对羟基苯甲酸酯类混合物的反相高效液相色谱分析.ppt

实验103对羟基苯甲酸酯类混合物的反相高效液相色谱分析 103 1实验目的 1 了解高效液相色谱仪构造 2 了解高效液相色谱分析操作 3 学习高效液相色谱保留值定性方法和归一化法定量方法 103 2实验原理 对羟基苯甲酸酯类混合物中含有强极性化合物对羟基苯甲酸甲酯 对羟基苯甲酸乙酯 对羟基苯甲酸丙酯和对羟基苯甲酸丁酯 可采用反相液相色谱进行分析 选用非极性的C 18烷基键合相作固定相 甲醇的水溶液作流动相 由于在一定的实验条件下 酯类各组分的保留值保持恒定 因此在同样条件下 将测得的未知物的各组分保留时间 与已知纯酯类备组分的保留时间进行对照 即可确定未知物中各组分存在与否 本实验采用归一化法定量 归一化法使用条件及计算公式 与气相色谱分析法相同 而对羟基苯甲酸酯类混合物属同系物 具有相同的生色团和助色团 因此它们在紫外光度检测器上具有相近的校正因子 可用下式 103 3实验条件 溶液的配制 1 标准贮备液 2 标准操作液 3 未知样品 混匀备用 色谱条件 1 色谱柱 2 流动相 3 检测器 4 记录仪 5 进样量 长25cm 内径3mm装填C 18烷基键合相粒度为10 m的固定相 甲醇 水 55 45流量1mL min 1 紫外光度检测器检测波长254nm 量程5mV走纸速度480mm h 3 L 103 4实验步骤 即可进样 103 5实验数据记录与处理 1 记录实验条件2 测量四种对羟基苯甲酸酯化合物标准溶液色谱峰的保留时间tR 并填于下表中 3 测量未知试样色谱图上各组分的峰高h 半峰宽Y1 2 计算各组分的峰面积A及其含量wi 并将数据列于下表中 103 6注意事项 1 严格按照规定使用仪器 防止因错误操作造成仪器损坏 2 流动相使用前应用微滤膜过滤并充分脱气 3 样品溶液若不清澈透明 应用微滤膜过滤 4 实验结束后 应冲洗色谱柱30min以上 103 7问题讨论 1 色谱定量分析采用归一化法定量有何优缺点 本实验为什么可以不用相对质量校正因子 2 本实验为什么采用反相液相色谱 试说明理由 3 高效液相色谱分析的流动相为何要脱气 不脱气对实验有何妨碍 103 8参考答案 1 色谱定量分析采用归一化法定量有何优缺点 本实验为什么可以不用相对质量校正因子 答 归一化法的优点是 简便 准确 当操作条件如进样量 流速等变化时 对结果影响小 但若试样中的组分不能全部出峰 则不能应用此法 本实验样品为同系物 若各组分的相对校正因子值相近 所以可以略去 2 本实验为什么采用反相液相色谱 试说明理由 答 流动相极性大于固定相极性的色谱称为反相色谱 反之称为正相色谱 本实验所用样品均为极性化合物 依据 相似相溶 原则 宜选用极性固定相 非极性的流动相 即选择正相色谱 但是 高效液相色谱的可贵之处是它的分离效能很高 对于极性化合物往往用反相色谱也能实现很好的分离 而且 反相色谱的流动相通常使用甲醇和水 价格远低于正相色谱通常使用的正己烷 3 高效液相色谱分析的流动相为何要脱气 不脱气对实验有何妨碍 答 流动相应该先脱气 以免在泵内产生气泡 影响流量的稳定性 如果有大量气泡 泵就无法正常工作 另外 如果在检测器中产生气泡 会造成基线波动或异常出峰