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一、非特异性免疫应答二、特异性免疫应答三、小结四、免疫反应的验证第1页/共22页根据核蛋白和基质蛋白的抗原性,流感病毒可以分成甲(A)、乙(B)、丙(C)三种类型,其中甲型流感病毒根据其表面血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)分成许多亚型。第2页/共22页第3页/共22页 Logo一、非特异性免疫应答流感病毒感染的早期，首先引起 防御屏障 吞噬细胞 干扰素 NK细胞等为主的非特异性免疫第4页/共22页 Logo防御屏障作用 在感染的初期，呼吸道粘膜及其分泌物等构成第一道防御屏障,阻挡流感病毒的侵入，再通过纤毛的摆动，排除病毒，净化呼吸道。 当第一道防线不足以阻挡病毒的入侵时，病毒则侵入呼吸道粘膜下组织，此时局部的吞噬细胞吞噬病原体。与此同时，补体被激活，其活化产物C3b /C4b通过调理作用，增强吞噬细胞的吞噬能力。活化的吞噬细胞释放大量的促炎因子和炎症介质，进一步增强免疫应答和炎症反应。一、非特异性免疫应答第5页/共22页 Logo NK细胞是自然杀伤的淋巴细胞，在干扰素和细胞因子的诱导下， NK细胞即可活化，活化的NK细胞直接与病毒感染的细胞(靶细胞)接触，并通过释放穿孔素裂解靶细胞，达到抗病毒的作用。一、非特异性免疫应答干扰素的作用 干扰素( IFN)是病毒感染的细胞或其它活化细胞产生的一类分泌性蛋白，具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节等多种生物学活性。干扰素可通过诱导细胞合成抗病毒蛋白( AV P)，该蛋白抑制病毒的复制、限制病毒的扩散。在感染的起始阶段特异性免疫尚未形成之前，干扰素发挥重要的抗病毒作用。第6页/共22页 Logo二、特异性免疫应答 病毒感染属细胞内感染,所以细胞免疫的作用尤为突出。流感病毒侵入机体后，依靠血凝素(HA)吸附于宿主细胞表面，经过吞饮进入胞浆后在其内合成病毒蛋白而成为内源性抗原，此内源性抗原降解为抗原肽，然后与MHC-1类分子结合成抗原肽MHC-1类复合物，然后表达于细胞膜上，供CD8+T细胞识别。细胞免疫应答第7页/共22页 Logo二、特异性免疫应答 该细胞称抗原提呈细胞( APC) ；APC膜上的抗原肽 MHC-1类复合物与T细胞表面的抗原受体(TCR)特异性结合，使T细胞活化、增殖、分化为细胞毒性T细胞(CT L)。CT L可通过抗原受体识别流感病毒感染的(靶细胞)细胞，然后释放穿孔素和颗粒酶等物质，攻击和杀伤靶细胞，达到清除或释放在细胞内复制的病毒体，从而在抗体的配合下清除病毒。CTL还通过分泌IFN、TN F等细胞因子发挥抗病毒作用。CD4+ T 细胞受流感病毒刺激后被活化、增殖、分化为效应性Th 1细胞，并释放多种细胞因子，诱发炎症反应，促进CTL的增殖和分化，在抗病毒感染中起重要作用。细胞免疫应答第8页/共22页 Logo体液免疫 体液免疫主要作用于细胞外游离的病毒。流感病毒侵入机体后，B细胞膜上的抗原受体(BCR)与其特异性结合，成为B细胞活化的信号，使B细胞活化、增殖、分化为浆细胞，浆细胞在流感病毒抗原的刺激下合成并分泌具有抗病毒效应的抗体。二、特异性免疫应答第9页/共22页 Logo 病毒中和抗体: 该抗体能与细胞外游离的病毒结合，封闭其细胞受体结合的病毒抗原表位或改变病毒表面抗原构型，阻止病毒吸附、侵入易感细胞，但不能直接杀灭病毒。 血凝抑制抗体:表面含有血凝素的流感病毒可刺激机体产生血凝抑制抗体，该抗体能中和病毒的感染性。 补体结合抗体: 此类抗体不能中和病毒感染性，但可通过调理作用增强巨噬细胞的吞噬作用。二、特异性免疫应答体液免疫中的抗体：第10页/共22页 Logo 总之，机体抗流感病毒免疫应答由非特异性免疫应答和特异性免疫应答共同来完成。非特异性免疫先于特异性免疫发生，主要通过屏障结构、非特异性免疫细胞(吞噬细胞、NK细胞)和体液免疫分子(补体、干扰素)等发挥抗病毒作用。特异性免疫是建立在非特异性免疫的基础上，受流感病毒抗原的诱导而发生。但特异性免疫的作用更强烈、更有效、更具有针对性。主要通过细胞免疫和体液免疫发挥特异性抗流感病毒作用。三、小结第11页/共22页 Logo 流感病毒多种多样，但只要感染过同一种病毒发生了感冒，之后再感染同一类病毒时就不会感冒了。这是因为免疫记忆。用同一抗原再次免疫时，可引起比初次更强的抗体产生，称之为再次免疫应答或免疫记忆，无论在体液免疫或细胞免疫均可发生免疫记忆现象。在体液免疫时，对TD抗原的再次应答可表现为抗体滴度明显上升，免疫球蛋白类别可由IgM转换为IgG，而且抗体亲和力增强。提示再次应答不仅发生抗体量的变化，而且也发生了质的变化。实验证明，免疫记忆的基础是免疫记忆细胞的产生。三、小结第12页/共22页 Logo（1）IgA的检测原理：病毒首先侵袭呼吸道黏膜， 而黏膜表面的分泌性 IgA 可以有选择的转移到黏膜表面， 能够结合病毒防止其粘附和进入。因此，只需检测IgA 的变化即可证实是否为免疫反应。四、免疫反应的验证第13页/共22页 Logo方法： 将小鼠随机分 2 组，设病毒组和正常组。 在乙醚轻度麻醉下， 滴鼻感染 15 滴LD 50 流感病毒液，感染后 5 天， 杀剖小鼠， 称体重和肺重测定肺指数。采血分离血清， 收集鼻咽冲洗液、 支气管肺泡灌洗液、 肠道冲洗液进行 ELISA法检测 IgA 含量。四、免疫反应的验证第14页/共22页四、免疫反应的验证（2）外周血IL-12水平的检测原理：白细胞介素白细胞介素12又称又称NK细胞刺激因子细胞刺激因子(NKSF)。IL-12主要由单主要由单核巨唾细胞、核巨唾细胞、NK细胞和细胞和B细胞分泌细胞分泌,主要生物学活性有主要生物学活性有:促进激活促进激活的的T细胞和细胞和NK细胞的增殖细胞的增殖;增强增强Th细胞、细胞、NK细胞、细胞、LAK细胞及细胞及CTL的生物学活性。诱导的生物学活性。诱导Tn向向Th1分化分化,并促进并促进Th1的增殖和发育的增殖和发育,与与IL - 4共同调节共同调节Th1/Th2平衡平衡,调节机体的免疫应答。调节机体的免疫应答。第15页/共22页 Logo实验对象：1、健康对照组：收集XX医院健康体检者20名2、流感症状组：收集XX医院明确诊断的流感症状患者26名；经rRT-PCR方法确定为非甲型HlNl流感病毒感染3、轻症甲流组：收集XX医院诊断明确甲型H1N1流感病毒感染住院患者29名;经rRT-PCR方法确诊为甲型 H1N1病毒感染，症状较轻4、重症甲流组：收集XX医院明确诊断甲型H1N1病毒感染住院患者名13名;经rRT-PCR方法确定为甲型H1N1病毒感染,并且症状较重四、免疫反应的验证第16页/共22页实验过程：实验前准备:板条包被ELASA法测定检测物浓度四、免疫反应的验证第17页/共22页 结论：流感病毒感染呼吸道后,通过呼吸器官上皮细胞感染其下方树突状细胞和巨唾细胞并且在这些细胞中传播,树突状细胞和巨嗟细胞可以分秘抗病毒的细胞因子例如TNF-、IL-12、IL-18等来协调有效的先天免疫反应来对抗病毒。四、免疫反应的验证第18页/共22页 Logo（3）外周血T淋巴细胞亚群及B、NK细胞百分率的测定步骤：1. 标本采集及制备 2. 染色及固定细胞 3. 流式细胞仪上T淋巴细胞亚群及B、NK的检测及分析 四、免疫反应的验证第19页/共22页 结论：正常情况下CD4+T/CD8+T比值维持动态平衡,保持机体免疫机能稳定,是细胞免疫功能状态的重要指标。甲型H1N1流感病毒可能是通过引起外周血中B、CD4+T、CD8+T细胞的减少,而影响机体的体液免疫和细胞免疫,并最终影响机体对病毒的适应性免疫反应。四、免疫反应的验证第20页/共22页第21页/共22页感谢您的观看！第22页/共22页
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