呼吸道感染常见病原菌ppt课件.ppt

社区获得性呼吸道感染的病原学 社区获得性呼吸道感染常见病原菌 其他致病菌包括 卡它莫拉菌 GNB 衣原体等 AdaptedfromWoodheadM JAntimicrobChemother 1994 34 supplA 85 92 以色列CAP的病因调查 1991 92 346例 阳性 Thorax1999 51 179 以色列不同年龄组CAP的病因调查 第一位第二位17 44岁肺炎支原体肺炎链球菌45 54岁肺炎链球菌肺炎支原体 55岁肺炎链球菌肺炎衣原体 CAP病原学诊断 我国苛养菌分离现状未建立标本送检指南 送检标本与接种时间相隔太长 不具备苛养菌分离的培养基 无CO2培养环境 不能辨别菌落 无鉴别试剂 苛养菌分离率低 污染菌影响药敏结果 迄今国内无可信的CAP病原学流行病学资料 标本采集痰标本 采集应在抗菌治疗前 清晨清水漱口三次 深咳痰 无痰者用高渗盐水吸入导痰 意识障碍者可经鼻或口腔吸痰 或经人工气道吸痰 CAP病原学诊断 CAP病原学诊断 标本采集咽试子应用无菌湿棉签取 即时送检 实验室应即时接种血琼脂和巧克力琼脂 含抗菌素 置5 10 CO2气体环境 标本质量评价 直接涂片镜检 鳞状上皮细胞25 低倍视野鳞状上皮细胞 白细胞 1 2 5 细胞学筛选标本的必要性 细胞学筛选标本的必要性 标本处理 痰标本用无菌盐水约20ML漂洗2次用等量sputosol作用20分钟 溶解粘痰用四区划线法分别接种血平板 巧克力平板和麦康凯平板放置CO2培养箱孵育从采集标本到接种平板应短于2小时 报告方式 痰培养以半定量形式记录菌量 即1 2 3 4 未发现致病菌生长时 培养48小时出报告 以免部分致病菌漏检 半定量培养结果的临床意义 CAP病原学诊断 检测结果 细菌 非典型病原体 判定1 确定 血或胸液培养到病原菌 纤支镜或人工气道吸取标本 细菌 105cfu ml 2 BALF 细菌 104cfu ml 1 2 PSB PBALF 细菌 103cfu ml 1 肺炎衣原体抗体滴度升高 4倍 LP直接荧光抗体阳性 抗体滴度升高 CAP病原学诊断 检测结果判定2 有意义 合格痰标本培养细菌 3 细菌少量生长 但与镜检结果一致 肺球 流感 卡他莫拉菌 入院3天内多次培养到相同细菌 血清肺炎衣原体抗体升高 1 32 LP抗体升高 1 320 ELISA 或间接荧光抗体 1 512 CAP病原学诊断 检测结果判定3 无意义 痰培养到上呼吸道正常菌 草链 表葡 非致病奈瑟菌 类白喉杆菌等 多种病原菌少量生长 不符上述 确定 和 有意义 条款 苛养菌 苛养菌 对营养要求苛刻 在普通培养基上不生长或难以生长的一类细菌 临床常见的有 G 球菌 肺炎链球菌G 球菌 卡他布兰汉菌 脑膜炎奈瑟菌 淋病奈瑟菌G 杆菌 嗜血杆菌 鲍特菌 嗜血杆菌属 嗜血杆菌属 Haemophilus 细菌为一类无动力 无芽孢的革兰阴性短小杆菌常呈球杆状 丝状等多形态 分类 隶属巴斯德菌科 嗜血杆菌属 本菌属包括16个菌种 其中9个与临床有关 临床意义 嗜血杆菌存在于正常人上呼吸道 可引起上呼吸道 泌尿道感染及脑膜炎 菌血症等感染性疾病 临床意义 流感嗜血杆菌 常引起咽炎 中耳炎 肺炎 鼻炎 脑膜炎 心包炎 骨髓炎等 主要致病物质 内毒素 荚膜 菌毛和酶类 临床意义 副流感嗜血杆菌 咽炎和心内膜炎 溶血嗜血杆菌 儿童上呼吸道感染 埃及嗜血杆菌 急性眼结膜炎 副嗜沫嗜血杆菌 心内膜炎 肺炎 脑膜炎 杜克嗜血杆菌 软下疳 培养特性 需氧或兼性厌氧最适生长温度 35 PH7 6 7 8生长因子 X V5 10 CO2 嗜血杆菌对生长因子的需求 菌种X因子V因子溶血性流感嗜血杆菌 副流感嗜血杆菌 埃及嗜血杆菌 杜克嗜血杆菌 嗜沫嗜血杆菌 溶血性嗜血杆菌 微生物特性 流感嗜血杆菌根据其对吲哚 脲酶及鸟氨酸试验的反应不同可分为8个生物型 副流感嗜血杆菌亦可分为8个生物型流感嗜血杆菌根据荚膜多糖抗原不同可分为a b c d e f6个血清型 其中b型致病性最强 f次之 微生物特性 流感嗜血杆菌含有不耐热的S抗原和耐热R抗原 流感嗜血杆菌根据菌落特征可分为三种类型 粘液型 M 光滑型 S 粗糙型 R 微生物检验 标本采集根据感染部位不同采集标本 如鼻咽试子 痰液 脑脊液 脓液等 避免干燥 及时送检 检验程序 检验方法 1 直接镜检 痰液 脓液 鼻咽分泌物等标本可直接涂片 脑脊液离心取沉淀物涂片 革兰染色镜检 如查见革兰阴性短小杆菌 呈多形性 结合临床症状 作初步诊断 2 分离培养 将血液 脑脊液增菌培养后 转种巧克力琼脂和血琼脂培养基 其他标本可直接划线接种于巧克力琼脂和血琼脂培养基 经35 培养18 24h 根据菌落特征 菌体形态 溶血情况 卫星试验 X和V因子需求试验定种 再作生化试验和荚膜肿胀试验分型 卫星试验 挑取可疑菌落 密集划线接种于兔血琼脂平板和M H琼脂平板上 再将金黄色葡萄球菌点种于培养基上 35 培养18 24h 如见金黄色葡萄球菌周围菌落较大 而远处菌落较小 即卫星试验阳性 3 鉴定要点 本菌为革兰阴性短小杆菌 呈球杆状 逗点状 丝状等多形态性 在巧克力琼脂平板上为灰白色 中等大小 湿润的菌落 流感嗜血杆菌血平板卫星试验阳性 M H琼脂平板卫星试验阴性 以X V和X V因子纸片贴于接种细菌的M H琼脂平板上 仅在X V因子周围生长为流感嗜血杆菌 荚膜肿胀试验 取一定浓度菌悬液 滴于载玻片上 再依次滴加a f流感嗜血杆菌抗血清混匀 加少量美蓝液混和后覆盖片 室温10min后 用油镜观察 如查见菌体呈蓝色 周围绕有界限分明未染色的膨大空白圈为阳性 此法可直接检查标本中细菌 作早期诊断 药敏试验 选用专用培养基HTM HaemophilusTestMediumBase 标准菌株 ATCC49247ATCC10211 结果解释 流感嗜血杆菌需常规检测 内酰胺酶 阳性提示对青霉素 氨苄西林 阿莫西林耐药 内酰胺酶检测 头孢硝噻吩 Nitrocefin 肺炎链球菌 菌落形态 灰色 圆形 扁平 0 5 1 0 的菌落 周围有草绿色溶血环 菌体形态 革兰阳性球菌 矛尖状 成双排列 宽端相对 尖端向外 无鞭毛 无芽胞 在机体内或含血清的培养基中可形成荚膜 Optochin敏感试验 阳性胆盐溶菌试验 阳性 美国CAP的流行病学调查Community acquiredpneumoniaincidencestudy CAPIS 例数 10万人 ArchInternMed1997 157 1079 美国CAP的流行病学调查Community acquiredpneumoniaincidencestudy CAPIS ArchInternMed1997 157 1079 肺炎链球菌是不明原因CAP的首要致病菌 1993年1月 1994年3月西班牙 纳入109例急诊CAP常规检查手段 血培养两次就诊当天及30天后取血查病毒及不典型致病菌抗体痰涂片及痰培养 肺炎链球菌是不明原因CAP的首要致病菌 胸腔细针抽吸术 细菌培养 抗原检测肺炎链球菌 流感嗜血杆菌PCR检测肺炎链球菌 支原体 衣原体 军团菌 卡氏肺囊虫 肺炎链球菌是不明原因CAP的首要致病菌 常规检查手段 54个病人确定病原菌 阳性率50 胸腔细针抽吸术 在54个已知病因者 22个得到证实另55个未明病因者 36个得以明确 其中18例为肺炎链球菌 1992 2001年青霉素 红霉素耐药的肺炎链球菌的发展趋势 Alexander监测 国家青霉素I R红霉素r法国 R92 n 169 7 725 4 R01 n 165 35 8 56 4 德国 R92 n 104 01 R01 n 147 2 47 7意大利 R92 n 70 24 91 4 R01 n 103 30 235 9 英国 R92 n 166 5 62 4 R01 n 87 20 7 11 5 美国 R92 n 125 5 66 4 R01 n 87 20 7 28 8 耐青霉素的肺炎链球菌 PRSP 1ug苯唑西林纸片筛选耐青霉素的肺炎链球菌 PRSP 抑菌圈 20mm为敏感 表示对其他相关的 内酰胺类抗生素敏感抑菌圈 19mm作MIC 卡他布兰汉菌 分类 莫拉菌属布兰汉亚属 该亚属包括卡他布兰汉菌 猪布兰汉菌 羊布兰汉菌 兔布兰汉菌 卡他布兰汉菌 菌落形态 灰白色 光滑 圆凸 不透明 不溶血的菌落 有特殊的手感 菌体形态 革兰阴性双球菌 呈咖啡豆形 无芽胞 无荚膜 无鞭毛 生化反应 氧化酶 触酶 DNA酶均阳性 不分解任何糖类 还原硝酸盐 院内感染和社区获得性呼吸道感染的区别 标本来自不同病房 病原菌种类不同 耐药的情况不同 菌种保存 制备脱脂牛奶将新鲜牛奶煮沸除去表面油脂 用脱脂棉过滤并3000r min离心15min 除去上层油脂 使用脱脂奶粉 可直接配成20 乳液 高压灭菌 无菌分装 谢谢