动物细胞融合和单克隆抗体.ppt

2010-3-26,1,细胞融合和单克隆抗体,2010-3-26,2,复习巩固：1.植物体细胞杂交 2.植物组织培养,2010-3-26,3,植物体细胞杂交,原生质 体融合,杂种细胞,组织培养,杂种植株,纤维素酶、果胶酶,诱导,2010-3-26,4,1.概念：动物细胞融合（cell fusion)，又称体细胞杂交（somatic hybridiazation），是指两个或更多个相同或不同细胞结合形成一个细胞的过程。,一、动物细胞融合,融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞，称为杂交细胞。,2010-3-26,5,2、动物细胞融合基本原理：,与植物原生质体融合的基本原理相同，即细胞膜的流动性,3、诱导方式,物理法：,化学法：,生物法：,灭活的病毒,电激、振动、离心,聚乙二醇（PEG）,例如：仙台病毒,2010-3-26,6,灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面,细胞膜被病毒颗粒穿通,细胞膜连接,细胞融合，形成杂种细胞 （细胞膜具有一定的流动性）,生物法：,灭活的病毒,（丧失感染性、保留抗原结构）,2010-3-26,7,病毒促使细胞融合的主要步骤如下：,两个原生质体或细胞在病毒黏结作用下彼此靠近； 通过病毒与原生质体或细胞膜的作用使两个细胞膜间互相渗透， 胞质互相渗透； 两个原生质体的细胞核互相融合，两个细胞融为一体； 进入正常的细胞分裂途径，分裂成含有两种染色体的杂种细胞。,2010-3-26,8,4、过程：,动物细胞A 动物细胞B,诱导，融合,2个完整的杂交细胞AB,有丝分裂,（膜融合、,诱导方法,质融合、,核融合）,单核细胞,2010-3-26,9,5、动物细胞融合技术的发展简史告诉我们：科学技术是不断发展的。那么，实现动物细胞融合有什么意义呢？,打破生殖隔离，使远缘杂交成为可能； 广泛应用多个学科领域； 重要用途：制备单克隆抗体。,2010-3-26,10,6、植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较,获得杂种植株,细胞膜的流动性,细胞膜的流动性 细胞的全能性,去除细胞壁后诱导原生质体融合,使细胞分散后诱导细胞融合,物理（离心、振荡、电刺激） 化学（聚乙二醇）,物理、化学方法（同左） 灭活的病毒,2010-3-26,11,2、什么是抗体？,二、单克隆抗体,回顾,3、抗体的分布？,抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。,主要分布在血清中。,1、什么是克隆？,“克隆”从英文“clone”音译而来，是指从一个共同祖先，通过无性繁殖的方法产生出来的一群遗传特性相同的DNA分子，细胞或个体。在细胞水平指动物细胞培养.,2010-3-26,12,由单个B淋巴细胞经过无性繁殖（克隆）形成基因型相同的细胞群，这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体。,1、单克隆抗体概念:,2010-3-26,13,该法制备抗体的特点： 产量低、纯度低， 且抗体的特异性差、灵敏度低。,自主阅读P52：抗体的传统生产方法及缺陷是什么？,思 考：如何大量获取某种特定抗体？,2010-3-26,14,B淋巴细胞特点：,.每一个B淋巴细胞只能产生一种抗体。,.B淋巴细胞受抗原刺激后，可以产生抗体。,.动物体内的B淋巴细胞可以产生百万种以上的抗体，每种抗体对特定的抗原具有特异性免疫作用。,2010-3-26,15,怎样才能大量生产单克隆抗体？,提示1：仅用细胞培养技术可行吗？,提示2：我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的？,提示3：有什么方法能使B细胞产生抗体的能 力和肿瘤细胞无限增殖能力同时具备呢？,2010-3-26,16,2、单克隆抗体的制备过程,自学与思考： 1）在从小鼠体内取B淋巴细胞前应对小鼠作何种处理？ 为什么要这样处理？ 2）从小鼠何处获取B淋巴细胞？ 3）如只考虑两两融合，可能出现哪些融合类型细胞？ 4）是否所有杂交瘤细胞都能产生某一特定抗体？ 5）由特定的B淋巴细胞和小鼠骨髓瘤细胞融合成的杂交 瘤细胞具有什么特点？ 6）最后可以通过哪些途径大量获取抗体？,2010-3-26,17,B淋巴细胞,注射特定抗原蛋白,骨髓瘤细胞,培养骨髓瘤细胞,融合,（只考虑两两融合）培养液中细胞有几种类型？融合细胞几种类型？,骨髓瘤细胞-骨髓瘤细胞 B淋巴细胞- B淋巴细胞 B淋巴细胞-骨髓瘤细胞,多种杂交细胞,在具有筛选作用的培养基上培养,专一抗体检验阳性,克隆上述杂交细胞,分开不同杂交细胞，克隆专一抗体， 检验阳性细胞,单克隆抗体,注射到小鼠体内,体外培养,第1次筛选目的：得到杂交瘤细胞（多种）。,第2次筛选目的：在杂交瘤细胞中筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞。,该细胞继承双亲细胞的遗传特性，既能产生专一抗体又能无限增殖。,杂交瘤细胞有何特点？,特异性强，灵敏度高,2010-3-26,18,2010-3-26,19,3.单克隆抗体的应用：,作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质，并与 一定抗原特异性结合。 优点：准确、高效、简易、快速,用于,运载药物：制成“生物导弹”,治疗疾病：主要用于癌症治疗,2010-3-26,20,2010-3-26,21,两个过程,动物细胞融合过程,单克隆抗体制备过程,三个“一”,一个诱导细胞融合的新方法,一个新细胞,一个优势,课堂小结,你记住了吗？,灭活的病毒,杂交瘤细胞,单克隆抗体特异性 强、灵敏度高的优势,2010-3-26,22,形成杂种细胞,获得杂种植株,结果,物理、化学方法,（同左）,灭活的病毒,物理（离心、振荡、电刺激）,化学（聚乙二醇）,诱导方法,细胞膜的流动性,细胞膜的流动性、,植物细胞全能性,原 理,动物细胞融合,植物体细胞杂交,比较项目,1、植物、动物细胞融合的比较,课堂小结,融合前处理,用纤维素酶、 果胶酶去壁,用胰蛋白酶 使细胞分散,2010-3-26,23,2、单克隆抗体制备过程,B淋巴细胞 骨髓瘤细胞,诱导融合,B-B细胞,B-瘤细胞,瘤-瘤细胞,选择培养,杂交瘤细胞（ B-瘤细胞）,克隆化培养,抗体检测,产生所需抗体的杂交瘤细胞,体外培养,单克隆抗体,2010-3-26,24,1.右图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌抗体的实验方案,制备单克隆抗体,不能，没有将抗原注入小鼠体内，无法获得产生单一抗体的B淋巴细胞。,(1).该实验方案的目的是： _,(2).该方案能达到预期效果吗？为什么？,课堂练习,2010-3-26,25,(3)A是从小鼠的脾脏中取得_ 该细胞能够产生_ 。,(4)图中B为_过程，常用_作为诱导剂，该细胞继承_的遗传特性，既能_ ,又能_。,B淋巴细胞,抗体,细胞融合,灭活的病毒,双亲细胞,产生专一抗体,无限增殖,课堂练习,2010-3-26,26,（5）_ 技术是单克隆抗体的技术支持。,动物细胞培养,（6）单克隆抗体的特点 _，并可大量制备。,特异性强，灵敏度高,课堂练习,