革兰氏阴性需氧杆菌

第十章 革兰氏阴性需养杆菌 内容提要 * 第一节 布氏杆菌属 第二节 假单胞菌属 第三节 波氏菌属 第四节 军团菌属 第五节 弗朗西斯菌属 第六节 摩拉菌属 第七节 不动杆菌属 第一节 布氏杆菌属 (Brucella) 布氏杆菌（布鲁氏菌） 布氏杆菌病（人兽共患病） 一、形态及染色特性 * 呈 球杆形或短杆形，单在，革兰氏阴性菌 * 柯兹罗夫斯基或改良 Z-N、 改良 K氏染色 红色 布鲁氏菌染色照片 * 染料（沙黄、孔雀绿） 迟染的特性 二、培养及生化特性 血液肝汤琼脂： 形成灰白色菌落，不溶血 * 细菌专性需氧，初代分离（ 5-10 CO2） * 血清、血液、肝汤、葡萄糖 促进生长 * 初分离生长缓慢（ 7-14天），传代（ 2-3天） * 菌落有光滑 (S)型、粗糙（ R） 型和黏液 (M)型 肝汤肉汤： 轻度混浊、粘稠沉淀物 血清肝汤琼脂： 无色透明、湿润、闪光的 小菌落 马尔他布氏杆菌 (羊型）：生物型 1-3 流产布氏杆菌 （牛型）：生物型 1-9 猪布氏杆菌： 生物型 1-5 绵羊布氏杆菌： 沙林鼠布氏杆菌： 犬布氏杆菌： 三、种和生物型 该属包括 6个种 20个生物型 四、抗原性 * 细胞壁低蛋白含量的脂多糖复合物 A抗原与 M抗原： * 抗原决定簇位于细胞壁 的脂多糖蛋白复合物上 * 光滑型布氏杆菌具有 A和 M两种表面抗原 R抗原： * 非光滑型布氏杆菌的共同抗原决定簇。 包括 A、 M 及 R抗原（ 表面抗原） 属外抗原 属内抗原 六、抵抗力 本菌对外界环境的 抵抗力较强 * 在污染的土壤和水中可存活 1-4个月 * 咸肉中 40日，羊毛中 1.5-4月 * 皮毛 2-4个月，乳、肉食品中约 2个月，粪便中 120d 对 湿热的抵抗力不强 * 60 -30min或 70 -5min即杀死、 煮沸立即死亡 * 对消毒剂的抵抗力也不强 七、致病性 致病因子 毒性较强 的 内毒素 （细胞壁的脂多糖 -LPS) 引起人和多种动物（ 60多种）的布病 * 一种重要的 人兽共患病 * 实验动物 豚鼠（最易感）、小鼠和家兔等感染 人 羊布氏杆菌感染最多，其次猪布氏杆菌， 流产布氏 杆菌最少。 主要 绵羊、山羊；另外牛、猪、鹿、骆驼、人等 马尔他布氏杆菌（羊布氏杆菌） 主要 牛、马、犬；另外也感染水牛、羊、鹿人等 流产布氏杆菌（牛布氏杆菌） 主要 猪； 另外也感染牛、羊、鹿、人等 猪布氏杆菌 易感动物： 牛、羊、猪，其次马、鹿、骆驼。人 亦易感，家禽较少感染 * 细菌在 胞内寄生 （肝、脾、骨髓、吞噬细胞等） 故治疗较难和彻底 感染途径： 主要消化道，其次皮肤、粘膜、伤口、 生殖道。呼吸道较少感染。 动物感染 * 一般无明显临床症状，多属 隐性传染 * 病变多局限于 生殖器官 流产、睾丸炎、乳腺炎、子宫炎、关节炎等 布氏杆菌病木乃伊胎儿（四月龄） 布氏杆菌病 流产胎儿（ 7月龄），皮下水肿 母猪子宫内死胎 布氏杆菌病 流产胎盘，水肿及子叶出血、坏死 八、微生物学诊断 * 因表现为慢性或隐性感染 血清学检查 变态反应检查 细菌学检查 流产 1.细菌学检查 病料 流产胎儿胃内容物、流产胎盘和羊水、道分泌物 染色镜检查 革兰氏、柯兹洛夫斯基染色 分离培养鉴定： 2.血清学检查 * 血清中布 氏杆菌抗体检查 * 病料中布氏杆菌检查 3.变态反应检查 反 应 强 度 时间（月份） 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 凝集反应 补体反应 变态反应 变态反应出现晚，不宜作早期诊断（ 山羊和绵羊） 布氏杆菌水解素 皮内 发生红肿 阳性反应 第二节 假单胞菌属 (Pseudomonas) 鼻疽假单胞菌 鼻疽假单胞菌惯称 鼻疽杆菌 ，现称 鼻疽伯氏菌 属动物等单蹄兽 鼻疽 的病原、人兽共患病病原 无芽孢、无荚膜、不运动、单在、成对或成群的中 等大小杆菌，革兰氏阴性。 一、形态及染色特性 第二节 假单胞菌属 (Pseudomonas) 鼻疽假单胞菌 鼻疽假单胞菌惯称 鼻疽杆菌 ， 现称 鼻疽伯氏菌 (Burkholderia mallei)为 属动物 （ 马 、 骡 、 驴 ） 等单蹄兽 鼻疽 的病原 ， 也能感染人 、 其他家畜和多种 野生动物 ， 为重要人兽共患病病原 。 此病可呈急性或慢性经过 ， 病变特征为 皮肤 、 鼻腔黏膜 、 肺脏及其他实质器官形成小型的鼻疽结节和溃疡 。 本菌为无芽孢、无荚膜、不运动、单在、成对或成群的中等大小杆菌， 革兰氏阴性。 一、形态及染色特性 二、培养及生化特性 本菌为专性需氧菌，在普通培养基上生长缓慢，加入适量血红蛋白、甘油、 血液、血清、葡萄糖等可促进生长。 甘油肉汤： 呈均匀轻度浑浊，并逐渐形成灰白色粘稠沉淀物，培养 10-15d液面 形成菌膜。 甘油琼脂： 培养 24h， 形成灰白色乃至黄色有光泽的正圆形菌落，边缘整齐， 表面湿润粘稠，加入生长促进物质（血红蛋白等），则菌落直径 显著增大；血液琼脂中不溶血。 正常菌落为 S型；变异型菌落为 R型、皱襞型 (C)、 矮小型 (D) 粘液型 (M)、 伪膜型 (P)等。 三、致病性 本菌不产生外毒素而仅有耐热（ 120 ， 1.5h） 的 内毒素 。内毒素对 健康动物毒性不强，但注射于感染鼻疽的动物，则可引起剧烈的病灶激发 反应。 自然条件下： 主要感染马属动物，驴和骡最易感，马较差；骆驼、犬、猫、狮、虎、 狼、貂等均可感染。绵羊、山羊、猪、牛及鸽不感染。 实验动物：猫、仓鼠最易感，豚鼠其次。 人也感染，经创伤或吸入含菌材料（呼吸道）而感染。 四、微生物学诊断 鼻疽的诊断和检疫主要采用 变态反应检查和血清学检查 ，而细菌学检 查 只有在特殊病例才被应用。 1. 变态反应检查： 患病动物较长时间（ 8-10年或终生）保持变态反应检查 阳性反应。检出急性、慢性、潜伏性等。点眼反应最常用。 方法 ：鼻疽菌素 3-4滴滴入被检动物一侧眼结膜囊内，分别于点眼后， 3、 6、 9、及 24h观察反应。如眼结膜红肿并排除脓性分泌物，即为 阳性反应。 2. 细菌学检查： 被检材料 ：未破溃脓肿采取的穿刺物、鼻汁、皮肤溃疡分泌物、病变组织 和 器官等。 分离培养： 病料接种于 1%血液甘油琼脂 上分离培养； 甘油肉汤增菌培养 。 获纯培养物进一步鉴定。应注意该菌与类鼻疽杆菌相区别。 动物试验 ：接种于雄性豚鼠腹腔后，可引起典型的 睾丸炎 和 睾丸周围炎 ， 睾丸肿胀化脓而破溃，称为 Strauss反应具有一定的诊断价值。 3. 血清学检查： 以 补体结合反应为主 ，但本方法对活动性鼻疽检出率较高，慢性病例 检出率低（ 10%-25%）。故本方法只能作为附加诊断方法。 五、免疫防治 本病不会引起大流行，动物呈隐性感染，目前无可用菌苗进行免疫。 发现开放性鼻疽，采用扑杀办法予以淘汰。 第十章 复习思考题 1.布氏杆菌属有哪些种和型，形态、染色及培养特点如何？ 2.试述布氏杆菌病的微生物学检疫诊断方法和免疫防治措施。 3.试述鼻疽杆菌的主要微生物学特性和鼻疽的微生物学诊断方法。