果胶酶试剂盒说明书

货号：QS2621规格：50管/24样果胶酶（pectinase ）试剂盒说明书可见分光光度法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。测定意义：果胶酶（pectinase）是一类分解果胶质酶类的总称，包括原果胶酶，果胶酯酶，多聚半 乳糖醛酸酶和果胶裂解酶四大类，广泛存在于植物果实和微生物中，主要用于食品、酿酒、环 保、医药、纺织及日化用品行业。测定原理：果胶酶水解果胶生成半乳糖醛酸，具有还原性醛基，与DNS试剂反应生成红棕色物质，在 540nm有特征吸收峰，测定540nm处吸光值变化可计算得果胶酶活性。自备实验用品及仪器：天平、低温离心机、可见分光光度计、1 mL玻璃比色皿、恒温水浴锅。试剂组成和配制：提取液：液体50mLX 1瓶，4C保存。试剂一：液体20mLX 1瓶，4C保存。试剂二：液体25mLX 1瓶，4C避光保存。酶液提取：1. 组织：按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为1： 510的比例（建议称取约0.1g组织，加 入1mL提取液），进行冰浴匀浆。10000g 4C离心 10min，取上清，置冰上待测。2. 细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为5001000： 1的比例（建议500 万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）； 然后10000g，4C离心 10min，取上清置于冰上待测。3. 细胞培养液等：直接检测。测定操作表：对照管测定管试剂一（此）40040050C水浴温育5min样本（心100煮沸样本（此）100混匀，50C水浴反应30min试剂二（此）500500沸水浴5min，冰浴冷却终止反应，8000g，4C,离心 10min，取 上清，蒸馏水调零，1mL玻璃比色皿测定540nm处吸光值A，A A=A测定管-A对照管。每个测定管需设一个对照管。酶活性计算公式：标准曲线：y = 3.9642x - 0.008； R2 = 0.9996； x为标准品浓度，mg/mL； y为吸光值。1. 按照蛋白浓度计算酶活性定义：在50C，pH3.5条件下，每毫克蛋白每小时分解果胶产生1mg半乳糖醛酸为一个 酶活力单位。果胶酶活性(mg/h/mg prot) = ( A+0.008) -F3.9642XV 反总：(V 样XCpr)：T=2.523X(A A+0.008)：Cpr2. 按照样本质量计算酶活性定义：在50C, pH3.5条件下，每克样本每小时分解果胶产生1mg半乳糖醛酸为一个酶 活力单位。果胶酶活性(mg/h /g 鲜重)=( A+0.008) -F3.9642XV 反总：(V 样XW：V 样总)：T=2.523 X(A A+0.008)：W3. 按细胞数量计算酶活性定义：在50C, pH3.5条件下，每104细胞每小时分解果胶产生1mg半乳糖醛酸为一个 酶活力单位。果胶酶活性(mg/h /104cell) =( A+0.008) -F3.9642XV反总：(V样X细胞数量：V样总) -FT=2.523 X(A A+0.008)F细胞数量4. 细胞培养液酶活性定义：在50C, pH3.5条件下，每毫升培养液每小时分解果胶产生1mg半乳糖醛酸为一 个酶活力单位。果胶酶活性(mg/h /mL) =( A+0.008) F3.9642XV 反总FV 样-FT=2.523X(A A+0.008)V反总：反应总体积，0.5mL； V样：反应中样本体积，0.1mL； V样总：加入提取液体积，1mL；Cpr:样本蛋白浓度，mg/mL； W，样本质量，g； T：反应时间，0.5h注意事项：1. 试剂一若有沉淀析出，请置于50C加热溶解。2. 测定之前请先做预实验，如果吸光值较高或较低，请用提取液做适当的稀释或者加大样本 量，并在计算公式中乘以稀释倍数或者以实际加入的样本体积参与计算。3. 煮沸样本建议在沸水中煮沸10分钟，以将酶彻底灭活。