LC-MSMS法测定鱼肉中氯霉素的残留

LC-MS/MS 法测定鱼肉中氯霉素的残留朱叶青 张晓东 王瑞生（内蒙古自治区食品药品检验所 呼和浩特010020）摘要：目的：建立动物源性食品氯霉素的残留分析方法。方法：采用乙酸乙酯提 取鱼肉中氯霉素的残留，以甲醇-水（70： 30）为流动相，流速0.2ml，进样量 20p 1,经高效液相色谱分离，以多反应监测（MRM）测定。结果：本方法在0.5 -10ng/m1内线性良好（r = 0.9996）.）；检出限0.04g/kg；方法回收率为76.93%, RSD为2.90%。结论：本方法稳定、可靠、准确，可用于动物源性食品中氯霉素 的残留分析方法。关键词：液相色谱-串联质谱鱼肉 氯霉素 食品安全Vestigital of chloramphenicol residues in fish by Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometryzhu yeqing zhang xiaodong（ Inner Mongolian Institute for the Control of Drug and Food， Hohhot， 010020）Abstract： Aim： To establish a method for determination the chloramphenicol residues in fish .Methods：Ethyl acetate was used for extract chloramphenicol residues in fish. With mobile phase consisting of methanol-water （ 70： 30） and eluted at flow rate of 0.2ml.min-1 at 25 C .inject volume 20ul To Separate by HPLC, to analysis with MRM.Results The line ranges for chloramphenicol residues were within 0.510 g/L .the limit of detection was 0.04 g/kg.the average recorvery was 76.93%（RSD2.90%） .Conclusion： This method could be used for the determineation of the chloramphenicol residues in beef， and stable、 reliable and accurate.Keywords Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry ， fish ， chloramphenicol residues， the safe of foods氯霉素对革兰阳性、阴性细菌均有抑制作用，且对后者的作用较强。其中对 伤寒杆菌、流感杆菌、副流感杆菌和百日咳杆菌的作用比其他抗生素强，对立克 次体感染如斑疹伤寒也有效，但对革兰阳性球菌的作用不及青霉素和四环素。氯 霉素的主要不良反应是抑制骨髓造血机能。二是不可逆的再生障碍性贫血，虽然 少见，但死亡率高。氯霉素也可产生胃肠道反应和二重感染。新生儿与早产儿剂 量过大可发生循环衰竭（灰婴综合征）。2001 年初，因为有消费者在食用当地“家乐福 ”超市出售的冻虾仁引起过 敏反应，奥地利“绿色和平”组织紧急对本国商场内所有的水产品进行检测。结 果发现德国雷斯蒂克（RISTIC）公司生产的部分虾仁产品含有违禁物质一一氯霉 素。德国雷斯蒂克（RISTIC）公司决策层立即撤下公司所有在市场上出售的所有冻 虾仁产品，连夜查验所有来自中国、印度和越南的进口库存原料。检测结果表明： 中国出口的冻虾仁中含有 0 .2-5ppb 的氯霉素。2001 年以来，中国出口水产品频频被进口国检出氯霉素残留。欧盟于 2002 年做出禁止中国动物源性食品进口的决议，这就意味着我国将在欧盟市场丢掉 13 万吨的市场份额和造成 6 亿多美元的经济损失，使中国水产品对欧盟出口严 重受挫。药物残留已成为扩大水产品国际贸易的主要障碍。2002 年 8 月，中国 农业部、国家质检总局日前联合开展水产品药物残留专项整治活动，力求从源头 控制水产品中氯霉素及其他禁用药物的使用，进行从生产到市场全程质量监控。1、实验部分1.1 实验仪器与材料API3200LC-MS/MS串联质谱仪（美国AB公司），配LC-20A型高效液相色 谱仪（日本岛津公司）和电喷雾离子源。SIGMA 2-16K型冷冻离心机（Sartorius 公司），IKA T18 basic ULTRA-TURRAX型均质机，VS-100 VORTEX SHAKER 型振荡器，TTL-DL型氮吹仪，24-Port SPE Vacuum Manifold System固相萃取装 置，氯霉素标准品（中国药品生物制品检定所），乙酸乙酯（色谱纯），甲醇（色 谱纯），1.2 分析条件液相色谱条件：色谱柱：ZORBAX C18 5p m 3 X 150mm；流动相：甲 醇-水（70： 30）；流速：0.2ml；柱温：室温；进样量：20l质谱条件：离子源：ECI,扫描方式：负离子扫描：Curtain Gas： 30psi;Collision Gas： 4psi;Ion Source Gas1:35 psi; Ion Source Gas2:45 psi ；离子源温度 350C :监 测离子及碰撞能量： 320.6/152.0（-10eV）； 320.6/256.9（-10eV）； 320.6/194.2（-10eV） 1.3氯霉素标准储备液的制备：取氯霉素约10mg,置100ml量瓶中，用甲醇超声 溶解并稀释成浓度为100g/mLo -20C保存，有效期1年。再逐级用流动相稀 释至所需浓度。1.4样品的制备：取10000r/min匀浆1min试料5.00g，置50mL离心管中，加乙 腈5mL，4%氯化钠溶液5mL，涡旋振荡2min，4000r/min离心10min，取上清 液至另一 50mL离心管中，重复提取1 次,合并提取液。提取液中加正己烷5mL， 涡旋振荡1min，2000r/min离心10min，弃去上层液，重复1次。加水饱和乙酸 乙酯溶液5mL，涡旋振荡1min，2000r/min离心10min，将上层液转移到15mL 离心管中，重复提取1次，合并提取液氮气吹干，用流动相1mL溶解，备用。2 结果与讨论：2.1 LC-MS/MS 条件的选择选择不同的液相色谱柱及色谱质谱条件，最后确定出1.2的 LC-MS/MS 质谱 条件检测氯霉素。氯霉素标准品的多反应监测（MRM）及质谱图见图1、图2。应 用 1.2 中的色谱 - 质谱条件进行分析。通过保留时间以及各离子之间的丰度比值 可以定性确定氯霉素是否存在。2.2 标准曲线和检出限氯霉素在0.5 -10ng/ml范围内线性关系良好，取0.5g/L、1.0g/L、2.0 g/L、5.0g/L、10ng/ml的溶液，用1.2的LC-MS/MS条件进行测定，得到子离 子320.6/152.2的峰面积和浓度。以浓度（X, ng/m 1）对二级子离子321.1/277.2 峰面积（Y）进行线性分析，线性方程为Y=1.21e+0.04x+454（r=0.9996）。方法的 最低检出限为 0.04 g/kg（S/N3）。2.3 方法的准确度与精密度取经测定不含有氯霉素的样品5.00g9份，分别加入25ng/mL、50ng/ml、75ng/ml 的标准工作液100 1，按1.4方法操作，测得9份的回收率。实验结果见表1.表 1 鱼肉中氯霉素的添加回收率序号加入量测得量回收率（）平均回收率（）RSD (%)12.5081.81272.2522.5081.98178.9932.5081.93277.0345.0163.84576.6555.0163.98179.3776.932.9065.0163.76275.0077.5245.78976.9487.5245.81977.3497.5245.93278.842.4实际样品的测定 应用本方法测定了六个地区的鱼肉共180批，共有15批检出氯霉素，最大检出 量为5.91g/kg （阴性样品图见图3）。2.5 本方法适用于猪、鸡肝脏、肌肉，鱼和虾组织中氯霉素残留量的检测。 参考文献：1、 动物源食品中氯霉素残留量的测定农业部 781 号公告220062、中国兽药杂志2005年1 1月39卷1 1期3、检验检疫科学2005年Z1期4、中国有机质谱学第十二届全国学术大会论文集， 2003 年图1标准品MRM图图 2 标准品质谱图图 3 阴性样品图