茶多酚对酒精性肝损伤的保护作用

茶多酚对酒精性肝损伤的保护作用【摘要】目的建立家兔酒精性肝损伤病理模型，探讨茶多酚对酒精性肝损伤 的治疗作用。方法家兔分为4组：对照组，茶多酚低剂量组、中剂量、高剂量组。 茶多酚低、中、高组分别灌胃以浓度为10, 20, 40 mg/ml的茶多酚溶液进行治 疗，实验期2周。测定肝组织中超氧化物歧化酶（SOD）活力、丙二醛（MDA）含 量，并取肝组织制作石蜡切片，HE染色，普通光镜观察。结果茶多酚能够直接降 低MDA含量，且中剂量（20 mg/ml ）和高剂量（40 mg/ml ）能够有效地清除活性氧 和自由基。结论茶多酚对酒精性肝损伤有良好的治疗和保护作用。【关键词】茶多酚； 肝损伤； 超氧化物歧化酶； 丙二醛茶多酚是从茶叶中提取的有效成分之一，由多种酚性物质组成，是一 种多酚类化合物，具有清除自由基和抗氧化等作用的生物活性。Marnewick 1也 发现，喂饲绿茶和红茶的大鼠，其肝组织匀浆中氧自由基浓度明显下降。本实验试 图建立酒精性肝损伤病理模型，运用茶多酚治疗的方法，从组织学与病理学的角度 研究茶多酚在酒精性肝损伤中起到的治疗作用，同时研究其机制。1材料与方法1.1 材料98%的茶多酚15g,超氧化物歧化酶试剂盒（南京建成生物工程公司）、 丙二醛试剂盒（南京建成生物工程公司）。1.2 动物和分组3月龄雌性大耳白兔24只，体质量11.5 kg，体质健康。统一编号后随 机分为4组，各组6只，分笼喂养，自由饮水摄食。1.3酒精性肝损伤病理模型建立2通过连续10d对4组实验动物灌胃 50%的酒精5 ml建立酒精性肝损伤模型；同时，对照组灌胃生理盐水，低剂量组灌 胃10 mg/ml的茶多酚溶液5ml（相当于25mgkg-1d-1）治疗，中剂量组灌胃20 mg/ml的茶多酚溶液5 ml（相当于50 mgkg-1 d-1）治疗，高剂量组灌胃40 mg/ml 的茶多酚溶液5 ml（相当于100 mgkg-1 d-1）治疗。治疗两周，观察并作相关记 录。1.4 观察指标和方法取家兔肝组织制备匀浆液，测定蛋白质的含量，采用 超氧化物歧化酶（SOD）活力试剂盒和丙二醛（MDA）含量试剂盒分别测定SOD的活 力和MDA的含量；同时对肝组织常规石蜡包埋，连续切片，HE染色，光学显微镜 观察并记录。2结果2.1 剖检变化解剖前，家兔身体消瘦，食欲不振，体毛蓬松，其中对照组有2只家兔死 亡，低剂量组有1只家兔死亡，高剂量组体重无明显变化，能够正常饮食，毛色光解剖后，对照组肝组织质地松软，颜色为土黄色；低剂量组肝组织质地较 松软，颜色为土黄色；中剂量组肝组织质地轻度松软，颜色为深红色；高剂量组肝 组织有韧性，颜色为深红色。2.2肝组织中SOD活力和MDA含量的变化随着对酒精性肝损伤的治疗，模型组SOD活性和MDA含量都显著性下 降。经方差分析，高剂量组和低剂量组SOD的活力与对照组比差异极显著，低剂量 组与对照组之间无显著差异；高剂量组MDA含量与对照组比差异极显著，中剂量 组与对照组之间差异显著，低剂量组与对照组之间无显著差异。结果见表1。表1 肝组织中SOD的活力和MDA的含量（略）2.3 肝组织病理变化光镜下，对照组肝组织受损较严重，肝细胞条索状不 明显，且杂乱无章，肝板间隙较小，肝小叶边缘模糊，界限不清（图1）。肝细胞 结构不完整，细胞膜破损，双核现象较多（图2）。低剂量组与正常组的变化基本 相同（图34）。茶多酚中剂量组肝小叶边缘界限清楚，肝细胞以中央静脉为中 心呈发射状排列，肝板间隙较大（图5）。细胞核双核较多，细胞膜完整（图 6）。高剂量组肝细胞呈有规律的条索状，肝板间隙较大（图7）。细胞结构完 整，双核现象较少（图8） 。3讨论研究表明，茶多酚清除自由基的能力大大超过目前已知的抗氧化剂维生素C和维生素E，其抗氧化能力是维生素C的310倍，是维生素E的39倍 3。通过对组织中SOD活力和MDA含量的测定可以间接反映出茶多酚清除活性氧 与自由基的能力。MDA的测定常常与SOD的测定相互配合，SOD活力的高低间接反 映了机体清除氧自由基的能力，而MDA的高低又反映了机体细胞受自由基攻击的严 重程度。许多研究表明，茶多酚不仅能防护体内抗氧化酶，还能促进和调动机体内 各种抗氧化酶的活性，生物体内的抗氧化酶主要有超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘 肽酶（GSH）和过氧化氢酶（CAT）。因此，茶多酚对氧自由基的清除主要表现在能使 SOD活性显著提高，MDA水平显著降低，且呈剂量效应关系4。本研究通过对酒精性肝损伤家兔动物模型进行茶多酚治疗实验，检测了肝 损伤中相关酶的活性，发现肝组织中SOD活力和MDA含量都呈下降趋势，茶多酚高 剂量组和低剂量组SOD的活力与对照组比差异极显著；茶多酚高剂量组MDA含量与 对照组比差异极显著，中剂量组与对照组之间差异显著。说明茶多酚能显著降低肝 组织中丙二醛的含量，但不能显著提升超氧化物歧化酶的活性，此结果与以往大多 数研究结果并不完全一致。究其原因，可能与茶多酚抗自由基机理的多样性有关， 茶多酚并没有提高抗氧化物酶活性和协同抗氧化物酶清除自由基。对于肝脏的损 害，主要是氧自由基形成的脂质过氧化引起的。铁离子能促使氧自由基生成，催化 脂质过氧化物裂解，引发新的脂质过氧化链式反应，而茶多酚能有效络合铁离子与 低分子铁结合成配合物，促使低分子铁排出体外，从而减少自由基的形成5，6,说明茶多酚可以自身直接清除组织细胞中的MDA，因此随着茶多酚的浓度不 断增高，MDA的含量逐渐降低。通过此途径减轻自由基对机体的损伤可能是造成本 实验结果的主要原因。另一方面，通过组织学的观察发现随着灌喂的茶多酚浓度的 增加，肝组织的受损程度就越低。其中中剂量和高剂量的浓度对该病理现象起到了 很好的治疗效果。综上所述，茶多酚有众多的生物学活性，本研究表明茶多酚对家兔酒精性肝损 伤有一定的预防和治疗效果，具有广泛的临床应用价值，但其机理还有待于进一步 研究。参考文献1Marneurick. The inhibition of mitochondrial peroxidation by ubiquinone and ubiquinolJ.The Journal of Biological Chemistry， 1966，2 41(19):4353.2 杜施霖，迟宝荣酒精性肝损伤动物模型的研究J.白求恩医科大学学 报，2001，27(6):682.3 龚盛昭，叶孝兆，骆雪萍利用废茶制备茶多酚护肤霜的研究J 广西 化工，2002，31(1):12.4 李春美，谢笔钧，姚平茶色素体外清除氧自由基及对老龄小鼠脂质过 氧化作用的影响J 中国药理学通报，2001，17:233.5 林春兰，蒋建伟，严玉霞，等.茶多酚对酒精诱导的小鼠肝脂质过氧化 和血清ALT活性变化的影响J 中国病理生理杂志，2002，19:110.6 窦若兰，刘书德，胡若梅，等.茶多酚对阻塞性黄疸肝脏过氧化损伤的保 护作用J 营养学报，2000，22(4) ：328.