饲料中香兰素、乙基香兰素、肉桂醛、桃醛、乙酸异戊酯 、γ—壬内酯、肉桂酸甲酯、乙基麦芽酚、大茴香脑的含量测定 气相色谱法

ICS 65.120B 46DB 21辽 宁 省 地 方 标 准DB 21/ XXXXXXXXX饲料中香兰素、乙基香兰素、肉桂醛、桃醛、乙酸异戊酯 、壬内酯、肉桂酸甲酯、乙基麦芽酚、大茴香脑的含量测定 气相色谱法      Detection of vanillin , ethyl vanillin, cinnamaldehyde, peach aldehyde ,isoamyl acetate, gamma-nonanolactone , methyl cinnamate ，ethylmaltoland anethole in feedstuffs by gas chromatography（报批稿）XXXX - XX - XX 发布 XXXX - XX - XX 实施辽 宁 省 质 量 技 术 监 督 局   发 布DBXX/ XXXXXXXXXI前  言本标准按照 GB/T 1.1-2009 和 GB/T 20001.4-2015 给出的规则起草。本标准由辽宁省畜牧兽医局提出并归口。本标准起草单位：辽宁省兽药饲料畜产品质量安全检测中心。本标准主要起草人：郭国贤、张明、张秀芹、王丽娜、刘雪红、张雪娇、苗翠、兰雨濛、侯广正。DBXX/ XXXXXXXXX1饲料中香兰素、乙基香兰素、肉桂醛、桃醛、乙酸异戊酯、壬内酯、肉桂酸甲酯、乙基麦芽酚、大茴香脑的含量测定 气相色谱法1 范围本标准规定了配合饲料、复合预混合饲料、浓缩饲料、精料补充料中香兰素、乙基香兰素、肉桂醛、桃醛、乙酸异戊酯、壬内酯、肉桂酸甲酯、乙基麦芽酚、大茴香脑的气相色谱测定方法。本标准适用于配合饲料、复合预混合饲料、浓缩饲料、精料补充料中香兰素、乙基香兰素、肉桂醛、桃醛、乙酸异戊酯、壬内酯、肉桂酸甲酯、乙基麦芽酚、大茴香脑的含量测定。本方法的检出限为20 mg/kg，定量限为50 mg/kg。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。GB/T 14699.1（ISO 6497 IDT） 饲料 采样GB/T 20195 动物饲料 试样的制备3 原理试样中香兰素、乙基香兰素、肉桂醛、桃醛、乙酸异戊酯、壬内酯、肉桂酸甲酯、乙基麦芽酚、大茴香脑用无水乙醇超声提取，提取液过滤膜后以氮气作为载气，使用气相色谱氢火焰检测器测定，外标定量法。4 试剂或材料除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂。4.1 化学试剂：无水乙醇。4.2 标准品：香兰素、乙基香兰素、肉桂醛、桃醛、乙酸异戊酯、壬内酯、肉桂酸甲酯、乙基麦芽酚、大茴香脑纯度均98.5%。4.3 混合标准贮备溶液：分别称取香兰素、乙基香兰素、肉桂醛、桃醛、乙酸异戊酯、壬内酯、肉桂酸甲酯、乙基麦芽酚、大茴香脑标准品 100 mg（精确至 0.1mg），置于同一棕色 10 mL 容量瓶中，用无水乙醇（4.1）溶解并定容，配成浓度为 10 mg/mL 的标准贮备溶液。 28 密封保存，有效期为3 个月。4.4 混合标准中间溶液：准确移取香兰素、乙基香兰素、肉桂醛、桃醛、乙酸异戊酯、壬内酯、肉桂酸甲酯、乙基麦芽酚、大茴香脑混合标准贮备溶液（4.3）1 mL 置于 10 mL 棕色容量瓶中，用无水乙醇（4.1）定容至刻度。该溶液的浓度为 1mg/mL。2 8密封保存，有效期为 1 个月。DBXX/ XXXXXXXXX24.5 混合标准工作溶液：准确移取香兰素、乙基香兰素、肉桂醛、桃醛、乙酸异戊酯、壬内酯、肉桂酸甲酯、乙基麦芽酚、大茴香脑混合标准中间溶液(4.4)适量，用无水乙醇（4.1）稀释成浓度分别为 5、10、20、50、100、200、500 g/mL 的标准工作溶液。现用现配。5 仪器设备5.1 分析天平：感量为 0.1 mg；5.2 气相色谱仪：配氢火焰检测器(FID)和程序升温的柱温箱；5.3 微孔滤膜：0.45 m，有机相。6 试样制备制样过程中应防止样品受到污染或含量发生变化。按GB/T 14699.1的规定，取饲料样品 500 g，按GB/T 20195规定制备试样，粉碎过0.45 mm 孔径筛，充分混匀，装入磨口瓶中备用。7 分析步骤7.1 提取称取试样约1 g（精确至0.1 mg），置于10 mL棕色容量瓶中，加5 mL无水乙醇（4.1），超声20min，降至室温后，用无水乙醇（4.1）定容至刻度。混匀后静置。取上清溶液，溶液过 0.45 m的微孔滤膜，供上机测定。同时做试剂空白试验。7.2 测定7.2.1 气相色谱参考条件色谱柱： DB-5毛细管柱，长 60 m，内径0.25 mm，膜厚0.25 m，或性能类似的色谱柱；载气：高纯氮气，2.0mL/min ；分流比：10:1；进样口温度：270；检测器：氢火焰检测器；检测器温度：290；柱温箱温度：起始温度90，保持2min，以15 /min升至200 ，保持8min ；进样量：1.00 L 。7.2.2 测定在仪器最佳工作条件下，取混合标准工作溶液（4.5，从低浓度到高浓度）和试样溶液分别上机测定，以混合标准工作液中香兰素、乙基香兰素、肉桂醛、桃醛、乙酸异戊酯、壬内酯、肉桂酸甲酯、乙基麦芽酚、大茴香脑峰面积为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准工作曲线，对样品进行定量。试样溶液中香兰素、乙基香兰素、肉桂醛、桃醛、乙酸异戊酯、 壬内酯、肉桂酸甲酯、乙基麦芽酚、大茴香脑的响应值应在标准工作曲线测定的线性范围内。超出线性范围的则用无水乙醇（4.1）适当稀释后DBXX/ XXXXXXXXX3再进样分析。在上述色谱条件下，香兰素、乙基香兰素、肉桂醛、桃醛、乙酸异戊酯、壬内酯、肉桂酸甲酯、乙基麦芽酚、大茴香脑标准溶液色谱图见附录A。8 试验数据处理试样中香兰素、乙基香兰素、肉桂醛、桃醛、乙酸异戊酯、壬内酯、肉桂酸甲酯、乙基麦芽酚、大茴香脑的含量以质量分数Xi计，单位为毫克每千克(mg/kg)，按式(1)计算：=（1）    niCVXm式中： C 由标准曲线计算所得的试样中香兰素、乙基香兰素、肉桂醛、桃醛、乙酸异戊酯、壬内酯、肉桂酸甲酯、乙基麦芽酚、大茴香脑的浓度，单位为微克每毫升（g/mL ）；m试样的质量，单位为克（ g）；n稀释倍数；V样品定容体积，单位为毫升（ mL）。平行测定结果用算术平均值表示，结果保留3位有效数字。9 精密度在同一实验室，由同一操作人员完成的两个平行测定结果，相对偏差不大于20%。DBXX/ XXXXXXXXX4A A附 录 A（资料性附录）9 种香味剂标准溶液的色谱图图A.1给出了9香味剂标准溶液的色谱图1乙酸异戊酯2乙基麦芽酚3肉桂醛4大茴香脑5壬内酯6肉桂酸甲酯7香兰素8乙基香兰素9桃醛图 A.1 9香味剂标准溶液的色谱图（浓度为50 g/mL）空白饲料色谱图图 A.2给出了9种香味剂空白的色谱图DBXX/ XXXXXXXXX5图A.2 空白饲料色谱图图 A.3给出了添加混合标样的样品色谱图1乙酸异戊酯2乙基麦芽酚3肉桂醛4大茴香脑5壬内酯6肉桂酸甲酯7香兰素8乙基香兰素9桃醛图 A.3  添加混合标样（20g/mL）的样品色谱图_