口蹄疫病毒A型抗体快速检测方法 镧系荧光免疫层析法

ICS 11.220B 41DB21辽 宁 省 地 方 标 准DB XX/ XXXXXXXXX代替 DB 口蹄疫病毒 A 型抗体快速检测方法 镧系荧光免疫层析法The Rapid Detection Methods for Antibodies to Foot and Mouth Disease Virus Type A  Lanthanide Fluorescence Immunochromatographic Assay点击此处添加与国际标准一致性程度的标识（报批稿）（本稿完成日期：2018 年 8 月）XXXX - XX - XX 发布 XXXX - XX - XX 实施辽 宁 省 质 量 技 术 监 督 局    发 布DBXX/ XXXXXXXXXI目 次前言 II1 范围 12 规范性引用文件 13 原理 14 仪器与试剂 14.1 仪器 14.2 试剂 15 样品采集与处理 25.1 样品的采集 25.2 样品的处理 25.3 样品的贮存 26 检测方法 26.1 样品稀释 26.2 加样 26.3 检测 26.4 有效性判定 27 结果判定 2附录 A（规范性附录） 样品稀释液的配置 .4DBXX/ XXXXXXXXXII前 言本标准按照GB/T 1.1给出的规则起草。本标准由辽宁省畜牧兽医局提出。本标准由辽宁省畜牧兽医局归口。本标准起草单位：辽宁省动物医学研究院、辽宁省动物疫病预防控制中心。本标准主要起草人：周晨阳、申贯男、杨本勇、杨洺扬、梁乔、李蓉、张健、孙世宇。   DBXX/ XXXXXXXXX1口蹄疫病毒 A 型抗体快速检测方法 镧系荧光免疫层析法1 范围本标准规定了以镧系荧光免疫层析法检测牛、羊、猪血清中的口蹄疫病毒A型抗体的检测方法。本标准适用于牛、羊、猪血清中口蹄疫病毒A型抗体水平的快速检测。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法NY/T 541 兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范3 原理采用免疫夹心法和镧系荧光免疫层析法相结合技术，检测动物血清样本中的口蹄疫病毒A型抗体。将镧系纳米荧光微球作荧光示踪物标记口蹄疫病毒A型重组抗原，血清样本抗体与镧系纳米荧光微球标记的口蹄疫病毒A型重组抗原接触形成复合物后，继续与硝酸纤维素膜上检测线包被的口蹄疫病毒A型重组抗原发生反应，形成抗原-抗体-荧光微球标记抗原免疫复合物，最后用荧光检测仪读取检测卡上的荧光信号。4 仪器与试剂4.1 仪器4.1.1 镧系荧光检测仪：激发波长为 400 nm20 nm，检测波长为 615 nm10 nm。4.1.2 单道可调移液器：10 L 100 L，0.5 L 10 L。4.1.3 分析天平：感量 0.0001 g。4.1.4 离心机。4.1.5 冰箱：2 8 ，-20 。4.2 试剂4.2.1 样品稀释液：见附录 A。4.2.2 口蹄疫病毒 A 型抗体荧光免疫试剂卡：镧系荧光微球标记的口蹄疫病毒 A 型重组抗原和鸡 IgY埋置在标记物垫内；硝酸纤维膜上的测试线（T）和参考线（C）分别包被口蹄疫病毒 A 型重组抗原和DBXX/ XXXXXXXXX2羊抗鸡 IgY 的 IgG。（见图 1）  图 1 口蹄疫病毒 A 型抗体镧系荧光免疫层析卡示意图5 样品采集与处理5.1 样品的采集应按照NY/T 541中的规定进行，并做好安全防护。按常规方法用干燥、洁净的离心管或适当容器采集3 mL5 mL血液。5.2 样品的处理血液样本用离心机3000 r/min离心3 min，分离血清，血清量不少于500 L。5.3 样品的贮存血清样本在2 8 冷藏可保存24 h，如需长期保存应置-20 或-80 。6 检测方法6.1 样品稀释将待检血清样本用样品稀释液进行 50 倍稀释。6.2 加样将镧系荧光免疫层析卡置于干净平坦的台面上，用移液器吸取已稀释好的待检样本垂直滴加 80 L 于加样孔内。6.3 检测避光层析 15 min20 min，30 min 内用镧系荧光检测仪检测，读取效价。6.4 有效性判定控制线（C线）检测到荧光信号，实验结果有效。7 结果判定DBXX/ XXXXXXXXX3效价128 时，判为阳性；效价64 时，判为阴性；效价在 64128 之间时，判为可疑。_DBXX/ XXXXXXXXX4A A附 录 A（规范性附录）样品稀释液的配置A.1 称取 Na 2HPO412H2O                4.02 gA.2 称取 NaH 2PO42H2O                0.66 g A.3 称取 NAN 3                    1.5 g A.4 称取硫酸葡聚糖（MW:40000）           1.5 gA.5 量取Tween-201 L                3.75 mL A.6 800 mL双蒸水放入1 L烧杯。A.7 A.1、A.2、A.3同时放入A.6烧杯中搅拌溶化。A.8 A.4 加入A.7烧杯中混匀。A.9 A.5 加入A.8烧杯中混匀。A.10 用双蒸水将A.9烧杯溶液定容至1 L。A.11 混匀后分装，置4 备用。_