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比格犬心脏组织取材1. 实验材料1.1 实验对象:比格犬1.2实验试剂:4C生理盐水、10%中性福尔马林等1.3 实验器材:解剖刀、刀片、锯子、肋骨剪、血管钳、拉钩、肾蒂钳、手 术剪、止血钳、电子秤、游标卡尺、弯盘、眼科剪、手术镊、冻存管、 液氮罐、广口瓶、标签、记号笔、泡沫盒、冰等。2. 实验方法2.1 取材前准备1)麻醉:术前12h禁食,但給予充足饮水,腹腔推注戊巴比妥钠30mg/kg 麻醉,麻醉后经尾静脉注入 100IU 肝素,使血液肝素化。然后将狗仰卧位固定于 操作台上。2)胸部备皮, 常规消毒, 铺无菌巾。2.2 取材1)自胸骨柄颈静脉切迹沿前正中线向下做一纵行切口至剑突,逐层解剖 浅层筋膜以及深层肌肉,锯断胸锁关节,剪断肋骨、剪开肋间组织,暴露心 脏;2)解剖上纵膈,包括上腔静脉、头臂静脉;主动脉弓及其分支;3)解剖中纵膈 剪开位于中纵膈内的心包,找到膈神经(膈神经与心包 膈血管相伴行,经肺根前方下降,继而贴心包侧壁下行至膈),于膈神经和心 包膈血管的稍前方个隔上1.5cm处做“U”形剪口,向上翻开心包前壁;暴露 心脏,注意心包的光泽度及心包内液体的情况,心脏的大小、外形、心外膜 情况。4)在心包内,近纤维性心包处剪断与心脏相连的大血管,将心脏取出5)取出心脏迅速放入4C生理盐水中停博,15-20s后将心脏取出,心脏 在4C生理盐水中自律性收缩并排除心腔内的血液,且还能降低心脏代谢, 防止缺血损伤。6)解剖心脏:注意检查右心房、右心室、三尖瓣、肺动脉瓣、腱索有否 病变;检查二尖瓣、主动脉瓣、腱索有无病变,左心房、左心室内壁有无出 血和感染;观察血管有无粥样硬化和血栓等。解剖左心房:分别在左肺静脉口和右肺经脉口稍内侧作垂指切口,然后 在两切口上端之间做横行切口,将左心房后壁翻向后下方,测量左房壁的厚 度;解剖左心室:沿前室间沟左侧0.5cm处自心尖至主动脉口稍下方,在 左心室前壁和下壁交界处自心尖至左房室口稍前方,分别做切口,然后在冠 状沟下方0.5cm处做切口,与上述两切口相连,将左心室外侧壁翻向左侧, 测量左心室壁的厚度;解剖右心室:用手触摸和确定室间隔前缘的位置,沿室间隔右侧 0.5cm处自心尖至肺动脉口稍下方,再沿冠状沟前方0.5cm处自前壁和下壁 交界处至肺动脉口稍下方分别作切口,然后,连接两纵行切口上端做横行切 口,将右室前壁翻向下方,测量右心室壁的厚度;解剖右心房:平上腔静脉口作横行切口,再沿右侧壁前缘做弧形切口,两切口至交界沟稍前方,将右心房右侧壁翻向后方,测量右心房壁的厚度;解剖房间隔和室间隔:沿心脏长轴自心尖向心底做四腔切面,在两半 心脏心脏观察房间隔及室间隔,并测量房间隔及室间隔的厚度。3. 注意事项1) 最好在活体狗上取材, 取出的心脏 迅速投入4 C生理盐水中停博 (15-20s)。脏器的上皮组织易变质,争取在死后半小时内取材完毕,否则免疫组化染色时会产生背景染色。2) 切取组织使用的刀、剪要求锋利,避免来回挫动组织。因动物组织质脆, 因此夹取组织时切勿 用力过重,以免挤压损伤组织。3) 取材用的刀剪应锋利,避免挤压组织;组织的切面应平整,组织切忌过 大、过厚,否则不仅浪费试剂,而且会造成固定、脱水不良而影响镜下观 察。4) PCR 组织准备时,应严格戴口罩、手套操作,实验器材应提高高温消毒 准备,以防 RNA 酶污染。特点:犬的心脏结构特点与人的大致相同,但狗的静脉窦只有前后腔静脉两个入口,后腔静 脉口腹侧有冠状窦口,左心房背侧壁上有肺静脉入口,它有 6 支肺静脉注入心脏,入口处位 于左心房后壁与左侧壁。
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