资源描述
精心整理人肿瘤特异性抗原TSA分析检测ELISA试剂盒运用说明书本试剂仅供探究运用 标本：血清或血浆上海乔羽生物专业供给：运用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本肿瘤特异性抗原TSA含量。试验原理：TSA试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附试验ELISA.确定TSA浓度的标准品、未知浓度的样品参加微孔酶标板内进展检测。先将TSA和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，参加亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后参加底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中TSA的浓度呈比例关系。试剂盒内容及其配制试剂盒成份2-8保存96孔配置48孔配置配制96/48人份酶标板1块板96T半块板48T即用型塑料膜板盖1块半块即用型标准品：80ng/ml1瓶0.6ml1瓶0.3ml按说明书进展稀稀空白参照1瓶1.0ml1瓶0.5ml即用型标准品稀释缓冲液1瓶5ml1瓶2.5ml即用型生物素标记的抗TSA抗体1瓶6ml1瓶3.0ml即用型亲和链酶素-HRP1瓶10ml1瓶5.0ml即用型洗涤缓冲液1瓶20ml1瓶10ml按说明书进展稀释底物A1瓶6.0ml1瓶3.0ml即用型底物B1瓶6.0ml1瓶3.0ml即用型终止液1瓶6.0ml1瓶3.0ml即用型标本稀释液1瓶12ml1瓶6.0ml即用型自备材料1 蒸馏水。2 加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。3 振荡器及磁力搅拌器等。平安性1 幸免干脆接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。2 试验中不要吃喝、抽烟或运用化装品。3 不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。操作留意事项1 试剂应按标签说明书储存，运用前复原到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不行保存。2 试验中不用的板条应马上放回包装袋中，密封保存，以免变质。3 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前运用。4 运用一次性的吸头以免穿插污染，吸取终止液和底物A、B液时，幸免运用带金属局部的加样器。5 运用干净的塑料容器配置洗涤液。运用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。6 洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸干脆放入酶标反响孔中吸水。7 底物A应挥发，幸免长时间翻开盖子。底物B对光敏感，幸免长时间暴露于光下。幸免用手接触，有毒。试验完成后应马上读取OD值。8 参加试剂的依次应相同，以保证全部反响板孔温育的时间一样。9 遵照说明书中标明的时间、加液的量及依次进展温育操作。样品收集、处理及保存方法1、 血清-操作过程中幸免任何细胞刺激。运用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000g离心10分钟将血清和红细胞快速当心地分别。2、 血浆-EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000g离心30分钟去除颗粒。3、 细胞上清液-1000g离心10分钟去除颗粒和聚合物。4、 组织匀浆-将组织参加适量生理盐水捣碎。1000g离心10分钟，取上清液5、 保存假如样品不马上运用，应将其分成小局部-70 保存，幸免反复冷冻。尽可能的不要运用溶血或高血脂血。假如血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品匀称地充分解冻。试剂的打算1 标准品：标准品的系列稀释应在试验时打算，不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。稀释比例按下表中进展：80 ng/ml6号标准品原倍浓度不用稀释干脆参加50ul。40 ng/ml5号标准品100ul的原倍标准品参加100ul的标准品稀释液20 ng/ml4号标准品100ul的5号标准品参加100ul的标准品稀释液10 ng/ml3号标准品100ul的4号标准品参加100ul的标准品稀释液5.0 ng/ml2号标准品100ul的3号标准品参加100ul的标准品稀释液2.5 ng/ml1号标准品100ul的2号标准品参加100ul的标准品稀释液0 ng/ml空白参照原始浓度不用稀释干脆参加50ul。2 洗涤缓冲液50的稀释：蒸馏水50倍稀释。操作步骤1 运用前，将全部试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时参加大量的气泡，产生加样上的误差。2 依据待测样品数量加上标准品的数量确定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品依据自己的数量来定，能运用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1：1稀释后参加50ul于反响孔内。3 参加稀释好后的标准品50ul于反响孔、参加待测样品50ul于反响孔内。马上参加50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37温育1小时。4 甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。假如用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。5 每孔参加80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37温育30分钟。6 甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。假如用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。7 每孔参加底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37温育10分钟。幸免光照。8 取出酶标板，快速参加50ul终止液，参加终止液后应马上测定结果。9 在450nm波特长测定各孔的OD值。建议运用的试验方案标准品浓度ng/mlA8080样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品B4040样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品C2020样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品D1010样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品E5.05.0样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品F2.52.5样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品G00样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品H样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品局限6号标准品以上的结果为非线性的，依据此标准曲线无法得到准确的结果。肿瘤特异性抗原TSAELISA试剂盒性能1. 灵敏度：最小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回来与预期浓度相关系数R值为0.990。2. 特异性：不与其它细胞因子反响。3. 重复性：板内、板间变异系数均小于10%。结果 判 断 与 分 析1、仪器值：于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值2、以吸光度OD值为纵坐标Y，相应的TSA标准品浓度为横坐标X，做得相应的曲线，样品的TSA含量可依据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。3、检测值范围：0-80ng/ml4、敏感度： 0.1 ng/ml上海乔羽专业生产供给的试剂盒类产品有：双抗夹心ELISA检测、ELISA试剂盒、人ELISA试剂盒、酶联检测试剂盒、国产进口试剂、代测elisa试剂盒、ELISA检测试剂盒、大鼠ELISA试剂盒、小鼠ELISA试剂盒、凋亡相关因子试剂盒、白介素ELISA试剂盒、VIP ELISA kit等试验室产品，产品品质，质量保证。The performance of kit:1 sensitivity: minimum detection concentration is less than 1 standard. Linearity of dilution. Sample linear regression and the expected concentration correlation coefficient R value is 0.990.2: no specific reaction with other cytokines.3 repeatability: plate, plate between the coefficients of variation were less than 10%.Human type III procollagen amino terminal peptide ELISA kit steps:1 before use, all reagents and mixing. Do not allow liquid to produce a large number of bubbles, so as to avoid adding a large number of bubbles, resulting in the addition of the error.2 according to determine the number of sample number plus standard strip number. Each standard and blank hole is recommended to do the hole. Each sample can be made according to its own quantity, and can be used as a hole in the hole.3 diluted after standard 50ul in reaction hole, added to the sample 50 UL in reaction hole to be measured. Immediately joined the 50 UL antibody biotin. Cover the membrane plate, gently oscillating mixing, 37 degrees Celsius for 45 minutes.4 left hole liquid, each hole filled with washing liquid, oscillating 30 seconds off the washing liquid, pat dry with absorbent paper. Repeat this operation 4 times. If the washing machine with washing, washing times increased once.5 per hole adding chain affinity enzyme -HRP 100ul, gently oscillating mixing, 37 degrees 30 minutes incubation.6 left hole liquid, each hole filled with washing liquid, oscillating 30 seconds off the washing liquid, pat dry with absorbent paper. Repeat this operation 4 times. If the washing machine with washing, washing times increased once.7 per hole adding substrate A, B 50ul, gently oscillating mixing, 37 degrees 5 minutes incubation. Avoid light.8 remove ELISA plate, quickly add 50ul terminated liquid, adding the stop solution immediately after the determination results.9 od determination of each hole at the wavelength of 450nm.The result of judgment and analysis:1, instrument value: Yu Bo 450nm ELISA od read the hole on the instrument2, to the OD value as a vertical coordinate (y), corresponding ot standard concentrations as a horizontal coordinate (x), do have corresponding curve, sample ot content can be according to the OD value by standard curve conversion out corresponding concentration, multiplied by the dilution multiple; or with the standard concentration and the OD value calculated the regression equation of the standard curve, the sample OD value in the equation to calculate the sample concentration, multiplied by the dilution factor is the actual concentration of the sample.3, detection range: 0-100ng/ml4, sensitivity: 0.39ng/ml
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