食品中沙门氏菌检验.ppt

第一节 沙门氏菌检验,食品中肠道致病杆菌的检验,沙门氏菌（Salmonella）是肠杆菌科中最复杂的菌属,1880年Eberth首先发现伤寒沙门氏菌，1885年Salmon与Smith又分离出猪霍乱沙门氏菌，以后取名Salmon氏之名为本菌属属名。已发现近2000个血清型，我国已发现近200个血清型。 对人类有致病性 肠热症伤寒沙门菌，甲型副伤寒沙门菌、肖氏沙门菌、希氏沙门菌 食物中毒鼠伤寒沙门菌、猪霍乱沙门菌、肠炎沙门菌 败血症猪霍乱沙门菌最常见,生物学性状,形态染色 符合肠杆菌特点，革兰氏染色阴性短杆菌，无荚膜，无芽胞，多数有鞭毛(周生毛菌)，有动力（也有无动力的变种）。,鼠伤寒沙门菌 （samonella typhimurium）,沙门氏菌革兰氏染色照片,培养特性,EMB、SS上呈无色透明乳糖不发酵菌落,沙门氏菌SS平板培养物（黑色菌落）,鼠伤寒沙门,鼠伤寒沙门在SS培养基上形成半透明较小菌落,在酸性条件下菌落中心产生H2S(SS培养基）,生化反应 乳糖（-），葡萄糖（+）/+，多数H2S+，动力+，尿素（-） 抗原结构 O抗原特异性低、稳定、分群（组） H抗原特异性高，不稳定，分型 Vi抗原（毒力抗原）不稳定，可阻止“O”凝集 抵抗力 不强,致病性与免疫性,致病物质 侵袭力 菌毛吸附 型分泌系统穿入细胞，扩散 Vi抗原微荚膜（抗吞噬） 内毒素 外毒素个别（鼠伤寒沙门菌）产生，与ETEC肠毒素相似,肠热症 临床过程 潜伏期2W 发病初期：第1W（第一次菌血症）、高热、肝脾肿大、皮疹、WBS等全身中毒症状，此期血液（80%）、骨髓（90%（+）有大量细菌 发病极期：第2-4W，全身症状持续加重，此期血、骨髓中仍有菌，但粪便（60%）、尿（20%）、皮疹液中可查到细菌， 由于型变态反应并发症发生， 血液抗体达到阳性标准肥达反应 恢复期：第四周末，体温下降，症状消失，恢复期带菌1年（粪便仍阳性），血液抗体仍高,胃肠炎（食物中毒） 潜伏期短，6-24h，起病急，病程短2-4天，发热、恶心、呕吐、腹痛、腹泻 败血症 经口感染，经肠道入血，败血症症状明显而肠道症状不明显 带菌者 健康带菌者，恢复期带菌者 免疫性 肠热症，病后免疫牢固，其它可重复感染,微生物学检查与防治,分离培养与鉴定 标本采取: 肠热症：第1-2W，血、骨髓；第2-3W，粪便、 食物中毒：粪便、呕吐物、可疑食物 败血症：血 带菌者：粪便 分离鉴定： 增菌（血、骨髓）EMB、SS生化反应血清鉴定,血清学诊断肥达反应（Widal）,原理 用已知伤寒沙门氏菌O抗原及H 抗原，以及引起副伤寒的沙门氏菌H抗原与待检血清作凝集试验，测定待检血清中有无相应抗体及其效价。（TO、TH、PA、PB） 方法：试管凝集法（定量） TO1：80，TH1：160，PA、PB均1：80才有意义 动态观察：双份血清抗体四倍升高有诊断意义,临床意义 O抗体（IgM）， H抗体（IgG） O 、H抗体均升高，患伤寒的可能性大 O 、H抗体不升高，患伤寒的可能性小 只有H升高，则可能是预防接种过或非特异性回忆反应， 只有O升高而H不高，则可能是感染早期或其他沙门菌的交叉反应。,沙门氏菌主要寄生在人体、哺乳动物和家禽的肠道内，可随同粪便的排泄污染水源，食品与药品。沙门氏菌的种类繁多，有些对人有致病力，如伤寒沙门菌和副伤寒沙门氏菌；有些对动物有致病力，如鸭沙门氏菌和雏沙门氏菌；尚有一些对人和动物皆有致病力，如肠炎沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌和猪霍乱沙门氏菌等。它们能引起人类伤寒症、急性胃肠炎和败血症等。 带有这些细菌的人与动物常可直接或间接地污染药品的生产环境、工具设备和原料辅料，以及半成品和成品等。特别是用动物脏器制成的药品,污染机率较高，影响患者用药安全，并有可能通过药品的流通而传播。故将沙门氏菌，应列为某些药品的必检项目。,（一）增菌培养： 取供试品稀释液毫升，接种于备妥的毫升胆盐乳糖增菌液内。置培养小时，进行增菌。,（二）分离培养： 取上述增菌培养物，划线接种于琼脂和琼脂平板各一个（划线时，适当增加琼脂平板的涂抹量-环，可提高阳检率），置培养-小时。凡沙门氏菌，在和琼脂平板上，菌落一般无色透明或半透明，圆形，周边整齐，表面光滑湿润，在琼脂平板上中心有时呈黑褐色。如有上述疑似菌落，应选取-个分别进行纯培养，按下列方法鉴别。,伤寒沙门菌在SS琼脂平板上的菌落特征,伤寒沙门菌在CHROMagar显色培养基上的菌落特征,伤寒沙门菌在CHROMagar显色培养基上呈紫色菌落,沙门氏菌SS平板培养物（黑色菌落）,沙门氏菌在BS平板上的典型菌落（产H2S菌株,沙门氏菌在BS平板上的菌落（Salmonella typhimurium）,（三）初步鉴别： 将上述纯培养物分别穿刺并划线接种三糖铁（）琼脂，置培养小时。凡在琼脂中不分解乳糖及蔗糖（即上部斜面呈碱性，不变色），下层底部分解葡萄糖呈酸性变黄色（有气泡或无气泡），有动力或无动力，以及产生或不产生黑褐色的硫化氢反应，并经涂片染色镜检为革兰氏阴性杆菌，都应继续做生化试验和血清学检查。,沙门氏菌三糖铁,沙门氏菌革兰氏染色照片,（四）生化试验： 取上述疑似菌落的纯培养物、分别接种至葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇和蔗糖等发酵管培养基，并接种蛋白胨水和尿素培养基，经培养-天，观察结果。沙门氏菌一般生化反应和动力检查，绝大数应为、葡萄糖，乳糖，麦芽糖，甘露醇，蔗糖，靛基质，硫化氢，尿素酶，动力。当一般生化试验符合时，应做赖氨酸脱羧酶及氰化钾试验。沙门氏菌赖氨酸脱羧酶试验，氰化钾。,沙门氏菌氨基酸脱羧酶,沙门氏菌蛋白胨水,尿素琼脂实验出现异常,原因可能是沙门氏菌变种,(五）动力试验： 取上述纯培养物穿刺接种半固体培养基，于培养小时后，观察动力表现。无动力表现的培养物，应在室温（左右）保留-天后，再观察。,（六）血清学检查： 取上述疑似菌落的琼脂培养物少许，与沙门氏菌多价血清作玻片凝集试验，并以生理盐水作对照试验。若凝集试验为阴性反应时，应将菌苔制成浓菌液在水浴中保温分钟后再进行-多价血清凝集试验。将反应结果，结合生化试验，判定之。,