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第三讲DNA亲子鉴定基本步骤,1,亲子鉴定的应用范围刑事方面:(1)无名尸体(2)强奸致孕(3)拐卖儿童民事方面:(1)男方怀疑子女非亲生(2)移民;登记户口(3)财产继承(4)婴儿调错(5)寻亲(6)索取抚养费(7)试管婴儿(8)灾难善后(9)交通事故(撞人逃逸;司机换人),2,采集样本,电泳分型,提取DNA,PCR扩增,分析结果,接受委托,3,4,司法鉴定需提供(个人鉴定可不提供):委托单位委托书,被鉴定人有效身份证件原件(身份证、户口本或出生证明)司法鉴定或个人鉴定均需填写:亲子鉴定委托书内容包括:1.姓名性别年龄民族身份证号等2.照相情况:本中心照相();自带照片()张;委托人要求不照相(签名:)3.其它信息:(1)母亲肯定是孩子的生母(是否);(2)是否进行过异基因骨髓移植(是否);(3)是否有双胞胎兄弟姐妹(是否)。(4)是否要求保留样本(是否),接受委托,5,采集样本,血液:抽取静脉血1-2ml,抗凝。血痕:将血液滴在22cm2医用纱布或滤纸上,通风阴干,做好标记后,分别存放在纸制信封中,切勿密闭保存。口腔拭子:先用清水簌口,使用医用棉签,从口腔内壁颊粘膜处适当力度反复擦拭,取出棉签,通风阴干,做好标记后,分别存放在纸制信封中,切勿密闭保存。每人需提取4-5根棉签。胎儿羊水:(孕16-20周)本鉴定室开具委托书在指定医院采取,由工作人员取回或被鉴定人自己在正规医院采取,羊水需5-10ml。带毛囊毛发:将毛发用力连根拔下,毛发末端可看到清晰的毛囊,即毛发根部白色物质。,6,1.样本处理血液:溶血,去除红细胞,消除血红素的影响。血痕、口腔拭子:洗脱细胞胎儿羊水细胞,带毛囊毛发:分离细胞2.加入5Chelex-100200l,10mg/ml蛋白酶K2l,摇匀,56水浴30min。3.取出后在漩涡混匀器上震荡混匀5-10秒。4.沸水浴8min,震荡混匀5-10秒。5.8000r/min离心5min,4保存备用。(PCR时取上清作为模板),提取DNA,Chelex-100法,7,STR位点1:TPOX,STR表型:6-8,PCR扩增,8,Powerplex16PCR体系(huaxi),按加样先后顺序引物(16对):0.5lBuffer(含Mg2+,dNTPs)0.5l金牌Taq酶AmpliTaqGold:0.4l灭菌超纯水:3.13.35l(补足总体积)模板DNA:0.250.5l总体积:5l,9,电泳分型,聚丙烯酰胺凝胶电泳毛细管电泳,10,毛细管电泳图谱,11,1.两个以上位点不符合遗传规律:排除父子关系2.全部符合遗传规律或1-2个位点不符合遗传规律计算父权相对机会(RCP)=若RCP100%99.99,支持甲是乙的生物学父亲若RCP100%99.99,继续增加检测位点,直至排除或支持。,结果分析,12,13,14,15,16,相关知识1.母系亲缘鉴定:线粒体DNA测序2.父系亲缘鉴定:Y-STR(孔子,成吉思汗)3.萨达姆4.双胞胎5.奇美拉现象6.曹操墓7.养父8.伦理道德方面,17,建议忠告1.珍爱生命,远离网游2.按部就班,学好专业3.人际交往,增加阅历4.关注时事,目光长远,18,试题1.目前最常用的亲子鉴定技术是什么?简述这种方法的基本原理。2.简述DNA亲子鉴定的基本流程。3.哪些样本可用于DNA亲子鉴定?采集方法?注意事项?4.采用上述方法进行亲子鉴定,结果有没有可能达到100%认定父子关系?为什么?5.上述方法可否用于动物之间的亲缘关系鉴定?与人类的DNA亲子鉴定相比,有哪些困难?6.关于亲子鉴定或分子生物学实验,你有何疑问,想了解哪些方面的知识?7.班级,姓名,学号,手机号码,19,课件hougeshuaia密码:xuanxiu交作业:17日前交给本班学习委员或代表;17日(周四)上午或中午,第三实验楼304房间,交给侯老师或放在边台上。实验:下学期第10周左右,周末,短信联系。联系方式:侯志平;18970786152QQ号:465805250推荐老梁视频:包括天天五味评,老梁说天下等节目;,20,
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