蛋白纯化策略和工艺课件

蛋白纯化策略和工艺吕虎2017.8.18五大层析原理内容内容:简介蛋白纯化策略如何建立纯化方案纯化工具总结简介早期的蛋白纯化1789-1940s层析纯化1950s-1980s今天的蛋白纯化决定因素层析技术蛋白纯化策略蛋白纯化策略CIPPKEEP SIMPLE关键因子分辨率速度载量回收率Phase 1：CapturePhase 2：Intermediate PurificationPhase 3：Polishing层析技术的推荐交替运用互补技术，合理衔接减少样品处理，尽量简单化综合考虑起始和结束条件的衔接设计合理的纯化路线互相衔接，减少中间处理建立纯化方案明确纯化目的了解纯化产物的特性CIPP纯化策略建立有效分析方法确立最终的纯化方案明确纯化目的MassspectrometryAntigen forimmunizationFunctionalstudiesStructuralstudiesTherapeuticproteinHomogeneityActivityPurityAmount pg ng ug mg g kgOften not necessary rigid requirements Moderate 80%High 95%-99%Very high 99%Often not necessary rigid requirements了解目的产物的特性目的产物的特性:分子量 等电点可溶性稳定性 起始条件:样品量 pH离子强度成分关键杂质 CIPP纯化策略筛选层析技术筛选填料优化条件筛选层析技术：标签蛋白筛选层析技术:非标签蛋白筛选填料筛选填料筛选填料不同HIC填料分离同种蛋白质的分离结果优化条件不同pH条件下，目的蛋白与DEAE柱的结合情况优化条件不同洗脱方式对蛋白纯化结果的影响有效的分析方法纯化追踪表Purification stepProteinConc.（mg/ml）Volume（ml）AmounttotalProtein（mg）Totalactivity（U）Specificactivity（U/mg）recovery（%）Purification factor回收率&纯化因子纯化工具手动纯化:重力纯化磁珠纯化离心纯化优点:简单易掌握经济自动纯化:预装柱配合层析设备优点:自动化解放人力更高效洗脱手段多样化结果更优高重复性，结果可追溯总结纯化目的&目的产物特性CIPP纯化策略Capture、Intermediate Purification and Polishing综合运用多种层析技术互相衔接保持简单纯化工具思考：如果要得到一个去GST标签的蛋白，该如何设计纯化实验？如何选择层析柱？如何搭配层析设备？中试放大？Thank you for your listening!