第14章 遗传病的治疗

第十四章 遗传病的治疗遗传病的治疗包括传统治疗和基因治疗两种方法，手术治疗、药物治疗、饮食 疗法是遗传病的治疗的传统方法，这些方法可以取得一定疗效，但不能根治。而基因 治疗是运用重组 DNA 技术，将具有正常基因及其表达所需的序列导入到病变细胞或体 细胞中，以替代或补偿缺陷基因的功能，或抑制基因的过度表达，从而达到治疗遗传 性或获得性疾病的目的，是治疗遗传病的理想方法。目前，遗传病的基因治疗有了突 破性的进展，但也存在许多问题。本章详细介绍了各种传统的遗传病治疗的方法和技术，并重点介绍了基因治疗 的方法、策略、常用技术、应用、问题和展望等问题。一、基本纲要1掌握遗传病的治疗原则。2掌握遗传病基因治疗的基本概念。3掌握基因治疗的策略及转基因治疗的技术考虑。4熟悉基因治疗的临床应用。5熟悉转基因治疗的问题与风险性。6了解传统的遗传病的治疗方法。二、习 题（一）选择题（A型选择题）1由于分子遗传学的飞速发展，遗传病的治疗有了突破性的进展，已从传统的手术 治疗、饮食方法、药物疗法等跨入了。A. 基因治疗B.手术与药物治疗C.饮食与维生素治疗D.蛋白质与糖类治疗E.物理治疗2由于成功的同种异体移植可以持续提供所缺乏的酶或蛋白质，因此，对于某些先天性代谢病进行器官移植而达到治疗目的，所以这种移植又称。A. 器官移植B.组织移植 C.细胞移植D.蛋白移植 E酶移植3目前能采用症状前药物治疗的疾病是A. 甲状腺功能低下B.苯丙酮尿症C.枫糖尿症D.同型胱氨酸尿症或半乳糖血症E.以上都是4. 目前，遗传病的手术疗法主要包括。A.手术矫正和器官移植C.克隆技术B. 器官组织细胞修复D.推拿疗法E.手术的剖折A.少食D.禁其所忌5. 目前，饮食疗法治疗遗传病的基本原则是。B. 多食肉类C. 口服维生素E.补其所缺6. 通过特定的方法如同源重组或靶向突变等对突变的DNA进行原位修复，将致病基因的突变碱基序列纠正，而正常部分予以保留，就称其为。A. 基因修正B.基因转移C.基因添加D.基因复制E.基因突变7. 假如在基因治疗时仅仅将正常的DNA导入细胞而不替换掉有缺陷的基因，从而使细胞的功能恢复正常，就称其为。A. 基因修正B.基因转移C.基因添加D.基因复制E.基因突变8. 对于缺陷型遗传病患者进行体细胞基因治疗，可以采用的方法为。A. SSCPB.基因添加C.三螺旋DNA技术D.反义技术E. cDNA杂交9. 去除整个变异基因，用有功能的正常基因取代之，使致病基因得到永久地更正的策略称为。A.基因替代B.基因转移C.基因修正D.基因复制E.基因突变10. 对有些遗传病是因为某些酶缺乏而不能形成机体所必需的代谢产物，如给予补充，即可使症状得到明显的改善，达到治疗目的，即称。A. 添加B.补缺C.基因突变D.基因修正E. cDNA11. 外源基因克隆至一个合适的载体，首先导入体外培养的自体或异体的细胞，经筛选后将能表达外源基因的受体细胞重新输回受试者体内称之为。A 直接活体转移B.回体转移C.间体转移D.导入E.移植12. 将正常基因转移到患者的生殖细胞中而使之发育成一个正常的个体称为。A. 体细胞基因治疗C. 胚胎细胞的基因治疗E.胎儿的基因治疗B. 生殖细胞基因治疗D. 胚胎组织细胞基因治疗13. 将目的基因导入病变细胞或其他细胞，目的基因的表达产物可以补偿缺陷细胞的功能或使原有的功能得到加强称之为。A.基因突变B.基因增强C.基因复制D.基因转移E.基因互补14. 将含有外源基因的重组病毒、脂质体或裸露的DNA直接导入体内称之为。A 直接活体转移B.回体转移C.间体转移D.导入E.移植15 遗传病治疗不包括下列方面。A. 针对突变基因的生殖细胞基因的修饰与改善B. 针对突变基因转录的基因表达调控C. 蛋白质功能的改善D. 在代谢水平上对代谢底物或产物的控制E. 临床水平的内、外科治疗以及心理治疗等16. 当遗传病发展到已出现各种临床症状尤其是器官组织已出现了损伤，应用外科手 术的方法对病损器官进行。A.切除B.修补C.替换D.克隆方法E.细胞转导17. 下列病症，如能通过筛查在症状出现前做出诊断、及时治疗可获得最佳 效果。C.苯丙酮尿症A.半乳糖血症B.糖原储积症D.血红蛋白病E.甲状腺肿瘤18. 药物治疗的原则不包括。A.去其所余B.补其所缺C.用其所余D.食其所需E.取其所劣19 补其所缺临床治疗方法是。A.应用鳌合剂B.应用促排泄剂C.应用酶制剂D.血浆置换或血浆过滤E.平衡清除法20. 酶补充疗法目前采用将纯化酶制剂装入载体后再输入给患者的办法，用的载体是使载体所带的酶逐渐释放，发挥治疗作用，提高疗效。常用的载体是A.蛋白质B.糖蛋白C.红细胞胞影D.反转录酶E.质粒21. 饮食疗法治疗遗传病的原则是。A.去其所余B.禁其所忌C.补其所缺D. 用其所余 E. 取其所劣22. 对因酶缺乏而造成的底物或中间产物堆积的患者正确的治疗方法是。A.制定特殊的食谱或配以药物B.增加底物或中间产物的摄入C. 使用诱导酶活性的药物D.多食水果E. 多用维生素治疗23. 基因治疗的策略不包括。A.基因修正B.基因替代C.基因增强D. 基因缺失E.基因抑制和基因失活24. 基因抑制是。A.导入外源基因去干扰D.导入原核细胞B. 抑制基因表达C.导入蛋白质基因E. 抑制有害的基因表达25. 基因失活是。A.导入外源基因去干扰B.抑制基因表达 C.导入蛋白质基因D.导入原核细胞E.抑制有害的基因表达26. 目前进行的基因治疗属于。A.生殖细胞基因治疗B.原核细胞基因治疗C. cDNA基因治疗D.体细胞基因治疗E.胎儿基因治疗27. 目前常用的基因转移方法是。A.物理B.药学C.生物学D. 数学E.化学28. 不是基因治疗的必要条件是。A.选择合适的疾病B.掌握该病分子缺陷的本质C. 矫正遗传病的治疗基因得到克隆D.克隆基因的有效表达E. 有可利用的动物模型29. 下列疾病不能进行基因治疗。A.癌症B.心血管病C.呼吸疾病D. 营养不良E.神经性疾病30转基因治疗的技术考虑不包括。A.靶细胞选择B.临床实践C.载体选择D. 被转基因在靶细胞中具有适当的表达效率E. 被转基因的表达必须受到严格调控等31. 目前用于转基因的载体有许多，在选择载体时，不需要考虑的是。A.载体对机体的毒性B.载体所携带的转录启动子启动转录的效率C. 载体对靶细胞的转染效率D.载体本身的大小E.载入的DNA在细胞中的作用32. 不属于遗传病的治疗方法是。A.外科治疗B.内科治疗C.基因治疗D. 饮食治疗E.组织胚胎治疗33. 对肿瘤的基因治疗是。A.对免疫细胞的修饰B.对肿瘤细胞的修饰C. 体细胞的修饰D.对生殖细胞的修饰E.对胚胎细胞的修饰34. 对于单基因病特别是先天性代谢病的治疗主要采用。A.外科治疗B.内科治疗C.基因治疗D. 饮食治疗E.组织胚胎治疗35. 对于多基因病的治疗主要采用。A.外科治疗B.细胞治疗C.基因治疗D.饮食治疗E.组织治疗36. 当遗传病发展到已出现各种临床症状尤其是器官组织已出现了损伤，最好的治疗方法是。A.基因治疗B.内科治疗C.手术治疗D.饮食治疗E.组织胚胎治疗37. 组织或器官的移植是治疗某些遗传病的有效方法 ,由于移植物能提供正常的酶原，所以这种移植称为。A.组织移植B.细胞移植C.酶移植D. 蛋白移植E. 器官移植38. 由于酶活性过高所造成的生产过剩病，可用。A.促排泄剂B.代谢抑制剂C.螯合剂D. 纯化酶制剂E. 维生素39. 在某些情况下，酶活性不足不是结构基因的缺失，而是其表达功能“关闭”，可使用药物、激素和营养物质使其“开启”，诱导其合成相应的酶。这种疗法称 为。A.酶补充疗法B.酶诱导治疗C.酶介导治疗D. 酶转移治疗E. 酶导入治疗40. 产前诊断如确诊羊水中甲基丙二酸尿症，在出生前和出生后给母体和患儿注射。A.维生素BB.维生素BC.维生素B6 2 12D. 维生素 EE. 维生素 C41. 肝豆状核变性（Wilson病）是一种铜代谢障碍性疾病，应用一些药物与铜离子能形成螯合物的原理，给患者服用。A.青霉素B.青霉胺C.维生素B12D. 硫酸镁E. 去铁胺 B42. 原发性痛风和自毁容貌综合征的治疗可用代谢抑制剂抑制酶活性，常用药物是。A.消胆胺D.别嘌吟醇B. 黄嘌呤氧化酶C. 腺嘌呤E. 硫酸锌43. a -抗胰蛋白酶缺乏症可用酶诱导法治疗，常用药物是。1A.苯巴比妥B.雄激素C.胰蛋白酶D. 雌激素E. 维生素 C44. 基因治疗时将正常基因及其表达所需的序列导入到病变细胞或体细胞中是运用。A.反义技术D.重组DNA技术B. 基因克隆技术 C. 基因测序技术E. 基因芯片技术45. 是指一段DNA或RNA寡核苷酸在DNA大沟中以、Hoogsteen氢键与DNA高嘌吟区结合，形成三链结构称为。A.三链核苷酸B.三链形成寡核苷酸 C.单链形成寡核苷酸D. 二链形成寡核苷酸 E. 三链 DNA46. 被誉为“基因封条”的反义技术是。A. 反义基因技术B.ribozyme 技术C. 反义 ribozymeD.反义RNAE.反义核蛋白47. 基因转移中回体转移（ex vivo）法的优点是。A.经典、安全B.效果不易控制C.步骤多D. 技术复杂难度大C. 不容易推广48. 基因转移中直接活体转移（in vivo）法的优点是A.技术不成熟B.疗效短C.免疫排斥D.安全性E.操作简便49. 已经在临床上经过基因治疗获得疗效的疾病是。A.PKUB.ADAC.半乳糖血症D.Gaucher 病E. a -抗胰蛋白酶血症等。50. 对于某一疾病进行基因治疗的价值需要进行几方面的估价。A.人群中的发病率B.疾病对病人的危害性C.患者对家庭和社会的影响D.其他治疗方面的可用性E.以上都是51. 在体内能保持相当长的寿命或者具有分裂能力的转基因治疗理想靶细胞是。A.肝细胞B.神经细胞C.骨髓细胞D.内皮细胞 E.肌细胞52. 目前用于来实现大Kb基因的转染的基因载体是。A.质粒B.反转录病毒C.腺病毒D.人工酵母染色体E.脂质体53. 迄今为止，被列为基因治疗的主要对象的遗传病有。A.10 种 B.20 种 C.30 种 D.40 种 E.50 种54. ADA缺乏症的临床基因治疗方案使用的靶细胞或组织是。A.造血祖细胞B.肝细胞血C.T淋巴细胞D. 骨髓细胞E. 干细胞55. 我国复旦大学应用反转录病毒载体转移因子IX基因转移至病人细胞中产生了高滴度有凝血活性的因子IX蛋白。A.呼吸道上皮B.皮肤成纤维C.B淋巴D. 肝E. 胆管上皮56. a -抗胰蛋白酶缺乏的基因治疗是应用运载体把a -抗胰蛋白酶基因转移到呼吸道上皮细胞，可阻止慢性阻塞性肺病的发展。A.质粒B.反转录病毒C.腺病毒D. 人工酵母染色体E. 粘粒57. 肿瘤的基因治疗中对宿主细胞的修饰技术包括。A. 将一些对细胞毒药物有抗性的基因转移至造血前体细胞B. 改正肿瘤细胞的基因突变 C. 导入酶药物前体，形成肿瘤特异的敏感性D. 将细胞因子基因导入肿瘤细胞E. 将抑制基因导入肿瘤细胞58. HIV感染的基因治疗技术包括。A.阻断HIV和CD4结合B.直接注射DNAC.转移携带自杀基因的CD8+T细胞D.将人工构建的一个重组基因导入易感细胞内E.以上都是59. 乙肝的基因治疗的可行方法是。A.基因修正B.基因替代C.反义核酸技术D.基因增强E.基因失活60. 血管疾病的基因治疗是在一个特定的部位把转移基因转移到。A.呼吸道上皮细胞 B.皮肤成纤维细胞C.血管壁细胞D. 肝细胞E. 淋巴细胞61. 对唇裂、腭裂的手术治疗的方法是。A.矫正B.修补C.替换D. 切除E. 移植62对先天性心脏畸形及两性畸形的手术治疗的方法是。A.替换B.移植C.矫正D. 修补E. 切除63.对家族性多囊肾，遗传性肾炎治疗的有效方法是。A.药物治疗 B.基因治疗 C.手术治疗D.肾移植E.饮食治疗64 .对重型p地中海贫血和某些遗传性免疫缺陷患者治疗的有效方法是施 行。A.骨髓移植术B.肝细胞移植术C.红细胞移植术D. 白细胞移植术E. 成纤维细胞移植65. 对a -抗胰蛋白酶缺乏症患者在进行治疗后，可使血中的a -抗胰蛋白酶达1 1 到正常水平。A.白细胞移植B.成纤维细胞移植C.肝移植D. 肾移植E. 骨髓移植术66. 介导转录后基因沉默现象的分子是。A.mRNAB. RNAiC.tRNAD.ssRNAE. dsRNA67. 药物治疗的时间可以在。A.症状出现后B.胎儿出生前 C.症状出现前D.出生后E.以上都是68. 口服消胆胺对于家族性高胆固醇血症的治疗方法属于。A.螯合剂应用B.促排泄剂应用C.代谢抑制剂利用D. 平衡清除法 E. 血浆置换69. 用别嘌吟醇治疗原发性痛风和自毁容貌综合征的方法属于。A.螯合剂应用B.促排泄剂应用C.代谢抑制剂利用D. 平衡清除法E. 血浆置换70用青霉胺治疗肝豆状核变性（Wilson病）的方法属于。A.螯合剂应用B.促排泄剂应用C.代谢抑制剂利用D. 平衡清除法E. 血浆置换71 雄激素用于a -抗胰蛋白酶缺乏症的治疗的方法属于。A.酶补充疗法B.激素疗法C.酶活化疗法D.酶诱导治疗E.激素补充疗法72给脑苷脂病（Gaucher病）患者注射0 -葡萄糖苷酶制剂的方法属于。A.酶补充疗法B.激素疗法C.酶活化疗法D. 酶诱导治疗E. 激素补充疗法73. 由于酶反应辅助因子合成不足，或者是缺乏的酶与维生素辅助因子的亲和力降低的遗传代谢病，应给予相应的。A.酶B.蛋白质C.维生素D. 微量元素E. 激素74. 对患有半乳糖血症风险的胎儿，在孕妇的饮食中限制摄入量的成分是。A.水解蛋白B.乳糖和半乳糖C.葡萄糖D. 淀粉E. 蔗糖75治疗苯丙酮尿症患儿的主要方法是。A. 早期治疗B. 服用低苯丙氨酸奶粉C. 服用苯丙氨酸氨基水解酶的胶囊D.低苯丙氨酸饮食法E.以上都是76 以骨髓细胞作为基因治疗靶细胞的血液系统疾病是。A.ADA缺乏症B.珠蛋白生成障碍性贫血C.镰状细胞贫血D. CGDE.以上都是77. 在选择载体时，需要考虑的因素是。A. 载体对机体的毒性B. 载体所携带的转录启动子启动转录的效率C. 载体所携带基因片段的大小D.载体对靶细胞的转染效率E. 以上都是78. 囊性纤维化（CF）基因治疗所使用的靶细胞或组织是。A.呼吸道B.肝细胞C.淋巴细胞D. 骨髓细胞E. 造血祖细胞79 LDL受体缺乏基因治疗所使用的靶细胞或组织是。A.造血祖细胞B.肝细胞C.骨髓细胞D. 淋巴细胞E. 呼吸道80.范可尼综合征基因治疗所使用的靶细胞或组织是。A.淋巴细胞B.肝细胞C.呼吸道D.造血祖细胞E.骨髓细胞（二）填空题1. 遗传病的治疗有了突破性的进展，已从传统的 、等跨入了，为遗传病根治开辟了广阔的前景。2. 遗传病治疗的策略包括、和3. 传统的遗传病的治疗方法包括、和等。4. 遗传病的手术疗法主要包括和两方面。5. “去其所余”的主要方法包括、和。6. 遗传性代谢病通常是由于基因突变造成 或，可用的方法进行治疗。7. 饮食疗法治疗遗传病的原则是，即对因而造成的或堆积的患者，制定特殊的或，以控制底物或中间产物的摄入，减少代谢产物的堆积，达到治疗的目的。8. 基因治疗的策略不同，概括起来主要有下列几种：、9. 反义技术是， 及的总称。10. 基因治疗根据靶细胞的类型可分为和。11 .基因转移的途径有两类：一类是 ，称为;另一类为，称为。基因转移方法可分为 、和等方法。12. 对于进行成功的基因治疗来说，必要条件是：、和。13. 对于某一疾病进行基因治疗的价值需要进行几方面的估价：、和。14. 除了骨髓细胞以外，、和也可作为靶细胞来研究或实施转基因治疗。（三）是非判断题1. 染色体病则是令人棘手的一类遗传病，目前无法根治，但改善症状很容易。2. 遗传病的治疗与一般的疾病治疗的疗效不同，遗传病治疗的初期效果明显， 但长期观察则达不到预期的目的。3. 药物治疗可以在胎儿出生前进行，这时可以使胎儿出生后的遗传病症状推迟 出现。4. 对于某些遗传病，采用症状前药物治疗也可以预防遗传病的病症发生而达到 治疗的效果。5. 当遗传病发展到各种症状已经出现，机体器官已经受到损害，这时治疗的作 用就仅限于基因治疗。6. 在临床上很多情况下，直接输入酶制剂，能有效地发挥作用。7随着患儿年龄的增大，饮食治疗的效果就越来越差，所以要求早诊断，早治 疗。8基因替代指去除整个变异基因，用有功能的正常基因取代之，使致病基因得 到永久地更正。9反义技术封闭某些正常基因的表达，以达到抑制有害基因表达的目的。 10迄今所有导入细胞的目的基因表达率都不十分高，这与基因转移方法、靶 细胞的选择等有关。(四) 名词解释1平衡清除(equilibrium deple tion) 法：2. 酶诱导治疗(enzyme-inducing t herapy)：3酶受体介导分子识别法：4. 基因治疗(gene therapy)：5基因修正(gene correc tion)：6. 基因替代(gene replacement)：7. 基因增强(gene augmentation )：8 反义技术(anti sense t echnology)：9. 回体转移 ex vivo )：10. 生殖细胞基因治疗(gene therapy on germ cell)：11. 三链形成寡核苷酸(triplex-forming oligonucleotides, TFO):12. RNA 干扰(RNA interference)：13. 基因添加(gene augmen tat ion)：(五) 问答题1. 遗传病的治疗有哪些策略？2. 传统的遗传病的治疗方法有哪些，怎样选择应用？3. 去其所余是药物治疗的原则之一，简述其方法。4. 对遗传病怎样进行酶疗法？5. 什么是基因治疗？如何分类？6. 简述基因治疗的策略。7说明基因转移的途径、方法和特点。8进行基因治疗的必要条件是什么？9基因治疗中靶细胞的选用原则和种类有哪些？10转基因过程中应注意哪些问题？11以 ADA 缺乏症为例说明基因治疗遗传病的过程12怎样对肿瘤进行基因治疗？13基因治疗目前还存在什么问题？三、参考答案（一） A型选择题1A2 E3 E4 A5 D6 A7 C8 B9 A10 B11.B12.B13.B14.B15.A16.A17.C 18.E19.C20C21 B22.A23.D24 A25. E26.D 27.C 28 E29 D30B31 E32 E33 B34.B 35.A36.C 37.C 38.B39.B40.C41.B42.D43.B 44.D45.B46.D47.A48.E49.B50.E51.C52.D53.B54.C55.B56.C57.A58.E59.C60.C61 B62 C63D64 A65C66E67 E68B69 C70.A71.D72.A73.C74.B75.E76.E77.E78.A79.B80.D（二）填空题1手术治疗；饮食疗法；药物疗法；基因治疗 2针对突变基因的体细胞基因的修饰与改善；针对突变基因转录的基因表达调 控；蛋白质功能的改善；在代谢水平上对代谢底物或产物的控制；临床水平的内、外 科治疗3. 手术治疗；药物治疗；饮食疗法4. 手术矫正；器官移植5. 应用螯合剂；应用促排泄剂；利用代谢抑制剂；血浆置换或血浆过滤；平衡清除法6. 酶的缺失；酶活性降低；酶诱导；酶补充7. 禁其所忌；酶缺乏；底物；中间产物；食谱；配以药物8. 基因修正；基因替代；基因添加；基因增强；基因抑制和基因失活9. 反义核酸（RNA或DNA）技术；反义ribozyme； ribozyme技术10. 体细胞基因治疗；生殖细胞基因治疗11. in vivo；直接活体转移；ex vivo；回体转移；物理；化学；生物学12选择合适的疾病；掌握该病分子缺陷的本质；矫正遗传病的治疗（或正常） 基因得到克隆；克隆基因的有效表达；克隆基因的有效调节；可利用的动物模型。13 .人群中的发病率；疾病对病人的危害性；患者对家庭和社会的影响；其他 治疗方面的可用性。14. 肝细胞；神经细胞；内皮细胞；肌细胞（三）是非判断题1. 错。应为：染色体病目前不仅无法根治，改善症状也很困难。2. 对。3. 错。应为：药物治疗可以在胎儿出生前进行，这时可以大幅度地减轻胎儿出 生后的遗传病症状。4. 对。5. 错。应为：当遗传病发展到各种症状已经出现，机体器官已经受到损害，这 时治疗的作用就仅限于对症。6. 错。应为：在临床上很多情况下，直接输入酶制剂，往往受到机体免疫功能 的作用而被破坏，因而不能有效地发挥作用。7. 对。8. 对。9. 错。应为：反义技术封闭某些特定基因的表达，以达到抑制有害基因表达的目的。10. 对。（四）名词解释1. 对于某些遗传病，由于其沉积物可弥散入血，并保持血与组织之间的动态平 衡。如果把一定的酶制剂注入血液以清除底物，则平衡被打破，组织中沉积物可不断 进入血液而被清除，周而复始，以达到逐渐去除“毒物”的目的。2在某些情况下，酶活性不足不是结构基因的缺失，而是其表达功能“关闭”， 可使用药物、激素和营养物质使其“开启”，诱导其合成相应的酶。3此法是把所用的酶进行一定的改造，用靶细胞表面特殊受体的抗体包裹，注 入体内后，更易为靶细胞的某些结合部位所识别并与之特异性结合。4. 所谓基因治疗就是运用重组DNA技术，将具有正常基因及其表达所需的序列 导入到病变细胞或体细胞中，以替代或补偿缺陷基因的功能，或抑制基因的过度表达， 从而达到治疗遗传性或获得性疾病的目的。5. 指将致病基因的突变碱基序列纠正，而正常部分予以保留。6. 指去除整个变异基因，用有功能的正常基因取代之，使致病基因得到永久地 更正。7. 指将目的基因导入病变细胞或其他细胞，目的基因的表达产物可以补偿缺陷 细胞的功能或使原有的功能得到加强。8. 反义技术封闭某些特定基因的表达，以达到抑制有害基因表达的目的。反义技术是反义核酸（RNA或DNA）技术，ribozyme技术及反义ribozyme的总称。9. 指外源基因克隆至一个合适的载体，首先导入体外培养的自体或异体（有特 定条件）的细胞，经筛选后将能表达外源基因的受体细胞重新输回受试者体内。10. 是将受精卵早期胚胎细胞作为目标进行的基因治疗。11. 三链形成寡核苷酸是指一段DNA或RNA寡核苷酸在DNA大沟中以、oogsteen 氢键与DNA高嘌吟区结合，形成三链结构。TF0可与启动子区或结构基因结合而抑制 基因转录。12. 意义链和反义链RNA共存抑制基因表达的效率达到单一意义链或反义链RNA 的10倍以上，这种双链RNA （dsRNA）介导的转录后基因沉默（post-transcription gene silencing ,PTGS）现象称为 RNA 干扰，简称为 RNAi。13. 非定点导入外源正常基因，而没有去除或修复有缺陷的基因。即间接疗法， 此法难度较小，是目前多采用的策略，并已付诸实践。（五）问答题1从基因突变到临床表现的出现，这其间涉及许多过程，每一过程都可能成为 遗传病治疗的着眼点。遗传病治疗的策略包括5个方面：针对突变基因的体细胞基 因的修饰与改善；针对突变基因转录的基因表达调控；蛋白质功能的改善；在 代谢水平上对代谢底物或产物的控制；临床水平的内、外科治疗以及心理治疗等。2遗传病的传统治疗方法大致上可分以下三类：外科治疗、内科治疗和饮食治 疗:外科治疗：当遗传病发展到已出现各种临床症状尤其是器官组织已出现了损伤， 应用外科手术的方法对病损器官进行切除、修补或替换，可有效地减轻或改善症状。 手术疗法主要包括手术矫正和器官移植两方面。内科治疗：若在出生后，当遗传病 发展到各种症状已经出现，机体器官已经受到损害，这时治疗的作用就仅限于对症。 治疗原则是补其所缺、禁其所忌和去其所余；饮食疗法治疗遗传病的原则是禁其所 忌，即对因酶缺乏而造成的底物或中间产物堆积的患者，制定特殊的食谱或配以药物， 以控制底物或中间产物的摄入，减少代谢产物的堆积，达到治疗目的。包括产前治疗 和现症患者治疗。3对于一些因酶促反应障碍，导致体内贮积过多的代谢产物，可使用各种理化 方法将过多的毒物排除或抑制其生成，使患者的症状得到明显的改善，称为去其所余。 主要方法包括：应用螯合剂：如肝豆状核变性是一种铜代谢障碍性疾病，应用青霉 胺与铜离子能形成螯合物的原理，给患者服用青霉胺，可除去患者体内细胞中堆积的 铜离子。应用促排泄剂：对于家族性高胆固醇血症患者可口服消胆胺治疗。利用 代谢抑制剂：由于酶活性过高所造成的生产过剩病，可用代谢抑制剂抑制酶活性，以 降低代谢率。例如，用别嘌吟醇治疗原发性痛风。血浆置换或血浆过滤：血浆置换 可除去大量含有毒物的血液，此法已成功应用于重型高胆固醇血症的治疗。血浆过滤 是将患者的血液引入含有特定的亲合剂容器内，由于亲和结合剂与血浆中“毒物”选 择性结合后不能通过回输滤器，而使患者的血液得到清理，在将血液重新输入患者体 内后，获得治疗效果。平衡清除法：对于某些溶酶体贮积症，由于其沉积物可弥散 入血，并保持血与组织之间的动态平衡。如果把一定的酶制剂注入血液以清除底物， 则平衡被打破，组织中沉积物可不断进入血液而被清除，周而复始，以达到逐渐去除毒物”的目的。4遗传性代谢病通常是由于基因突变造成酶的缺失或活性降低，可用下列两种 方法进行治疗。酶诱导治疗：在某些情况下，酶活性不足不是结构基因的缺失，而 是其表达功能“关闭”，可使用药物、激素和营养物质使其“开启”，诱导其合成相应 的酶。例如雄激素能诱导a -抗胰蛋白酶的合成，因而可应用于a -抗胰蛋白酶缺乏11症的治疗。酶补充疗法：给患者体内输入纯化酶制剂是酶补充疗法的重要途径。 如给脑苷脂病(Gaucher病)患者注射0 -葡萄糖苷酶制剂，可使患者肝和血液中的脑 苷脂含量降低，使症状缓解；在临床上很多情况下，直接输入酶制剂，往往受到机体 免疫功能的作用而被破坏，因而不能有效地发挥作用。为了降低外源酶在体内的破坏， 延长酶作用的半衰期，目前采用将纯化酶制剂装入载体后再输入给患者的办法。5基因治疗(gene therapy)作为治疗疾病的一种新手段，正愈来愈受到人们 的重视和关注。所谓基因治疗就是运用重组 DNA 技术，将具有正常基因及其表达所需 的序列导入到病变细胞或体细胞中，以替代或补偿缺陷基因的功能，或抑制基因的过 度表达，从而达到治疗遗传性或获得性疾病的目的。基因治疗根据靶细胞的类型可分为生殖细胞基因治疗和体细胞基因治疗。从理论 上讲，将受精卵早期胚胎细胞作为目标进行生殖细胞的基因治疗是可行的。但由于受 精卵或早期胚胎细胞的遗传改变势必影响后代，伦理学障碍和技术上的困难使生殖细 胞治疗目前仍为禁区。体细胞基因治疗只涉及体细胞的遗传转变，不影响下一代，现 已被广泛接受作为严重疾病的治疗方法之一，在现代伦理道德上是可行的。方法上易 于施行，而且已取得了可喜的成果。6根据宿主病变的不同，基因治疗的策略也不同，概括起来主要有下列几种：基因修正：基因修正指将致病基因的突变碱基序列纠正，而正常部分予以保留。 但目前在技术上还无法做到。基因替代：基因替代指去除整个变异基因，用有功能 的正常基因取代之，使致病基因得到永久地更正。基因添加(gene augmen tat ion) 非定点导入外源正常基因，而没有去除或修复有缺陷的基因。即间接疗法，此法难度 较小，是目前多采用的策略，并已付诸实践。基因增强：基因增强指将目的基因导 入病变细胞或其他细胞，目的基因的表达产物可以补偿缺陷细胞的功能或使原有的功 能得到加强。基因抑制和(或)基因失活：导入外源基因去干扰、抑制有害的基因 表达。例如，向肿瘤细胞内导入肿瘤抑制基因（如Rb或p53）,以抑制癌基因的异常 表达。此外利用反义技术封闭某些特定基因的表达，以达到抑制有害基因表达的目的。7基因转移的途径有两类：一类是in vivo,称为直接活体转移；另一类为ex vivo,称为回体转移。前者指将含外源基因的重组病毒、脂质体或裸露的DNA直接导 入体内。后者指外源基因克隆至一个合适的载体，首先导入体外培养的自体或异体（有 特定条件）的细胞，经筛选后将能表达外源基因的受体细胞重新输回受试者体内。 ex vivo 法比较经典、安全，而且效果较易控制，但是步骤多、技术复杂难度大、不容 易推广； invivo 法操作简便、容易推广，但尚不成熟，存在疗效短、免疫排斥及安 全性等问题，它是基因转移研究的方向，只有invivo基因转移方法成熟了，基因治 疗才能真正走向临床。基因转移方法可分为物理、化学和生物学等方法。8对于进行成功的基因治疗来说，必要条件是：选择合适的疾病；掌握该 病分子缺陷的本质；矫正遗传病的治疗（或正常）基因得到克隆；克隆基因的有 效表达；克隆基因的有效调节；可利用的动物模型。9转基因治疗中的靶细胞选用应该是在体内能保持相当长的寿命或者具有分裂 能力的细胞，这样才能使被转入的基因能有效地、长期地发挥“治疗”作用。因此干 细胞、前体细胞都是理想的转基因治疗靶细胞。以目前的观点看，骨髓细胞是惟一满 足以上标准的靶细胞，而骨髓的抽取、体外培养、再植入等所涉及的技术都已成熟； 另一方面，骨髓细胞还构成了许多组织细胞（如单核巨噬细胞）的前体，因此，不仅 一些累及血液系统的疾病如ADA缺乏症、珠蛋白生成障碍性贫血、镰状细胞贫血、CGD 等以骨髓细胞作为靶细胞，而且一些非血液系统疾病如苯丙酮尿症、溶酶体贮积病等 也都以此作为靶细胞。除了骨髓以外，肝细胞、神经细胞、内皮细胞、肌细胞也可作 为靶细胞来研究或实施转基因治疗。10.转基因过程中应注意：必须考虑到被转基因在靶细胞中具有适当的表达效 率。尽管在某些遗传病，正常基因2%5%的表达量就可能不会发病，但像地中海贫 血等疾病则需要较高的表达水平；被转基因的表达必须受到严格的调控，做到这一 点虽然很难，但在某些疾病，过少的基因表达不能达到治疗目的，而过多的表达又会 引起不良反应，因此，这就需要严格的体外试验和动物试验；大片段基因的转染以 及不分裂细胞的转染都需要特别的考虑，否则难以达到预期效果。11. 腺苷脱氨酶（adenylate deaminase, ADA）缺乏症 这是一种AR病，因ADA 缺乏，致脱氨腺苷酸增多，改变了甲基化的能力，产生毒性反应，患者T淋巴细胞受 损，引起反复感染等症状。Anderson 等提出了一项关于 ADA 缺乏症的临床基因治疗方案，具体内容是：先 分离病人外周血 T 淋巴细胞，在体外培养；在培养时，用 IL-2 等促细胞生长因子刺 激它生长，一旦T淋巴细胞分裂后就用含正常ADA基因的反转录病毒载体LASN导入 这种细胞，然后回输病人，以达到用正常的ADA基因替代有缺陷的ADA基因的目的， 实现基因治疗。该方案分别于1990年和1991 年,对两例ADA缺乏症女孩进行临床基 因治疗。12. 对肿瘤的基因治疗分为对宿主细胞的修饰和对肿瘤细胞的修饰。对宿主细 胞的修饰包括将一些对细胞毒药物有抗性的基因转移至造血前体细胞以降低治疗 药物对骨髓的毒性，这样就可以用高剂量的药物杀伤肿瘤细胞而不破坏骨髓细胞。 涉及免疫系统，如果抗肿瘤应答（如 CTL、TIL 等）已经存在，导入细胞因子的基因 有可能扩大抗肿瘤效应。对肿瘤细胞的修饰是达到以下三个目标：改正肿瘤细胞的 基因突变，降低其生长率，诱导肿瘤消退。导入酶药物前体（pro-drug），形成肿 瘤特异的敏感性。其主要原理是让病毒基因编码合成的酶在细胞中的表达依赖于细胞 中某些蛋白质的诱导，所表达的酶能使无毒的药物前体转变成有毒的药物，从而杀伤 肿瘤，而不伤及正常细胞。导入目的基因以增强肿瘤的免疫原性，从而被机体的免 疫系统所识别。随着多种细胞因子（IL-1、IL-2、TNF-a、GM-CST、IFN）基因的克 隆化，将这些基因以各种基因转移方法导入各种类型的靶细胞，并在细胞内进行表达， 直接发挥杀伤肿瘤细胞的功能，或是诱导淋巴细胞成为 LAK 细胞，或是诱导主要组织 相容性复合物（MHC）抗原的表达，增加双识别抗肿瘤的免疫功能。13. 基因治疗存在的问题：导入基因是否持续表达。靶细胞寿命短，需反复治 疗，治疗过程繁杂、成本高。应研究长寿命的靶细胞（如造血干细胞，骨髓前体细胞 等）；导入基因能否高效表达。导入基因表达均不十分活跃，反转录病毒须带有高 效启动子（如人巨细胞病的启动子等）；安全性：反转录病毒载体有诱导肿瘤或并 发症的可能；载体病毒自发重组产生有包装能力的辅助病毒或辅助病毒污染，辅助病 毒即可扩散感染其他细胞，导致机体病变；伦理学问题：生殖细胞基因治疗可将遗传改变直接传递给后代，对后代有不可预知的危险性；载体与外源基因的随机插入将影响靶细胞基因组的稳定性，不稳定的基因组同样有不可预知的危险性。岳风珍、王修海）