黄曲霉毒素B1(AFB1)ELISA检测试剂盒说明书.doc

黄曲霉毒素B1（AFB1）ELISA检测试剂盒说明书一、概要黄曲霉毒素是一类真菌（如黄曲霉和寄生曲霉）的有毒的代谢产物，它们具有很强的致癌性，主要存在于谷物、坚果、棉籽以及一些和人类血液，动物饲料相关的产品中。其中黄曲霉毒素B1（AFB1）的毒性、致癌性、污染频率均居于首位。而使用黄曲霉毒素B1 ELISA试剂盒则能够快速而准确的分析样品中黄曲霉毒素B1残留。参考国家标准GB/T 5009.22-2003。黄曲霉毒素B1检测试剂盒是应用ELISA技术研发的新一代真菌毒素检测产品，操作时间短于60min，能最大限度地减少操作误差和工作强度。二、试验原理黄曲霉毒素B1检测试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在酶标板微孔条上预包被黄曲霉毒素B1抗原，样本中黄曲霉毒素B1和此抗原竞争黄曲霉毒素B1抗体，同时黄曲霉毒素B1抗体与酶标二抗相结合，经TMB底物显色，样本吸光值与其含有的黄曲霉毒素B1成负相关，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样品中黄曲霉毒素B1的含量。三、适用范围黄曲霉毒素B1检测试剂盒可定性、定量检测玉米、大米、麦类、豆类、花生、花生酱、饲料、食用油等样本中的黄曲霉毒素B1。四、测定前应须知：1、使用之前将所有试剂和需用板条的温度回升至室温（2025）。2、使用之后立即将所有试剂放回28。3、在ELISA分析中的再现性，很大程度上取决于洗板的一致性，正确的洗板操作是ELISA测定程序中的要点。4、在所有恒温孵育过程中，避免光线照射，用盖板膜封住微孔板。5、黄曲霉毒素B1可致癌，应戴手套操作。五、操作步骤：1、将所需试剂从冷藏环境中取出，置于室温（2025）平衡30min以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。2、取出需要数量的微孔板，将不用的微孔板放进原锡箔袋中并且与提供的干燥剂一起重新密封，保存于28。不要冷冻。3、洗涤工作液在使用前也需回温。4、编号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。5、加标准品/样本：加标准品/样本50ml到对应的微孔中，加入AFB1酶标物50ml/孔，再加入AFB1抗试剂50ml/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置室温避光环境中反应30min。6、洗板：小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，用洗涤工作液300ml/孔，充分洗涤5次，每次间隔30s，用吸水纸拍干（拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头戳破）。7、显色：加入底物液A液50ml/孔，再加底物液B液50ml/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置室温避光环境反应1520min。8、测定：加入终止液50ml/孔，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm处（建议用双波长450/630nm检测，请在5min内读完数据），测定每孔OD值。(若无酶标仪，则不加终止液用目测法可进行判定)。六、检测方法灵敏度、准确度、精密度试剂盒灵敏度：0.1ppb回收率：花生、玉米等谷物：9015%曲奇饼干：9015%蜂蜜蛋糕：8515%饲料：8515%食用油：9015%酱油：8515%醋：9015%葡萄酒：9015%干黄酱：80%10%火锅底料：95%10%精密度：试剂盒的变异系数均小于10%七、注意事项1、室温低于20或试剂及样本没有回到室温（2025）会导致所有标准的OD值偏低。2、在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。3、每加一种试剂前需将其摇匀。4、反应终止液为2M硫酸，避免接触皮肤。5、不要使用过了有效日期的试剂盒；也不要使用过了有效期的试剂盒中的任何试剂，掺杂使用过了有效期的试剂盒会引起灵敏度的降低；不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。6、储存条件 保存试剂盒于28，不要冷冻，将不用的酶标板微孔板放进自封袋重新密封。标准物质和无色的发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。7、试剂变质的迹象发色试剂有任何颜色表明发色剂变质，应当弃之。0标准的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm0.5）时，表示试剂可能变质。8、在加入底物液A液和底物液B液后，一般显色时间为1520min即可。若颜色较浅，可延长反应时间到30min（或更长）。反之，则减短反应时间。9、浓缩洗涤液如有结晶属正常现象，请加热溶解后使用。10、该试剂盒最佳反应温度为25，温度过高或过低将导致检测吸光度值和灵敏度发生变化八、贮藏条件及保存期贮藏条件：保存试剂盒于28。保存期：该产品有效期为12个月。