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成才之路生物,路漫漫其修远兮吾将上下而求索,人教版选修3,细胞工程,专题二,专题归纳,专题二,解析用农杆菌转化法获得的转基因细胞需经植物组织培养获得转基因个体，不需要经过原生质体融合过程，C错误。答案C,2(2015四川卷，9)将苏云金杆菌Bt蛋白的基因导入棉花细胞中，可获得抗棉铃虫的转基因棉，其过程如下图所示(注：农杆菌中Ti质粒上只有TDNA片段能转移到植物细胞中)。(质粒中“Bt”代表“Bt基因”，“KmR”代表“卡那霉素抗性基因”),(1)过程需用同种_酶对含Bt基因的DNA和Ti质粒进行酶切。为将过程获得的含重组质粒的农杆菌筛选出来，应使用_培养基。(2)过程中将棉花细胞与农杆菌混合后共同培养，旨在让_进入棉花细胞；除尽农杆菌后，还须转接到含卡那霉素的培养基上继续培养，目的是_。(3)若过程仅获得大量的根，则应在培养基中增加_以获得芽；部分接种在无激素培养基上的芽也能长根，原因是_。(4)检验转基因棉的抗虫性状，常用方法是_。种植转基因抗虫棉能减少_的使用，以减轻环境污染。,解析(1)同种限制酶切割质粒和含目的基因的DNA，可获得相同的黏性末端，以构建基因表达载体。重组质粒含完整的卡那霉素抗性基因，故应使用含卡那霉素的选择培养基筛选含重组质粒的农杆菌。(2)过程中将棉花细胞与农杆菌混合后共同培养，旨在让重组质粒中的TDNA片段进入棉花细胞；除尽农杆菌后，还须转接到含卡那霉素的培养基上继续培养，目的是筛选出含目的基因的受体细胞。,(3)培养基中生长素用量与细胞分裂素用量比值高时，利于根的分化，抑制芽的形成，反之，有利于芽的分化，抑制根的形成。因芽顶端可合成生长素，故接种在无激素的培养基上的芽也能长根。(4)检验转基因棉的抗虫性状，常用方法是直接投放害虫，观察其生存情况。种植转基因抗虫棉能减少农药的使用，以减轻环境污染。,答案(1)限制性核酸内切选择(2)TDNA筛选获得TDNA片段的植物细胞(3)细胞分裂素浓度顶芽端合成的生长素向基部运输，促进根的分化(4)投放棉铃虫农药,3(2015福建卷，33)GDNF是一种神经营养因子，对损伤的神经细胞具有营养和保护作用。研究人员构建了含GDNF基因的表达载体(如图1所示)，并导入到大鼠神经干细胞中，用于干细胞基因治疗的研究。请回答：,注：bp表示碱基对；载体和基因片段上的小箭号示相关限制酶的酶切位点图1,(1)在分离和培养大鼠神经干细胞的过程中，使用胰蛋白酶的目的是_。(2)构建含GDNF基因的表达载体时，需选择图1中的_限制酶进行酶切。(3)经酶切后的载体和GDNF基因进行连接，连接产物经筛选得到的载体主要有3种：单个载体自连、GDNF基因与载体正向连接、GDNF基因与载体反向连接(如图1所示)。为鉴定这3种连接方式，选择HpaI酶和BamHI酶对筛选得到的载体进行双酶切，并对酶切后的DNA片段进行电泳分析，结果如图2所示。图中第_泳道显示所鉴定的载体是正向连接的。,(4)将正向连接的表达载体导入神经干细胞后，为了检测GDNF基因是否成功表达，可用相应的_与提取的蛋白质杂交。当培养的神经干细胞达到一定密度时，需进行_培养以得到更多数量的细胞，用于神经干细胞移植治疗实验。解析(1)动物细胞培养时，可用胰蛋白酶或胶原蛋白酶作用，使细胞分散开。(2)目的基因两端及载体DNA分子中均有Xho酶识别的核苷酸序列，故构建基因表达载体时，应用Xho酶切割DNA分子。,(3)图示可知载体中酶Hpa与Xho切割点距离为100bp，GDNF基因切割成600bp和100bp两种DNA片段，由正向连接的重组载体中GDNF基因方向与Hpa、Xho酶切割结果可知，正向连接的重组载体被酶Hpa和酶Xho切割后，将得到6000bp和700bp两种DNA片段，即为。(4)检测基因是否表达采用抗原抗体杂交法。培养动物细胞采用动物细胞培养法，当细胞密度达到一定程度，需要进行分瓶，进行传代培养。答案(1)使细胞分散开(2)Xho(3)(4)抗体传代,
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