实验2淀粉酶活力测定

实验二a一淀粉酶活力测定一、实验目的：掌握a一淀粉酶活力测定的方法，同时熟悉分光光度计的使用方法。二、实验原理：a一淀粉酶水解淀粉的产物为还原糖，用比色法测定还原糖的生成量可计算 酶活力单位，其定义：1min内水解淀粉所产生的还原糖相当于lumol麦芽糖的 酶量，为一个活力单位。三、实验步骤：1.取8支干净的试管，编号：1.空白；2.样品；3.标空；4.标准。在25C恒 温条件下按下表顺序进行操作。步骤1234加底物溶液（ml）1100加双蒸水（ml）1020加酶液（ml）摇匀010060 C准确保温3minDNS 显色剂（ml）2222标准麦芽糖溶液（ml）0002沸水浴3min，冷却双蒸水（ml）20202020摇匀，在分光光度计上测A540nm2.计算a一淀粉酶活力酶活力（U/mg） =（A样一A空）*标准麦芽糖的微摩尔数/（A标一A标空）*3*样品管中酶的毫克数四、仪器和试剂1. 分光光度计、恒温水浴锅、温度计、试管、移液管、天平、容量瓶2. 待测样品液的准备：准确称取1g,用磷酸盐缓冲液定容至100ml3. 配制底物溶液：称取可溶性淀粉1g,用磷酸盐缓冲液定容至100ml4. 磷酸盐缓冲溶液：准确称取 0.2mol/LNa2HPO4 3.72g, NaH2PO4 12.42g, NaCl0.372g，用蒸 馏水充分溶解后，定容至1000ml，即为20mmol/L磷酸盐缓冲溶液。5. 配制显色剂3, 5 一二硝基水杨酸试剂：准确称取3, 5 一二硝基水杨酸1g,溶于20mL 2mol/LNaOH溶液中，加 入50mL蒸馏水，在加入30g酒石酸钾钠，待溶解后用蒸馏水定容至 100mL。盖紧瓶塞，勿使二氧化碳进入。若溶液混浊可过滤后使用。6. 配制标准麦芽糖溶液：0.342g分析麦芽糖溶于蒸馏水，定容至1000ml, 即为1umol/ml的标准溶液。