H 水 和 醛 n2 官 能 团n C17-醇 酮 基 : 肾 上 腺 皮 质 激 素类 药 物 特 征 反 应 。 机 理 ： C17-醇 酮 基 有 强 还 原 性 ， 与氧 化 剂 作 用 ， 被 氧 化 成 水 合 醛 。 C C H 2 O H O 氧 化 剂 水 和 醛斐 林 试 剂肾 上 腺 皮 质 激 素 红 色 OCu2 水 和 醛氨 制肾 上 腺 皮 质 激 素 AgTSAgNO3 水 和 醛甲 臢肾 上 腺 皮 质 激 素 有 色 BTor TTCTTC： 氯 化 三 苯 四 氮 唑 (红 四 氮 唑 RT）BT： 蓝 四 氮 唑生 成 Formazan， 用 于 皮 质 激 素 类 药 物鉴 别 和 含 量 测 定 。 +水 合 醛 n 羰 基3位 ,20位 羰 基 可 与 羰 基 试 剂 反 应羰 基 试 剂 :羟 胺 、 2,4-二 硝 基 苯肼 、 异 烟 肼 、 氨 基 脲 、 苯 肼 等 O OH CH3 N CONHN H2 OH CH3 CONHN N + _H 2O O OH CH3 N CONHN H2 OH CH3 CONHN N + _H 2O 3 2 OH CH3 _ 2 甲 酮 基 -孕 激 素 特 征 反 应第 17位 的 甲 酮 基 和 亚 硝 基 铁 氰 化钠 作 用 ,形 成 蓝 紫 色 的 络 合 物 。 C O O CH3 蓝 紫 色 亚 硝 基 铁 氰 化 钠 NO)CN(FeNa 52 H2O2+ -4Fe5CNNOCHC O O n 乙 炔 基 OHC CH HO OHC CAg HO 白3AgNO炔 雌 醇 OHC CH HO 酚 羟 基 ： C CH2OH O O OHHO CH 3 F有 机 氟 F有 机 破 坏有 机 氯 Cl茜 素 氟 蓝 硝 酸 亚 铈硝 酸 硝 酸 银AgCl 呈 色 (蓝 紫 色 ) 氧 瓶 燃 烧 有 机 卤 素丙 酸 氯 倍 他 索 KOHOCOCHR 醇 制 OCOCHCHCHSOH OHHC 戊 酸戊 酸 雌 二 醇 醇 制 NaOH H 己 酸己 酸 羟 孕 酮 醇 制 OH H 黄体酮双酮肟盐酸羟胺黄体酮240235.pm 苯甲酸酯苯甲酰氯炔雌醇 .p.m二 制 备 衍 生 物 测 定 m.p. .p.m 睾 丸 素丙 酸 睾 酮 醇 制 KOH 盐酸氨基脲苯丙酸诺龙 分 解约 180.pm缩 氨 基 脲 衍 生 物 n 代 表 药 物 有 ： C CH2OH O O O OH 可 的 松 C CH2OH O O OHHO 氢 化 可 的 松 C O O CH3 17 18 19 20 21 黄 体 酮 C CH2OH O O OHHO CH3 F O H HO 17 18 OH HO C CH 雌 二 醇炔 雌 醇 O OH CH3 O OCOC2H5 甲 睾 酮丙 酸 睾 酮 三 、 薄 层 色 谱 法 CH 3300 3000cm-1HC 3000 2700cm-1 OC 1900 1650cm-1CCv 1650 1450cm-1 四 、 红 外 光 谱 法 IR 法 中 国 药 典 上 收 载 的 甾 体 激 素 类药 物 均 有 红 外 光 谱 图 。 3750 3300cm-1OH C O O O OHCH2OCOCH3 OH 醋 酸 酯 ,C20 酮 , C11 酮 基 , 43酮 基 结 构 特 征 ： 酚 羟 基 、 C17 OH C17 乙 炔 基炔 雌 醇 OHC CHHO 一 、 有 关 物 质 TLC（ 多 采 用 自 身 稀 释 对 照 法 ， 已 经 介 绍 ） HPLC（ 可 与 含 量 测 定 同 时 进 行 ）（ 合 成 起 始 物 、 中 间 体 、 副 产 物 、 降解 产 物 ）第 三 节 杂 质 检 查 nmA环 己 烷苯 并 苯 硒 二 唑二 氨 基 萘 ,Se , .pH SeSe 盐 酸 羟 胺氧 瓶 燃 烧 三 、 有 机 溶 剂 残 留 量 (甲 醇 和 丙 酮 ) 气 相 色 谱 法 。四 、 游 离 磷 酸 原 理 ：与对照品比较钼蓝磷钼酸钼酸盐磷酸盐 730nmmaxHO2nH)410P(MoO3HH43 POH 第 四 节 含 量 测 定一 、 紫 外 分 光 光 度 法1 原 理 “ C=C-C=C”或 “ C=C-C=O”共 轭体 系 ， 有 紫 外 吸 收 。4-3-酮 结 构 ， max在 240nmA环 为 苯 环 ， max在 280nm 2 讨 论 前 提 是 原 料 药 中 “ 其 它 甾 体 ” 必 须合 格 ， 否 则 ， 不 适 用 。 需 进 行 分 离 后再 测 定 。 如 炔 孕 酮 测 定 制 剂 时 ， 赋 形 剂 在 240nm附 近 有吸 收 需 经 前 处 理 后 测 定 。 如 醋 酸 地 塞米 松 片 ,氢 化 可 的 松 片 和 注 射 液 ,醋 酸可 的 松 片 和 注 射 液 ,醋 酸 泼 尼 松 片 ,甲睾 酮 片 ,醋 酸 甲 地 孕 酮 片 ,炔 雌 醇 片 ,炔 诺 酮 片 。 习 题 ： 醋 酸 氢 化 可 的 松 滴 眼 液 的 含 量 测 定方 法 如 下 ： 取 本 品 ， 摇 匀 ， 精 密 量 取 2ml，置 100ml量 瓶 中 ， 加 无 水 乙 醇 稀 释 至 刻 度 ，摇 匀 ； 精 密 量 取 10ml， 置 另 一 100ml量 瓶中 ， 加 无 水 乙 醇 稀 释 至 刻 度 ， 摇 匀 ， 在241nm波 长 处 测 得 吸 收 度 A=0.408， 求醋 酸 氢 化 可 的 松 的 标 示 百 分 含 量 。 已 知 ：醋 酸 氢 化 可 的 松 的 吸 收 系 数 E1%1cm =395；本 品 规 格 为 3ml 15mg . %11cm (103.3%) n 二 .四 氮 唑 比 色 法n 1 四 氮 唑 盐 的 种 类 ：（ 1） 红 四 氮 唑 ： 2,3,5三 苯 基 氯 化 四 氮 唑 2 , 3 , 5 triphenyltetrazoliumchloride） 缩 写 TTC 或 RT（ Red tetrazolium）还 原 产 物 为 不 溶 于 水 的 深 红 色 三 苯 甲 nmmax 490480 朁 月 朁月 （ 2） 蓝 四 氮 唑 ：3,3二 甲 氧 苯 基 双 4， 4（ 3,5二 苯 基 ） 氯 化 四 氮 唑3,3-dianisole-bis4,4-(3,5-diphenyl) triphenyltetrazoliumchloride 缩 写 BT ( Blue tetrazolium ) ， 还 原产 物 为 暗 兰 色 的 双 甲 ， nmmax 525 朁 月 朁月 n 2 原 理 17位 -醇 酮 基 具 有 还 原 性 ，在 碱 性 条 件 下 能 将 四 氮 唑 盐 定 量地 为 有 色 的 甲 ， 在 一 定 波 长 下具 有 最 大 吸 收 ， 可 用 比 色 法 进 行含 量 测 定 朁 月 朁月有色甲瓒醇酮基四氮唑盐 17C 朁 月 朁月 3、 测 定 法nA TTC法 : BP; Ch.PnB BT法 : USP Anmml Anmml mlmlml mlmlml 测 定供 试 品 溶 液 测 定对 照 品 溶 液 氢 氧 化 四 甲 基 铵氯 化 四 氮 唑无 水 乙 醇 氢 氧 化 四 甲 基 铵氯 化 四 氮 唑无 水 乙 醇 4851 4851 129 129 Anmml Anmml mlmlml mlmlml 测 定供 试 品 溶 液 测 定对 照 品 溶 液 氢 氧 化 四 甲 基 铵氯 化 四 氮 唑无 水 乙 醇 氢 氧 化 四 甲 基 铵氯 化 四 氮 唑无 水 乙 醇 4851 4851 129 129 暗 处 放 置 40-45min 4、 讨 论结 构溶 剂 和 水 分碱 种 类 和 加 入 顺 序空 气 中 氧 和 光 线反 应 温 度 和 时 间 反 应 速 度呈 色 强 度和 稳 定 性 4、 讨 论（ 1） 官 能 团 位 置 的 影 响 a C11： 11位 酮 基 反 应 速 度 快 于 11位 羟 基 可 的 松 氢 化 可 的 松 b C21： -羟 基 （ C21-OH） 21 -OH酯 化 后 ， 较 母 体 羟 基 反 应速 度 慢 即 ： 游 离 体 酯 类 如 ： 可 的 松 醋 酸 可 的 松 简 单 酯 复 杂 酯 ， 醋 酸 酯 磷 酸 酯 琥 珀 酸 酯 三 甲 基 醋 酸 酯 n （ 2） 溶 剂 和 水 分 的 影 响 ：n a 常 用 无 水 乙 醇 含 水 量 5%， 对 结 果 无 影 响 含 水 量 为 10%， 吸 收 度 约 降 低 10% 含 水 量 为 30%， 反 应 完 全 受 到 抑 制n b 用 无 醛 醇 醇 中 不 能 含 有 醛 类 醛 有 还 原 性 ， 使吸 收 度 （ 3） 试 剂 质 量 及 加 入 顺 序 a.灵 敏 度 ： BT TTC； BT： 淡 黄 色 ， 空 白 值 高 ， 稳 定 性 差 ；TTC： 无 色 ， 空 白 值 较 低 ， 稳 定 性 好 . USP规 定 ： BT： 极 淡 黄 色 ， 空 白 A值 与 乙 醇 比 较 0.030.06 b.加 入 顺 序 ： 先 加 TTC或 BT，后 加 (CH3)4N+OH-原 因 ： 醇 酮 基 与 (CH3)4N+OH-长时 间 接 触 ， 有 部 分 分 解 。Ch.P:氢 化 可 的 松 软 膏 ,醋 酸 地 塞米 松 注 射 液 ,醋 酸 可 的 松 眼 膏 ,醋酸 泼 尼 松 眼 膏 ,醋 酸 泼 尼 松 龙 注射 液 n （ 4） 氧 及 光 线 的 影 响 对 光 敏 感 ， 在 暗 处 显 色 。 TTC法 形 成 的 甲 对 空 气 中 氧 敏感 ， 使 颜 色 强 度 ， 稳 定 性 。 BP规 定 ： 加 入 试 剂 后 ， 要 往 容 器 中 充 N2，以 置 换 反 应 容 器 中 的 空 气 。 朁 月 朁月 n （ 5） 液 性 ： 必 要 条 件 ： 强 碱 性 以 (CH3)4N+OH-结 果 较 满 意 （ 6） 温 度 与 时 间 一 般 室 温 或 30 Ch.P: 25 ， 暗 处 反 应 40-45min O OH CH3 N CONHN H2 OH CH3 CONHN N + _H 2O 三 .异 烟 肼 法1 原 理 : C3酮 基 及 某 些 其 他 位 置上 的 酮 基 能 与 羰 基 试 剂 异 烟 肼 在 酸性 条 件 下 形 成 黄 色 异 烟 腙 ， 在 一 定波 长 下 具 有 最 大 吸 收 ， 可 用 于 定 量 。 max420nm 2、 反 应 条 件（ 1） 溶 剂 ： 无 水 乙 醇 ， 无 水 甲 醇（ 2） 酸 的 种 类 、 浓 度 及 异 烟 肼 的 浓 度常 用 HClHCl： 异 烟 肼 =2M:1M时 ， 获 最 大 吸 收 度 。 HCl浓 度 ： 0.0074mol/L （ 1000ml醇 中 含 0.625mol浓 HCl）异 烟 肼 浓 度 ： 0.0365mol/L (0.5mg/ml) （ 3） 水 分 、 O2与 光 线 的 影 响 甾 体 激 素 与 异 烟 肼 的 缩 合 反 应 为 可逆 反 应 ， 所 以 含 水 量 升 高 可 促 使 反应 逆 转 而 水 解 ， 使 吸 收 度 降 低(H2O A ）具 塞 玻 璃 容 器 中 ,光 线 和 氧 影 响 不 大 3、 反 应 的 专 属 性 在 该 反 应 条 件 下 ,对 43酮 具 有 一定 的 专 属 性 C20酮 基 反 应 慢 ， C17酮 基 反 应 慢 ； C11酮 基 不 反 应 43酮 ： 室 温 下 ， 30 反 应 完 全 。如 ： 醋 酸 地 塞 米 松 软 膏 四 . kober反 应 及 铁 一 酚 试 剂 比 色 法 nm51542 nm46542 max maxSOHor -SOH 荧 光 性 红 色稀 释 稀水 黄 色乙 醇雌 激 素 类 药 物 1、 Kober反 应 ： 指 雌 激 素 与 硫 酸 乙 醇 共 热 呈 色 ， 用水 或 稀 硫 酸 稀 释 后 ， 重 新 加 热 发 生 颜 色改 变 ， 并 在 515nm附 近 有 最 大 吸 收 的 反应 。 （ 特 征 反 应 ） n改 进 方 法 ：n 2 铁 酚 试 剂 法 铁 酚 试 剂 的 组 成 硫 酸 亚 铁 铵 浓 硫 酸 过 氧 化 氢 苯 酚 浓 硫 酸 和 过 氧 化 氢 的 作 用n 浓 硫 酸 和 过 氧 化 氢 将 2价 铁 氧 化 成 3价 铁 。 硫 酸 铁 铵硫 酸 亚 铁 铵 ， 24422422424 )SO(FeNHOHSOH)SO()NH(Fe 三 价 铁 的 作 用 能 够 加 快 黄 色 生 成 的 速 度 能 促 进 黄 色 向 红 色 的 转 变 能 增 加 红 色 的 稳 定 性 苯 酚 的 作 用n 可 消 除 反 应 产 生 的 荧 光n 能 够 促 进 红 色 的 生 成 OHC CH HO OHC CAg HO 白3AgNO 五 硝 酸 银 一 NaOH滴 定 法+HNO3+NaOH滴 定 ， 同 时 做 空 白 六 非 水 溶 液 滴 定 法HClO4滴 定 ， 同 时 做 空 白米 非 司 酮 , C10位 为 七 HPLC法 广 泛 用 于 此 类 药 物 原 料 和 制 剂 的含 量 测 定 一 般 为 内 标 法 掌 握 甾 体 激 素 类 药 物 的 基 本 结 构 与分 类 ； 各 类 药 物 的 结 构 特 征 及 其 与分 析 方 法 的 关 系 。熟 悉 甾 体 激 素 类 药 物 的 紫 外 分 光 光度 法 、 四 氮 唑 比 色 法 和 异 烟 肼 比 色法 ； 柯 柏 反 应 比 色 法 。了 解 甾 体 激 素 类 药 物 的 特 殊 杂 质及 其 检 查 方 法 。基 本 要 求 D ABCD ABCDE B C A C B B D 17.用 化 学 方 法 将 下 列 药 物 鉴 别 开 来 ，并 写 出 药 物 名 称 。 1. HO C O CH2OH OH O 2. C O O CH3 3. HO OH