小鼠黑色素MC试剂盒使用方法

96T小鼠黑色素(MC)试剂盒使用方法检测范围：1ng/L - 32ng/L使用目的：本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中黑色素(MC)含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠黑色素(MC)水平。用纯化的小鼠黑色素 (MC)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入黑色素(MC)，再与HRP 标记的黑色素(MC)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深 浅和样品中的黑色素(MC)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，通过 标准曲线计算样品中小鼠黑色素(MC)浓度。试剂盒组成130倍浓缩洗涤液20ml X 1 瓶7终止液6ml X 1 瓶2酶标试剂6ml X 1 瓶8标准品(64ng/L)0.5ml X1 瓶3酶标包被板12孔X8条9标准品稀释液1.5ml X 1 瓶4样品稀释液6ml X 1 瓶10说明书1份5显色剂A液6ml X 1 瓶11封板膜2张6显色剂B液6ml X 1/瓶12密封袋1个标本要求1 .标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能 马上进行试验，可将标本放于-20C保存，但应避免反复冻融2. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。操作步骤1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。32ng/L5号标准品150gl的原倍标准品加入150gl标准品稀释液16ng/L4号标准品150gl的5号标准品加入150gl标准品稀释液8ng/L3号标准品150gl的4号标准品加入150gl标准品稀释液4ng/L2号标准品150gl的3号标准品加入150gl标准品稀释液2ng/L1号标准品150gl的2号标准品加入150gl标准品稀释液2. 加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、标准孔、 待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50gl，待测样品孔中先加样品稀释液40gl， 然后再加待测样品10gl (样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部，尽 量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3. 温育：用封板膜封板后置37C温育30分钟。4. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此 重复5次，拍干。6. 加酶：每孔加入酶标试剂50gl，空白孔除外。7. 温育：操作同3。8. 洗涤：操作同5。9. 显色：每孔先加入显色剂A50gl，再加入显色剂B50gl，轻轻震荡混匀，37C避光显色 15分钟.10. 终止：每孔加终止液50gl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止 液后15分钟以内进行。操作程序总结：准备试剂，样品和标准品计算以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的 OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标 准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数， 即为样品的实际浓度。注意事项1 .试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未 用完，板条应装入密封袋中保存。2. 浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3. 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4. 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值 大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（I倍）后再测定，计 算时请最后乘以总稀释倍数（XnX5）o5. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6. 底物请避光保存。7. 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准8 .所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9. 本试剂不同批号组分不得混用。10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。保存条件及有效期1. 试剂盒保存:；2-8C。2. 有效期：6个月