中药制剂的检查

第三章 中药制剂的检查 【 目的要求 】 掌握重金属、砷盐的检查原理和方法 熟悉 中国药典 现行版制剂通则的检查项目及特殊 杂质的检查原理 了解农药残留量的检查原理和方法 了解黄曲霉毒素的检查方法 药物分析学科 中药制剂的检查项目： 制剂通则检查 一般杂质检查 特殊杂质检查 微生物限度检查 药物分析学科 1 中药制剂杂质检查 一、中药制剂的杂质 指能危害人体健康或影响药物质量的物质。 （一）杂质的分类 一般杂质 （如酸、碱、水分、氯化物、硫酸盐、铁盐、重金属、砷盐） 特殊杂质： 根据其来源、生产工艺及药品的性质有可能引入的杂质。 （二）杂质来源 中药材原料中带入 生产制备过程中引入 贮存过程中引起的中药制剂自身理化性质的改变 药物分析学科 二、杂质的限量检查 1、杂质限量 ： 药物中所含杂质的最大允许量，通常用 %或 ppm表示。 2、杂质限量检查及计算方法 1）限量检查：规定一定限度，要求所检测的样品中某组分的含量不 超过此限度。 2）检查方法 对照品比较法： 取一定量与被测杂质相同的纯物质或其它对照品 配制成标准溶液，与一定量供试药物的溶液，在相同处理条件下， 比较反应结果，从而确定杂质限量是否超过规定。 灵敏度法： 在供试品溶液中加入试剂，在一定反应条件下，观察 有无正反应出现。 1 中药制剂杂质检查 药物分析学科 1 中药制剂杂质检查 3）计算方法 %100 %100 S CV L S CV L ）样品量（ ）标准溶液的浓度（）标准溶液的体积（ ）杂质限量（ 药物分析学科 p p mgS mlgCmlVL 5%0 0 0 5.0%1 0 04.0 100.12%1 0 0)( )/()( 6 1 中药制剂杂质检查 例 1：注射用双黄连（冻干）中砷盐限量检查 取本品 0.4g，加 2%硝酸镁乙醇溶液 3ml，点燃，燃尽后，先用 小火炽灼使炭化，再在 500 600 炽灼使完全灰化，放冷，加 盐酸 5ml与水 21ml使溶解，依法检查（中国药典 2000版附录 F） 如果标准砷溶液（ 1gAs/ml）取用量为 2ml，计算杂质限量。 药物分析学科 1 中药制剂杂质检查 规定：含重金属 百万分之五 (5ppm) 计算：应取标准铅溶液 (10gPb/ml)多少 ml？ 依法检查样品 ）（醋酸盐水 25 m l.0 g4 p H 3 . 5b u f f, 610 1 0 0 04 01.0V5 )ml(0.21001.0 51 0 0 04V 6 例 2. 葡萄糖中重金属的检查 方法： 药物分析学科 1 中药制剂杂质检查 例 4. 肉桂油中重金属检查 取肉桂油 10ml，加水 10ml与盐酸 1滴，振摇后，通硫化氢气使 饱和，水层与油层均不得变色。 例 3. 溴化钠中砷盐检查 S = = x106 =0.5g C.V L 2.0X1/106 4 方法：中国药典规定，取标准砷溶液 2.0mL(每 1mL相当于 1g砷 ) 制备砷斑 规定：含砷量不得超过 4 ppm 计算：应取供试品量 (g)？ 药物分析学科 一、重金属检查法 1、重金属的概念 重金属 是指在实验条件下能与硫代乙酰胺或硫化钠作用 呈色的金属 . 如： Ag、 Pb、 Hg、 Cu、 Cd、 Bi、 Sb、 Sn、 As、 Ni、 Co、 Zn等 . 重金属存在影响药物的稳定性及安全性 . 铅易在体内积蓄中毒 ,以 Pb为代表 . 2 一般杂质检查 药物分析学科 一、重金属检查法 （一）第一法：硫代乙酰胺法 1、原理： 2 一般杂质检查 SHC O N HCHpHOHC S N HCH 223223 5.3 H2P b SHSHPb 22 2、适用范围：适用于供试品不经有机破坏，在酸性溶液中显色的 重金属限量检查。 药物分析学科 2 一般杂质检查 2 操作方法 比色放置硫代乙酰胺水 22 m l TS2 5 m l 2 m l )b uf f ( p H 3 . 5水、醋酸盐样品样品管 同上标准液 （一定量） 对照管 结果观察 样品 对照 药物分析学科 2 一般杂质检查 3讨论 标准铅溶液浓度： 27ml溶液中 Pb2+标准溶液 10g/ml 12ml 硫代乙酰胺试液： 95版药典改用硫代乙酰胺为显色剂 溶液的 pH： pH在 3.03.5时 , 呈色较完全 . 供试品溶液有颜色时的处理 a.外消色法： . 稀焦糖溶液调节， . 指示剂调节 b.内消色 作样品管 硫代乙酰胺 第二份 作对照管 溶液标准 滤液 硫代乙酰胺 第一份 ，分成二等份 两倍量的供试品 除去 Pb p H 3 . 5 P b S 过滤 药物分析学科 2 一般杂质检查 3讨论 干扰物的排除方法 a.供试品中微量高价 Fe3+存在 干扰： 弱酸性溶液中 Fe3+氧化 H2S析出 S,产生混浊影响检查 . 排除： 加入 抗坏血酸 或 盐酸羟胺 使 Fe3+还原为 Fe2+. 如： 葡萄糖酸亚铁中重金属的检查 . b.供试品为铁盐（大量的 Fe3+） Fe3+在 HCl溶液中能形成配位化合物用乙醚提取 Fe3+HCl HFeCl62-（黄色） 或水层加氨试液调至碱性 ,残存的 Fe3+可用 KCN掩蔽 , 按第三法检查 . 如： 枸橼酸铁铵的重金属检查 药物分析学科 一、重金属检查法 （二）第二法：灼烧后检查 1、原理： 供试品先炽灼破坏后 ,使有机结合的重金属游离 , 再按 第一法 检查 . 2 一般杂质检查 2、适用范围： 适用于供试品需灼烧破坏，取炽灼残渣项下遗留的残渣，经处 理后在酸性溶液中显色的重金属限量检查 适用于绝大多 数的中药 药物分析学科 一、重金属检查法 （二）第二法：灼烧后检查 3、操作： 2 一般杂质检查 缓缓炽灼 放冷 H2SO4 0.5-1.0ml 供试品 炭化 加热 HNO3 500-600 H 2SO4 除尽 放冷 完全灰化 蒸干 HCl 2ml 水 15ml 中性 按第一法检查 蒸干 氨试液 注意： 做空白试验 药物分析学科 一、重金属检查法 （二）第二法：灼烧后检查 4、讨论： a. HNO3处理后 ,必须蒸干除尽 NO. b. 炽灼温度严格控制： 500-600 c. 含 钠盐 或 氟 的有机药物在炽灼时改用 铂坩埚 或 硬质玻璃 (玛瑙 ) 蒸发皿 . 如：盐酸氟奋乃静中重金属检查 2 一般杂质检查 药物分析学科 一、重金属检查法 （三）第三法： 硫化钠法 1、原理 在碱性介质中 ,以 Na2S为显色剂 , 使 Pb2+与 S2-作用生成 PbS 的混悬液 , 与一定量标准铅溶液经同法处理所呈颜色比 较 , 不得更深 . 2、适用范围 适用于难溶于稀酸（或在稀酸中即生成沉淀）但 能溶解于碱性溶液的药物中重金属的检查 . 3、方法 取供试品适量 ,加 NaOH试液 5ml和水 20ml使溶解后 , 置纳氏比色管中 ,加 Na2S试液 5滴 , 摇匀 , 与一定量标准铅溶液 经同法处理所呈颜色比较 . 2 一般杂质检查 药物分析学科 一、重金属检查法 （四）第四法： 微孔滤膜法 1、原理 同第一法 2、适用范围 当重金属含量低 (2-5g) 时 , 在比色管中难于目视 观察 ,采用本法 . 3、方法 使重金属生 成的硫化物富集于微 孔滤膜上 (铅斑 )提高 检查的 灵敏度 . 2 一般杂质检查 药物分析学科 二、砷盐检查法 （一）古蔡氏法 Gutzeit（法定方法） 1、原理： 2 一般杂质检查 AsO33-+3Zn+9H+AsH3+3Zn2+3H2O 砷化氢与溴化汞试纸作用： AsH3+2HgBr22HBr+AsH(HgBr)2 (黄色 ) AsH3+3HgBr23HBr+As(HgBr)3 (棕色 ) As5+反应速度慢，需将 As5+转化为 As3+ 初生 态的 氢 药物分析学科 二、砷盐检查法 （一）古蔡氏法 Gutzeit 1、原理： 故加入碘化钾、酸性氯化亚锡还原剂， 将 5价砷还原为 3价砷 AsO43-+2I-+2H+ AsO33-+I2+H2O AsO43-+Sn2+2H+ AsO33-+ Sn4+H2O I2+Sn2+ 2I-+Sn4+ 4I-+Zn2+ ZnI42- Sn2+Zn Sn+Zn2+ 2 一般杂质检查 促进反应向 右进行 形成锌锡齐，有利 于反应平稳的进行 药物分析学科 二、砷盐检查法 （一）古蔡氏法 Gutzeit 2、装置： 3、操作： A瓶： 标准砷溶液 (1g/ml )2ml +盐酸 5ml+水 21ml+KI试液 5ml+酸性 SnCl2试液 5滴， 室温放置 10min A瓶 锌粒 2g，接导气管 C 25 -40 水浴 45min 取出，比较砷斑颜色深浅 2 一般杂质检查 HgBr2 试纸 醋酸铅棉 60mg (装管高度 6- 8cm) 药物分析学科 二、砷盐检查法 （一）古蔡氏法 Gutzeit 4、讨论 1） Zn粒 2）溴化汞试纸的选择 3）适宜的 PH值及反应温度和时间 4） 干扰物的排除 a、供试品是硫化物 ,亚硫酸盐 ,硫代硫酸盐 干扰： 排除方法 ：加入浓硝酸处理 b、 供试品是铁盐 (Fe3+) 干扰： Fe3+能消耗还原剂 (KI、 SnCl2), 并能氧化砷化氢 . 排除方法 ： 先加酸性 SnCl2试液使 Fe3+ Fe2+ 2 一般杂质检查 （色斑，干扰试验） Hg,H g SH g B r SO,SHHOS,SO,S 2 22 2 32 2 3 2 药物分析学科 二、砷盐检查法 （二）二乙基二硫代氨基甲酸银法（ Ag-DDC法） （法定） 第一步 ：同 古蔡氏法 生成砷化氢 第二步 ： 砷化氢还原 Ag-DDC溶液 ,产生 红色 的 胶态银 . 目视比色法 仪器分析 510nm， 可定量 2 一般杂质检查 S S H A g 6 3 + A s C 2 H 5 N C 2 H 5 C S S + C 2 H 5 N C 2 H 5 C A s H 3 C 2 H 5 N C 2 H 5 C S S A g + 6 药物分析学科 二、砷盐检查法 （三）白田道夫法（灵敏度低） 1、原理： SnCl2在 HCl中能将砷盐还原为棕褐色的胶态砷 , 与 一定量的标准砷溶液按同法处理后进行比较 , 判断供试品中砷 盐的限量 . 2 一般杂质检查 2As 3+ + 3SnCl2 + 6HCl 2As + 3SnCl4 + 6H+ 棕 褐色 2、对含 锑 药物中砷盐的检查不能用古蔡氏法 ,需用白田道夫法 . 灰色锑斑（干扰）锑盐 23 H g B rS b H H 药物分析学科 2 一般杂质检查 二、砷盐检查法 （四） 奇列氏法（次磷酸法） 1、原理： 在盐酸酸性溶液中 , 次磷酸还原砷盐为棕色的游离砷 ,与标 准砷溶液同法处理后比较颜色 . NaH2PO2+HClH3PO2+NaCl 3H3PO2+H3AsO33H3PO3+2AS 2. 特点 不受 S2-,SO32-,Sb干扰 灵敏度较古蔡氏法低 药物分析学科 2 一般杂质检查 三、铁盐检查法 第一法 硫氰酸盐法 1. 原理 铁盐在盐酸酸性溶液中与硫氰酸铵生成 红色 可溶 性硫氰酸铁配离子 ,与一定量标准铁溶液用同法处理后所呈 的颜色进行比较 . F e 3 + + 6 S C N - H C l F e ( S C N ) 6 3 - （ 硫 氰 酸 铁 络 离 子 ） 2. 操作 4ml 25ml d.HCl 30%硫氰酸铵 过 硫酸铵 50mg H2O 50ml H2O 样品 标准溶液 影响药物 稳定性 药物分析学科 2 一般杂质检查 四、硫酸盐检查 指示性 杂质 1、原 理 硫酸盐与氯化钡在盐酸酸性溶液中生成硫酸钡的白色浑浊液 , 与一定量标准硫酸钾溶液与氯化钡在相同条件下生成的浑浊 比较 . S O 4 2 - + B a 2 + B a S O 4 （ 白 色 ）H C l 2. 操作法 2ml 40ml d.HCl 25%BaCl2 5ml H2O 50ml H2O 样品 标准溶液 浓度范围： 0.1mg0.5mgSO42-/50ml 药物分析学科 2 一般杂质检查 五、氯化物检查 指示性 杂质 1. 原理 利用氯化物在硝酸酸性条件下与硝酸银反应 , 生成氯化银白 色浑浊液 , 与一定量标准氯化钠溶液在相同条件下产生的氯 化银浑浊程度比较 , 浊度不得更大 . Cl- + Ag+ AgCl H+ 5ml HNO3/50ml， 30-40 ，置暗处反应 ) 适宜的浓度范围： 50-80 g Cl- /50ml 药物分析学科 2 一般杂质检查 六、干燥失重 药品在规定的条件下，经干燥后所减失的重量，包括 水分 及其他 挥发性成分 。 检查方法 常压恒温干燥（烘干法） -受热较稳定的中药制剂 恒重 ：连续 2次干燥后的重量差异不超过 0.3mg 干燥剂干燥 -受热易分解或挥发的供试品 硅胶，五氧化二磷，硫酸等干燥剂 减压干燥 熔点低、受热不稳定及较难赶除水分的供试品 药物分析学科 2 一般杂质检查 七、水分测定法 检查方法 烘干法 -不含或含少量挥发性成分的供试 甲苯法 -含挥发性成分的供试品 减压干燥 -含挥发性成分的贵重药品 气相色谱法 -散剂、颗粒剂、丸剂、片剂等 各类型中药制剂中 微量水分 的测定 费休法 药物分析学科 2 一般杂质检查 八、炽灼残渣 1、定义： 有机物经高温炽灼后残留的非挥发性物及杂质，多 为金属的氧化物或无机盐类。 2、操作： 供试品 1.0 2.0g 置已恒重的坩埚中 精密称定 炽灼至炭化 放冷 硫酸 0.5 1ml使湿润 低温除尽硫酸 蒸气 700 800 至灰化 精密称定 恒重 3、注意： 如需将残渣留作 重金属检查 ，则炽灼温度必须控制 在 500 600 。 药物分析学科 2 一般杂质检查 九、灰分测定 1、总灰分： 中药经粉碎后加热，高温炽灼至灰化，则其细胞 组织及其内含物成为灰烬而残留，由此所得灰分为“生理灰 分”，即总灰分 2酸不溶性灰分 中药经高温炽灼得到的总灰分加盐酸处理， 得到不溶于盐酸的灰分，成为酸不溶性灰分。 注意：当灰分本身差异较大时，增加酸不溶性灰分的测定 药物分析学科 2 一般杂质检查 十、有害元素的测定 05版药典增加“ 铅、镉、砷、汞、铜 ”的限量测定 测定方法：原子吸收分光光度法 电感耦合等离子体质谱法 测定药材：甘草、黄芪、西洋参、丹参、白芍、金银花 限 量：铅 5ppm，镉 0.3ppm，砷 2ppm， 汞 0.2ppm，铜 20ppm 药物分析学科 3 特殊杂质检查 特殊杂质 ：指在该药品的生产和贮存过程中，根据其来源、 生产工艺及药品的性质有可能引入的杂质。 西洋参中人参的检查 大黄中土大黄苷的检查 阿胶中碱性挥发性物质的检查 乌头酯型生物碱的检查 药物分析学科 4 农药残留量的检查 常见农药的种类 （ 1） 有机氯类 ： DDT、六六六等 （ 2） 有机磷类 ：敌敌畏、乐果等 （ 3）植物性农药：烟叶、尼古丁， 除虫菊酯 等 （ 4）无机农药：磷化铝、砷酸钙等 （ 5）苯氧羧酸类除草剂： 2， 4-D； 2， 4， 5-T等 分析方法： GC（法定方法） ， TLC 药物分析学科 5 黄曲霉毒素的检查 （食标） 黄曲霉毒素 （ aflatoxin） 极强的毒性和致癌性 在紫外线照射下，能发出荧光 耐热，在 280 时发生裂解 低浓度时易受紫外线破坏，被氧化或遇碱被破坏 在水中溶解度低，易溶于油及氯仿、丙酮、甲醇等有机溶剂 测定方法 总成分：微柱色谱法、 单体成分：薄层色谱法、高效液相色谱法、荧光分析法、 免疫化学分析法等 药物分析学科 6 二氧化硫残留量测定法 蒸馏滴定法（ CHP） 四氯汞钠 -副玫瑰苯胺比色法 离子色谱法 示波极谱法 其他方法 药物分析学科 习 题 简述中药制剂检查包括的主要内容。 中药制剂杂质来源的主要途径是什么？ 简述砷盐检查法（古蔡法）的原理操作及注意事项。 药典中收载重金属检查共有几种方法，简述每种方法的应 用特点及范围。 干燥失重测定和水分测定有何区别？常用水分测定方法有 哪些 ？ 药物分析学科