大鼠睾丸酮T酶联免疫分析ELISA

大鼠睾丸酮(T)酶联免疫分析(ELISA )试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定大鼠血清，血浆及相关液体样本中睾丸酮(T含量。实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠睾丸酮(T)水平。用纯化的大鼠睾丸酮(T)抗 体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入睾丸酮(T),再与HRP标记的 睾丸酮(T)抗体结合，形成抗体-抗原哂每标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。 TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样 品中的睾丸酮(T)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(0D值)，通过标准曲线 计算样品中大鼠睾丸酮(T)浓度。试剂盒组成：试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片(48)2 片(96)密封袋1个1个酶标包被板1x481x962-8C保存标准品：360ng/L0.5mlx 1 瓶0.5mlx 1 瓶2-8C保存标准品稀释液1.5mlx 1 瓶1.5mlx 1 瓶2-8C保存酶标试剂3 mlx 1 瓶6 mlx 1 瓶2-8C保存样品稀释液3 mlx 1 瓶6 mlx 1 瓶2-8C保存显色剂A液3 mlx 1 瓶6 mlx 1 瓶2-8C保存显色剂B液3 mlx 1 瓶6 mlx 1 瓶2-8C保存终止液3ml x1 瓶6ml x1 瓶2-8C保存浓缩洗涤液(20mlx20 倍)x1 瓶(20mlx30 倍)x1 瓶2-8C保存样本处理及要求：1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上 清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。2血浆：应根据标本的要求选择EDTA、者柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后， 离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再 次离心。3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清，保存过程中 如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS(PH7.2-7.4稀释细胞悬液，细胞浓 度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟 左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备 用。标本融化后仍然保持2-8C的温度。加入一定量的PBS （PH7.4）,用手工或匀浆器将 标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测， 其余冷冻备用。操作步骤1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标 准品100也然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50也混匀；然后从第一孔、第二 孔中各取100山分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50也 混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50山弃掉，再各取50山分别加到第五、第六孔 中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50u|混匀；混匀后从第五、第六孔中各 取50山分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50也 混 匀后从第七、第八孔中分别取50山加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准 品稀释液50也 混匀后从第九第十孔中各取50山弃掉。（稀释后各孔加样量都为50也 浓度分别为 240ng/L， 160ng/L，80ng/L，40ng/L L 20ng/L）o2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样 品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40也然后再加待测样品10山（样 品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混 匀。3. 温育：用封板膜封板后置37C温育30分钟。4. 配液：将30 （48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 （48T的20倍）倍稀释后备用。5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此 重复5次，拍干。6. 加酶：每孔加入酶标试剂50也 空白孔除外。7. 温育：操作同3。8. 洗涤：操作同5。9. 显色：每孔先加入显色剂A50也再加入显色剂B50也轻轻震荡混匀，37C避光显色 15分钟.10. 终止：每孔加终止液50也 终止反应（此时蓝色立转黄色）。11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（0D值）。测定应在加终止 液后15分钟以内进行。注意事项：1试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未 用完，板条应装入密封袋中保存。2浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。 3各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好 控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4. 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本0D值 大于标准品孔第一孔的0D值），请先用样品稀释液稀释一定倍数a倍）后再测定，计 算时请最后乘以总稀释倍数（xnx5）o5. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6. 底物请避光保存。7. 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。 9本试剂不同批号组分不得混用。10.如与英文说明书有异，以英文说明书为准。 计算：以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标， 在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的0D 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释 倍数；或用标准物的浓度与0D值计算出标 准曲线的直线回归方程式，将样品的0D值 代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释 倍数，即为样品的实际浓度。试剂盒性能：1样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.95以上。2.批内与批见应分别小于9%和11%检测范围：10ng/L - 300ng/L保存条件及有效期：1试剂盒保存：;2-8C。2有效期：6个月RDRat Testoterone (T )FOR RESEARCH USE ONLYDrug NamesGeneric Nam：e Rat Testoterone (T) ELISA Kit.PurposeThis kit allows for the determination of T concentrations in Rat serum, blood pla other biological fluids.Principle of the assayThe kit assay Rat T level in，tuhse sPaumrpilfeied Rat T antibody to coat microtiter plate wells, make solid-phase antibody, then add T to wells, Combined T antibody which With labeled ,become antibody - antigen - enzyme-antibody complex, after washing Completel TMB substrate solution,TMB substrate becomes blue color At HRP enzyme-catalyzed, reac is terminatbeydtheadditioonfa sulphuriacidsolutioannd thecolor change is measured spectrophotometrically at a wavelength of 450 nm. The concentration of T in the sampl then determined by comparing the O.D. of the samples to the standard curve.Materials provided with the kitMaterials provided the kitWit48de termina tion;s 96 determinationsStorageUser manual11Closure plate membr5).5. Closure plate membrane only limits the disposable use, to avoid cross-contaminatio6. The substrate evade the light p.reservation7. Pleaseacco rdintgouse inst ructisotnrictTlhye, testresuldtete rminatimounst takethe microtiter plate reader as a standard.8. All samples, washing buffer and each kind of reject should according to infective process.9. Do not mix reagents with those from other lots.CalculateTakethestandardensitas thehorizontaheOD valueforthe verticadrawthe standar(Curveon graph paper, Find out the corresponding density sample OD valueby t he Sample curvejn ulti plibyd the dilutiomiltiplor calculattie straightineregression equation of the standard curve with the theOD value, withhesampleOD valueintheequation, calculate the sample density, multiplied by the result is the sample actual density.This chartis for reference onlyAssay range10ng/L - 300ng/LStorage and validity1. Storage 2-8C.2validi：tysix months.